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Article de méthode

Imagerie par autofluorescence pour évaluer la physiologie des algues rouges

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DOI :

10.3791/64533

17 février 2023

Dans cet article

Résumé

Le présent protocole décrit l’imagerie par autofluorescence étape par étape et l’évaluation des changements phycobiliprotéiques dans les algues rouges sur la base d’une analyse spectrale. Il s’agit d’une méthode non marquée et non destructive pour évaluer l’adaptation cellulaire à des habitats extrêmes, lorsque seul du matériel rare est disponible et que les cellules se développent lentement, voire pas du tout, dans des conditions de laboratoire.

Résumé

Les algues rouges (Rhodophyta) contiennent des phycobiliprotéines et colonisent les habitats avec une faible lumière, mais certaines (par exemple, certaines espèces de Chroothece ) peuvent également se développer en plein soleil. La plupart des rhodophytes sont rouges, mais certains peuvent apparaître bleutés, selon la proportion de biliprotéines bleues et rouges (phycocyanine et phycoérythrine). Différentes phycobiliprotéines peuvent capturer la lumière à différentes longueurs d’onde et la transmettre à la chlorophylle a, ce qui rend possible la photosynthèse dans des conditions lumineuses très différentes. Ces pigments réagissent aux changements de l’habitat dans la lumière, et leur autofluorescence peut aider à étudier les processus biologiques. En utilisant Chroothece mobilis comme organisme modèle et le mode spectral lambda scan dans un microscope confocal, l’adaptation des pigments photosynthétiques à différentes lumières monochromatiques a été étudiée au niveau cellulaire pour deviner les conditions de croissance optimales de l’espèce. Les résultats ont montré que, même lorsque la souche étudiée était isolée d’une grotte, elle s’adaptait à des intensités lumineuses faibles et moyennes. La méthode présentée est particulièrement utile pour étudier les organismes photosynthétiques qui ne se développent pas ou se développent très lentement dans des conditions de laboratoire, ce qui est généralement le cas pour ceux qui vivent dans des habitats extrêmes.

Introduction

Les algues rouges, comme le genre Chroothece, peuvent pousser dans des habitats extrêmes, où elles doivent souvent faire face à des changements environnementaux marqués1. Les inondations et les sécheresses sont fréquentes dans les régions semi-arides où ce genre peut être trouvé, et certaines espèces ont été signalées dans les ruisseaux, les falaises, les grottes, ou même les eaux thermales2. Cependant, la plupart du temps, des variables biologiques, telles que la compétition ou le pâturage, relèguent les espèces à des conditions non optimales pour leur croissance. Comme ces organismes sont souvent difficiles à ....

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Protocole

L’espèce d’algue Chroothece mobilis a été utilisée pour la présente étude. L’espèce a été obtenue à partir de la collection de culture Microalgae Edaphic SE Spain, MAESE 20.29. Une vue d’ensemble du protocole est présentée à la figure 1.

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Figure 1 : Aperçu de l’étude. Chroothece mobilis est incubé dans des conditions d’habitat extrêmes, telles que différentes lumières monochromatiques, pe....

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Résultats

La chlorophylle a absorbe généralement les longueurs d’onde bleues et rouges de la lumière visible, tandis que les phycobiliprotéines utilisent les longueurs d’onde verte, jaune et orange7. L’autofluorescence de ces pigments rend possible la première approche pour étudier les phycobiliprotéines et le comportement de la chlorophylle dans des conditions expérimentales et sur le terrain.

En comparant les données obtenues et en traçant sur différents graphiques, les changem.......

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Discussion

Certaines algues rouges unicellulaires ou coloniales, telles que Chroothece, poussent lentement in vitro, mais contiennent plusieurs composés autofluorescents qui peuvent être analysés par analyse spectrale au microscope confocal, où les différences dans les pics d’émission pigmentaire peuvent être détectées. La microscopie confocale spectrale à fluorescence nous a permis de mener des études in vivo pour évaluer l’adaptation ou l’acclimatation des organismes photosynthétiques 8,10,17,18,19,20.<.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à déclarer.

Remerciements

Cette recherche a été réalisée dans le cadre des projets TIN2015-68454-R et 20961/PI/18, financés par le ministère espagnol de l’Économie et de la Compétitivité et la Fondation Séneca de la région de Murcie. Irene Hernández Martínez et Francisco Javier Ibáñez López de la Section de soutien statistique du domaine scientifique et de la recherche de l’Université de Murcie (Sección de Apoyo Estadístico (SAE), Área Científica y de Investigación (ACTI), Universidad de Murcia, (Figure 1 ont été dessinés à l’aide d’images de Servier Medical Art. Servier Medical Art by Servier est sous licence Creative Commons Attribution 3.0 Unported License (https://creative....

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
µ ;-Plat 35 mm, haut fond en verreIbidi  ;81158-24
plaque de puits noirIbidi82406  ; fond plat et transparent pour la microscopie à haut débit
Incubateur d’alguesPanasonicMLR-352-PE
Microscope confocal à balayage laserLeica MicrosystemsSP8 TCS-Flask
Fisher Scientific15380591Peut être acheté dans un dépanneur local ou dans des magasins en ligne.
filtre vertPNTA, filtres LEE-Peut être acheté dans un dépanneur local ou dans des magasins en ligne.
HC PL APO 63X/1.30 GLYC CORR CS2Leica Microsystems506353Lentille d’immersion au glycérol
Logiciel d’acquisition d’images. LAS XLeica MicrosystemsSP8TCS-Source
lumineusePanasonicFL40SSENW/37MLR-352-PE
Photoradiomètre quantiqueDeltaOhm  ;DO 9721-R
softwareR Core Team, 20204.0.2.-
filtre rougePNTA, filtres LEE-Peut être acheté dans un dépanneur local ou dans des magasins en ligne.
SWES mediumUniversité de Murcie--
Type G Liquided’immersion Leica Microsystems11513910Glycérol  ;

Références

  1. Vis, M. L., Necchi, O. Freshwater Red Algae: Phylogeny, Taxonomy and Biogeography. , Springer Nature. (2021).
  2. Aboal, M., et al. Diversity of Chroothece (Rhodophyta, Stylonematales) including two new species. European Journal of Phycology. 53 (2), ....

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Réimpressions et autorisations

Étiquettes

PhycobiliprotéinesMicroscopie confocaleChroothece mobilisPigments photosynthétiquesSpectres d'émission de fluorescenceAdaptation à la lumière monochromatiqueChlorophylle aAllophycocyanine