Injection intracardiaque de cellules cancéreuses de la prostate humaine pour créer un modèle murin de xénogreffe de métastases osseuses

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour l’injection intra-cardiaque de cellules cancéreuses de la prostate humaine afin de générer un modèle murin avec des lésions de métastases osseuses.

Résumé

En tant que tumeur maligne masculine la plus courante, le cancer de la prostate (PC) se classe au deuxième rang pour la mortalité, principalement en raison d’un taux de métastases osseuses de 65% à 75%. Par conséquent, il est essentiel de comprendre le processus et les mécanismes connexes des métastases osseuses du cancer de la prostate pour développer de nouveaux traitements. Pour cela, un modèle animal de métastases osseuses est un outil essentiel. Ici, nous rapportons des procédures détaillées pour générer un modèle murin de métastases osseuses par injection intra-cardiaque de cellules cancéreuses de la prostate. Un système d’imagerie par bioluminescence peut déterminer si les cellules cancéreuses de la prostate ont été injectées avec précision dans le cœur et surveiller les métastases des cellules cancéreuses, car il présente de grands avantages dans la surveillance du développement des lésions métastatiques. Ce modèle reproduit le développement naturel des cellules cancéreuses disséminées pour former des micro-métastases dans l’os et imite le processus pathologique des métastases osseuses du cancer de la prostate. Il fournit un outil efficace pour approfondir l’exploration des mécanismes moléculaires et des effets thérapeutiques in vivo de cette maladie.

Introduction

Le cancer de la prostate est le cancer le plus fréquent chez les hommes dans 112 pays et se classe au deuxième rang pour la mortalité dans les pays à indice de développement humain^{supérieur 1,2}. La plupart des décès chez les patients atteints d’un cancer de la prostate sont causés par des métastases, et environ 65% à 75% des cas développeront des métastases osseuses ^3,4. Par conséquent, la prévention et le traitement des métastases osseuses du cancer de la prostate sont nécessaires de toute urgence pour améliorer les résultats cliniques des patients at....

Protocole

Des souris athymiques BALB/c mâles âgées de six à huit semaines (n = 10) ont été hébergées dans des cages de souris ventilées individuellement (5 souris/cage) dans une salle animalière exempte d’agents pathogènes spécifiques (FPS) dans des conditions de cycle lumière/obscurité de 12 h, avec libre accès à des aliments pour FPS et à de l’eau stérile. Les souris ont été nourries de manière adaptative pendant une semaine avant les expériences. Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvées par le comité du bien-être animal de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Shanghai.

1. Préparation cellulaire

Résultats

L’imagerie par bioluminescence offre d’énormes avantages dans le suivi du développement de la lésion métastatique pour un modèle d’injection intracardiaque. Peu après l’injection de cellules cancéreuses (dans les 24 heures), l’imagerie par bioluminescence a été utilisée pour visualiser les cellules cancéreuses entrant dans la circulation générale (Figure 3A). Une signalisation évidente de bioluminescence dans tout le corps sera observée lorsque les cellules cancéreuses sont injectées correct.......

Discussion

L’injection intracardiaque de cellules cancéreuses de la prostate humaine pour générer des métastases osseuses est un modèle murin idéal pour explorer les fonctions et les mécanismes des métastases osseuses du cancer de la prostate et évaluer l’efficacité thérapeutique. Des études ont montré que les lésions osseuses se produisent très probablement dans le tibia proximal et le fémur distal¹⁷, ce qui peut être dû à leur vascularisation élevée et à leur activité métabolique.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringues et aiguilles de 1 mL	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd	20200411	Les cellules ont été injectées dans les ventricules de souris
Appareil d’anesthésie	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd	R500IP	Équipement pour anesthésier les souris
Compteur de cellules automatique	Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd	IC1000	; Pour le comptage de cellules
souris athymiques BALB/c	Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.	Souris mâles	mâles âgées de 6 à 8 semaines Système
d’imagerie par bioluminescence	Shanghai Baitai Technology Co., Ltd	Vieworks	Pour le suivi de la croissance tumorale et des métastases pulmonaires si les cellules injectées sont marquées par luciférase
Tube à centrifuger (15 mL, 50 mL)	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	; 430790, Corning
EDTA solution	Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd	G1105	; Pour la décalcification de l’os tissure
F-12	milieu Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	21700075, GIBCO	Milieu de culture cellulaire
Solution de formol	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	BL539A	Pour la fixation de l’échantillon de chaque souris
Isoflurane	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd	VETEASY	Pour l’anesthésie  ;
Lipofectamine 2000	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	11668027, Thermo fisher	Réactif de transfection plasmidique
Lignée cellulaire PC-3	Banque de cellules de l’Académie chinoise des sciences	TCHu 158	Lignée cellulaire du cancer de la prostate
Solution saline tamponnée au phosphate	Beyotime Biotechnology	ST447	Laver les cellules d’ostéosarcome humain
Trypsine (0,25 %)	Shanghai YueNian Biotechnology Co. , Ltd	25200056, Gibco	Pour détacher les cellules
Vecteur (pLV-luciférase)	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	VL3613	Plasmide pour
d’imagerie par rayons X	Brook (Beijing) Technology Co., Ltd	FX PRO	Pour obtenir des images radiographiques pour détecter la croissance tumorale
&mu ; CT80	Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd	Scanco Medical AG, Suisse	Pour la détection de la destruction osseuse. Le mico-CT est équipé de 3DCalc, reconstruction conique,   ; et &mu ; Logiciel de visualisation de modèles CT Ray V3.4A.

système par transfection