Enrichissement de cultures de neurones ganglionnaires de la racine dorsale de souris adultes par immunopanoramique

Aislinn  D. Maguire; Jason R. Plemel; Bradley J. Kerr

doi:10.3791/64603

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Article de méthode

Enrichissement de cultures de neurones ganglionnaires de la racine dorsale de souris adultes par immunopanoramique

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DOI :

10.3791/64603

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24 février 2023

Aislinn D. Maguire¹ , Jason R. Plemel¹^,²^,³ , Bradley J. Kerr¹^,⁴^,⁵

¹Neuroscience and Mental Health Institute, University of Alberta, ²Department of Medicine, Division of Neurology, University of Alberta, ³Department of Medical Microbiology and Immunology, University of Alberta, ⁴Department of Pharmacology, University of Alberta, ⁵Department of Anesthesiology and Pain Medicine, University of Alberta

Dans cet article

Résumé

Cet article décrit un protocole d’immunopanoramique pour les ganglions de la racine dorsale de souris adultes. En adhérant des anticorps aux plaques de culture, nous pouvons sélectionner négativement et éliminer les cellules non neuronales. Nous montrons que les cultures sont enrichies pour les neurones en utilisant ce protocole, permettant une étude approfondie des réponses neuronales à la manipulation.

Résumé

Les ganglions radiculaires dorsaux (DRG) sont des structures périphériques adjacentes à la corne dorsale de la moelle épinière, qui abritent les corps cellulaires des neurones sensoriels ainsi que divers autres types de cellules. Les protocoles de culture publiés se réfèrent souvent à des cultures DRG dissociées entières comme étant neuronales, malgré la présence de fibroblastes, de cellules de Schwann, de macrophages et de lymphocytes. Bien que ces cultures DRG entières soient suffisantes pour les applications d’imagerie où les neurones peuvent être discernés en fonction de la morphologie ou de la coloration, les homogénats de protéines ou d’ARN collectés à partir de ces cultures ne sont pas principalement d’origine neuronale. Ici, nous décrivons une séquence d’immunopanoramique pour les DRG de souris en culture. Le but de cette méthode est d’enrichir les cultures DRG pour les neurones en supprimant d’autres types de cellules. L’immunopanning fait référence à une méthode d’élimination des types de cellules en adhérant des anticorps aux boîtes de culture cellulaire. En utilisant ces plats, nous pouvons sélectionner négativement et réduire le nombre de fibroblastes, de cellules immunitaires et de cellules de Schwann en culture. Cette méthode nous permet d’augmenter le pourcentage de neurones dans les cultures.

Introduction

Les ganglions radiculaires dorsaux (DRG) abritent les corps cellulaires des neurones sensoriels qui innervent les tissus périphériques. L’étude de ces neurones nous permet de comprendre les fondements mécanistes de la douleur et des conditions sensorielles. Cependant, les DRG ne sont pas composés uniquement de neurones, mais contiennent également des fibroblastes, des cellules de Schwann, des macrophages et d’autres cellules immunitaires¹. Malgré la présence de ces différents types de cellules, les cultures DRG entières sont souvent appelées neuronales ^2,3 dans la littérature. Ces cultu....