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Article de méthode

CLHP couplée à une empreinte chimique pour la reconnaissance multi-motifs afin d’identifier l’authenticité de Clematidis armandii caulis

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DOI :

10.3791/64690

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11 novembre 2022

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour établir la chromatographie liquide à haute performance (HPLC), couplée à la reconnaissance multi-motifs d’empreintes chimiques par empreintes digitales, qui fournit une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les variétés authentiques de Clematidis Armandii Caulis et de ses adultérants.

Résumé

Une méthode d’identification des matériaux médicinaux chinois et de leurs adultérants apparentés a été construite en prenant Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, une médecine traditionnelle chinoise universellement utilisée) comme exemple. Dix lots de variétés authentiques de Chuanmutong et cinq lots d’adultérants apparentés ont été analysés et comparés sur la base des empreintes digitales par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) combinées à la chimiométrie, y compris l’analyse en grappes (AC), l’analyse en composantes principales (ACP) et l’analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-DA). En outre, la teneur en β-sitostérol a été déterminée. L’empreinte chimique de contrôle de Chuanmutong a été établie et 12 pics communs ont été identifiés. La similitude entre l’empreinte digitale de 10 lots de variétés authentiques de Chuanmutong et l’empreinte digitale de contrôle était de 0,910-0,989, tandis que la similitude de cinq lots d’adultérants n’était que de 0,133-0,720. Sur la base des pics communs dans le chromatogramme, 15 lots d’échantillons ont été classés en trois niveaux de teneur par PCA, et ont été agrégés en quatre catégories par CA, obtenant une distinction claire entre le Chuanmutong authentique et les adultérants de Chuanmutong. En outre, sept composants différentiels capables d’identifier efficacement les Chuanmutong authentiques et les adultérants de Chuanmutong ont été trouvés grâce à OPLS-DA. La teneur en β-sitostérol de 10 lots de variétés authentiques de Chuanmutong était de 97,53-161,56 μg/g, tandis que la teneur en β-sitostérol des cinq lots d’adultérants variait considérablement, parmi lesquels la teneur en β-sitostérol de Clematis peterae Hand.-Mazz. et Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. était significativement inférieur à celui des variétés authentiques de Chuanmutong. La méthode de reconnaissance multimodèle par composants de l’indice HPLC et la méthode de reconnaissance multi-formes par empreintes chimiques établies dans cette étude fournissent une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les matériaux médicinaux chinois authentiques et les adultérants associés.

Introduction

Chuanmutong, Caulis sec de Clematis armandii Franch. ou Clematis montana Buch.-Ham., est une médecine traditionnelle chinoise couramment utilisée dans les cliniques 1,2,3. Il est utilisé pour traiter les problèmes urinaires, l’œdème, les plaies sur la langue et la bouche, la diminution de la sécrétion de lait, la raideur articulaire et les douleurs musculaires causées par la chaleur humide4. Le Chuanmutong a toujours été obtenu à partir de variétés sauvages, principalement distribuées dans le sud-ouest de la Chine, en particulier dans....

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Protocole

1. Méthodes de détection chimique des empreintes digitales

  1. Conditions chromatographiques
    1. Préparer la phase mobile acétonitrile (A)/eau (B). Définissez un programme de gradient comme suit dans le logiciel HPLC : 0-20 min, 3%A-10%A ; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.
    2. Maintenir le débit de la phase mobile à 1,0 mL/min.
    3. Effectuer la séparation chromatographique sur une colonne C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) maintenue à 30 °C.
    4. Réglez le volume d’injection sur 10 μL.
    5. Détecter les échantillons à une longueur d’onde de 205 nm.
      ....

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Résultats

Empreinte chromatographique de Chuanmutong et analyse de similarité (SA)
Les valeurs RSD du temps de rétention relatif de précision, de répétabilité et de stabilité étaient inférieures à 0,46 %, 1,65 % et 0,53 %, respectivement; les valeurs RSD de la zone de pointe relative étaient inférieures à 4,23%, 3,56% et 3,96%, respectivement. Comme le montrent les figures 1A, B, il y avait 12 pics communs distincts (du pic 1 au pic 12) dans les empreintes HPLC dans les 10<.......

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Discussion

La collecte d’échantillons pour la recherche est la première étape clé de la construction de la reconnaissance multi-motifs dans l’identification de l’authenticité des matériaux médicinaux chinois. Grâce à des études de marché, nous avons constaté que Sichuan Ya’an, Liangshan et Leshan sont les principales zones de production des ressources sauvages de Chuanmutong. Les variétés apparentées d’un même genre ont également la même répartition géographique 6,20 ; CC, .......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par le projet de l’Administration de la médecine traditionnelle chinoise du Sichuan (n° 2020JC0088, n° 2021MS203).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Acide acétiqueZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine2017381038
AcétonitrileSigma-Aldrich  ; Trading Co., Ltd., Shanghai, ChineWXBD5243V
&beta ;-SitosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chine20210201
  ; C18 colonneYuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, ChineWelch Ultimate LP
ChuanmutongGuoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;19020103CMT-1
ChuanmutongHongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine200701CMT-2
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine.200701CMT-3
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine.200901CMT-4
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;210701CMT-5
ChuanmutongHaobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;210401CMT-6
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;200901CMT-7
ChuanmutongWusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;201201CMT-8
ChuanmutongLimin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;201001CMT-9
ChuanmutongYuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine210501CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. WangMadzi Bridge, canton de Sanlang, comté de Tianquan, Sichuan, Chine.-CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.Village de Heilin, canton de Qiliping, comté de Hongya, Sichuan, Chine.-DC
Clematis peterae Main.-Mazz.Village de Huangmu, canton de Huangmu, comté de Hanyuan, Sichuan, Chine.-DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et WilsMixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China  ;-XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot.Village de Wannian, canton de Huangwan, comté d’Emei, Sichuan, Chine.-Balance électronique SMT
Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,  ; Chine  ;FA1204
ErgosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, Chine20210201
ÉthanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine2021112602
Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine2017042043
Acide formiqueKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine2016062901
Chromatographie liquide à haute performanceAgilent, États-Unis.1260
IBM SPSS Statistics version 26.0International Business Machines Corporation, États-Unis-Méthanol
Sigma-Aldrich  ; Trading Co., Ltd., Shanghai, ChineWXBD6409V
MéthanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine202010302
alcool n-butyliqueZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine2020071047
Éther de pétroleZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine2020090125
Acide phosphoriqueComeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine20200110
SESCF-TCM version 2012National Pharmacopoeia Commission,Chine-http://114.247.108.158:8888/login
StigmasterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chine20210201
TrichlorométhaneSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, Chine20200214
Umetrics Version SIMCA 14.1.0.2047Umetrics,Suède-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download
Machine à eau ultrapureYoupu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, ChineUPH-II-10T
Nettoyeur à ultrasonsKunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, ChineKH3200E
Acétate d’éthyle

Références

  1. Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
  2. Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of ....

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Réimpressions et autorisations

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