Article de méthode

CLHP couplée à une empreinte chimique pour la reconnaissance multi-motifs afin d’identifier l’authenticité de Clematidis armandii caulis

DOI :

10.3791/64690

⸱

11 novembre 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, The Second Class Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutics, National Administration of Traditional Chinese Medicine, Chengdu Medical College, 2Pengzhou Second People's Hospital

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nous présentons ici un protocole pour établir la chromatographie liquide à haute performance (HPLC), couplée à la reconnaissance multi-motifs d’empreintes chimiques par empreintes digitales, qui fournit une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les variétés authentiques de Clematidis Armandii Caulis et de ses adultérants.

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Une méthode d’identification des matériaux médicinaux chinois et de leurs adultérants apparentés a été construite en prenant Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, une médecine traditionnelle chinoise universellement utilisée) comme exemple. Dix lots de variétés authentiques de Chuanmutong et cinq lots d’adultérants apparentés ont été analysés et comparés sur la base des empreintes digitales par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) combinées à la chimiométrie, y compris l’analyse en grappes (AC), l’analyse en composantes principales (ACP) et l’analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-DA). En outre, la teneur en β-sitostérol a été déterminée. L’empreinte chimique de contrôle de Chuanmutong a été établie et 12 pics communs ont été identifiés. La similitude entre l’empreinte digitale de 10 lots de variétés authentiques de Chuanmutong et l’empreinte digitale de contrôle était de 0,910-0,989, tandis que la similitude de cinq lots d’adultérants n’était que de 0,133-0,720. Sur la base des pics communs dans le chromatogramme, 15 lots d’échantillons ont été classés en trois niveaux de teneur par PCA, et ont été agrégés en quatre catégories par CA, obtenant une distinction claire entre le Chuanmutong authentique et les adultérants de Chuanmutong. En outre, sept composants différentiels capables d’identifier efficacement les Chuanmutong authentiques et les adultérants de Chuanmutong ont été trouvés grâce à OPLS-DA. La teneur en β-sitostérol de 10 lots de variétés authentiques de Chuanmutong était de 97,53-161,56 μg/g, tandis que la teneur en β-sitostérol des cinq lots d’adultérants variait considérablement, parmi lesquels la teneur en β-sitostérol de Clematis peterae Hand.-Mazz. et Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. était significativement inférieur à celui des variétés authentiques de Chuanmutong. La méthode de reconnaissance multimodèle par composants de l’indice HPLC et la méthode de reconnaissance multi-formes par empreintes chimiques établies dans cette étude fournissent une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les matériaux médicinaux chinois authentiques et les adultérants associés.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chuanmutong, Caulis sec de Clematis armandii Franch. ou Clematis montana Buch.-Ham., est une médecine traditionnelle chinoise couramment utilisée dans les cliniques 1,2,3. Il est utilisé pour traiter les problèmes urinaires, l’œdème, les plaies sur la langue et la bouche, la diminution de la sécrétion de lait, la raideur articulaire et les douleurs musculaires causées par la chaleur humide4. Le Chuanmutong a toujours été obtenu à partir de variétés sauvages, principalement distribuées dans le sud-ouest de la Chine, en particulier dans le Sichuan, où la meilleure qualité peut être trouvée 5,6. Il est difficile de faire la distinction entre les variétés authentiques et leurs adultérants étroitement apparentés en raison de leurs caractéristiques similaires 7,8,9,10. La norme de qualité de Chuanmutong dans l’édition 2020 de la pharmacopée chinoise ne stipule que les propriétés, l’identification microscopique et l’identification sur couche mince sans détermination du contenu, qui ne peuvent pas identifier efficacement les adultérants et présentent donc des risques potentiels. De plus, il existe peu de rapports comparant et identifiant Chuanmutong et les plantes apparentées. Par conséquent, une méthode de contrôle de la qualité pour assurer l’authenticité de Chuanmutong mérite une étude plus approfondie.

Les constituants chimiques de Chuanmutong sont principalement composés de triterpénoïdes pentacycliques de type oléanane et de leurs glycosides, flavonoïdes et acides organiques11,12,13,14. Parmi eux, l’acide oléanolique, le β-sitostérol, le stigmastérol et l’ergostérol ont des effets diurétiques d’intensités différentes, qui peuvent être des substances pharmacodynamiques potentielles pour favoriser la diurèse et soulager la strangurie15,16. Les empreintes chimiques sont obtenues en séparant et en détectant de nombreux composants chimiques contenus dans les échantillons par chromatographie liquide à haute performance (CLHP), chromatographie en phase gazeuse (CG), etc. L’adoption de méthodes d’analyse statistique appropriées pour analyser les caractéristiques de Chuanmutong peut déterminer le contrôle de qualité global et l’identification scientifique de la médecine traditionnelle chinoise17,18,19.

Dans cette étude, 10 lots de variétés authentiques Chuanmutong et cinq lots d’adultérants ont été collectés. Leur qualité a été comparée et analysée par la méthode d’empreintes digitales HPLC combinée à la reconnaissance multi-formes, y compris l’analyse en grappes (AC), l’analyse en composantes principales (ACP), l’analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-CA) et la détermination du contenu de la composante pharmacodynamique. Ce protocole établit une méthode d’identification des variétés authentiques à haute spécificité, une nouvelle stratégie pour l’identification scientifique des variétés authentiques et des adultérants des matières médicinales chinoises.

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Protocole

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Méthodes de détection chimique des empreintes digitales

  1. Conditions chromatographiques
    1. Préparer la phase mobile acétonitrile (A)/eau (B). Définissez un programme de gradient comme suit dans le logiciel HPLC : 0-20 min, 3%A-10%A ; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.
    2. Maintenir le débit de la phase mobile à 1,0 mL/min.
    3. Effectuer la séparation chromatographique sur une colonne C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) maintenue à 30 °C.
    4. Réglez le volume d’injection sur 10 μL.
    5. Détecter les échantillons à une longueur d’onde de 205 nm.
      REMARQUE: Pour les réglages spécifiques des conditions chromatographiques, reportez-vous aux modes opératoires du logiciel de travail de chromatographie liquide haute performance (Table des matériaux).
  2. Préparation de la solution échantillon
    1. Broyer les matières premières jusqu’à ce qu’elles atteignent une taille de particules uniforme en les faisant passer à travers un treillis en nylon d’un diamètre intérieur de 850 μm ± 29 μm.
    2. Placer 2 g de matière première broyée (pesée avec précision) dans une fiole conique de 50 ml munie d’un bouchon et ajouter 50 ml de méthanol. Placer le bouchon sur la fiole et ultrasons (600 W, 40 kHz) pendant 30 min.
    3. Ensuite, refroidir le ballon à température ambiante (RT). Pesez à nouveau les échantillons et rattrapez le poids initial en remplaçant l’extractant perdu.
    4. Verser 4 mL de la solution de méthanol contenant les extraits médicinaux dans une fiole jaugée de 10 mL. Ajouter 6 mL deH2O, mélanger et laisser reposer pendant 10 min.
    5. Enfin, filtrez le surnageant à travers une membrane filtrante de 0,45 μm et placez-le en veille.
  3. Validation des méthodes de détection des empreintes digitales
    1. Préparer l’échantillon comme décrit ci-dessus (étape 1.2) et le soumettre à une analyse CLHP (étape 1.1) six fois par jour. Pour évaluer la précision, calculez l’écart type relatif (DSR) du temps de rétention relatif et des zones de pics relatives comme décrit à l’étape 1.3.5.
    2. Évaluer la stabilité de la solution échantillon en analysant la même solution échantillon stockée à TA pendant 0, 2, 4, 6, 8, 12 et 24 h, et calculer la DSR du temps de rétention relatif et des zones de pics relatives comme décrit à l’étape 1.3.5.
    3. Prélever six répétitions du même échantillon (CMT-4), préparer la solution échantillon selon la procédure ci-dessus (étape 1.2) et détecter son empreinte dans la CLHP suivant l’étape 1.1. Calculer la DSR du temps de rétention relatif et des zones de pic relatives, et évaluer sa répétabilité comme décrit à l’étape 1.3.5.
    4. Utilisez ensuite le pic numéro 10 de la figure 1B comme pic de référence et calculez le DSR du temps de rétention relatif et de la surface relative des pics de chaque pic commun, comme décrit à l’étape 1.3.5.
    5. Utilisez les formules mentionnées ci-dessous pour calculer le temps de rétention relatif et la surface relative des pics de chaque pic commun :
      T re = T caractéristique/Tréférence
      Are = Une caractéristique/Uneréférence
      Où T re = temps de rétention relatif, T caractéristique = temps de rétention du pic caractéristique, T référence = temps de rétention du pic de référence, A re = surface relative du pic, A caractéristique = surface du pic caractéristique et A référence = surface du pic de référence.
      NOTE: L’établissement des empreintes digitales de la médecine traditionnelle chinoise nécessite généralement de sélectionner un pic chromatographique facile à obtenir et à haute résolution. Ceci est utilisé comme pic de référence pour identifier les empreintes digitales et examiner leur stabilité et leur reproductibilité.

2. Mise en place de l’analyse des empreintes digitales et de la similitude de Chuanmutong

  1. Utilisez 10 lots d’échantillons authentiques et cinq lots d’adultérants tels que Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang (CC), Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. (DC), Clematis peterae Hand.-Mazz. (DE), Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils (XS), et Clematis finetiana Levl. et Vaniot. (SMT) comme échantillons pour l’analyse des empreintes digitales.
  2. Préparez les exemples de solutions comme décrit à l’étape 1.2. Effectuer l’analyse des empreintes digitales de toutes les solutions d’échantillons par CLHP dans les conditions décrites à l’étape 1.1.
  3. Importer les données pertinentes dans le système d’évaluation de la similarité des empreintes chromatographiques de la médecine traditionnelle chinoise (SESCF-TCM, version 2012). Le système désignera les pics avec une hauteur raisonnable et une bonne résolution dans les chromatogrammes de tous les échantillons comme pics communs.
    REMARQUE: Le logiciel SESCF-TCM peut être téléchargé après enregistrement sur le site Web de la Commission chinoise de pharmacopée (http://114.247.108.158:8888/login).
    1. Dans le logiciel, cliquez sur le bouton Définir le spectre de référence dans le menu.
    2. Ensuite, dans la fenêtre Paramètres des paramètres , définissez la largeur de la fenêtre temporelle sur 0,5 et sélectionnez Méthode de génération du spectre de contrôle comme méthode médiane.
    3. Cliquez sur Étalonnage multipoint dans le menu principal, puis sélectionnez Correspondance des pics comme Correspondance des pics à spectre complet.
    4. Enfin, cliquez sur Générer le contrôle pour générer l’empreinte chromatographique de référence de l’espèce authentique de Chuanmutong.
  4. Importer le temps de rétention et la zone de pic de 10 lots d’échantillons authentiques de Chuanmutong et de cinq lots d’adultérants dans SESCF-TCM pour analyse. Les opérations spécifiques sont les suivantes :
    1. Dans le logiciel, cliquez sur le bouton Définir le spectre de référence dans le menu principal.
    2. Dans la fenêtre Paramètres des paramètres , définissez l’empreinte chromatographique de référence de l’espèce authentique de Chuanmutong comme référence, sélectionnez la méthode de génération du spectre de contrôle comme méthode médiane et définissez la largeur de la fenêtre temporelle sur 0,5.
    3. Cliquez sur Étalonnage multipoint dans le menu principal, puis sélectionnez Correspondance des pics comme Correspondance des pics à spectre complet.
    4. Enfin, cliquez sur Calculer la similarité pour calculer la similarité en fonction des empreintes digitales chromatogramme de référence de Chuanmutong. Enfin, calculez la similitude des empreintes digitales à l’aide du système d’évaluation chromatographique des empreintes digitales de la médecine chinoise (version 2012).
      REMARQUE : Pour les opérations spécifiques, reportez-vous aux spécifications d’exploitation du système d’évaluation des empreintes digitales chromatographiques de la médecine chinoise (version 2012).

3. Analyse de reconnaissance multi-formes de l’empreinte digitale Chuanmutong

  1. Analyse par grappes (AC)
    1. Utilisez les zones de pics de 12 pics communs dans les empreintes digitales de 10 lots d’échantillons authentiques de Chuanmutong et de leurs cinq lots d’adultérants comme variables, et saisissez-les dans un logiciel d’analyse statistique pour une analyse systématique en grappes (AC).
    2. Choisissez la méthode entre les groupes et utilisez le coefficient de corrélation de Pearson comme base de classification pour dessiner un diagramme d’analyse en grappes de Chuanmutong et de ses adultérants. Les opérations spécifiques sont les suivantes :
      1. Dans le logiciel d’analyse statistique, cliquez sur Fichier pour importer des données.
      2. Cliquez sur Analyse dans le menu, puis sur Regroupement de systèmes dans Classification.
      3. Sélectionnez la zone de pic commune comme variable et définissez le nombre de clusters sur quatre.
      4. Cliquez sur Méthode, sélectionnez la méthode de clustering comme Connexion inter-groupes, sélectionnez l’intervalle de mesure comme Corrélation de Pearson, puis cliquez sur OK pour dessiner la carte de l’autorité de certification.
  2. Analyse en composantes principales (ACP)
    1. Importez la surface de pic commune relative des variétés authentiques et de leurs adultérants dans le logiciel d’analyse pour l’analyse PCA, et utilisez la carte de score PCA pour évaluer la carte matricielle de score des différences d’échantillon. Les opérations spécifiques sont les suivantes :
      1. Ouvrez le logiciel d’analyse de données, cliquez sur Fichier dans le menu et créez un nouveau projet régulier. Importez la zone des pics de 12 pics communs dans une feuille de calcul (par exemple, format Excel) à partir du système HPLC. Cliquez ensuite sur Terminer pour terminer l’importation des données.
      2. Cliquez sur Nouveau pour créer un nouveau modèle afin de définir le type de modèle avec PCA. Cliquez sur Autofit et Add pour ajuster les données, puis cliquez sur Scores pour obtenir la carte des scores PCA.
  3. Analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-DA)
    1. Utilisez la méthode d’analyse de discrimination des moindres carrés partiels orthogonaux avec mode supervision pour analyser plus en détail les pics de surface de pics communs relatifs des variétés authentiques de Chuanmutong et des adultérants et dessiner une carte de score de classification OPLS-DA de tous les échantillons. Les opérations spécifiques sont les suivantes :
      1. Dans un logiciel d’analyse de données, cliquez sur Fichier dans le menu pour importer un fichier et créer un nouveau projet régulier. Importez la zone de pics de 12 pics communs dans une feuille de calcul à partir du système HPLC, puis cliquez sur Terminer pour terminer l’importation des données.
      2. Cliquez sur Nouveau pour créer un nouveau modèle afin de définir le type de modèle avec PCA. Cliquez sur Autofit et Add pour ajuster les données. Cliquez ensuite sur Scores pour obtenir la carte des scores PCA.
      3. Cliquez sur Nouveau et choisissez Nouveau comme modèle un pour définir le type de modèle avec OPLS-DA.
      4. Cliquez sur Échelle et définissez le type avec Par pour tous. Cliquez d’abord sur Ajustement automatique , puis sur Scores pour obtenir la carte des scores OPLS-DA.
    2. Afin de déterminer l’influence de chaque pic commun à Chuanmutong sur ses résultats de classification et la différence entre les matériaux authentiques de Chuanmutong et les adultérants apparentés, utilisez l’importance variable dans la projection (VIP) pour l’analyse.
    3. Dessinez la carte VIP des différentes composantes de Chuanmutong. Utilisez la carte du PAAC qui en résulte pour évaluer l’incidence de chaque variable sur la classification et pour éliminer les composantes qui contribuent de façon significative aux différences entre les groupes. Les opérations spécifiques sont les suivantes :
      1. Dans le logiciel d’analyse de données, cliquez sur Analyse dans le menu et cliquez sur Permutations, définissez le nombre de permutations sur 200 et obtenez les R 2 et Q2 de la carte de score OPLS-DA.
      2. Cliquez sur VIP et choisissez VIP Predictive pour obtenir la carte VIP.

4. Dosage du β-sitostérol à Chuanmutong par CLHP

  1. Conditions chromatographiques (voir étape 1.1)
    1. Préparer la phase mobile : méthanol-eau (97:3).
    2. Réglez le débit de la phase mobile à 1,0 mL/min.
    3. Effectuer la séparation chromatographique sur une colonne C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) maintenue à 30 °C.
    4. Réglez le volume d’injection sur 10 μL.
    5. Détecter le composant à une longueur d’onde de 204 nm.
  2. Préparation de la solution échantillon
    1. Préparer la solution mère étalon de β-sitostérol (0,1 mg/mL) en dissolvant dans du méthanol une quantité pesée avec précision de l’étalon de référence correspondant.
    2. Broyer l’échantillon d’analyse de la matière première jusqu’à ce qu’il atteigne une taille de particules uniforme en faisant passer l’échantillon à travers le treillis en nylon d’un diamètre intérieur de 180 μm ± 7,6 μm.
    3. Placer 2 g de matière première broyée (pesée avec précision) dans une fiole à fond rond et y ajouter 50 ml de chloroforme.
    4. Connecter la fiole à un réfrigérant à reflux et la chauffer au bain-marie bouillant (ébullition modérée) pendant 60 min. Filtrer la solution d’extraction avec un papier filtre de 15-20 μm.
    5. Évaporer le filtrat jusqu’à quasi-sécheresse au bain-marie bouillant (ébullition modérée) pendant environ 10 min.
    6. Dissoudre le résidu et porter le volume à 5 mL avec du méthanol. Enfin, passez le surnageant à travers une membrane filtrante de 0,45 μm et placez-le en veille.
  3. Validation de la méthode
    1. Prélever la solution mère de β-sitostérol préparée à l’étape 4.2.1, la diluer avec du méthanol à 100 % et préparer des solutions à 100 μg/mL, 80 μg/mL, 60 μg/mL, 50 μg/mL, 40 μg/mL, 30 μg/mL et 20 μg/mL.
    2. Injecter les échantillons dans les conditions chromatographiques décrites à l’étape 4.1 pour déterminer la surface du pic, effectuer une analyse de régression avec la surface du pic au volume d’injection et obtenir l’équation de régression et le coefficient de corrélation pour évaluer sa linéarité.
    3. Préparer les échantillons comme décrit ci-dessus (étape 4.2) et les soumettre à une analyse CLHP (étape 4.1) six fois le même jour. Calculez ensuite le RSD des zones de pic pour évaluer la précision.
    4. Évaluer la stabilité de la solution échantillon en analysant les mêmes solutions d’échantillon stockées à TA pendant 0, 2, 4, 6, 8, 12 et 24 h, comme décrit à l’étape 4.1. Calculez ensuite la DSR des zones de crête comme décrit à l’étape 1.3.5.
    5. Examiner la répétabilité en dissolvant le même échantillon (CMT-4) dans un sextuplicate, préparé comme décrit à l’étape 4.2, et en le soumettant à une analyse CLHP comme décrit à l’étape 4.1. Calculez ensuite la DSR de la teneur en β-sitostérol dans six échantillons.
    6. Évaluer la précision de la méthode en utilisant la méthode d’addition standard. Pour cela, ajoutez des solutions de référence de β-sitostérol aux échantillons à 80%, 100% et 120% de la teneur en β-sitostérol et répétez chaque condition trois fois comme décrit à l’étape 4.1. Évaluer la précision de la méthode en calculant la récupération moyenne et la DSR.
      NOTE: La formule de calcul du taux de récupération (RR) est la suivante:
      RR % = [(M t - M 0) / Ms] × 100
      Où M t = la qualité du β-sitostérol après addition de l’étalon, M 0 = la qualité de la solution échantillon et Ms = la qualité du β-sitostérol ajouté.
  4. Détermination de la teneur en β-sitostérol des échantillons
    1. Prélever 10 lots de matières médicinales chinoises authentiques et cinq lots d’adultérants apparentés pour préparer des solutions d’échantillon conformément à l’étape 4.2.
    2. Injecter ensuite chaque solution échantillon et solution de référence de β-sitostérol pour déterminer la surface du pic dans les conditions décrites à l’étape 4.1, et calculer la teneur en β-sitostérol de chaque échantillon en utilisant la méthode étalon externe en un point.

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Résultats

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Empreinte chromatographique de Chuanmutong et analyse de similarité (SA)
Les valeurs RSD du temps de rétention relatif de précision, de répétabilité et de stabilité étaient inférieures à 0,46 %, 1,65 % et 0,53 %, respectivement; les valeurs RSD de la zone de pointe relative étaient inférieures à 4,23%, 3,56% et 3,96%, respectivement. Comme le montrent les figures 1A, B, il y avait 12 pics communs distincts (du pic 1 au pic 12) dans les empreintes HPLC dans les 10<...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La collecte d’échantillons pour la recherche est la première étape clé de la construction de la reconnaissance multi-motifs dans l’identification de l’authenticité des matériaux médicinaux chinois. Grâce à des études de marché, nous avons constaté que Sichuan Ya’an, Liangshan et Leshan sont les principales zones de production des ressources sauvages de Chuanmutong. Les variétés apparentées d’un même genre ont également la même répartition géographique 6,20 ; CC, ...

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Déclarations de divulgation

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ce travail a été soutenu par le projet de l’Administration de la médecine traditionnelle chinoise du Sichuan (n° 2020JC0088, n° 2021MS203).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Acide acétiqueZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine2017381038
AcétonitrileSigma-Aldrich  ; Trading Co., Ltd., Shanghai, ChineWXBD5243V
&beta ;-SitosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chine20210201
  ; C18 colonneYuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, ChineWelch Ultimate LP
ChuanmutongGuoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;19020103CMT-1
ChuanmutongHongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine200701CMT-2
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine.200701CMT-3
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine.200901CMT-4
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;210701CMT-5
ChuanmutongHaobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;210401CMT-6
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;200901CMT-7
ChuanmutongWusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;201201CMT-8
ChuanmutongLimin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, Chine  ;201001CMT-9
ChuanmutongYuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine210501CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. WangMadzi Bridge, canton de Sanlang, comté de Tianquan, Sichuan, Chine.-CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.Village de Heilin, canton de Qiliping, comté de Hongya, Sichuan, Chine.-DC
Clematis peterae Main.-Mazz.Village de Huangmu, canton de Huangmu, comté de Hanyuan, Sichuan, Chine.-DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et WilsMixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China  ;-XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot.Village de Wannian, canton de Huangwan, comté d’Emei, Sichuan, Chine.-Balance électronique SMT
Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,  ; Chine  ;FA1204
ErgosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, Chine20210201
ÉthanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine2021112602
Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine2017042043
Acide formiqueKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine2016062901
Chromatographie liquide à haute performanceAgilent, États-Unis.1260
IBM SPSS Statistics version 26.0International Business Machines Corporation, États-Unis-Méthanol
Sigma-Aldrich  ; Trading Co., Ltd., Shanghai, ChineWXBD6409V
MéthanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine202010302
alcool n-butyliqueZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine2020071047
Éther de pétroleZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine2020090125
Acide phosphoriqueComeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine20200110
SESCF-TCM version 2012National Pharmacopoeia Commission,Chine-http://114.247.108.158:8888/login
StigmasterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chine20210201
TrichlorométhaneSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, Chine20200214
Umetrics Version SIMCA 14.1.0.2047Umetrics,Suède-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download
Machine à eau ultrapureYoupu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, ChineUPH-II-10T
Nettoyeur à ultrasonsKunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, ChineKH3200E
Acétate d’éthyle

Références

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