Method Article

Analyse d’échantillons bruts et traités de Cyperi rhizoma par chromatographie liquide et spectrométrie de masse en tandem chez des rats atteints de dysménorrhée primaire

DOI:

10.3791/64691

⸱

December 23rd, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Chongqing Engineering Research Center of Pharmaceutical Evaluation of Chinese Medicine, Chongqing Academy of Chinese Materia Medica

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ici, une analyse comparative d’échantillons bruts et traités de Cyperi rhizoma (CR) est présentée à l’aide de la chromatographie liquide ultra-haute performance-spectrométrie de masse en tandem à haute résolution (UPLC-MS/MS) chez des rats atteints de dysménorrhée primaire. Les changements dans les taux sanguins des métabolites et des constituants de l’échantillon ont été examinés entre des rats traités par RC et des rats traités au vinaigre (CRV).

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cyperi rhizoma (CR) est largement utilisé en gynécologie et est un médicament général pour traiter les maladies des femmes en Chine. Étant donné que l’effet analgésique de la RC est renforcé après le traitement avec du vinaigre, la RC traitée avec du vinaigre (CRV) est généralement utilisée cliniquement. Cependant, le mécanisme par lequel l’effet analgésique est renforcé par le traitement du vinaigre n’est pas clair. Dans cette étude, la technique de chromatographie liquide à ultra-haute pression par spectrométrie de masse en tandem (UPLC-MS/MS) a été utilisée pour examiner les changements dans les concentrations sanguines des constituants exogènes et des métabolites entre les rats atteints de dysménorrhée traités par RC et traités par CRV. Les résultats ont révélé des niveaux différents de 15 constituants et deux métabolites dans le sang de ces rats. Parmi eux, les taux de (-)-myrténol et d’acide [(1R,2S,3R,4R)-3-hydroxy-1,4,7,7-tétraméthylbicyclo[2.2.1]hept-2-yl]acétique dans le groupe CRV étaient considérablement plus élevés que dans le groupe CR. La CRV a réduit le niveau de prostanoïdes de la série 2 et des leucotriènes de la série 4 avec des activités pro-inflammatoires, d’agrégation plaquettaire et de vasoconstriction et a fourni des effets analgésiques en modulant le métabolisme de l’acide arachidonique et de l’acide linoléique et la biosynthèse des acides gras insaturés. Cette étude a révélé que le traitement du vinaigre améliore l’effet analgésique de la RC et contribue à notre compréhension du mécanisme d’action de la CRV.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La dysménorrhée primaire (MP) est l’affection la plus fréquente en gynécologie clinique. Elle se caractérise par des maux de dos, un gonflement, des douleurs abdominales ou une gêne avant ou pendant la menstruation sans pathologie pelvienne dans le système reproducteur1. Un rapport sur sa prévalence a montré que 85,7% des étudiants souffrent de2. Les contraceptifs oraux à faible dose sont le traitement standard, mais leurs effets secondaires indésirables, tels que la thrombose veineuse profonde, attirent de plus en plus l’attention3. La prévalence de la thrombose veineuse profonde chez les utilisatrices de contraceptifs oraux est de >1 pour 1 000 femmes, et le risque est le plus élevé au cours des 6 à 12 premiers mois et chez les utilisatrices âgées de plus de 40 ans4.

Longtemps utilisé en médecine traditionnelle chinoise (MTC), le Cyperi rhizoma (CR) est dérivé du rhizome séché du Cyperus rotundus L. de la famille des Cyperaceae. La RC régule les troubles menstruels et soulage la dépression et la douleur5. La RC est largement utilisée en gynécologie et est considérée comme un médicament général pour traiter les maladies féminines6. La RC traitée avec du vinaigre (CRV) est généralement utilisée cliniquement. Par rapport à la RC, la CRV montre une meilleure régulation de la menstruation et un soulagement de la douleur. Des études modernes ont montré que la RC inhibe la cyclooxygénase-2 (COX-2) et la synthèse ultérieure des prostaglandines (PG), obtenant ainsi un effet anti-inflammatoire. Pendant ce temps, la RC présente un effet analgésique sans effets secondaires7, ce qui fait de la RC un bon choix pour les patients dysménorrhées. Cependant, le mécanisme sous-jacent à la régulation des menstruations et à la fourniture d’un soulagement de la douleur par CRV n’est pas clair. La recherche sur la RC s’est principalement concentrée sur les changements dans ses composants chimiques actifs et ses activités pharmacologiques, telles que ses effets anti-inflammatoires, antidépresseurs et analgésiques 8,9,10,11,12.

Bien que les ingrédients de la MTC soient complexes, ils sont absorbés dans le sang et doivent atteindre une concentration sanguine spécifique pour être efficaces13. La portée du dépistage des ingrédients actifs de la MTC peut être réduite en utilisant la stratégie de détermination des constituants dans le sang. La cécité peut être évitée en étudiant les composants chimiques in vitro, et l’unilatéralité peut être évitée en étudiant les constituants individuels14. En comparant les compositions de CR et de CRV dans le sang, les changements dans les ingrédients actifs de la CR traitée peuvent être détectés efficacement et rapidement. L’efficacité d’un médicament est le processus par lequel un médicament influence le corps. Les changements dans les composants du médicament dus à la réponse métabolique du corps, qui peuvent être liés au mécanisme d’action du médicament, peuvent être déterminés avec la métabonomique. Metabonomics vise à mesurer les réponses métaboliques globales et dynamiques, ce qui est cohérent avec la détermination de l’efficacité globale de la médecine traditionnelle chinoise15. En outre, les métabolites sont le produit final de l’expression génique, qui est la plus étroitement liée aux phénotypes16. Ainsi, la métabonomique peut convenir pour explorer les différences dans les voies métaboliques entre la RC et la CRV dans le traitement de la MP. La métabolomique non ciblée basée sur la chromatographie liquide et la spectrométrie de masse en tandem à haute résolution (LC-MS/MS) se caractérise par un débit élevé, une sensibilité élevée et une haute résolution et peut être utilisée pour mesurer de nombreux petits composants moléculaires différents17,18 . Cette méthode permet de déterminer simultanément les métabolites endogènes et les constituants exogènes absorbés dans le sang. La métabonomie a été largement utilisée dans des études sur la MTC19, la toxicologie des médicaments20, la gestion de la santé 21, le sport 22, l’alimentation 23 et d’autres domaines.

Dans cette étude, les différences entre les constituants exogènes absorbés dans le sang et les métabolites endogènes ont été mesurées entre des rats modèles de dysménorrhée traités par RC et traités par CRV en utilisant une métabolomique non ciblée basée sur la LC-MS / MS pour révéler les mécanismes des effets analgésiques de la CRV.

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toutes les expériences sur les animaux ont été menées avec l’approbation du Comité d’éthique des expériences de l’Institut de MTC de Chongqing. Vingt-quatre rats Sprague Dawley femelles âgés de 8 à 10 semaines et pesant 200 g ± 20 g ont été utilisés dans cette expérience.

1. Préparation de l’extraction

  1. Calcul
    1. Prévoyez d’administrer l’extrait de RC ou de CRV à un groupe de traitement de six rats Sprague-Dawley (10 g/[kg∙jour]) pendant 3 jours. Utilisez une concentration d’extrait CR ou CRV de 1 g/mL (1 mL de l’extrait est obtenu à partir de 1 g d’herbes).
      REMARQUE: La posologie de CR est de 6-10 g. Dans cette étude, la dose maximale de 10 g a été utilisée comme dosage. Comme le poids moyen d’une personne adulte est de 60 kg, la dose adulte est de 0,1667 g / kg. Selon l’algorithme de conversion de poids24, comme le coefficient de conversion de dose entre les humains et les rats est de 6,3, la posologie pour les rats est de 1,05 g / kg. La posologie du médicament a été augmentée de 10 fois à 10,5 g / kg pour les rats. La posologie a été fixée à 10 g/kg pour faciliter le calcul et l’expérience réelle. Par exemple, selon le calcul, si un total de 36 g de RC ou de CRV est nécessaire, la phytothérapie chinoise doit être préparée au moins deux fois. Ainsi, 200 g de RC ont été nécessaires - 100 g de RC ont été utilisés comme RC, et 100 g de CR ont été transformés en CRV.
    2. Calculer le volume de RC ou de CRV à appliquer par rat à l’aide de l’équation (1):
      V = 10 g/(kg∙jour) × 200 g/(1 g/mL) = 2 mL (1)
  2. Traitement du CRV
    1. Bien mélanger 100 g de CR et 20 g de vinaigre (>5,5 g d’acide acétique/100 mL) et incuber pendant 12 h.
      REMARQUE: Pour s’assurer que l’intérieur du CR a été humidifié par du vinaigre après 12 heures, le CR et le vinaigre ont été mélangés, bien agités, puis agités à nouveau jusqu’à ce que la partie intérieure soit humide.
    2. Faire sauter le mélange dans une poêle en fer pendant 10 min à 110-120 °C. Ensuite, sortez le mélange et laissez-le refroidir à température ambiante.
      REMARQUE: Pour éviter que le CR ne brûle, il est nécessaire de remuer continuellement pendant le chauffage. Si le CRV traité est trop humide, il peut être séché à 60 °C. Lorsque la surface du CR est sépia, le sauté peut être arrêté.
  3. Extraction
    1. Extrait CR
      1. Ajouter 10 fois (la quantité de CR) d’eau pure au CR et laisser tremper pendant 2 h. Assurez-vous que les matières médicinales sont en dessous du niveau de liquide lors du trempage.
        REMARQUE: Le CR doit seulement être coupé en deux avant l’extraction. Le but du trempage est d’extraire les constituants actifs plus efficacement. Le processus de trempage est essentiel.
      2. Porter le mélange d’eau et de médicament à ébullition à feu vif et le maintenir à ébullition à feu doux pendant 20 minutes. Filtrer avec une toile filtrante (100 mesh) et recueillir le filtrat.
        REMARQUE: Lors de la décoctation, une chaleur élevée a été utilisée avant l’ébullition et une chaleur basse a été utilisée pour maintenir l’ébullition.
      3. Répétez l’étape 1.3.1.2 une fois et combinez les filtrats.
      4. Concentrer l’extrait avec un évaporateur rotatif à 1 g/mL (sur la base du médicament original, la température de concentration doit être inférieure à 60 °C).
        NOTE: Les composants actifs de CR sont volatils, de sorte que la température de concentration ne doit pas être supérieure à 60 ° C.
    2. Extrait CRV
      1. Effectuez les mêmes étapes (1.3.1.1-1.3.1.3) que pour la méthode d’extraction CR.
    3. Extrait CR pour test
      1. Pipeter 500 μL de l’extrait CR et 500 μL de méthanol dans un tube microcentrifuge de 1,5 mL, et vortex pendant 30 s pour mélanger.
        REMARQUE: Un mélange de méthanol et d’eau extrait mieux les composants actifs. L’extrait ne doit pas être filtré directement pour les tests.
      2. Centrifuger chaque échantillon pendant 15 min à 1,6502 × g à 4 °C. Filtrez le surnageant, puis transférez-le dans le flacon d’échantillon pour le tester.
        NOTE: Après la centrifugation à grande vitesse du mélange de méthanol et d’extrait, le surnageant peut être directement transféré dans le flacon d’échantillon pour être déterminé sans filtration. En raison de la chaleur générée par le processus de centrifugation, il est préférable d’utiliser une centrifugeuse cryogénique.
    4. Extrait CRV pour les tests
      1. Effectuez les étapes 1.3.3.1-1.3.3.2 pour préparer l’extrait CRV pour les tests.

2. Animaux

  1. Calcul
    1. Prenez 50 mg de benzoate d’estradiol et ajoutez-le à 50 ml d’huile d’olive pour préparer une solution de 1 mg / mL. Prenez 50 mg d’ocytocine et ajoutez-la à 50 mL de solution saline normale pour préparer une solution à 1 mg/mL.
      NOTE: La dose de l’injection intrapéritonéale de benzoate d’œstradiol et d’ocytocine est de 10 mg / (kg ∙jour). Le benzoate d’estradiol est dissous dans l’huile d’olive et l’ocytocine est dissoute dans une solution saline normale. Le benzoate d’estradiol n’est pas facile à dissoudre dans l’huile d’olive et peut être traité par ultrasons pour accélérer la dissolution. Les solutions de benzoate d’œstradiol et d’ocytocine doivent être préparées quotidiennement.
    2. Calculer le volume de solution de benzoate d’œstradiol à appliquer par rat (c.-à-d. V = 10 mg/[kg∙jour] × 200 g/[1 g/mL] = 2 mL). Calculer le volume de solution d’ocytocine à appliquer par rat (c.-à-d. V = 10 mg/[kg∙jour] × 200 g/[1 g/mL] = 2 mL).
  2. Groupement et administration d’animaux
    NOTE: Dix jours ont été attribués pour l’administration25,26. Pendant le traitement, les rats avaient un accès illimité au chow et à l’eau standard. Dans les 30 minutes suivant l’administration d’ocytocine, l’activité de tordage de chaque rat a été suivie. Le modèle de rat a été développé avec succès, comme en témoignent les réponses de torsion des rats modèles, qui comprenaient la contraction utérine, la rotation d’un membre, l’extension du membre postérieur, un tronc creux et la contraction abdominale26.
    1. Assigner 24 rats Sprague-Dawley femelles (rats SD, âgés de 8 à 10 semaines, pesant 200 g ± 20 g) en quatre groupes au hasard - contrôle, modèle, CR et CRV - et les nourrir pendant 7 jours.
    2. Administration animale
      1. Injecter par voie intrapéritonéale aux rats des groupes modèle, CR et CRV 2 mL de solution de benzoate d’estradiol chaque jour. Injecter par voie intrapéritonéale aux rats du groupe témoin 2 mL de solution saline normale.
      2. À partir du jour 8, complétez l’étape 2.2.2.1. Ensuite, administrer par voie intragastrique 2 mL d’extrait de CRV aux rats du groupe CRV, 2 mL d’extrait CR aux rats du groupe CR et 2 mL de solution saline normale aux rats du groupe témoin et du groupe modèle.
      3. Le jour 10, terminez l’étape 2.2.2.2. Ensuite, injecter par voie intrapéritonéale aux rats des groupes modèle, CR et CRV 2 mL de solution d’ocytocine et aux rats du groupe témoin 2 mL de solution saline normale.
    3. Notez les temps de tordion des rats dans les 30 minutes suivant l’injection d’ocytocine.
  3. Prélèvement d’échantillons
    1. Prélevez des échantillons de sang de l’aorte abdominale, excisez l’utérus rapidement et complètement, et séparez soigneusement le tissu conjonctif et la graisse adhérant à la paroi utérine.
      REMARQUE : Le sang a été prélevé près de 1 heure après la dose finale.
    2. Utilisez des tubes microcentrifugés pour préserver et transférer le tissu utérin à l’azote liquide. Conservez les échantillons de tissus à −80 °C.
    3. Centrifuger les échantillons de sang pendant 10 min à 4 125 × g. Retirer le surnageant contenant le sérum et centrifuger à 16 502 × g pendant 10 min à 4 °C. Centrifuger le sérum, puis le conserver dans le tube à −80 °C pour le stockage.
      NOTE: Les échantillons de sang doivent être laissés à température ambiante pendant 1 h pour être retraités.
  4. Traitement des échantillons
    1. Échantillons de sérum
      1. Mettez 400 μL de méthanol et 200 μL de sérum dans un tube microcentrifugeux, et vortex pendant 30 s pour mélanger. Centrifuger chaque échantillon pendant 15 min à 16 502 × g à 4 °C. Remplir les flacons d’échantillons avec le surnageant après la collecte et la filtration. Mélanger tous les surnageants de chaque échantillon avec le même volume pour préparer les échantillons de contrôle de la qualité pour les tests.
    2. Échantillons de tissus utérins
      1. Prenez 100 mg de tissu utérin du segment ipsilatéral et broyez-le avec un volume neuf fois de solution saline normale. Centrifuger l’homogénat pendant 10 min à 4 125 × g et recueillir le surnageant. Placer le surnageant au réfrigérateur à 4 °C pour l’essai ou à −80 °C s’il ne doit pas être testé le même jour.
      2. Placez la solution saline, le mouchoir et les billes d’acier normaux dans un tube microcentrifuge de 2 mL, mettez le tube de microcentrifugeuse dans de l’azote liquide pendant 3 à 5 s, puis mettez le tissu dans un broyeur de tissus pour le broyage.
  5. Analyse d’échantillons
    1. Utiliser un test immuno-enzymatique (ELISA) pour mesurer la teneur en PGF2α et PGE2 dans les tissus utérins des échantillons de rats.
      NOTE: Le kit ELISA PGE 2 chez le rat a été utilisé pour mesurer la teneur en PGE 2, et le kit ELISA PGF2α chez rat a été utilisé pour mesurer le niveau de PGF2α. Les étapes détaillées se trouvent dans les instructions du fabricant. Les détails du kit sont donnés dans le tableau des matériaux.
    2. Évaluez l’échantillon de sérum, l’extrait de RC et l’extrait de CRV à l’aide de UPLC-MS/MS.
      1. Pour UPLC, utiliser une colonne C18 (2,6 μm, 2,1 mm x 100 mm) et une méthode de gradient binaire avec phase mobile A contenant 0,1% d’acide formique et phase mobile B contenant de l’acétonitrile. Régler le gradient d’élution comme suit : de 0 min à 1 min, 15 % B ; de 1 min à 8,5 min, 15 % à 85 % B ; de 8,5 min à 11,5 min, 85 % B ; de 11,5 min à 11,6 min, 99 % à 1 % B; et de 11,6 min à 15 min, 15 % B. Régler le débit à 0,35 mL/min et le volume d’injection à 2 μL.
      2. Pour la SM, réglez la température à 600 °C, le débit de gaz rideau (CUR) à 0,17 MPa et les débits de gaz de gaine et auxiliaire à 0,38 MPa. Réglez la tension de projection ionique du mode ion positif et du mode ion négatif sur 5,5 kV et −4,5 kV, respectivement, la tension du potentiel de dégroupage (DP) sur 80 V ou −80 V, l’énergie de collision (CE) sur 40 eV ou −25 eV, et la superposition d’énergie de collision (CES) sur 35 eV ± 15 eV.
      3. Effectuez le test en suivant le protocole du fabricant à l’aide de UPLC-MS/MS. Effectuez la MS pour une plage de masse de 50 à 1 000 m/z.
      4. Obtenez les résultats UPLC-MS/MS à l’aide du programme de station de travail correspondant en conjonction avec l’acquisition dépendante des informations, le filtre de défauts de masse multiples et la déduction dynamique de l’arrière-plan du mode de détection. Utiliser les échantillons de contrôle de la qualité du sérum combiné pour tester la répétabilité et la stabilité de l’équipement UPLC-MS/MS afin de vérifier l’approche conventionnelle. Avant les échantillons de recherche, injectez les échantillons de contrôle de la qualité pendant quatre cycles successifs, puis injectez-les tous les cinq échantillons de sérum.

3. Traitement des données

  1. Préparation des données
    1. Utilisez un logiciel de conversion pour convertir les données brutes au format mzXML. Normaliser les données de courant ionique total (TIC) de chaque échantillon.
      REMARQUE : Une application interne basée sur R (www.lims2.com) basée sur XCMS a été utilisée pour analyser les informations pour l’intégration, l’alignement, l’extraction et la détection des pics27.
    2. Effectuer l’annotation des métabolites à l’aide d’une base de données MS2 propriétaire (www.lims2.com). Définissez le seuil d’annotation sur 0,328.
      NOTE: Les métabolites endogènes ont été identifiés dans chaque groupe.
  2. Analyse en composantes principales et analyse discriminante partielle orthogonale des moindres carrés
    1. Utilisez un logiciel d’analyse pour effectuer l’analyse en composantes principales (ACP) et la modélisation. Importer les données normalisées des métabolites dans le logiciel d’analyse. Ensuite, utilisez l’ajustement automatique pour générer le modèle d’analyse. Enfin, utilisez le score pour obtenir le nuage de points de l’ACP.
      NOTE: Le regroupement de chaque groupe a été obtenu avec le diagramme de dispersion des scores de l’ACP. L’ACP est un mode d’analyse non supervisé qui regroupe principalement les échantillons par réduction de dimension sans intervention.
    2. Utilisez le logiciel d’analyse pour effectuer l’analyse discriminante orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-DA).
      1. Importez les données normalisées sur les métabolites des groupes CR et CRV dans le logiciel d’analyse.
      2. Importez les données du groupe CR dans le groupe CR créé et importez les données du groupe CRV dans le groupe CRV créé.
        NOTE : OPLS-DA est un mode d’analyse supervisé et le regroupement des échantillons est nécessaire.
      3. Ensuite, utilisez l’ajustement automatique pour créer le modèle d’analyse et utilisez le score pour obtenir le nuage de points de score de l’OPLS-DA. Enfin, utilisez VIP pour obtenir la signification variable dans la valeur de projection (VIP) dans l’OPLS-DA.
        REMARQUE : La signification variable dans les valeurs de projection (VIP) des métabolites dans les groupes CR et CRV a été obtenue par l’intermédiaire de l’OPLS-DA.
  3. Identification des métabolites différentiels potentiels
    1. Éliminer les métabolites dont la valeur VIP est supérieure à 1 à l’étape 3.2.2.3.
    2. Utiliser un logiciel statistique pour calculer la valeur P des métabolites qui ont été éliminés à l’étape 3.3.1 par le test t du Student.
      REMARQUE : Les différences significatives dans les métabolites différentiels potentiels dans les groupes RC et CRV ont été déterminées par un test t de Student. Les métabolites différentiels potentiels étaient ceux dont la valeur p du test t de Student était < 0,05 et dont la signification variable dans la projection (VIP) était supérieure à 1. La représentation a été réalisée à l’aide d’une parcelle volcanique.
  4. Identification des métabolites différentiels
    1. Éliminer les métabolites différentiels potentiels à l’étape 3.3. Utilisez les résultats de l’étape 3.1.2 pour identifier ces métabolites différentiels.
      REMARQUE : Un petit nombre de métabolites différentiels potentiels ont été identifiés, et ils sont devenus les métabolites différentiels candidats.
    2. Filtrer les métabolites différentiels à apparier dans la base de données KEGG. Montrez les changements dans les métabolites différentiels dans les groupes CR et CRV en dessinant une carte thermique.
      REMARQUE : Un petit nombre de métabolites différentiels candidats ont été appariés, et ils sont devenus les métabolites différentiels.
  5. Examen des voies métaboliques potentielles
    1. Téléchargez les différents métabolites dans la base de données Metaboanalyst (www.metaboanalyst.ca).
    2. Utilisez l’analyse des voies pour obtenir les voies métaboliques potentielles.
      NOTE: Les voies métaboliques potentielles ont été obtenues dans les groupes CR et CRV. La valeur P et la valeur d’impact étaient deux indicateurs très importants dans le choix des voies critiques. La valeur P était plus importante que la valeur d’impact. La signification a été définie par une valeur P < 0,05; Des valeurs d’impact plus élevées étaient associées à de meilleures corrélations.
    3. Analyser les voies métaboliques potentielles en téléchargeant les différents métabolites dans la base de données KEGG (http://www.kegg.jp/kegg/pathway.html).
      REMARQUE: La relation entre la fonction de la voie métabolique et la MP doit également être prise en compte. Les voies métaboliques critiques ont été obtenues.
  6. Identification des constituants absorbés dans le sang
    1. Identifier les constituants chimiques dans les extraits CR et CRV à l’aide de la base de données MS2 interne (www.lims2.com), de la base de données sur le métabolome humain (HMDB) et des bases de données Massbank et Chemspider.
    2. Déterminer les constituants absorbés dans le sang dans les groupes RC et CRV, et comparer les constituants entre les groupes CR et CRV.
      NOTE: Les constituants absorbés dans le sang doivent être détectés dans les groupes CR ou CRV mais ne peuvent pas être détectés dans le groupe témoin.
  7. Analyse statistique
    1. Analyser les données à l’aide de l’analyse univariée (UVA) et de méthodes statistiques multivariées, y compris l’analyse de variance (ANOVA) et le test t de Student.
      REMARQUE : Les informations expérimentales ont été présentées à l’aide d’un logiciel statistique sous forme d’écart type moyen ± (±écart-type). P < 0,01 a été considéré comme une différence très significative, et P < 0,05 représentait une différence significative28.

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Analyse de l’expérience du modèle de dysménorrhée
Il n’y a pas eu de réponse tordue dans les 30 minutes dans le groupe témoin parce que ces rats n’ont pas reçu d’injection intrapéritonéale d’ocytocine et de benzoate d’œstradiol pour causer de la douleur. Les rats des groupes modèle, CR et CRV ont présenté des réactions de torsion substantielles après l’injection d’ocytocine. Ces résultats démontrent l’efficacité de la combinaison benzoate d’œstradiol et ocytocine pour induire la dysménorrhée. Les diff...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En raison de la grande variété et de la nature différente des MTC, ces herbes ne fonctionnent parfois pas dans la pratique clinique, ce qui peut être dû au traitement et à la décocation inappropriés des MTC. Les mécanismes de la MTC deviennent de plus en plus apparents avec l’utilisation de la science et de la technologie contemporaines29,30. Cette étude montre que la RC et la CRV ont des effets thérapeutiques chez les rats modèles de MP et que l’effet thérapeuti...

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ce travail a été soutenu par le projet scientifique et technologique de la médecine chinoise de la Commission municipale de la santé et de la planification familiale de Chongqing (numéro de projet: ZY201802297), le projet général de la Fondation des sciences naturelles de Chongqing (numéro de projet: cstc2019jcyj-msxmX065), le plan de renforcement de l’équipe d’innovation du système de technologie agricole à haute efficacité de la région montagneuse moderne de Chongqing [10] et le projet de construction de la discipline clé de la Commission municipale de la santé de Chongqing de la matéria chinoise Traitement médicamenteux.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Acétonitrile  ;Fisher Scientific, Pittsburg, Pennsylvanie, États-Unis197164
BECKMAN COULTER Microfuge 20Beckman  ; Coulter, Inc.
Benzoate d’estradiolShanghai Macklin Biochemical Co., LtdC10042616
acide formiqueFisher Scientific, Pittsburg, PA, États-Unis177799
système LC 30AShimadzu, Kyoto, Japon228-45162-46
Huile d’oliveShanghai Yuanye Biotechnology Co., LtdH25A11P111909
Ocytocine synthétiqueZhejiang peptide biology Co., Ltd  ;
Rat PGF2&alpha ; kit ELISAShanghai lmai Bioengineering Co., Ltd202101
Rat PGFE2 kit ELISAShanghai lmai Bioengineering Co., LtdEDL202006217
SPF Sprague-Dawley ratsHunan SJA Laboratory Animal Co., LtdNuméro de certificat SCXK (Hunan) 2019-0004
Tecan Infinite 200 PRO  ;   ;Tecan Austria GmbH, Autriche1510002987
Système Triple TOF 4600SCIEX, Framingham, MA, États-UnisBK20641402
eauFisher Scientific, Pittsburg, PA, États-Unis152720
MRZ15K0472019092001

References

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