Le protocole était conforme au Code australien de la santé et de la recherche médicale du Conseil national australien de la santé et de la recherche médicale pour le soin et l’utilisation des animaux à des fins scientifiques18. Le comité d’éthique animale de l’Université d’Australie-Occidentale a approuvé prospectivement le protocole (RA3/100/1596). Les moutons proviennent de la ferme Ridgefield de l’Université d’Australie-Occidentale (UWA) (2018-2020). Les moutons ont été introduits dans l’établissement pour grands animaux de l’UWA, accrédité par l’AAALAC, 2 à 3 semaines avant l’intervention chirurgicale. Les moutons étaient initialement logés à l’intérieur dans des enclos partagés à plancher surélevé, avec des enclos simples utilisés pendant la période périopératoire. Les moutons ont été nourris avec des granulés, de l’ivraie d’avoine et des lupins avec un mélange de minéraux calculé sur le poids corporel. La température des pièces a été contrôlée (20,5-21,5 °C) et maintenue sur un cycle lumière/obscurité de 12:12 h. La douleur et le bien-être ont été évalués dans la période postopératoire deux fois par jour pendant 7 jours, puis tous les jours jusqu’à la fin de l’étude. Les paramètres postopératoires surveillés comprenaient des signes de douleur, un resserrement orbitaire, un effort respiratoire, une température, une fréquence cardiaque, le site chirurgical, l’appétit et la consommation d’eau, l’activité, la boiterie, l’état du pelage, la consistance fécale, le travail prématuré, le comportement et les signes de toxémie de grossesse. Les scores attribués à chaque paramètre ont déclenché une intervention lorsque nécessaire.
REMARQUE : Deux interventions chirurgicales de récupération ont été requises : la préparation de la brebis, l’approche chirurgicale et la fermeture, ainsi que la récupération de la brebis sont les mêmes pour les deux interventions chirurgicales. La première procédure est la création chirurgicale de la hernie diaphragmatique chez l’agneau fœtal. La deuxième procédure concerne la mise en place du dispositif d’intervention fœtale et de surveillance de la pression. La conception de l’étude a nécessité deux chirurgies de survie pour permettre au contenu abdominal de se déplacer dans la cavité thoracique après la création de la hernie diaphragmatique, de sorte qu’une hypoplasie pulmonaire puisse se développer avant la chirurgie d’intervention ultérieure.
1. Création chirurgicale de la hernie diaphragmatique chez l’agneau fœtal
- Préparation de la brebis
- À ~80 jours de gestation, prémédiquez la brebis avec une injection intramusculaire d’acépromazine (0,04 mg/Kg) et de morphine (0,3 mg/Kg).
- Induire une anesthésie par voie intraveineuse avec de la kétamine (5 mg/Kg) et du midazolam (0,25 mg/Kg).
- Intuber la trachée de la brebis à l’aide d’une sonde endotrachéale (diamètre intérieur de 8 mm). Maintenir l’anesthésie à l’isoflurane (1 % à 3 % dans l’oxygène) administrée par ventilation à pression positive (10 à 12 respirations/min, volume courant 8 à 10 mL/kg).
- Établissez la surveillance de la brebis à l’aide d’un électrocardiogramme (ECG), de la pression artérielle invasive via un cathéter artériel auriculaire, du CO2 expiré, de la saturation périphérique en oxygène et de la température pendant l’opération.
- Placez la brebis en décubitus dorsal sur la civière. Enroulez des cordes autour des pattes de la brebis et fixez-la doucement à la table.
- Cisaillez la laine de l’abdomen et du flanc de la brebis, puis coupez-la près de la peau.
- Enlevez la saleté et la lanoline de l’abdomen, du flanc et de l’aine de la brebis avec de l’eau et du savon.
- Administrez de la céfazoline (20 mg/kg) par voie intraveineuse toutes les 90 minutes pendant la chirurgie.
- Transférez la brebis au bloc opératoire sur une civière.
- Déplacez la brebis de la civière de transport à la table d’opération.
- Placez la brebis en position couchée dorsale sur la table chirurgicale.
- Fixez tous les membres à la table d’opération à l’aide d’attaches de corde souples.
- Préparation aseptique de l’abdomen exposé : Laver 3 fois avec un gommage chirurgical à la chlorhexidine à 4 %, en éliminant la solution contaminée entre chaque lavage avec de l’alcool à 70 %.
- Compléter la préparation stérile en vaporisant légèrement une solution d’iode à 10 % sur l’abdomen, le flanc et l’aine.
- Couvrez la brebis avec un champ chirurgical fenêtré stérile afin que seul le site de l’incision abdominale soit exposé. Assurez-vous que tous les instruments chirurgicaux, cathéters, seringues et solutions utilisés pendant la chirurgie sont stériles.
- Approche chirurgicale
- Établir une anesthésie locale par infiltration sous-cutanée et musculaire locale de bupivacaïne (5 %; 9,5 ml) à l’aide d’une seringue de 10 ml et d’une aiguille de 22 g.
- Exposez l’utérus par une incision abdominale para-médiane (8-11 cm) à travers la peau de la brebis, le tissu sous-cutané et la linea alba faite avec une lame chirurgicale de taille 10 avec cautérisation si nécessaire pour minimiser les saignements incisionnels.
- Création d’une hernie diaphragmatique
- Localiser la tête/le thorax du fœtus par palpation.
- Couvrez l’utérus d’une pellicule plastique stérile.
- Utilisez des ciseaux chirurgicaux pour faire une fenêtre (6 cm x 4 cm) dans la pellicule plastique.
- Faites une incision utérine de 5 à 7 cm à travers l’utérus et le sac amniotique avec une coupe cautérinaire, en évitant les vaisseaux sanguins utérins et les cotylédons placentaires.
- Extérioriser la tête et les membres antérieurs du fœtus.
- Utilisez des pinces utérines Babcock pour sceller les bords de l’incision utérine et une pellicule plastique stérile étroitement autour de l’abdomen du fœtus pour prévenir la perte de liquide amniotique.
- Positionnez le fœtus sur son côté droit et fixez une deuxième pellicule plastique stérile sur le fœtus extériorisé pour réduire la perte de chaleur et d’humidité. Identifiez l’espace intercostal entre la 9e et la 10e côte à gauche et percez un trou dans la pellicule plastique avec des ciseaux chirurgicaux pour accéder au site d’incision fœtale prévu.
- Établir une anesthésie locale par bloc linéaire chez le fœtus par infiltration sous-cutanée et musculaire locale de bupivacaïne (5 %; 0,25 mL dilué à 0,5 mL avec une solution saline stérile ; 1 mL seringue stérile et aiguille 27 G) dans l’espace intercostal immédiatement adjacent au bord supérieur de la 10e côte pour éviter les vaisseaux sous-costaux.
- À l’aide d’une seringue stérile de 60 ml, baignez la peau fœtale exposée avec une solution chaude de Hartmann (5 à 10 ml toutes les 5 à 10 minutes) afin de garder la peau fœtale humide tout au long des étapes subséquentes.
- Créez une thoracotomie postérolatérale gauche en pratiquant une incision cutanée de 2 à 4 cm avec électrocautérisation dans le 9e espace intercostal immédiatement adjacent au bord crânien de la 10e côte.
- Utilisez des hémostats anti-moustiques pour disséquer brutalement le tissu sous-cutané, les muscles intercostaux et la membrane pleurale pour accéder au diaphragme.
- Utilisez deux petits anti-moustiques pour ramasser le diaphragme à chaque extrémité du site de la hernie de 1 cm de long et élevez le diaphragme par le cran pour le tenir à l’écart de l’estomac, du foie et de la rate sous-jacents.
- Faites une incision de 1 cm entre les deux hémostats à l’aide de petits ciseaux coudés.
- Relâchez les hémostatiques qui maintiennent le diaphragme.
- Utilisez une pince de Potts atraumatique pour tirer l’estomac vers le haut à travers le trou du diaphragme.
- Utilisez une seule attache de monofilament de polydioxanone 5-0 résorbable (aiguille à point conique RB-1) pour envelopper soigneusement les 9e et 10e côtes pour s’opposer aux côtes fœtales, en évitant le poumon sous-jacent.
- Incision thoracotomique rapprochée avec une suture de matelas (monofilament de polydioxanone 5-0 résorbable).
- Fermeture chirurgicale
- Remettez le fœtus dans le sac amniotique.
- Administrer du méloxicam peropératoire (0,25 mg/kg ; par voie sous-cutanée) à la brebis pour l’analgésie postopératoire.
- Remplacez le liquide amniotique perdu à l’aide d’une solution de Hartmann réchauffée (~50 ml) avec de la pipéracilline/tazobactam intra-amniotique (1000 mg/125 mg).
- Apposez les surfaces opposées du chorioamnion et des parois utérines adjacentes et utilisez une suture réceptive polyglactine 910 tressée 2-0 avec une suture de matelas inversé pour fermer l’utérus et le sac amniotique ensemble.
- Fermez la linea alba de la brebis, le tissu sous-cutané et la peau (monofilament de polydioxanone 1 résorbable, monofilament de polyproprone 25 résorbable 3-0 et monofilament de polypropylène 2-0 non résorbable respectivement).
- Récupération et surveillance des brebis
- Vaporisez la plaie abdominale postopératoire avec du ruban de rétention de pansement imperméable et couvrez-la d’un pansement pour réduire le risque d’infection postopératoire de la plaie.
- Appliquez un timbre transdermique de fentanyl (100 μg/h) sur l’aine pour une analgésie postopératoire supplémentaire.
- Récupérez la brebis et extuber lorsque vous respirez spontanément, puis laissez-la se réveiller.
- Surveiller les brebis quotidiennement jusqu’à l’accouchement pour une intervention chirurgicale fœtale.
- Retirez les sutures après 14 jours.
2. Mise en place du dispositif d’intervention fœtale et de surveillance de la pression
- Préparation de la brebis pour l’intervention fœtale à 101 jours de gestation
- Injecter de la médroxyprogestérone (1 ml) par voie intramusculaire à ~85 jours de gestation (terme ~147 jours) pour réduire le risque d’accouchement prématuré.
- Utilisez la même procédure de préparation anesthésique et chirurgicale que celle utilisée pour la chirurgie initiale de création du diaphragme.
- Suivez l’approche chirurgicale des étapes 2.1.2.2 et 2.1.2.3, comme aux étapes 1.2.1 et 1.2.2.
- Établir une anesthésie locale par infiltration sous-cutanée et musculaire locale de bupivacaïne (5 %; 9,5 ml) à l’aide d’une seringue de 10 ml et d’une aiguille de 22 g.
- Avec une incision abdominale para-médiane (8 à 11 cm) adjacente au site d’incision abdominale utilisé pour la chirurgie de création du diaphragme, exposez l’utérus à travers la peau de la brebis, le tissu sous-cutané et la linea alba faite avec une lame chirurgicale de taille 10 avec cautérisation si nécessaire pour minimiser les saignements incisionnels.
- De plus, administrer de l’oxytétracycline (20 mg/kg) par voie intramusculaire à la brebis pour fournir une protection antimicrobienne fœtale contre le dispositif de surveillance implanté de manière chronique.
- Activation de l’appareil
- Activer l’appareil de mesure de pression19.
- Tube de mesure de pression par pince avec hémostats.
- Placez l’ensemble de l’appareil dans un bol stérile contenant un mélange d’acide peracétique à 0,08 % et de peroxyde d’hydrogène à 1 % pendant au moins 1 h, en vous assurant que l’ensemble de l’appareil est couvert.
- À l’aide d’une pince stérile, placez le dispositif dans un bol stérile contenant de l’eau stérile pendant au moins 10 minutes avant l’implantation fœtale. Assurez-vous que l’ensemble de l’appareil est recouvert d’eau stérile.
- Approche chirurgicale et intervention fœtale
- Extérioriser la tête fœtale par hystérotomie en utilisant la même approche chirurgicale que celle utilisée pour la chirurgie initiale, mais avec des incisions utérines adjacentes (étapes 1.1-2.2).
- Gardez la tête et le cou du fœtus extériorisés enveloppés dans le champ en plastique stérile pour minimiser la perte de température et de liquide.
- Instrumentez la trachée à l’aide d’un cathéter pour mesurer la pression (figure 1).
- Pour une trachée non occluse, suivez les étapes 2.3.3.2 à 2.3.3.3.
- Intubez le fœtus d’agneau à l’aide d’un cathéter d’aspiration à 5 français (1,67 mm de diamètre intérieur) avec le connecteur d’aspiration retiré à une profondeur de 14 cm au coin de la bouche de l’agneau.
- Connectez l’extrémité externe du cathéter à l’aide d’un connecteur de 1,59 mm (diamètre extérieur, OD) à 3,18 mm (OD) et d’un tube en silicone de 30 cm de long et de 3,18 mm (ID).
- Pour la trachée cluse, suivez les étapes 2.3.3.5 à 2.3.3.6.
- Intubez le fœtus de l’agneau à l’aide d’un tube endotrachéal à microbrassard de 3,0 avec le connecteur retiré à une profondeur de 14 cm jusqu’à un coin de la bouche de l’agneau.
- Connectez l’extrémité externe du cathéter à l’aide d’un connecteur de 3,18 mm (OD) à 3,18 mm (OD) et d’un tube en silicone de 30 cm de long et de 3,18 mm (ID).
- Connectez l’autre extrémité du tube en silicone de 30 cm de long et de 3,18 mm (ID) à l’appareil de mesure de pression à l’aide d’un connecteur de 3,18 mm (OD) à 1,59 mm (OD) sur l’appareil de mesure de pression.
- Suturez le cathéter au coin de la bouche et du cou de l’agneau (monofilament de nylon non résorbable 4-0).
- Fixez l’appareil de mesure de la pression sur la peau de l’agneau sur la poitrine (monofilament de nylon non résorbable 4-0) (figure 2).
- Fermez les incisions chirurgicales du fœtus et de la brebis comme lors de la chirurgie de création de hernie diaphragmatique initiale (étapes 1.4 à 1.5).
- Appareil de test
- Testez si l’appareil transmet le signal19.
- Récupération et surveillance des brebis
- Récupérer la brebis selon la chirurgie initiale.
- Surveiller les brebis quotidiennement jusqu’à l’accouchement.
- Administrer une deuxième dose de médroxyprogestérone (0,5 ml) par voie intramusculaire à ~120 jours de gestation.
- Administrer de la bétaméthasone (5,7 mg) par voie intramusculaire 48 h et 24 h avant l’accouchement par césarienne pour favoriser la maturation fœtale en vue des soins postnatals.
- Livraison d’agneau
- À ~142 jours de gestation (terme ~147-150 jours), prémédiquer la brebis par injection intramusculaire d’acépromazine (0,03 mg/kg) et de morphine (0,3 mg/kg).
- Induire une anesthésie par voie intraveineuse avec du thiopental (10-15 mg/Kg), intuber la brebis avec une sonde endotrachéale (taille 8,5 mm) et maintenir l’anesthésie par isofluorane avec une surveillance appropriée par anesthésiques antérieurs.
- Procéder à l’accouchement chirurgical du fœtus par hystérotomie comme pour les chirurgies précédentes, avec une brebis en décubitus dorsal (étapes 1.1 - 2.2).
- Retirez le dispositif de surveillance. Nettoyez l’appareil avec de l’eau et 70 % d’éthanol.
- Tuez la brebis sans cruauté avec une injection intraveineuse de 160 mg/kg de solution sodique de pentobarbital.
- Réanimer et aérer l’agneau pendant 2 à 3 h, puis le mettre à mort sans cruauté (160 mg/kg de solution sodique de pentobarbital, injection intraveineuse).
- Données
- Téléchargez des données sur un ordinateur portable etanalysez-en 19. Filtrez les données de pression à l’aide d’une fenêtre de 6 heures. Calculez la différence de pression entre les pressions amniotiques et trachéales.