La présente étude décrit un protocole permettant de surveiller les changements dans les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC) au cours d’une infection virale à l’aide d’un système d’analyse cellulaire en temps réel (RTCA).
Article de méthode
La présente étude décrit un protocole permettant de surveiller les changements dans les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC) au cours d’une infection virale à l’aide d’un système d’analyse cellulaire en temps réel (RTCA).
Les cellules endothéliales tapissent la surface interne de tous les vaisseaux sanguins et lymphatiques, créant une barrière semi-perméable régulant les échanges de fluides et de solutés entre le sang ou la lymphe et leurs tissus environnants. La capacité d’un virus à traverser la barrière endothéliale est un mécanisme important qui facilite la dissémination du virus dans le corps humain. De nombreux virus altèrent la perméabilité endothéliale et/ou provoquent une perturbation de la barrière cellulaire endothéliale pendant l’infection, ce qui peut provoquer des fuites vasculaires. La présente étude décrit un protocole d’analyse cellulaire en temps réel (RTCA), utilisant un analyseur cellulaire commercial en temps réel pour surveiller l’intégrité endothéliale et les changements de perméabilité pendant l’infection par le virus Zika (ZIKV) des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC). Les signaux d’impédance enregistrés avant et après l’infection par le virus Zika ont été traduits en valeurs d’indice cellulaire (IC) et analysés. Le protocole RTCA permet de détecter des effets transitoires sous forme de changements morphologiques cellulaires lors d’une infection virale. Ce test pourrait également être utile pour étudier les changements dans l’intégrité vasculaire des HUVEC dans d’autres configurations expérimentales.
Les cellules endothéliales (CE) tapissent la surface interne de tous les vaisseaux sanguins et lymphatiques. Ils sont reliés par des adhérents, des jonctions lacunaires serrées, créant une barrière semi-perméable entre le sang ou la lymphe et les tissus environnants 1,2. Les jonctions cellule-cellule endothéliale intactes sont essentielles pour réguler le transport des macromolécules, des solutés et des fluides, ce qui est crucial pour les activités physiologiques des tissus et organes correspondants3. La barrière endothéliale est dynamique et modulée par des stimuli spécifiques
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1. Préparation des cellules
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Avant l’infection par le virus Zika, l’IC enregistré pour la monocouche HUVEC cultivée sur une plaque de microtitration spécialisée recouverte de microélectrodes d’or était supérieur à 8, ce qui suggère de fortes propriétés d’adhérence. Les plaques ou les puits dont l’indice IC est inférieur à 8 doivent être jetés. Les HUVEC ont ensuite été infectés par le virus Zika à un moment d’inertie de 0,1 et 1, et l’impédance cellulaire a été enregistrée pendant 7 jours. La valeur de l’IC des HUVEC infectés par le virus Zikv P6-74.......
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L’infection virale cytocide dans les cellules permissives est généralement associée à des changements substantiels dans la morphologie cellulaire et la biosynthèse36. Les changements morphologiques cellulaires induits par le virus, tels que le rétrécissement cellulaire, l’élargissement cellulaire et/ou la formation de syncytia, sont également connus sous le nom d’effets cytopathiques (EPC), caractéristiques de certaines infections virales37. Dans les CE, l’EPC a été décrite.......
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Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts concurrents.
Cette recherche a reçu le soutien du ministère de l’Enseignement supérieur de Malaisie dans le cadre du programme Higher Institution Centre of Excellence (HICoE) (MO002-2019) et un financement dans le cadre du programme de subventions de recherche à long terme (LRGS MRUN Phase 1 : LRGS MRUN/F1/01/2018).
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Tube de microcentrifugation de 1,5 mL | Nest | 615601 | |
| 37 ° ; C incubateur à 5 % de CO2 | Sanyo | MCO-18AIC | |
| 75 cm2 flacon de culture tissulaire ; | Corning | 430725U | |
| Solution antibiotique pénicilline-streptomycine (P/S) | Sciencell | 0503 | |
| Enceinte de sécurité biologique, Classe II | Holten | HB2448 | |
| Collagène de type 1 | SIgma-Aldrich | C3867 | |
| Supplément de croissance des cellules endothéliales (ECGS) | Sciencell | 1052 | |
| Milieu de cellules endothéliales (ECM) | Sciencell | 1001 | |
| E-plate 96 | Agilent Technologies, Inc. | ||
| Sérum fœtal bovin (FBS) | Sciencell | 0025 | |
| Solution saline équilibrée de Hanks (HBSS) | Sigma-Aldrich | H9394 | |
| Hémocytomètre | Laboroptik LTD | Neubauer Cellules | |
| (HUVECs) | Microscope inversé Sciencell | 8000 | |
| ZEISS | TELAVAL 31 | ||
| Latitude 3520 Ordinateur portable | Dell ; | - | |
| Micropipette multicanaux (10 - 100 & micro ; L) | Eppendorf | 3125000036 | |
| Micropipette multicanaux (30 - 300 & micro ; L) | Eppendorf | 3125000052 | |
| Réactif réservateur | Tarsons | T38-524090 | |
| Plaque de résistance RTCA 96 | Agilent Technologies, Inc. | ||
| RTCA Software Pro (Version 2.6.1) | Agilent Technologies, Inc. | ||
| Pipettes monocanaux (10 - 100 & micro ; L) | Eppendorf | 3123000047 | |
| Pipettes monocanaux (100 - 1000 & micro ; L) | Eppendorf | 3123000063 | |
| Pipettes monocanaux (20 - 200 & micro ; L) | Eppendorf | 3123000055 | |
| xCELLigence Analyseur de cellules en temps réel SP (Modèle : W380) | Agilent Technologies, Inc. | 00380601030 | https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-analysis/rtca-analyzers/xcelligence-rtca-sp-single-plate-741232 |
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