Ici, nous proposons un protocole pour l’administration intratrachéale de lipopolysaccharides (LPS) via une intubation endotrachéale oropharyngée non invasive. Cette méthode minimise le traumatisme de l’intervention chirurgicale pour l’animal et délivre avec précision le LPS à la trachée, puis aux poumons.
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Article de méthode
Instillation intratrachéale non invasive de lipopolysaccharides chez la souris
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le modèle murin de lésion pulmonaire aiguë (LAI) induite par le lipopolysaccharide (LPS) ou l’endotoxine est toujours parmi les modèles les plus couramment utilisés dans les études animales de lésions pulmonaires aiguës ou d’inflammation aiguë. Les méthodes actuellement les plus couramment utilisées dans les modèles murins de lésions pulmonaires aiguës sont l’injection intrapéritonéale de LPS et la trachéotomie pour la perfusion trachéale de LPS. Cependant, la première méthode manque de ciblage pulmonaire et endommage d’autres organes, et la dernière méthode induit un traumatisme opératoire, un risque d’infection et un faible taux de survie. Ici, nous recommandons une méthode d’intubation endotrachéale oropharyngée non invasive pour l’instillation de LPS chez la souris. Dans cette méthode, le LPS est introduit de manière non invasive dans la trachée par la cavité oropharyngée pour être instillé dans les poumons à l’aide d’un appareil d’intubation endotrachéale. Cette méthode assure non seulement le ciblage pulmonaire, mais évite également les dommages et le risque de mort chez les animaux. Nous nous attendons à ce que cette approche soit largement utilisée dans le domaine des lésions pulmonaires aiguës.
Introduction
Les lésions pulmonaires aiguës (LAI) sont un syndrome clinique courant. Sous une variété de facteurs pathogènes, la perturbation de la barrière physiologique des cellules épithéliales pulmonaires et des cellules endothéliales vasculaires entraîne une augmentation de la perméabilité alvéolaire, entraînant ainsi une diminution de la compliance pulmonaire, un œdème pulmonaire et une hypoxémie sévère1. Le syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA) est la forme la plus grave de LAI. L’inflammation incontrôlée et les dommages causés par le stress oxydatif sont considérés comme les principales causes de l’ALI et du SDRA2 pl....
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Protocole
Le protocole d’expérimentation animale a été examiné et approuvé par le Comité de gestion de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Chengdu (dossier n° 2021-11). Des souris C57/BL mâles (20-25 g, âgées de 6 à 8 semaines) ont été utilisées pour la présente étude. Les souris ont été gardées dans une chambre animale et étaient libres de boire et de manger pendant l’expérience.
1. Préparation
- Assurez-vous que la plate-forme d’intubation se compose d’une base, d’une colonne montante, d’un trombone, de deux élastiques et de ficelles. Prenez une ficelle, passez la ficelle à travers les deux trous au sommet d....
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Résultats
La méthode proposée pour l’instillation de LPS chez la souris a été vérifiée en évaluant l’expression de la cytokine inflammatoire TNF-α et le rapport poids sec-humide des poumons 12 h après l’instillation de LPS. Il y avait quatre groupes dans l’expérience: témoin à blanc (sans aucun traitement), intubation chirurgicale16, intranasale17,18 et intubation oropharyngée non invasive (n = 6). Par rapport au gro.......
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Discussion
Dans un premier temps, nous avons regardé à l’intérieur de la cavité buccale pour trouver l’emplacement de la trachée19. Cependant, au cours de ce processus, nous avons découvert que la trachée des souris C57 / BL est étroite, ce qui rend difficile de trouver l’emplacement correct par cette méthode sans l’aide d’équipements tels qu’un endoscope20. Après une exploration plus approfondie, nous avons constaté que la lumière de la lampe à intubateur pouvait pénétrer la surface .......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (No.: 81903902), la China Postdoctoral Science Foundation (No.: 2019M663457), le Sichuan Science and Technology Program (No.: 2020YJ0172) et le Xinglin Scholar Research Premotion Project de l’Université de Chengdu de TCM (No.: QJRC2022053).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Lipopolysaccharide | MERK | L4130 | LPS |
| Seringues d’un microlitre | SHANGHAI GAOGE INDUSTRY AND TRADE CO., LTD | Pour livrer LPS | |
| Canule de souris | RWD Life Science | 803-03008-00 | Canule de souris |
| Kit d’intubation de souris | RWD Life Science | 903-03027-00 | Comprenant une base, une colonne montante, un intubateur, une pince chirurgicale et certains cordes |
| Pipette Pasteur | Biosharp life science | BS-XG-03 | Pour vérifier le succès de l’intubation |
| Pentobarbital sodium | Beijing Chemical Co., Chine | 20220918 | Pour anesthésier les souris |
Références
- Xia, Y., et al. Protective effect of human amnion epithelial cells through endotracheal instillation against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice. Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 33 (1), 7-11 (2017).
- Butt, Y., Kurdowska, A., Allen, T. C.
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Réimpressions et autorisations
