Isolement et culture de macrophages synoviaux primaires et de fibroblastes à partir de tissus arthritiques murins

Résumé

La présente étude fournit un protocole modifié pour isoler les macrophages synoviaux et les fibroblastes du tissu arthritique inflammatoire murin.

Résumé

La polyarthrite rhumatoïde est une maladie auto-immune qui entraîne une inflammation chronique des articulations. Les macrophages synoviaux et les fibroblastes synoviaux jouent un rôle central dans la pathogenèse de la polyarthrite rhumatoïde. Il est important de comprendre les fonctions des deux populations cellulaires pour révéler les mécanismes sous-jacents à la progression pathologique et à la rémission de l’arthrite inflammatoire. En général, les conditions expérimentales in vitro devraient imiter autant que possible l’environnement in vivo . Des cellules dérivées de tissus primaires ont été utilisées dans des expériences caractérisant les fibroblastes synoviaux dans l’arthrite. En revanche, dans les expériences portant sur les fonctions biologiques des macrophages dans l’arthrite inflammatoire, des lignées cellulaires, des macrophages dérivés de la moelle osseuse et des macrophages dérivés de monocytes sanguins ont été utilisés. Cependant, il n’est pas clair si ces macrophages reflètent réellement les fonctions des macrophages résidant dans les tissus. Pour obtenir des macrophages résidents, les protocoles précédents ont été modifiés pour isoler et développer à la fois les macrophages primaires et les fibroblastes du tissu synovial dans un modèle murin d’arthrite inflammatoire. Ces cellules synoviales primaires peuvent être utiles pour l’analyse in vitro de l’arthrite inflammatoire.

Introduction

La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie auto-immune caractérisée par une hyperplasie de la synoviale, entraînant une destruction articulaire ^1,2. Les macrophages et les fibroblastes résidant dans les tissus sont présents dans la synoviale saine pour maintenir l’homéostasie articulaire. Chez les patients atteints de PR, les fibroblastes synoviaux (SF) prolifèrent et les cellules immunitaires, y compris les monocytes, s’infiltrent dans la synoviale et le liquide articulaire, processus associés à l’inflammation ^1,3,4

Protocole

Les expériences impliquant des animaux ont été approuvées par le Comité de l’expérimentation animale de l’Université d’Ehime et ont été réalisées conformément aux directives de l’Université d’Ehime pour l’expérimentation animale (37A1-1 * 16).

1. Préparation des instruments, des réactifs et du milieu de culture

1. Préparer le milieu de culture comme suit: compléter le milieu aigle modifié (DMEM) de Dulbecco avec 10% de sérum bovin fœtal (FBS) et 1% de solution antibiotique-antimycotique (anti-anti-anti).
2. Préparer le milieu de digestion comme suit : compléter le milieu de culture avec 1 mg/mL de collagénase ....

Résultats

Les souris C57BL/6 femelles âgées de 7 à 8 semaines ont souffert d’arthrite induite par les anticorps anticollagène. Les cellules de type macrophage et les cellules de type fibroblaste ont été isolées indépendamment du tissu arthritique inflammatoire selon la procédure décrite ci-dessus (figure 2A,B). Des cellules de type macrophage ont été utilisées immédiatement après l’étape 5.7. Les cellules de type fibroblaste ont d’abord été cultivées pour être sous-confluentes après l.......

Discussion

Cette méthode développée ici améliore les techniques précédentes pour isoler à la fois les SF de l’arthrite murine et les macrophages résidents d’un certain nombre d’organes ^7,11. La méthode modifiée peut isoler à la fois les macrophages et les fibroblastes de la synoviale inflammatoire avec une grande pureté, et elle est simple et reproductible. Étant donné que la méthode ne nécessite pas d’instruments complexes tels qu’un trieur de cellules, n’importe qui peut .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
5,0 g/L de trypsine/5,3 mmol/L de solution d’EDTA	nacalai tesque	35556-44	diluée avec l’antibiotique HBSS
. antimycosique (anti/anti)	Gibco	15240-062
Aiguille papillon	TERUMO	SV-23DLK	23G
Passoire cellulaire	Falcon	352340	40 µ ; m pore, Nylon
Cellmatrix Type I-C	Gélatine Nitta	637-00773	Collagène de type I-C
Tube centriguge 15	TPP	91014	Tube de 15 mL
Tube de centriguge 50	TPP	91050	Tube de 50 mL
Collagénase de C. Histolyticum	Sigma	C5138	Collagénase de type IV
Dulbecco' s Modified Eagle Medium GlutaMax (DMEM)	Gibco	10569-010
Sérum fœtal bovin (FBS)	SIGAM	173012	Une inactivation thermique a été réalisée
Solution saline équilibrée de Hanks (HBSS)	Wako	085-09355
Ciseaux	Research Center	PRI28-1525A
Boîte de culture tissulaire 40	TPP	93040	Pour la culture cellulaire
Boîte de culture tissulaire 60	TPP	92006	Pour culture cellulaire
Pince à épiler	KFI	1-9749-31	Pince
épiler	Bio Research Center	PRI28-1522	Pointe dentelée
ZEISS Stemi 305	ZEISS	STEMI305-EDU	Stéréomicroscope

Bio à à pointe fine