Culture primaire de cellules souches de la pulpe dentaire

Ajay Kumar; Shalini Raik; Prakshi Sharma; Vidya Rattan; Shalmoli Bhattacharyya

doi:10.3791/65223

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Article de méthode

Culture primaire de cellules souches de la pulpe dentaire

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DOI :

10.3791/65223

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5 mai 2023

Ajay Kumar^*¹ , Shalini Raik^*¹ , Prakshi Sharma¹ , Vidya Rattan² , Shalmoli Bhattacharyya¹

¹Department of Biophysics, PGIMER, ²Unit of Oral and Maxillofacial Surgery, Department of Oral Health Sciences, PGIMER

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Cet article fournit un guide par étapes pour établir une culture primaire de cellules souches de pulpes dentaires à l’aide de la méthode de culture d’explants et la caractérisation de ces cellules basée sur les directives de l’ICSCRT. Les cellules isolées par ce protocole peuvent être considérées comme des cellules souches mésenchymateuses pour d’autres applications.

Résumé

La pulpe dentaire humaine représente un réservoir de cellules souches multipotentes prometteur avec une compétence régénérative prééminente qui peut être récoltée à partir d’une dent extraite. L’origine ecto-mésenchymateuse dérivée de la crête neurale des cellules souches de la pulpe dentaire (DPSC) confère un haut degré de plasticité qui doit à ses multiples avantages dans la réparation et la régénération des tissus. Il existe diverses façons pratiques de récolter, de conserver et de faire proliférer les cellules souches adultes à l’étude pour leur utilisation en médecine régénérative. Dans ce travail, nous démontrons l’établissement d’une culture primaire de cellules souches mésenchymateuses à partir de tissu dentaire par la méthode de la culture d’explants. Les cellules isolées étaient en forme de fuseau et adhéraient à la surface en plastique de la plaque de culture. La caractérisation phénotypique de ces cellules souches a montré une expression positive des marqueurs de surface cellulaire recommandés par la société internationale de thérapie cellulaire (ISCT) pour les CSM, tels que CD90, CD73 et CD105. De plus, l’expression négligeable des marqueurs hématopoïétiques (CD45) et endothéliales (CD34), et l’expression inférieure à 2 % des marqueurs HLA-DR, ont confirmé l’homogénéité et la pureté des cultures DPSC. Nous avons également illustré leur multipotence basée sur la différenciation en lignées adipogènes, ostéogéniques et chondrogéniques. Nous avons également induit ces cellules à se différencier en cellules de type hépatique et neuronal en ajoutant des milieux de stimulation correspondants. Ce protocole optimisé aidera à la culture d’une population hautement extensible de cellules souches mésenchymateuses qui seront utilisées en laboratoire ou pour des études précliniques. Des protocoles similaires peuvent être incorporés dans des configurations cliniques pour la pratique de traitements basés sur le DPSC.

Introduction

Les cellules souches adultes sont devenues un outil thérapeutique puissant pour les traitements et les thérapies dirigés contre les cellules en raison de leur plasticité, de leurs mécanismes paracrines et de leurs propriétés immunomodulatrices ^1,2,3. Les données encourageantes des études précliniques basées sur les cellules souches ont inspiré les chercheurs à travailler pour la traduction du laboratoire au chevet du patient. Le type de cellules souches utilisé pour la thérapie par cellules souches joue un rôle important dans les résultats positifs. Dans les études précliniqu....