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Article de méthode

Amélioration du développement et de la croissance de rats atteints de paralysie cérébrale infantile à l’aide de manipulations sélectives de la colonne vertébrale

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DOI :

10.3791/65659

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2 février 2024

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1Yunnan University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Cette étude illustre l’effet de la manipulation sélective de la colonne vertébrale sur la croissance et le développement de rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale, en mettant l’accent sur la procédure spécifique et le protocole standardisé. La mesure du poids corporel, le test Rotarod, le score de fautes de pied, d’autres tests comportementaux et la détection de l’hormone de croissance ont été effectués pour évaluer le protocole.

Résumé

La paralysie cérébrale (PC) est une maladie pédiatrique réfractaire avec une prévalence élevée, un taux d’invalidité élevé et un traitement difficile. Une variété de traitements sont actuellement utilisés pour la paralysie cérébrale. Le traitement implique un traitement médicamenteux et non médicamenteux. La thérapie externe de la médecine traditionnelle chinoise est une méthode de traitement très distinctive dans la thérapie non médicamenteuse. En tant que l’une des thérapies externes de la médecine traditionnelle chinoise, le massage est utilisé dans le traitement de la paralysie cérébrale et a une bonne efficacité, de petits effets secondaires et une forte opérabilité. Dans le cadre de la thérapie externe de la MTC, la manipulation sélective de la colonne vertébrale peut favoriser efficacement la croissance et le développement des rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale. L’opération a été principalement divisée en quatre étapes : tout d’abord, la méthode de frottement a été appliquée sur la colonne vertébrale et les deux côtés de la colonne vertébrale pendant 1 min. La méthode de pressage et de pétrissage a été appliquée sur la colonne vertébrale pendant 5 minutes et sur les muscles des deux côtés de la colonne vertébrale pendant 5 minutes. Deuxièmement, on a effectué une pression et un pétrissage des points d’acupuncture locaux sensibles de la colonne vertébrale pendant 2 minutes. Troisièmement, le membre affecté a été traité par la méthode de torsion pendant 1 min. Quatrièmement, la méthode de frottement a été appliquée sur une ligne médiane du front à l’arrière du cerveau pendant 1 min. Cette étude visait à utiliser la manipulation sélective de la colonne vertébrale pour traiter les rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale. Le poids, le test de Rotarod, le score de faute de pied et l’hormone de croissance de rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale ont été détectés pour comprendre l’effet de la manipulation sélective de la colonne vertébrale sur la croissance et le développement de rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale. Les résultats ont montré qu’il peut favoriser la prise de poids, améliorer la capacité d’équilibre et la fonction motrice, favoriser la croissance et le développement des rats atteints de paralysie cérébrale, favoriser la sécrétion d’hormone de croissance et augmenter la température des parties sensibles du dos.

Introduction

La paralysie cérébrale (PC), causée par des lésions cérébrales non progressives chez le fœtus ou la petite enfance, est un groupe de troubles caractérisés par un développement moteur et postural anormal1, des troubles du développement, y compris une prise de poids lente 2,3,4 et un dysfonctionnement moteur. L’incidence de la paralysie cérébrale en Chine est de 2,48 % et la prévalence est de 2,46 ‰ (1-6 ans)5, respectivement. Des études étrangères ont rapporté une prévalence de 2,4 % à 3,6 %6. La paralysie cérébrale est une cause majeure de blessures physiques et d’invalidité chez les enfants, parmi lesquelles les troubles de l’équilibre et du mouvement ont un impact significatif sur les activités de la vie quotidienne1. La paralysie cérébrale peut être causée par une naissance prématurée, une infection, la génétique, l’ischémie et l’hypoxie néonatales, la jaunisse néonatale et d’autres facteurs pathogènes complexes et divers7. L’objectif du traitement de la paralysie cérébrale est d’améliorer la fonction physique et la qualité de vie 8. Actuellement, les méthodes de traitement de la paralysie cérébrale comprennent la stimulation cérébrale profonde9, l’entraînement à la marche assisté par robot10, l’acupuncture du poignet et de la cheville11 et l’acupuncture des méridiens combinée au massage12.

La médecine traditionnelle chinoise (MTC) est de plus en plus utilisée comme traitement efficace de la CP13,14. Le massage, dans le cadre de celui-ci, joue également un certain rôle. Par exemple, la manipulation sélective de la colonne vertébrale peut réguler l’état d’hydroxyméthylation de l’ADN pour réguler le développement neuronal et améliorer l’apprentissage et la fonction de mémoire15. Dans le traitement du rat infantile atteint de paralysie cérébrale, la manipulation sélective de la colonne vertébrale peut améliorer l’homéostasie inflammatoire du cortex et de l’hippocampe en régulant le niveau de méthylation des cytokines inflammatoires TNF-α et de la région promotrice du gène IL-1016 et jouer un rôle thérapeutique positif dans la capacité d’équilibre du rat nourrisson atteint de paralysie cérébrale16. La manipulation sélective de la colonne vertébrale peut améliorer la fonction cognitive des rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale17. La manipulation sélective de la colonne vertébrale a été utilisée dans le traitement des nourrissons rats atteints de paralysie cérébrale, et il a été observé qu’elle avait également des effets thérapeutiques sur leur croissance et leur développement18.

Le but de cette étude est d’illustrer l’effet de la manipulation sélective de la colonne vertébrale sur la croissance et le développement de rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale en mesurant le poids corporel, le test Rotarod19, le score de faute plantaire 20,21 et d’autres tests comportementaux et la détection de l’hormone de croissance, et de fournir des idées de recherche au personnel concerné.

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Protocole

Cette étude a été approuvée par le Comité d’éthique des animaux d’expérimentation de l’Université de médecine traditionnelle chinoise du Yunnan. Toutes les opérations expérimentales sur des animaux ont suivi le principe des 3R de réduction, d’optimisation et de remplacement des animaux de laboratoire (n° R-06202018). Des rats Sprague Dawley (SD) en bonne santé (14 mâles et 7 femelles) de grade exempt d’agents pathogènes spécifiques (FPS) avec un poids corporel moyen de 250 à 300 g ont été utilisés dans cette expérience. Les rats ont été élevés dans la salle des animaux SPF de l’Université de médecine traditionnelle chinoise du Yunnan, numéro de certificat : SYXK(Yunnan)K2022-0004. Tous les rats ont été logés sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures avec un environnement contrôlé par la lumière naturelle à une température ambiante de 22-26 °C et une humidité relative de 40 à 50 %. Après 1 semaine d’alimentation adaptative, le rapport mâle/femelle s’est maintenu à 1:2. Après 1 semaine, les rates enceintes ont été logées dans une seule cage, nourries normalement, mangeant et buvant librement. Après l’accouchement naturel, les rats nourrissons en bonne santé nés des rats gravides ont été sélectionnés. Les rats nourrissons ont été divisés en groupes Simulacre, Contrôle et Traitement pour observer l’effet de la manipulation sélective de la colonne vertébrale sur la croissance et le développement des rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale. Dans chaque groupe, 6 petits mâles ont été sélectionnés pour l’expérience. Le groupe de traitement a été traité par manipulation sélective de la colonne vertébrale à partir du 5èmejour après la naissance, et le traitement a été administré pendant 6 jours suivis d’un repos pendant 1 jour.

1. Établir un modèle de paralysie cérébrale

  1. Stérilisez le microscope, les ciseaux ophtalmiques, les pinces, les sutures, la plaque chirurgicale, les ciseaux, les cotons-tiges et les gants nécessaires à la chirurgie, et placez-les dans la salle d’opération.
  2. Séparez temporairement un chiot de sa mère le troisième jour de sa vie, placez-le dans un seul cadre et transportez-le dans la salle d’opération stérile.
  3. Mesurez le poids corporel. Inclure dans l’étude les rats nourrissons dont le poids corporel variait de 7 à 9 g et exclure ceux qui ne se conformaient pas au poids corporel. Divisez au hasard les rats nourrissons en groupes Sham, Control et Treatment.
  4. Induire l’anesthésie avec de l’isoflurane à une concentration de 2 % et maintenir l’anesthésie à 1 % à l’aide d’un appareil d’anesthésie par inhalation de gaz pour petits animaux.
    REMARQUE : Cette expérience vise principalement à observer les effets de la manipulation sélective de la colonne vertébrale sur la croissance et le développement de rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale. L’anesthésie a été réalisée conformément aux exigences générales pendant le processus de modélisation, et une analgésie supplémentaire affectera les résultats de l’observation.
    1. Connectez l’anesthésique au gaz des petits animaux à l’alimentation électrique et ouvrez la vanne connectée au boîtier d’induction.
    2. Placez le rat nourrisson dans la boîte d’induction, tournez le bouton de réglage de la concentration et ajustez la concentration d’isoflurane à 2 % pour induire l’anesthésie.
    3. Lorsque le rat infantile est inconscient, retirez-le de la boîte à induction. Placez-le sur la plaque de commande et fermez le canal 1 de l’appareil d’anesthésie.
    4. Placez le bébé rat en décubitus dorsal. Fixez le masque d’inhalation d’anesthésie pour maintenir l’anesthésie.
    5. Ouvrez le canal connecté au masque d’inhalation d’anesthésie. Maintenez l’anesthésie en tournant le bouton de réglage de la concentration et en ajustant la concentration d’isoflurane à 1 %.
      REMARQUE : Après l’anesthésie, évaluez la profondeur de l’anesthésique en soulevant et en pinçant de force les orteils et la queue des rats nourrissons. Une absence de réponse lorsque les orteils et la queue ont été soulevés et pincés confirme que la profondeur de l’anesthésie a atteinte.
  5. Désinfectez la peau du cou du rat nourrisson trois fois avec de l’alcool à 75 % et faites une incision longitudinale de 1 cm sur la peau du cou pour exposer le tissu sous-cutané.
    REMARQUE : L’incision longitudinale de la peau du cou ne provoque pas de défaut cutané.
  6. Coupez la peau du cou gauche sous un microscope de dissection et utilisez une pince à épiler ophtalmique pour séparer brutalement le muscle sterno-hyoïdien et le muscle sterno-mastoïdien gauche.
    1. Trouvez l’artère carotide commune gauche et le nerf vague, et séparez l’artère carotide commune gauche et le nerf vague.
    2. Dans le groupe Modèle, coupez l’artère carotide commune gauche avec un stylo de coagulation électrique. Nettoyez et suturez l’incision du cou.
    3. Dans le groupe Sham, séparez l’artère carotide commune gauche du nerf vague.
  7. Après l’opération, placez le bébé rat dans le bain-marie thermostatique en position couchée pour la réanimation pendant 1 h.
    REMARQUE : Après récupération naturelle, la couleur de la peau des membres et de tout le corps était rougeâtre. Le bébé rat pouvait bouger ses membres de manière autonome et ramper indépendamment.
  8. Placez les rats réanimés des groupes Contrôle et Traitement dans un incubateur fermé à 37 °C en position couchée. Introduisez un mélange de 5 % d’oxygène et de 95 % d’azote gazeux pour induire l’hypoxie, et retirez les rats après 2 h.
  9. Retirez le rat qui a terminé le processus d’hypoxie de la boîte d’hypoxie et placez-le en position couchée dans une boîte avec une teneur normale en oxygène atmosphérique. Placez-les dans un bain-marie thermostatique à 37 °C pendant 1 h. Après un rétablissement complet, transférez le bébé rat dans la cage de la mère.
    REMARQUE : Après avoir récupéré naturellement, la couleur de la peau des membres et de tout le corps était rouge. Le bébé rat pouvait bouger ses membres de manière autonome et pouvait ramper indépendamment.
  10. Placez le rat bébé du groupe Sham dans une boîte avec une teneur en oxygène atmosphérique normale, et placez la boîte dans un bain-marie thermostatique à 37 °C pendant 1 h. Une fois complètement rétabli, remettez le rat infantile dans la cage de sa mère pour qu’il se nourrisse.
    REMARQUE : Après avoir récupéré naturellement, la couleur de la peau des membres et de tout le corps était rouge. Le bébé rat pouvait bouger ses membres de manière autonome et pouvait ramper indépendamment. L’ensemble du processus d’opération a été réalisé dans la salle d’opération spéciale de la salle des animaux SPF de l’Université de médecine traditionnelle chinoise du Yunnan. Pendant la réanimation et l’hypoxie, l’opérateur observe le rat nourrisson en tout temps pour prévenir la mort causée par une mauvaise posture. Les rats femelles en lactation ont été nourris avec des aliments reproducteurs sans agents pathogènes spécifiques (SPF), et lorsque les petits ont pu se nourrir eux-mêmes, les petits ont été sevrés (jour 21 postnatal) et nourris avec des aliments d’entretien SPF.

2. Expérience du réflexe de redressement

  1. Le 4ème jour après la naissance (le 2èmejour après le modélisage), effectuez l’expérience du réflexe de redressement pour vérifier si le modèle a réussi (Figure 1 et Tableau 1).
    1. Soulevez la queue du rat, posez son dos sur une planche horizontale et utilisez le pouce et l’index pour sécuriser son ventre et son cou. Vérifiez si le rat peut revenir à sa position normale. L’incapacité du rat à revenir à la position normale à partir de la position anormale en raison de la perte du réflexe de redressement est enregistrée comme un modèle réussi16,22.
    2. Notez le temps que chaque groupe de chiots prend pour passer de la position couchée à la position couchée. Commencez à enregistrer le moment où le pouce et l’index sont relâchés simultanément en position couchée, laissez le rat bébé se tourner en position couchée et arrêtez d’enregistrer lorsque les pattes avant et arrière sont placées sur le sol. Si le rat n’a pas pu revenir à la position normale pendant plus de 20 s, notez le temps de redressement à 20 s.

3. Préparation avant l’opération

  1. Après le modélisage, séparez le rat infantile atteint de paralysie cérébrale de sa mère et amenez-le dans une salle d’opération avec une température ambiante constante de 22-26 °C pendant 2 min pour s’adapter à l’environnement environnant.
  2. Portez des gants jetables pour garder la paume douce et douce et la température entre 36 et 37 °C.
  3. Placez délicatement le rat dans la paume de la main gauche. Pliez le pouce gauche pour couvrir les yeux du rat pendant 2 min afin de former un champ de vision sombre afin que le rat puisse s’adapter à l’environnement de la paume de l’opérateur. Utilisez l’index et le majeur droits pour la manipulation.
    REMARQUE : Couvrir les yeux du bébé rat peut créer un environnement sombre. Cela empêchera le bébé rat de s’agiter en raison de l’environnement dangereux et incertain qui affecte les résultats expérimentaux.

4. Répartition des rats entre le groupe témoin et le groupe de traitement

  1. Le deuxième jour après la modélisation (P5), vérifiez le modèle par le test du réflexe de redressement et divisez au hasard les rats nourrissons dans les groupes de contrôle et de traitement. Effectuer une manipulation sélective de la colonne vertébrale sur les rats nourrissons du groupe de traitement.
  2. Placez le bébé rat en position couchée. Assurez-vous que la colonne vertébrale est toujours maintenue à un niveau droit (Figure 2A).
  3. Massez la colonne vertébrale et les deux côtés de la colonne vertébrale pendant 1 min en utilisant la méthode de frottement, et utilisez la méthode de pression et de pétrissage sur la colonne vertébrale et les muscles des deux côtés de la colonne vertébrale pendant 5 min.
    1. Massez la colonne vertébrale et la peau des deux côtés en utilisant la méthode de frottement pour détendre le rat infantile et soulager complètement ses tensions. Assurez-vous que la fréquence des frottements est de 100 à 120 fois/min pendant 1 minute après que le rat infantile est calme et sans agitation.
      1. Utilisez l’index, le majeur et l’annulaire droits comme surface de contact et effectuez un mouvement de frottement circulaire sur la surface de la peau de la colonne cervicale, de la colonne thoracique et de la colonne lombaire de la tête à la queue sans perturber le tissu sous-cutané.
      2. Avec l’index, le majeur et l’annulaire droits comme surfaces de contact, effectuez des mouvements circulaires sur la surface de la peau du muscle trapèze, du muscle fessier superficiel, du muscle rhomboïdien cervical, du muscle rhomboïdien pectoral, du muscle grand dorsal et du muscle oblique externe dans l’ordre de la tête à la queue conformément à la norme anatomique animale23, sans perturber le tissu sous-cutané.
    2. Traitez d’abord la colonne vertébrale en appuyant et en pétrissant pendant 5 min, puis en pressant et en pétrissant les muscles des deux côtés de la colonne vertébrale pendant 5 min.
      1. Appliquez la méthode de pétrissage sur la colonne vertébrale à une fréquence de 120 fois/min pendant 5 min. Utilisez l’index ou le majeur droit comme surface de contact. De la tête à la queue, effectuez un pétrissage circulaire sur la surface de la peau des vertèbres cervicales, thoraciques et lombaires, combiné à une pression vers le bas (1,77 ± 0,54 N). Assurez-vous que la force atteint les vertèbres cervicales, les vertèbres thoraciques, les vertèbres lombaires et les ligaments supra-épineux.
      2. Appliquez la méthode de pression et de pétrissage sur les muscles des deux côtés de la colonne vertébrale à une fréquence de 120 fois/min pendant 5 min. Utilisez l’index ou le majeur droit comme surface de contact. Selon la norme anatomique animale23, appuyez sur la surface cutanée du trapèze, du fessier superficiel, du cou rhomboïde, du pectoral rhomboïde, du grand dorsal et des muscles abdominaux obliques externes dans un mouvement de pétrissage rond de la tête à la queue, avec une force de 1,77 ± 0,54 N, de sorte que la force atteigne le trapèze, le fessier superficiel, le cou rhomboïdal, le pectoral rhomboïde, grand dorsal et muscles abdominaux obliques externes (Figure 2B)23.
  4. Appuyez et pétrissez les points d’acupuncture sensibles de la colonne vertébrale (tels que Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu et Feishu24) à une fréquence de 100 à 120 fois/min pendant 2 min. En utilisant l’index ou le majeur droit comme surface de contact, effectuez un pétrissage circulaire et une pression vers le bas (1,77 ± 0,54 N) sur la peau de surface des points d’acupuncture locaux (tels que Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu et Feishu) chez les rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale.
    REMARQUE : Les points d’acupuncture ont été sélectionnés selon la « carte des points d’acupuncture animale » formulée par la branche de recherche en acupuncture expérimentale de la Société chinoise d’acupuncture (Figure 3)25.
  5. Stimuler localement le membre affecté par la méthode de torsion à une fréquence de 25 fois/min pendant 1 min.
    1. Avec le pouce et l’index droits, pincez le membre affecté du rat infantile atteint de paralysie cérébrale, en exerçant une force symétrique sur les deux doigts. Assurez-vous que la force est douce et que l’action est légère et douce. Frottez l’extenseur du carpe radial, l’extenseur des doigts commun, l’extenseur du carpe cubital, la phalange, l’articulation interphalangienne, le muscle gastrocnémien, le muscle semi-tendineux, l’os métatarsien et l’articulation intermétatarsienne du rat nourrisson d’avant en arrière.
  6. Appliquez la méthode de frottement sur la ligne médiane du front vers l’arrière du cerveau à une fréquence de 100 à 120 fois/min pendant 1 min. Utilisez l’index droit comme surface de contact et utilisez la méthode de frottement sur une ligne imaginaire du front au milieu du cerveau postérieur du rat nourrisson (à savoir, une ligne de Baihui, Fengfu et Dazhui) (Figure 3).
    REMARQUE : Le massage est principalement appliqué sur la peau. Il s’agit d’un mouvement circulaire à la surface de la peau de la tête du rat infantile atteint de paralysie cérébrale. Il n’a pas besoin de piloter le mouvement musculaire sous-cutané d’un rat infantile atteint de paralysie cérébrale.
  7. À la fin de l’intervention, laissez le rat bébé tranquille pendant 30 min avant de le remettre dans la cage de la mère rat.
    REMARQUE : Avec l’âge, les poils des rats nourrissons deviennent épais, il est donc nécessaire d’enlever les poils du dos de tous les groupes de rats nourrissons pendant l’opération de massage pour éviter d’affecter l’effet expérimental.

5. Détection de la température des points d’acupuncture locaux

  1. Utilisez une caméra thermique infrarouge pour détecter la température de la zone d’acupuncture locale avant et après l’opération.
    1. Avant le massage sélectif de la colonne vertébrale, connectez l’interface Type-C du téléphone portable à l’interface USB de l’appareil d’imagerie infrarouge avec un câble de données et allumez le bouton d’alimentation.
    2. Cliquez sur Analyser pour accéder au terminal de téléphone portable du logiciel, sélectionnez Photo pour accéder au mode photo, puis cliquez sur le mode Image dans l’image dans le coin inférieur droit.
    3. Focalisez la caméra sur les zones d’acupuncture des points d’acupuncture de Dazhui, Xinshu et Shenshu (Figure 3) sur le dos du rat nourrisson pour prendre des photos de température. Cliquez sur Photo pour terminer la capture de l’image et l’enregistrer au format JPG.
    4. Connectez l’ordinateur à l’aide d’un câble de données et téléchargez l’image enregistrée sur un ordinateur équipé du logiciel Fotric pour analyse.
      1. Ouvrez le logiciel Fotric sur le PC, ouvrez le fichier local et trouvez l’emplacement de l’image.
      2. Sélectionnez l’espace de travail Thermogramme, sélectionnez l’image à analyser et entrez dans l’interface d’analyse.
      3. Sur l’écran d’analyse , sélectionnez l’image dans la zone Image thermique à droite et ouvrez le verrouillage.
      4. Sélectionnez la fonction Zoom, ajustez la taille de l’image thermique et de la case de gauche Image d’arrière-plan pour qu’elles coïncident, puis désactivez le verrouillage à droite.
      5. Recherchez le rectangle Définir la mesure dans la barre d’outils en haut et marquez le point d’acupuncture à détecter sur la figure.
      6. Cliquez sur Rapport à droite pour enregistrer la valeur de température.

6. Détection de la fonction d’équilibre moteur des rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale

  1. Utilisez le test Behavioral Rotarod19 pour détecter la fonction motrice des rats dans les groupes Sham, Control et Treatment le 61e jour après la naissance.
    1. Paramètres : Démarrez l’interrupteur d’alimentation, sélectionnez Faire l’expérience pour entrer dans l’étape suivante, sélectionnez Positif, Rats, Timing 5 min pour entrer l’étape suivante, et sélectionnez Temps Acc : 10 s, Vitesse : 10 tr/min.
    2. Ensuite, placez les rats sur la piste de course et commencez le test en cliquant sur Courir une fois qu’ils se sont tenus fermes. Réglez l’état de fonctionnement de chaque exécution sur ON. Entraînez chaque rat une fois pendant 5 minutes, puis commencez à effectuer le test trois fois.
    3. Après l’entraînement, placez les bébés rats sur la piste de course du rotarod. Une fois qu’il est stable, cliquez sur Exécuter et réglez l’état d’exécution sur ON. À la fin de 5 min, sélectionnez Date pour enregistrer le temps et la vitesse de chaque rat tombant de la piste de course pour la première fois, c’est-à-dire les données de temps de course.
  2. Utilisez le test de défaillance du pied20,21 pour évaluer la fonction motrice équilibrée du membre antérieur droit des groupes Sham, Control et Treatment le 61e jour après la naissance.
    1. Placez les bébés rats à l’extrémité initiale de l’échelle horizontale et enregistrez une vidéo d’eux en train de la traverser jusqu’à l’autre extrémité (100 cm de long et la distance entre chaque échelle est de 2 cm). Après une séance d’entraînement, effectuez le test formel trois fois pour chaque rat à 5 minutes d’intervalle.
    2. Observer le membre antérieur droit lorsque l’animal franchit l’échelle en utilisant la lecture à basse vitesse pour faire un score, comme le montre la norme de pointage (tableau 2).

7. Transfert Western

  1. Effectuer une analyse par transfert Western des échantillons de tissus comme décrit précédemment26.
    REMARQUE : La quantité de lysat a été déterminée en fonction de la taille du bloc de tissu. Les anticorps utilisés étaient les suivants : anticorps anti-hormone de croissance primaire (0,5 μg [0,5 ng/voie]) ; anticorps anti-récepteur de l’hormone de croissance (1/1000) ; anticorps anti-bêta-actine de référence interne (1/2000) pour les anticorps primaires ; Anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) de chèvre pour l’anticorps secondaire.

8. Détecter la force de la main

  1. Portez l’appareil utilisé pour détecter la force de manipulation sur la main utilisée pour le massage. Ajustez le doigt utilisé pour masser le bébé rat avec la puce de capteur de l’appareil et allumez le bouton d’alimentation .
  2. Connectez l’interface du disque dur qui stocke le logiciel de test manuel à l’ordinateur et entrez l’adresse IP dédiée du testeur manuel dans la zone de saisie URL.
  3. Installez le client SpringVR sur l’ordinateur, cliquez pour entrer dans l’interface de collection et sélectionnez le motif de doigt dans le coin inférieur droit pour tester la force de manipulation.
  4. Sélectionnez l’option Pression et cliquez sur Démarrer pour commencer à enregistrer la force manuelle de l’opérateur pendant le fonctionnement. Le logiciel enregistrera automatiquement l’intensité de la manipulation et générera une table de données sur le disque local où se trouveront les données du nom de fichier PressureSensor .

9. Statistiques des données

REMARQUE : Le logiciel SPSS26.0 a été utilisé pour l’analyse statistique, Graphpad Prism9.0.0 pour la production de graphiques à barres et Image J pour l’analyse des valeurs de gris des bandes de protéines.

  1. Analyser et présenter toutes les données sous forme de moyenne ± d’écart-type (moyenne ± écart-type).
    REMARQUE : La norme d’essai était α = 0,05, et P ≤ 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Le test de Fisher a été utilisé parce que les données ont été analysées par analyse de la variance et de la normalité et qu’elles étaient conformes aux caractéristiques de distribution normale et à l’homogénéité de la variance.

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Résultats

La manipulation sélective de la colonne vertébrale peut favoriser la prise de poids chez les rats nourrissons atteints de paralysie cérébrale.
Au cours du traitement, le poids corporel a été mesuré aux jours 3, 14, 28, 42 et 61 postnatals (Figure 4, Tableau 3). Le troisième jour après la naissance, le poids corporel du groupe Sham était de 5,53 ± 0,035 g, et le poids corporel du groupe témoin était de 3,15 ± 0,43 g. Le poids corporel du groupe de traiteme...

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Discussion

Parce que l’ischémie et l’hypoxie sont des facteurs pathogènes importants de la paralysie cérébrale, la méthode internationalement reconnue d’établissement du modèle de paralysie cérébrale est combinée à l’hypoxie pour préparer le modèle de paralysie cérébrale 16,28,29,30. Lorsque la paralysie cérébrale se développe, elle provoque un retard global du développem...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts financier ou autre dans le cadre de ce travail.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par le Programme général de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (82374614), le Projet biomédical majeur du Département des sciences et de la technologie de la province du Yunnan (202102AA100016), le Grand Projet conjoint de recherche fondamentale appliquée du Département des sciences et de la technologie de la province du Yunnan -- Université de médecine traditionnelle chinoise du Yunnan (201901AI070004), Soutenu par le Laboratoire clé d’acupuncture, de moxibustion et de massage pour la prévention et le traitement de l’encéphalopathie dans les collèges et universités de la province du Yunnan (2019YGZ04), Département des sciences et de la technologie de la province du Yunnan -- Projet jeunesse du programme de recherche fondamentale de la province du Yunnan (202101AU070002), Programme d’études supérieures du Fonds de recherche scientifique du Département de l’éducation de la province du Yunnan, (2023Y0433) ; Fondation pour la recherche scientifique du Département de l’éducation de la province du Yunnan, (2023Y0462).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Plaques à 96 puitsBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Détermination de la concentration en protéines
Anticorps anti-bêta-actineAbacmAb8227Dilution : 1/2000
Anticorps anti-hormone de croissanceAbacmAb1268820,5 & micro ; g (0,5 ng/voie)
Anticorps anti-récepteur de l’hormone de croissanceAbacmAb202964Dilution : 1/1000
Microscope opératoire de baseShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101L’artère carotide commune a été isolée au microscope lors de la modélisation
Développeur BCABiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Détermination de la concentration
en protéinesSystème d’imagerie par chimiluminescenceShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Imagerie par bandes de protéines
Marqueur précoloré à charge directeBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Machine à glace à neigeautomatique Henan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023Fabrication de glace
ECL kitde substrat luminescentBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConvertir les images latentes d’un film exposé en images visibles
Bain d’eau thermostatique chauffé électriquementTAISITE INSTRUMENTDK-98-IILes jeunes rats ont été réanimés après modélisation
Balances électroniquesKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002Le poids corporel des jeunes rats a été mesuré
Petit stylo de coagulation électrique blanc allemand HemostatHaohangL55& fois ; W125&fois ; H37Il a été utilisé pour coaguler l’artère carotide commune gauche
GantJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017Pour l’opération de massage
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Solution électrophorétique, Configurer le fluide de transfert
Chèvre Anti-RabbitIgG H& L (HRP)  ;AbacmAb6721Dilution : 1/10000
Machine à eau ultra-pure de laboratoire intelligenteChongqing huachuag water treatment engineering co.,LTDN/AFiltration (15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198L’anesthésie a été maintenue par induction chez les jeunes rats
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Logiciel d’analyse d’images infrarouges
Broyeur de tissus à basse température et à grande vitesseWuhan Servicebio technology CO., LTDSKZ3F20200191Broyage de tissus
MéthanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configurer le fluide de transfert
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Spectrophotomètre à microplaques
spectre Multiskan par électrophorèseTECANSparkL’absorbance et la concentration des protéines tissulaires ont été détectées
Gants intelligents à détection de pressionJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveIl est utilisé pour mesurer la force de manipulation de l’opérateur
membrane PVDFMerckMillipore Corporation  ;IPVH00010  ;Transfert Western
Centrifugeuse réfrigéréeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifuge
Research Caméra thermique trois-en-unFOTIRC226S (384 x 288)Mesure de la température
RIPA lysatBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Tissu lytique
SHA-CA affichage numérique oscillateur thermostatique à bain d’eauChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CADe jeunes rats ont été utilisés dans l’hypoxie
Appareil de rotation de fatigue à six ratsShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703la fonction motrice du CP a été détectée
Lait écrémé en poudreGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Liquide de confinement
SPF aliment d’élevageSPF (Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285266rats femelles allaitants ont été nourris
avec des aliments d’entretienSPF (Beijing) biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285267Les chiots ont été nourris après le sevrage
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TS-200 Agitateur orbitalHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SFixation sur gel
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ZS-MV Appareil d’anesthésie portableZHONGSHI SCIENCE & TECHNOLOGIEZS-MV-IL’anesthésie a été induite et maintenue chez des animaux de laboratoire
à

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