Cette étude décrit une méthode rapide et efficace pour l’analyse des composants cellulaires des caillots sanguins cérébraux par la dissolution des caillots, la coloration cellulaire et l’examen sanguin de routine.
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Article de méthode
Une approche globale pour analyser les composants cellulaires des caillots sanguins cérébraux
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
La thrombose cérébrale, un caillot sanguin dans une artère ou une veine cérébrale, est le type d’infarctus cérébral le plus courant. L’étude des composants cellulaires des caillots sanguins cérébraux est importante pour le diagnostic, le traitement et le pronostic. Cependant, les approches actuelles pour étudier les composants cellulaires des caillots sont principalement basées sur la coloration in situ , ce qui ne convient pas à l’étude complète des composants cellulaires car les cellules sont étroitement enveloppées dans les caillots. Des études antérieures ont réussi à isoler une enzyme fibrinolytique (sFE) de Sipunculus nudus, qui peut dégrader directement la fibrine réticulée, libérant les composants cellulaires. Cette étude a permis d’établir une méthode complète basée sur la sFE pour étudier les composants cellulaires du thrombus cérébral. Ce protocole comprend la dissolution du caillot, la libération des cellules, la coloration des cellules et l’examen sanguin de routine. Selon cette méthode, les composants cellulaires pourraient être étudiés quantitativement et qualitativement. Les résultats représentatifs des expériences utilisant cette méthode sont présentés.
Introduction
Les maladies cérébrovasculaires sont l’une des trois principales maladies qui peuvent menacer la santé humaine, parmi lesquelles les maladies cérébrovasculaires ischémiques représentent plus de 80%. La thrombose cérébrale et la thrombose veineuse cérébrale sont les maladies cérébrovasculaires ischémiques les plus concernées aujourd’hui, principalement causées par des caillots sanguins cérébraux 1,2. Si le traitement n’est pas effectué correctement, il aura des taux élevés d’invalidité et de mortalité et un taux de récidive élevé après la sortie3.
Récemment, u....
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Protocole
La recherche a été réalisée conformément aux directives institutionnelles du Comité d’éthique médicale de l’Université Huaqiao. Les caillots sanguins cérébraux ont été retirés chirurgicalement et prélevés au premier hôpital de Quanzhou, affilié à l’Université médicale du Fujian, avec le consentement éclairé des patients.
1. Prétraitement des caillots sanguins
- Placez les caillots sur un plat propre, ajoutez 5 mL de sérum physiologique à l’aide d’une pince à épiler, secouez doucement le plat et retirez le sérum physiologique à l’aide d’une pipette.
REMARQUE : Répétez le rinçage trois fois. - Coupez les ca....
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Résultats
Au stade initial du processus de dégradation, il a été constaté que les caillots sanguins avaient une structure compacte rouge et que la solution de travail était incolore. Après une incubation de 30 minutes, la solution de travail est devenue rouge clair, ce qui indique que les cellules sanguines croisées ont été libérées dans la solution de travail. La plupart des caillots ont été dissous lors de l’allongement du temps d’incubation à 5 h, et la solution de travail est devenue rouge clair. Au contraire, il n’y a pas eu .......
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Discussion
La sFE est un agent fibrinolytique qui peut dégrader la fibrine directement et efficacement12,16. Ici, la sFE a été utilisée pour dégrader la fibrine réticulée des caillots sanguins cérébraux, libérer les cellules enfermées dans les caillots et analyser qualitativement et quantitativement les composants cellulaires des caillots. Les données microscopiques et l’examen sanguin de routine ont indiqué que les cellules enfermées avaient été libérées des caillots sangu.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Cette recherche a été financée par le Bureau des sciences et de la technologie de la ville de Xiamen (3502Z20227197) et le Bureau des sciences et de la technologie de la province du Fujian (n° 2019J01070, n° 2021Y0027).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Plaque de réaction d’agglutination | ROTEST | RTB-4003 | |
| Analyseur d’hématologie automatique | SYSMEX | XNB2 | |
| Stérilisateur automatique à vapeur à pression verticale ; | SANYO | MLS-3750 | |
| Tube à centrifuger (1,5 mL) | Biosharp | BS-15-M | |
| Banc propre | AIRTECH | BLB-1600 | |
| Incubateur à température constante | JINGHONG | JHS-400 | |
| Plat de culture (100 mm) | NEST | 704001 | |
| DHG Series Four de chauffage et de séchage ; | SENXIN | DGG-9140AD | |
| Balance analytique électronique | DENVER | TP-213 | |
| Membrane filtrante (0,22 µ ; m) | Millex GP | SLGP033NK | |
| Micro centrifugeuse réfrigérée ; | Cence | H1650-W | |
| CITOGLAS | 01-30253-50 | ||
| Milli-Q Référence | Millipore | Z00QSV0CN | |
| Saline normale | CISEN | H37022337 | |
| Microscope optique | Nikon | ECLIPSE E100 | |
| Parafilm | Bemis | PM-996 | |
| Saline tamponnée au phosphate | Beyotime | C0221A | |
| Pointe de pipette (1 mL | Axygene | T-1000XT-C | |
| Pointe de pipette (200 µ ; L) | Pipette Axygene | T-200XT-C | |
| (1 mL) | Pipette Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
| (200 µ ; L) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
| Scalpel | MARTOR | 23111 | |
| Oscillateur Vortex de petite taille | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
| Pince à épiler | Hystic | HKQS-180 | |
| Wright Staining Solution | Beyotime | C0135-500ml |
Références
- Park, D. W., et al. Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial. Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).
- Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T.
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Réimpressions et autorisations
