Fibres musculaires squelettiques courtes, intermédiaires et longues intactes obtenues par dissociation enzymatique de six muscles des membres postérieurs de souris : au-delà du fléchisseur digitorum brevis

Jorge L. Petro; Andrés F. Milán; Erika Arenas; Laura Valle; Valeria Hernández; Juan C. Calderón

doi:10.3791/65851

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Article de méthode

Fibres musculaires squelettiques courtes, intermédiaires et longues intactes obtenues par dissociation enzymatique de six muscles des membres postérieurs de souris : au-delà du fléchisseur digitorum brevis

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DOI :

10.3791/65851

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1 décembre 2023

Jorge L. Petro^*¹ , Andrés F. Milán^*¹ , Erika Arenas¹ , Laura Valle¹ , Valeria Hernández¹ , Juan C. Calderón¹

¹Physiology and Biochemistry Research Group-PHYSIS, Faculty of Medicine, University of Antioquia

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Nous décrivons un protocole pour obtenir des fibres dissociées enzymatiquement de différentes longueurs et types à partir de six muscles de souris adultes : trois d’entre eux déjà décrits (fléchisseur des doigts court, extenseur des doigts long, soléaire) et trois d’entre eux dissociés avec succès pour la première fois (extenseur de l’hallucis long, péronier long, péronier des doigts quarti).

Résumé

Les fibres musculaires squelettiques obtenues par dissociation enzymatique des muscles de souris sont un modèle utile pour les expériences physiologiques. Cependant, la plupart des articles traitent des fibres courtes du fléchisseur des doigts (FDB), ce qui limite la portée des résultats traitant des types de fibres, limite la quantité de matériel biologique disponible et empêche un lien clair entre les phénomènes physiologiques cellulaires et les connaissances biochimiques et dynamiques antérieures obtenues dans d’autres muscles.

Cet article décrit comment obtenir des fibres intactes à partir de six muscles avec différents profils et longueurs de types de fibres. En utilisant des souris adultes C57BL/6, nous montrons le protocole de dissection musculaire et d’isolement des fibres et démontrons l’adéquation des fibres pour les études transitoires Ca²⁺ et leur caractérisation morphométrique. La composition en fibres des muscles est également présentée. Lorsqu’ils sont dissociés, tous les muscles sont rendus intacts, des fibres vivantes qui se contractent rapidement pendant plus de 24 h. FDB a donné des fibres courtes (<1 mm), le péronier carré quarti (PDQA) et le péronier long (PL) ont donné des fibres intermédiaires (1-3 mm), tandis que les muscles extenseurs digitoles longs (EDL), extenseurs hallucis longs (EHL) et soléaires ont libéré des fibres longues (3-6 mm).

Lorsqu’ils ont été enregistrés avec le colorant rapide Mag-Fluo-4, les transitoires Ca²⁺ des fibres PDQA, PL et EHL ont montré la cinétique rapide et étroite rappelant la morphologie de type II (MT-II), connue pour correspondre aux fibres de type IIX et IIB. Cela est cohérent avec le fait que ces muscles ont plus de 90% de fibres de type II par rapport au FDB (~80%) et au soléaire (~65%). Au-delà du FDB, nous démontrons pour la première fois la dissociation de plusieurs muscles, ce qui donne des fibres couvrant une gamme de longueurs comprises entre 1 et 6 mm. Ces fibres sont viables et donnent des transitoires rapides Ca²⁺ , indiquant que le MT-II peut être généralisé aux fibres rapides IIX et IIB, quelle que soit leur source musculaire. Ces résultats augmentent la disponibilité de modèles pour les études des muscles squelettiques matures.

Introduction

Le muscle squelettique mature des mammifères est un tissu multifonctionnel. Il régule fortement le métabolisme, est la principale source de production de chaleur et ses propriétés dynamiques lui confèrent un rôle clé dans la respiration, le mouvement des segments du corps ou le déplacement d’un point à un autre ^1,2,3. Le muscle squelettique est également pertinent pour la physiopathologie de nombreuses maladies, y compris les maladies héréditaires et chroniques, telles que les myopathies, les dystrophies ou la sarcopénie, ainsi que de nombreuses maladies chroniques non