La fraction vasculaire stromale (SVF) isolée mécaniquement associée à un hydrogel de fibrine offre un support facile et efficace pour des cellules stromales viables dérivées du tissu adipeux pour diverses indications, y compris l’ingénierie tissulaire et/ou la cicatrisation des plaies. Ici, nous présentons la préparation d’une construction mécanique d’hydrogel SVF (mSVF)-fibrine pour la recherche translationnelle et l’application clinique.
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Article de méthode
La combinaison d’une fraction vasculaire stromale isolée mécaniquement et d’un hydrogel de fibrine : un protocole de traitement
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le potentiel de régénération des cellules stromales dérivées du tissu adipeux (ASC) a suscité une attention considérable dans la recherche régénérative et translationnelle. Dans le passé, l’extraction de ces cellules du tissu adipeux nécessitait un processus enzymatique en plusieurs étapes, ce qui aboutissait à un mélange cellulaire hétérogène composé de SCA et d’autres cellules, appelées conjointement fraction vasculaire stromale (SVF). Plus récemment, les protocoles d’isolation mécanique SVF (mSVF) prennent moins de temps et contournent les problèmes réglementaires. Nous avons récemment proposé un protocole qui génère des mSVF riches en cellules stromales en combinant émulsification et centrifugation. L’un des problèmes actuels dans l’application mSVF pour l’application de thérapie des plaies est l’absence d’un échafaudage offrant une protection contre les manipulations mécaniques et la dessiccation. Les hydrogels de fibrine se sont avérés être un complément utile dans le transfert cellulaire à des fins de cicatrisation des plaies dans le passé. Dans le présent travail, nous décrivons les étapes de préparation d’une construction d’hydrogel mSVF-fibrine en tant qu’approche novatrice pour la recherche translationnelle et l’application clinique.
Introduction
Au cours des dernières années, la chirurgie plastique régénérative est devenue un pilier supplémentaire de la chirurgie plastique1. La chirurgie plastique régénérative vise à restaurer les tissus endommagés en transférant des facteurs solubles, des cellules et des tissus prélevés sur le patient pour favoriser la restauration des tissus de manière peu invasive2. Les cellules souches dérivées du tissu adipeux (ASC) ont attiré l’attention en raison de leur capacité à se différencier en plusieurs lignées mésenchymateuses, ce qui en fait un candidat prometteur pour la re....
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Protocole
Cette étude a été réalisée conformément à la Déclaration d’Helsinki. Tous les donneurs adultes ont fourni un consentement éclairé écrit pour permettre l’utilisation ultérieure des échantillons de tissus recueillis. Le protocole suit les lignes directrices du comité d’éthique de la recherche sur les êtres humains de notre établissement.
1. Prélèvement du tissu adipeux
- Récoltez le tissu adipeux en effectuant une liposuccion standard dans une technique conventionnelle de récolte de graisse décrite dans les publications précédentes26,27
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Résultats
Dosage de la résine
Nous avons d’abord examiné la viabilité cellulaire in vitro des cellules mSVF. À cette fin, nous avons effectué un test de viabilité cellulaire de la résazurine aux jours 0, 3 et 7. La figure 1 montre la viabilité cellulaire aux jours 0, 3 et 7 d’un total de quatre échantillons. Les valeurs du jour 0 servent de référence et ont été fixées à 100 %. Au jour 3, le témoin positif (mSVF) a montré une légère baisse à 78,92 % (± 5,33%), tandis que l’.......
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Discussion
L’isolement mécanique de la FVS offre une alternative élégante à l’approche enzymatique traditionnelle et offre un large accès pour une application clinique29. En fait, la mSVF, telle que proposée dans le présent manuscrit, est déjà utilisée en clinique pour le traitement des tissus mous des cicatrices ou en complément des procédures esthétiques30. Le protocole présenté ici fournit une méthode simple pour une administration topique efficace.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Bong-Sung Kim est soutenu par la Fondation allemande pour la recherche (KI 1973/2-1) et la Fondation Novartis pour la recherche médico-biologique (#22A046).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 12-Wellplate | Sarstedt | 83.3921 | |
| 4&prime ;,6-diamidino-2-phénylindole (DAPI) | Biochemica | A1001.0010 | |
| 50 mL-Falcon | Falcon | 352070 | |
| Serviettes absorbantes, paquet de deux | drisse | 89701 | |
| Alamar blue 25 mL | Invitrogen | DAL1025 | |
| albumine bovine (BSA) | VWR | 0332-500G | |
| Biotek Cytation 5 ; | Lecteur de microplaques multimode Agilent Cell Imaging ; | ||
| CaCl2 ; | Sigma-Aldrich | C5670-500G | |
| Cryostat | Microtome | ||
| DMEM avec 4,5 g/L de glucose, avec L-Glutamine, avec pyruvate de sodium | VWR | 392-0416 | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Épinéphrine | Sigma-Aldrich | E4250 | |
| Sérum fœtal bovin | Biowest | S181H-500 | |
| Fibrinogène Plasma Humain 100 mg | Sigma-Aldrich | 341576-100MG | |
| Formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Formafix 4 % | Formafix | 1308069 | |
| FSC 22-Einbettmedium, blau | Biosystems | 3801481S | |
| Hématoxyline & Eosin Solution | Sigma-Aldrich | H3136 / HT110132 | |
| Sonnerie lactée s Solution 1000 mL | B Braun | R5410-01 | |
| Canule Mercedes 4mm | MicroAire | PAL-R404LL | |
| NaCl 0.9 % | Bbraun | 570160 | |
| OCT Embedding Matrix 125 mL | CellPath | KMA-0100-00A | |
| Paraformaldéhyde | Fisher Scientific | 10342243 | |
| PBS 1 % | Sigma-Aldrich | P4474 | |
| PenStrep | Sigma-Aldrich | P4333-100ML | |
| Pétridish 150mm | Sarstedt | 83.1803 | |
| Phalloidin-iFluor 488 Réactif | Abcam | ab176753 | |
| Serbe stérile 20 mL Luer | HENKE-JECT | 5200-000V0 | |
| Seringue stérile 30 mL Luer-Lock | BD | 10521 | |
| Thrombine à partir de plasma | humainSigma-Aldrich | T6884-100UN | |
| Acide tranexamique | Orpha Swiss | 6837093 | |
| Tulipfilter 1.2 | Lencion Surgical | ATLLLL | |
| Tulipfilter 1.4 | Lencion Surgical | ATLLLL |
Références
- Daar, A. S., Greenwood, H. L. A proposed definition of regenerative medicine. J Tissue Eng Regen Med. 1 (3), 179-184 (2007).
- Machens, H. G., Mailänder, P. Regenerative medicine and plastic surgery. Chirurg. 76 (5), 474-480 (2005).
- Zuk, P. A., et al.
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Réimpressions et autorisations
