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Article de méthode

Création d’un modèle de défaut de cavité en boîte dans l’os cortical du fémora de rat

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DOI :

10.3791/66068

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21 novembre 2023

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Dans cet article

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour la création d’un défaut de cavité en boîte dans le tissu de diaphyse fémorale du rat. Ce modèle permet d’évaluer les performances des biomatériaux sous stress biomécanique et d’explorer les mécanismes de régénération osseuse liés à l’ostéogenèse intramembraneuse.

Résumé

De graves défauts osseux ou des fractures complexes peuvent entraîner de graves complications telles que l’absence de consolidation ou une cicatrisation osseuse insuffisante. L’ingénierie tissulaire, qui implique l’application de cellules, d’échafaudages et de cytokines, est considérée comme une solution prometteuse pour la régénération osseuse. Par conséquent, divers modèles animaux qui simulent des défauts osseux jouent un rôle crucial dans l’exploration du potentiel thérapeutique de l’ingénierie tissulaire pour la cicatrisation osseuse. Dans cette étude, nous avons établi un modèle de défaut osseux cortical en forme de boîte dans le milieu du fémur de rats, qui pourrait servir de modèle idéal pour évaluer la fonction des biomatériaux dans la promotion de la cicatrisation osseuse. Ce défaut osseux cortical en forme de boîte a été percé à l’aide d’une pièce à main orale à basse vitesse et façonné à l’aide d’une aiguille de tour. Une analyse micro-TDM postopératoire a été immédiatement effectuée pour confirmer l’établissement réussi de l’anomalie osseuse corticale de la cavité carrée. Les fémurs du côté opéré des rats ont ensuite été récoltés à plusieurs moments après la chirurgie (0 jour, 2 semaines, 4 semaines et 6 semaines). Le processus de cicatrisation de la zone défectueuse de chaque échantillon a été évalué à l’aide d’une micro-tomodensitométrie, d’une coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E) et d’une coloration au trichrome Masson. Ces résultats ont démontré un schéma de cicatrisation compatible avec une ossification intramembraneuse, la cicatrisation étant essentiellement terminée à 6 semaines. La catégorisation du processus de cicatrisation de ce modèle animal fournit une méthode in vivo efficace pour étudier de nouveaux biomatériaux et médicaments qui ciblent l’ossification intramembraneuse pendant la cicatrisation des défauts du tissu osseux.

Introduction

Les fractures et les défauts osseux résultent souvent de traumatismes, de tumeurs, d’inflammations et de malformations congénitales 1,2. Bien que le tissu osseux chez les jeunes individus en bonne santé possède généralement des capacités de régénération robustes3, des défauts dépassant une taille critique ou des obstacles à la guérison dus à des maladies systémiques (par exemple, le diabète, l’ostéoporose et les infections) peuvent toujours entraîner des complications telles qu’une discontinuité osseuse ou une altération de la cicatrisation4. Pour relever ce défi....

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Protocole

Toutes les procédures animales de cette étude ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique de l’École de stomatologie de l’Ouest de la Chine de l’Université du Sichuan (WCHSIRB-D-2021-597). Des rats Sprague-Dawley (mâles, poids corporel de 300 g) ont été utilisés pour la présente étude.

1. Préparation préopératoire

  1. Préparation de l’instrument
    1. Reportez-vous à la figure 1A pour les instruments chirurgicaux utilisés dans cette étude : rasoir électrique, ciseaux tissulaires, ciseaux ophtalmiques, pinces ophtalmiques, scalpel jetable, séparateur périosté, pièce à main orale à basse vitess....

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Résultats

Dans ce protocole, nous réussissons à établir un modèle de défaut de boîte fémorale-cavité de rat avec des dimensions de 4,5 mm x 1,5 mm par forage. Afin d’analyser le processus de guérison, nous avons collecté le tissu fémoral du côté opéré à 0 jour, 2 semaines, 4 semaines et 6 semaines après la chirurgie, qui sont les points clés de l’ossification endochondrale, de l’ossification intramembraneuse et du remodelage osseux au cours du processus de guérison des traumatismes fémoraux chez le.......

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Discussion

Les modèles animaux précliniques sont essentiels pour examiner la cicatrisation osseuse et l’influence des biomatériaux sur la régénération osseuse. Ce protocole illustre un modèle de défaut de la boîte fémorale-cavité reproduisant le processus de formation osseuse intramembraneuse associé à la régénération osseuse clinique. La zone du défaut a été normalisée en peropératoire à l’aide d’une sonde buccale pré-marquée. Les résultats de la micro-tomodensitométrie et de la coloration histopathologique ont montré une cicatris.......

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Déclarations de divulgation

Toutes les données et images originales sont incluses dans cet article. Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts

Remerciements

Cette étude a été financée par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine 82101000 (H. W.), U21A20368 (L. Y.) et 82100982 (F. L.), et soutenue par le Sichuan Science and Technology Program 2023NSFSC1499 (H. W.).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Perceuse à bille à vitesse lente de 1,2 mmDreybird Medical Equipment Co., Ltd.RA3-012Pour la préparation des défauts de la cavité de la boîte
3.0 sutureChengdu Shifeng Co., Ltd.AucunPour suturer les plaies
4 % de paraformaldéhydeBiosharpBL539APour fixer les échantillons fémoraux
Boules de cotonHaishi Hainuo Group Co.,  ; Ltd.20120047Pour la stérilisation de la peau et le nettoyage du champ chirurgical
Bâtonnets de cotonLakong Medical Devices Co., Ltd.M6500RPour la désinfection de la peau
Rectifieuse de prothésiste dentaireMarathonN3-140232Pour la préparation des défauts de cavité de la boîte
Scalpel jetableHangzhou Huawei Medical Supplies Co., Ltd.20100227Pour la création d’incisions cutanées ainsi que pour la séparation nette du tissu musculaire
Rasoir électriqueJASE BM320210Élimination du tissu pileux de la zone chirurgicale
Kit de coloration à l’hématoxyline et à l’éosineBiosharpC1005Pour l’analyse histologique des échantillons
Masson' s Kit de coloration trichromeSolarbioG1340Pour l’analyse histologique des échantillons
Micro CTScanco medical agµ ; CT 45Pour l’analyse de la cicatrisation des défauts dans les échantillons fémoraux
Porte-aiguilleChengdu Shifeng Co., Ltd.AucunPour les aiguilles de maintien de suture
Olympus Research Grade Whole Slide Scanning System VS200Chengdu Knowledge Technology Co.VS200Pour l’analyse des résultats de la coloration HE et de la coloration Masson
Pince ophtalmiqueChengdu Shifeng Co., Ltd.AucunPour le clampage de la peau, du tissu musculaire
Ciseaux ophtalmiquesChengdu Shifeng Co., Ltd.AucunPour la formation d’une incision cutanée
approche Pièce à main orale à basse vitesseMarathonY221101003Pour la préparation des défauts de cavité de la boîte
Sonde buccaleShanghai Sangda Medical Insurance Co., Ltd.20000143Pour mesurer le diamètre des défauts
Séparateur périostéChengdu Shifeng Co., Ltd.AucunPour la séparation brutale du tissu musculaire
Sprague&ndash ; Rats DawleyByrness Weil Biotech LtdAucunPour l’établissement de l’os fémoral boy-cavitaire
Ciseaux à tissusChengdu Shifeng Co., Ltd.AucunPour former une approche d’incision cutanée

Références

  1. Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. Fracture healing: mechanisms and interventions. Nat Rev Rheumatol. 11 (1), 45-54 (2015).
  2. Claes, L., Recknagel, S., Ignatius, A. Fracture healing under healthy and inflammatory conditions. Nat Rev Rheumatol. 8 (3), 133-143 (2012).
  3. <....

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Réimpressions et autorisations

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