Ce protocole fournit des informations techniques pour la reconstruction vasculaire à l’aide de la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris.
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Article de méthode
Reconstruction vasculaire avec la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
La transplantation hépatique orthotopique de souris est une méthodologie efficace pour étudier les mécanismes sous-jacents de l’ischémie hépatique et des lésions de reperfusion. Cependant, les défis techniques constituent un obstacle à l’utilisation de ce précieux modèle expérimental et à la transmission de ces compétences à la prochaine génération. L’aspect le plus difficile de cette procédure est la reconstruction vasculaire, y compris la veine porte (PV), la veine cave inférieure infrahépatique (IHIVC) et la veine cave inférieure suprahépatique. L’utilisation de brassards en plastique, plutôt que de sutures, permet une reconstruction PV et IHIVC plus fluide. Les vaisseaux sont reconstruits en fixant un brassard fabriqué à partir d’un cathéter intraveineux à l’extrémité du vaisseau greffé et en interposant le brassard dans le vaisseau receveur. Les deux aspects les plus cruciaux sont de visualiser correctement la lumière interne du vaisseau et d’éviter l’utilisation d’une force excessive. Notre objectif est de fournir un aperçu technique des reconstructions vasculaires à l’aide de la technique du brassard en chirurgie du receveur. Ces conseils techniques pour la technique du brassard devraient aider les microchirurgiens à faciliter la reconstruction vasculaire et à faire avancer leurs recherches.
Introduction
La transplantation hépatique orthotopique de souris (MOLT) est une méthode expérimentale efficace signalée pour la première fois en 19911. Ce modèle expérimental, qui utilise des souris génétiquement modifiées et divers réactifs de recherche, a joué un rôle central dans l’étude de l’ischémie chaude et froide et des lésions de reperfusion. Cependant, la grande complexité technique du modèle a entravé le développement d’une médecine de base pour la transplantation hépatique2. La MOLT comporte trois étapes principales : (1) le prélèvement du foie de la souris donneuse, (2) la chirurgie de la table arrière et (3) l’implantat....
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Protocole
Le protocole expérimental a été approuvé par le Comité d’expérimentation animale de l’Université de Kyoto. L’étude a utilisé des souris C57BL/6, âgées de plus de 10 semaines et pesant entre 25 g et 30 g, obtenues d’une source commerciale (voir le tableau des matériaux). Tous les animaux ont été anesthésiés avec de l’isoflurane à 2,5 % (selon les protocoles approuvés par l’établissement), maintenus dans des conditions spécifiques exemptes d’agents pathogènes, et toutes les procédures expérimentales ont été menées conformément à la réglementation sur l’expérimentation animale de l’Université de Kyoto. Les instruments appropriés utilisés pour l’étude son....
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Résultats
La reconstruction PV est réussie lorsque, lors du déclampage de la veine porte, il n’y a pas de tortuosité et que le foie est uniformément perfusé. Le temps anhépatique doit être inférieur à 20 min, car le temps anhépatique supérieur à 25 min augmente le risque de mortalité chez la souris. La reconstruction de l’IHIVC est considérée comme réussie s’il n’y a pas de régurgitation sanguine du greffon.
Le stockage du greffon à des températures froides pendant 1 h à l’aide d’une solution de préserv.......
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Discussion
L’apprentissage de la reconstruction vasculaire est l’aspect le plus difficile de la réussite de la MOLT. La qualité du brassard influence considérablement la difficulté de la reconstruction, compte tenu de la petite taille de la souris5. Cet article fournit un protocole détaillé pour la préparation, la fixation et la reconstruction du brassard.
Bien qu’il n’y ait pas de différences majeures par rapport aux rapports précédents concernant la prépa.......
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Déclarations de divulgation
Aucun auteur n’a de conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par la recherche fondamentale 2022 JST (The Japanese Society for Transplantation).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Cathéter intraveineux 16 G | TERUMO | SR-FF2032 | Brassard IHIVC |
| 20 G Cathéter intraveineux | TERUMO | SR-FF1651 | Brassard PV |
| 8-0 tresse soie | Natsume Seisakusho | CR9-80B2 | 8-0 soie |
| Belzer UW Solution de stockage frigorifique ; | Astellas | Liquide de préservation d’organe | |
| Bulldog clamp | B BRAUN | FB329R | Bulldog |
| clamp C57BL/6 souris ; ; | Oriental Bio Service | ||
| Solution d’inhalation d’isoflurane | Viatris | Anesthesic | |
| Micro Blunted Tips 0,1 mm x 0,06 mm ; | F.S.T | 11253-20 | Micropince droite |
| Micro Serrefine Applicateur à pince avec serrure | F.S.T | 18056-14 | Applicateur à pince pour cuve |
| Micro Serrefines ; | F.S.T | 18055-4 | Pince pour récipient |
| N°11 Lames de rechange | Rasoir de sécurité FEATHER 11 | lames | |
| Ciseaux ophtalmiques, manche rond | B BRAUN | FD103R | Microciseaux |
| Récipient en plastique de forme rectangulaire ; ; | Daiso | 10 cm de long, 15 cm de large et 6 cm de haut | |
| Embouts SuperGrip | F.S.T | 00649-11 ; | Micropinces incurvées |
| SZX7 | Olympus | SZX7 | |
| Microscope Étau | Niigataseiki | 00505351 | Un outil mécanique pour fixer la pince de Péan sur la table |
Références
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
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Réimpressions et autorisations
