Le protocole de greffe hépatique auxiliaire hétérotopique de rat décrit ici offre un outil d’investigation pratique pour explorer les mécanismes de rejet de l’allogreffe hépatique. Ce modèle permet d’atténuer les obstacles chirurgicaux et le stress animal de la transplantation hépatique orthotopique chez le rat.
Article de méthode
Modèle de greffe de foie entier auxiliaire hétérotopique utilisant une hépaticourétérostomie pour des études de rejet d’allogreffe
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les modèles de transplantation de petits animaux sont indispensables pour les études de tolérance d’organe qui étudient les interventions thérapeutiques réalisables dans les études précliniques. Les protocoles de transplantation hépatique de rat (LTx) utilisent généralement un modèle orthotopique où le foie natif du receveur est retiré et remplacé par un foie de donneur. Cette procédure chirurgicale techniquement exigeante nécessite des compétences microchirurgicales avancées et est encore compliquée par de longs temps d’anhépatie et d’ischémie du bas du corps. Cela a conduit au développement d’une méthode hétérotopique moins compliquée qui peut être réalisée plus rapidement sans temps d’anhépatie ou d’ischémie du bas du corps, réduisant ainsi le stress post-opératoire pour l’animal receveur.
Ce protocole LTx hétérotopique comprend deux étapes principales : l’excision du foie du rat donneur et la transplantation de l’ensemble du foie dans le rat receveur. Lors de l’exérèse du foie du donneur, le chirurgien ligature la veine cave supra-hépatique (CVH) et l’artère hépatique (HA). Du côté du receveur, le chirurgien enlève le rein gauche et positionne le foie du donneur avec la veine porte (PV), la veine cave infra-hépatique (CIVH) et le canal biliaire face aux vaisseaux rénaux. De plus, le chirurgien anastomose la veine rénale du receveur d’une extrémité à l’autre avec l’IHVC du foie et artérialise le PV avec l’artère rénale à l’aide d’un stent. L’hépaticourétérostomie est utilisée pour le drainage biliaire en anastomosant le canal biliaire jusqu’à l’uretère du receveur, ce qui permet l’évacuation de la bile par la vessie.
La durée moyenne de la transplantation était de 130 min, la durée de l’ischémie froide était d’environ 35 minutes et la durée de l’ischémie chaude était inférieure à 25 min. L’histologie de l’hématoxyline et de l’éosine du foie auxiliaire des greffes syngéniques a montré une structure hépatocytaire normale sans altérations parenchymateuses significatives 30 jours après la greffe. En revanche, les échantillons de greffe allogénique de 8 jours après la greffe ont montré une infiltration lymphoïde étendue avec un score de 9 de l’indice d’activité de rejet du schéma de Banff. Par conséquent, cette méthode LTx facilite une alternative au modèle de rejet de faible morbidité au LTx orthotopique.
Introduction
Le LTx chez les petits animaux est un modèle inestimable pour étudier les mécanismes de rejet hépatique. La transplantation hépatique auxiliaire hétérotopique avec artérialisation de la veine porte (HALT-PVA) chez le rat a été introduite en 1968 par Lee et Edgington1lorsqu’ils ont rapporté avoir utilisé la veine rénale et l’artère d’un receveur pour revasculariser un foie auxiliaire greffé. Par la suite, Hess et al.2 ont amélioré le protocole en atténuant la compétition fonctionnelle entre les foies natif et auxiliaire en réduisant la taille du foie natif et du foie donneur ainsi qu’en reconstruisant la connexion des voies biliaires du donneur, ce qui a entraîné la survie à long terme du greffon. D’autres améliorations ont été apportées avec l’introduction de l’anastomose du ballonnet 3,4, et Schleimer et al.5 ont déterminé le diamètre optimal du stent pour réguler le flux sanguin afin d’obtenir un flux porte physiologique et d’éviter l’hyper- ou l’hypo-perfusion du greffon. D’autres chercheurs ont apporté des modifications significatives à la méthode en utilisant l’artère splénique6 ou l’artère iliaquecommune 7 pour l’approvisionnement en sang du greffon, tandis que certains ont développé des modèles qui utilisaient uniquement du sang veineux8 ou uniquement du sang artériel via l’artère hépatique9 pour alimenter la greffe hépatique auxiliaire.
La présente étude a émis l’hypothèse que la compétition fonctionnelle du foie natif n’interférerait pas avec le rejet de l’allogreffe, nous avons donc développé un protocole basé sur le modèle de Schleimer10 régulé en flux qui n’incluait aucune réduction de taille du foie natif ou auxiliaire. Le côté gauche du receveur a été sélectionné pour localiser le greffon car il offrait une orientation optimale entre les vaisseaux rénaux et hépatiques du receveur et du donneur. Initialement, nous avons tenté une reconstruction biliaire par hépaticoduodénostomie, mais ces essais ont simplement confirmé l’affirmation de Schleimer selon laquelle « le drainage biliaire est le talon d’Achille de la transplantation hépatique »10. Cela a conduit au développement d’une nouvelle technique où le canal biliaire est anastomosé de bout en bout à l’aide d’un stent avec l’uretère des receveurs, permettant l’évacuation de la bile par la vessie. Un avantage notable de l’utilisation d’une hépaticourétérostomie est que la fonctionnalité hépatique du greffon peut être surveillée quotidiennement en observant l’urine ; Une greffe de foie productrice de bile colore l’urine d’un jaune vif. La figure 1 représente la vue d’ensemble schématique de la méthode HALT-PVA.
Un avantage important de l’hétérotopie de rat LTx par rapport à l’orthotopique est l’absence de tout anhépatique ou de temps d’ischémie totale du bas du corps, ce qui permet une récupération plus rapide et plus facile pour les receveurs hétérotopiques. De plus, les études immunologiques LTx utilisant des méthodes orthotopiques reposent souvent sur un rejet sévère ou la mort du receveur comme critère expérimental, ce qui n’est pas le cas avec les greffes hétérotopiques, où l’animal reste en bonne santé même si l’allogreffe cesse de fonctionner en raison du rejet. Ces deux caractéristiques de la méthode hétérotopique soutiennent les principes de l’initiative internationale 3R (Replacement, Reduction, and Refinement)11, qui promeut un cadre pour minimiser la douleur, la souffrance et la détresse ressenties par les animaux de recherche et améliorer leur bien-être.
Le modèle HALT-PVA présenté ici est une méthode pratique et fiable pour étudier les mécanismes de rejet de l’allogreffe hépatique dans les études précliniques. Cette technique expérimentale utile permet de surmonter les exigences chirurgicales considérables et le stress animal de la LTx orthotopique chez le rat. À l’avenir, nous avons l’intention d’utiliser cette méthode pour étudier les mécanismes du rejet immunitaire aigu tout en explorant de nouvelles cibles et stratégies thérapeutiques pour supprimer le rejet hépatique de l’allogreffe.
Protocole
Les animaux ont été élevés et logés dans des conditions spécifiques exemptes d’agents pathogènes dans les installations de soins aux animaux de l’Institut de recherche médicale de l’Université du Wisconsin (UW)-Madison, conformément aux directives institutionnelles. Le protocole d’étude (n° M006022) a été approuvé par le comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de la faculté de médecine et de santé publique de l’UW, et tous les animaux ont été traités de manière éthique.
1. Animaux
- Utilisez des rats femelles Lewis adultes pesant de 205 à 235 g et des rats Lewis mâles pesant de 250 à 280 g comme rats donneurs. Utilisez des rats Lewis et des rats surmulots bruns mâles adultes pesant de 365 à 420 g comme receveurs.
- Effectuer des greffes syngéniques en transplantant des donneurs Lewis chez des receveurs Lewis, tandis que les greffes allogéniques ont utilisé des donneurs Lewis transplantés chez des receveurs Brown Norway.
- Effectuez toutes les interventions chirurgicales par deux personnes à l’aide d’un microscope à deux têtes.
2. Procédure d’obtention d’un donneur de foie auxiliaire
- Anesthésier le rat donneur avec une inhalation d’isoflurane à 5 % dans une chambre d’induction. Enregistrez le poids du rat et rasez l’abdomen avec une tondeuse électrique.
- Placez le rat en position couchée sur un coussin de chirurgie chauffé avec son nez dans un cône d’anesthésie et immobilisez les membres avec du ruban adhésif. Désinfectez l’abdomen avec de l’alcool à 75 % et abaissez l’isoflurane à 2 %.
- Faites une incision longitudinale médiane de la peau et des muscles du pubis au xiphoïde à l’aide de ciseaux. Près du point médian de l’incision longitudinale, étendez-la latéralement vers la gauche et la droite, puis installez des écarteurs des deux côtés de la paroi abdominale et du processus xiphoïde.
- À l’aide de cotons-tiges humides, rétractez les intestins vers le côté gauche de l’abdomen tout en utilisant des ciseaux à ressort pour couper les ligaments gastro attachés au foie, puis immobilisez les intestins sous de la gaze humidifiée. Couvrez le foie d’un petit morceau de gaze stérile imbibé d’une solution saline chaude.
- Utilisez des cotons-tiges humides pour rétracter le foie et disséquer les ligaments falciforme, triangulaire, hépatogastrique et hépatoduodénal. Ensuite, cautérisez avec une pince bipolaire et divisez les vaisseaux para-œsophagiens entre le lobe latéral gauche et le lobe caudé antérieur.
- À l’aide d’une pince à angle ou d’un porte-aiguille, disséquez derrière le SHVC inférieur au diaphragme, puis passez une suture en soie 5-0 sous le SHVC et faites un double nœud sans serrer pour une utilisation ultérieure.
- Rétractez le lobe latéral droit inférieur vers le haut, coupez le ligament et immobilisez sous de la gaze humidifiée. Isolez l’IHVC du tissu rétropéritonéal jusqu’à la veine rénale droite et ligaturez la veine surrénale droite avec une suture en soie 6-0 aussi près que possible de l’IHVC. Divisez cette veine plus tard lorsque le greffon est retiré.
- À l’aide d’une aiguille d’hydro-dissection de 27 G (Figure 2A), dissociez le PV du tissu conjonctif environnant et séparez-le des veines pyloriques et spléniques en les ligaturant et en les divisant à l’aide d’une suture en soie 7-0.
- Isolez, ligaturez avec une suture en soie 6-0 et divisez l’artère hépatique commune près de l’endroit où elle passe sous le PV.
- Lister le canal biliaire avec une suture en soie 5-0 au niveau de la ramification de l’artère gastroduodénale tout en préservant autant que possible le tissu adipeux autour du canal biliaire ; En particulier, évitez de séparer le canal biliaire de l’artère hépatique appropriée tout en gardant la longueur totale aussi courte que possible.
- À l’aide de ciseaux à ressort, faites une petite incision dans la paroi du canal biliaire à proximité de la ligature. Insérez un stent en polyimide de 0,0215" de diamètre sur 5 mm de long dans la lumière du canal biliaire et fixez-le avec une suture en soie 6-0, en laissant une extrémité de la suture longue pour une utilisation ultérieure. Divisez le canal biliaire en coupant entre les ligatures 5-0 et 6-0.
- Marquez la face supérieure de l’IHVC et du PV avec un stylo à colorant chirurgical pour aider à aligner les vaisseaux pendant l’anastomose, puis clampez la veine porte avec une pince à microvaisseaux aussi distale que possible par rapport au foie.
- Insérez une seringue de 20 mL avec une aiguille de 26 G dans le PV proximal du micro-clamp et perfuser le foie avec 10 à 15 mL de solution saline héparinée glacée ; simultanément, divisez l’IHVC à l’aide de ciseaux à ressort aussi près que possible de la veine rénale droite.
- Excise le foie à l’aide de ciseaux à ressort en disséquant le PV proximal à la micro-pince, en resserrant la suture 5-0 précédemment placée autour du SHVC et en disséquant le diaphragme pour transecter la veine cave intrathoracique.
- Continuez en disséquant les ligaments restants à l’arrière du foie et divisez la veine surrénale précédemment ligaturée. Placez le foie excisé dans une solution saline froide sur de la glace.
3. Procédure de greffe de foie auxiliaire
- Anesthésier le rat receveur avec une inhalation d’isoflurane à 5 % dans une chambre d’induction. Enregistrez le poids du rat et rasez l’abdomen avec une tondeuse électrique.
- Placez le rat en position couchée sur un coussin de chirurgie chauffé avec son nez dans un cône d’anesthésie et immobilisez les membres avec du ruban adhésif. Appliquez un lubrifiant pour les yeux, désinfectez l’abdomen avec de l’alcool à 75 % et abaissez l’isoflurane à 2 %.
- À l’aide de ciseaux, faites une incision longitudinale médiane de la peau et des muscles du pubis au xiphoïde, puis installez des écarteurs des deux côtés de la paroi abdominale.
- À l’aide de cotons-tiges humides, rétractez les intestins vers le côté droit de l’abdomen et couvrez-les de gaze humidifiée. Appliquez une autre gaze humide pour couvrir l’estomac, la rate et le foie, en exposant le rein gauche et les vaisseaux rénaux.
- À l’aide d’une aiguille d’hydrodissection de 27 g et d’une pince à pointe émoussée, séparez la veine rénale gauche de l’artère rénale, en retirant soigneusement la graisse et le tissu conjonctif des deux vaisseaux.
- Isolez les veines gonadiques et surrénales et utilisez de la soie 6-0 pour les ligaturer temporairement à proximité de la veine rénale. Cautériser, à l’aide d’une pince bipolaire, toutes les micro branches latérales en isolant la veine rénale et l’artère entre l’aorte/VC et le rein.
- Mobilisez et ligaturez l’uretère avec une suture en soie 6-0 au pôle inférieur. Marquez la veine et l’artère rénales avec un stylo à colorant chirurgical pour aider à orienter les vaisseaux pendant l’anastomose et vous assurer qu’il n’y a pas de torsions.
- Clampez l’artère rénale et la veine rénale à l’aide d’une pince à microvaisseaux aussi près que possible de l’aorte et du VC. Transectez l’artère rénale avec des ciseaux à ressort juste après la bifurcation du vaisseau et divisez la veine rénale à peu près à mi-chemin entre le VC et le rein. Mobilisez le rein gauche du tissu conjonctif environnant et retirez-le.
- Rincer les deux vaisseaux avec une solution saline héparinisée à l’aide d’une aiguille d’hydro-dissection de 27 G pour éliminer tout le sang restant.
- À l’aide de ciseaux à ressort, découpez une petite ouverture en bouche de poisson dans la fourche de la bifurcation de l’artère rénale pour en faire une ouverture en forme d’entonnoir et insérez une endoprothèse de 8 mm découpée dans un cathéter de 26 G (figure 2B). Fixez le stent avec une suture en soie 6-0, en laissant une extrémité de la suture longue pour une utilisation ultérieure.
- Introduisez le foie du donneur et placez-le avec le PV, l’IHVC et le canal biliaire face à la veine rénale et à l’artère gauche du receveur. À l’aide d’une suture en nylon 9-0, installez deux sutures de maintien sur les côtés opposés de la connexion veineuse rénale IHVC.
- Comparez la largeur des vaisseaux et faites une petite incision dans la bouche du poisson à l’aide de ciseaux à ressort dans la face de la veine rénale jusqu’à ce qu’elle ait une largeur similaire à l’IHVC du donneur (figure 2C).
- À l’aide d’une suture en nylon 9-0, anastomose l’IHVC hépatique d’un bout à l’autre de la veine rénale à l’aide de 9 ou 10 sutures courantes sur les parois avant et arrière du vaisseau. Alternativement, utilisez une méthode de brassard pour compléter cette anastomose 3,4.
- Confirmez que l’artère rénale est placée sous l’IHVC (Figure 2D), et insérez l’endoprothèse précédemment placée dans l’artère rénale dans la veine porte du foie et fixez-la avec une suture en soie 6-0, en laissant une extrémité de la suture longue pour s’attacher au fil opposé sur l’artère. Rassemblez les extrémités pour empêcher chacune de glisser de l’endoprothèse.
- Retirez d’abord la micro-pince sur la veine rénale, puis retirez la micro-pince sur l’artère rénale.
- Pendant la reperfusion du foie, utilisez de la gaze et des cotons-tiges pour appliquer une légère pression autour de la région de l’anastomose jusqu’à ce qu’une anastomose patente soit obtenue (figure 2D). Retirez les ligatures temporaires précédemment placées sur les veines surrénales et gonadiques.
- Mobilisez soigneusement environ 10 mm à l’extrémité de l’uretère gauche à partir du tissu conjonctif environnant, en laissant une quantité importante de tissu adipeux attaché. Avec des ciseaux à ressort, faites une petite incision dans la paroi de l’uretère proximal à la ligature 5-0 précédemment placée.
- Insérez l’endoprothèse en polyimide préalablement fixée au canal biliaire dans la petite incision pratiquée dans la paroi de l’uretère. Fixez avec une suture en soie 6-0 et attachez une extrémité avec le long fil du côté des voies biliaires de l’endoprothèse, en rapprochant fermement les deux extrémités.
- Remettez les intestins dans leur position naturelle (figure 2E), irriguez avec 2-3 mL de solution saline et fermez l’abdomen en deux couches à l’aide de sutures en soie 3-0.
- Injectez 0,1 mg/kg de buprénorphine par voie sous-cutanée, placez le receveur dans une cage propre et chauffée et surveillez la récupération pendant 1 à 2 heures avant de ramener l’animal à l’animalerie.
4. Suivi post-chirurgical
- À partir du 2e jour post-opératoire, injectez quotidiennement de l’héparine (1 UI/g) par voie sous-cutanée aux receveurs d’une greffe allogénique.
- À partir du 2e jour post-opératoire, injectez de l’héparine (1 UI/2 g) par voie sous-cutanée tous les deux jours aux receveurs d’une greffe syngénique.
Résultats
À l’heure actuelle, 29 paires de rats ont été utilisées pour établir le protocole HALT-PVA, 17 greffes syngéniques et 12 greffes allogéniques. Les foies transplantés syngéniques ont survécu jusqu’à leur point final expérimental désigné de 8 ou 30 jours avec un taux de réussite de 70 %, tandis que les foies transplantés allogéniques ont survécu jusqu’à leurs critères d’évaluation désignés de 3 ou 8 jours avec un taux de réussite de 50 %. Les échecs comprennent les rats qui sont morts à cause de complications chirurgicales et les foies auxiliaires qui ont échoué même lorsque le receveur a survécu.
La durée moyenne de l’opération était de 130 min, avec un temps d’ischémie froide d’environ 35 min et un temps d’ischémie chaude de moins de 25 min. À condition qu’il n’y ait pas de complications peropératoires, les receveurs se sont réveillés et sont devenus actifs dans les 10 à 20 minutes, ont commencé à boire et à se promener dans les 1 h et 24 h plus tard, ils se sont comportés comme des rats normaux et en bonne santé.
Les greffes hépatiques syngéniques ont montré une excellente couleur et une perméabilité des voies biliaires 30 jours après la greffe (Figure 3), tandis que l’histologie de l’hématoxyline et de l’éosine (H&E) a montré une structure hépatocytaire normale sans altérations parenchymateuses significatives aux points de temps de 8 jours et de 30 jours (Figure 4A,B). Après seulement 3 jours, l’histologie des greffes allogéniques a montré une inflammation portale significative (Figure 4C), tandis que les greffons allogéniques de 8 jours ont montré un rejet cellulaire aigu avec une infiltration lymphoïde étendue (Figure 4D).
Des échantillons représentatifs de LTx allogéniques et syngéniques ont été évalués par un pathologiste hépatique certifié, et le rejet a été noté à l’aide de l’indice d’activité de rejet (RAI) du schéma de Banff12. L’évaluation pathologique a révélé qu’il n’y avait pas de rejet, avec un RAI de Banff de 0, dans les greffes syngéniques de 8 jours et de 30 jours, tandis que les allogreffes de 8 jours ont été sévèrement rejetées avec un score RAI de Banff de 9 (tableau 1).
Figure 1 : Schéma de principe de la procédure HALT-PVA pour rats. Le PV est artérialisé avec l’artère rénale gauche à l’aide d’un stent, l’IHVC est anastomosé d’un bout à l’autre de la veine rénale gauche et le canal biliaire est fixé à l’uretère à l’aide d’un stent. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : Intervention chirurgicale. (A) Hydro-dissection de PV. Dissociez le PV du tissu conjonctif environnant à l’aide d’une aiguille d’hydro-dissection de 27 G. (B) Insertion d’une endoprothèse artérielle. L’endoprothèse artérielle est insérée dans une petite ouverture en forme d’entonnoir pratiquée dans la fourche de la bifurcation de l’artère rénale. (C) Élargissement de la veine rénale. Afin de correspondre à la plus grande largeur de l’IHVC du donneur pour l’anastomose, une petite incision dans la bouche de poisson est pratiquée dans la face de la veine rénale du receveur après la mise en place de deux sutures de séjour. (D) Greffe de foie perfusée immédiatement après l’anastomose. Le positionnement de l’artère rénale et de la connexion PV sous la veine rénale et l’IHVC est crucial pour prévenir la thrombose du greffon. (E) Rat HALT-PVA in situ. Le foie auxiliaire est positionné contre la paroi gauche de l’abdomen avant de retourner dans les intestins. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
Figure 3 : HALT-PVA syngénique 30 jours après la greffe. (A) Après 30 jours, le foie auxiliaire a une couleur et une texture similaires à celles du foie natif, tandis que (B) le canal biliaire et le stent PV restent persistants et sans restriction. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
Figure 4 : Histologie des greffes hépatiques auxiliaires. Coloration H&E de greffons syngéniques (A) de 8 jours et (B) de 30 jours après la greffe présentant une structure hépatocytaire normale ainsi que de greffons allogéniques de 3 jours et de 8 jours présentant une inflammation portale et une infiltration lymphocytaire. Barre d’échelle : 50 μm. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
| Tx allogéniques | Inflammation portale | Lésion des voies biliaires | Inflammation endoveineuse | Banff RAI |
| 3 jours (LT-34) | 2 | 2 | 3 | 7 |
| 3 jours (LT-38) | 1 | 0 | 0 | 1 |
| 8 jours (LT-20) | 3 | 3 | 3 | 9 |
| 8 jours (LT-40) | 3 | 3 | 3 | 9 |
| Tx Syngeneic | ||||
| 8 jours (LT-13) | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 8 jours (LT-19) | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 30 jours (LT-28) | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 30 jours (LT-32) | 0 | 0 | 0 | 0 |
Tableau 1 : Schéma de Banff. Indice d’activité de rejet (IRA) des LTx de rat allogéniques et syngéniques.
Discussion
La transplantation hépatique est la seule option de traitement pour les patients atteints d’une maladie hépatique en phase terminale, avec près de 9 000 LTx effectuées chaque année aux États-Unis13. Malheureusement, le rejet immunologique est observé chez jusqu’à 25 % des receveurs de LTx, et ce rejet est préjudiciable à l’organe transplanté et au patient 14,15. Pour améliorer les résultats après LTx, il est nécessaire de développer des modèles innovants pour étudier le rejet d’organe et de mettre en œuvre des stratégies pour réduire le rejet.
Par rapport à la transplantation hépatique orthotopique de rat, le modèle hétérotopique actuel est remarquablement facile à établir. Le degré de difficulté technique est mieux calculé en considérant l’étape la plus difficile de la procédure, à savoir les anastomoses de bout en bout de l’IHVC à la veine rénale. Notre préférence personnelle pour cette connexion est d’utiliser des points de suture traditionnels tandis que d’autres trouvent un système de brassard plus pratique 3,4 ; Quoi qu’il en soit, toute personne à l’aise avec l’anastomose de bout en bout d’une veine de 3 mm par n’importe quelle méthode possède toutes les compétences techniques nécessaires pour accomplir cette procédure. Ayant accès à un microscope à double tête, nous préférons faire ces chirurgies avec deux personnes ; Cependant, ce n’est pas une condition préalable au succès de ce protocole car il a également été exécuté en solo.
La principale complication postopératoire de ce modèle est la thrombose du foie du greffon qui est provoquée par trois choses. Tout d’abord, le stent artériel lui-même peut induire une thrombose si les extrémités du stent présentent des bavures ou des irrégularités qui provoquent des turbulences de Foucault dans le flux sanguin. L’endoprothèse doit être coupée avec un rasoir bien aiguisé, et non avec des ciseaux, puis inspectée au microscope pour s’assurer qu’il n’y a pas d’imperfections. Deuxièmement, si l’anastomose de l’artère rénale/stent PV est positionnée au-dessus de l’anastomose veineuse rénale/IHVC, elle limitera le flux sanguin et induira une thrombose. La mise en place finale de l’endoprothèse artérielle doit se faire sous l’IHVC, voir la figure 2D. Troisièmement, le traitement post-chirurgical avec l’anticoagulant héparine est essentiel pour prévenir la thrombose des greffes allogéniques, tandis qu’une dose plus faible d’héparine est également utile pour éliminer le risque de thrombose dans les greffons syngéniques.
Le taux de survie plus faible pour les greffes allogéniques par rapport aux greffons syngéniques rapportés ici reflète la nature pro-thrombotique du foie auxiliaire rejetant, qui déclenche la thrombose de l’endoprothèse artérielle. Plusieurs tentatives ont été nécessaires pour trouver un schéma posologique d’héparine qui pourrait empêcher le stent de thromboser dans les allogreffes. Initialement, sur les 6 premiers receveurs d’allogreffes à survivre à la chirurgie, 50 % des foies auxiliaires ont échoué en raison d’une thrombose, mais à la suite d’une augmentation de la dose d’héparine, les trois dernières allogreffes ont survécu sans thrombose. À l’avenir, après avoir déterminé une dose efficace d’héparine, nous nous attendons à ce que le taux de réussite des allogreffes augmente considérablement. De même, la plupart des échecs syngéniques se sont produits au début du développement, et nous nous attendons à ce que le taux de réussite des greffes syngéniques s’améliore également.
Nous avons utilisé le modèle de rejet aigu de Lewis à Brown Norway LTx car la combinaison de souches Brown Norway à Lewis ne rejette pas16. Il convient de noter que lorsque des méthodes de transplantation orthotopique sont utilisées avec ce modèle de rejet et qu’un rejet hépatique se produit, les animaux receveurs souffrent d’une morbidité sévère car ils deviennent déprimés, inactifs et cessent de manger avant de mourir dans les 14 jours16. Cependant, avec ce modèle LTx hétérotopique, la mort n’est pas utilisée comme critère d’évaluation, et la morbidité ne se produit pas ; L’animal reste en bonne santé et actif pendant toute la durée de l’expérience, même lorsque le foie auxiliaire est complètement rejeté. Sans aucun doute, ce modèle LTx hétérotopique contribue de manière significative à minimiser la douleur, la souffrance et la détresse ressenties par les animaux receveurs.
Les progrès récents dans la perfusion hépatique exothermique ex vivo (NEVLP) constituent une avancée passionnante dans la façon dont les foies sont stockés avant la transplantation clinique 17,18,19. Au cours de la NEVLP, le foie du donneur reprend l’activité physiologique permettant des interventions thérapeutiques avant la transplantation20,21. Le NEVLP est également de plus en plus utilisé pour évaluer la viabilité d’organes marginaux (foies provenant de donneurs âgés ou obèses ou foies obtenus de donneurs après une mort cardiaque)22,23. Bien que passionnant, seule une poignée de laboratoires ont été en mesure de transplanter des foies de rats après NEVLP24,25. Cela est probablement dû au stress chirurgical subi par l’animal et à la forte exigence technique de préparation du foie pour le NEVLP et la transplantation. En revanche, la technique opératoire hétérotopique LTx décrite dans ce manuscrit est moins exigeante techniquement et cause moins de stress à l’animal. En tant que tel, il peut s’agir d’une option viable pour les petits modèles animaux de NEVLP et la transplantation ultérieure.
En conclusion, nous présentons un modèle alternatif de transplantation hépatique à faible morbidité qui pourrait être bénéfique pour les futures études de rejet de greffe.
Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Cette recherche a été soutenue par le National Institute of Health (NIH) K08AI155816, attribuée à DA.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 3-0 Suture en soie | Éthicon | C013D | |
| 5-0 Cravates en soie | Outils scientifiques fins | 18020-50 | |
| 6-0 Cravates en soie | Outils scientifiques fins | 18020-60 | |
| 7-0 Cravates en soie | Téléflex | 103-S | |
| 9-0 Suture en polyamide | AROSurgique | T05A09N10-13 | Noir |
| Cautère bipolaire | Codman & Shurtleff Inc. | P.H. 234 | |
| Buprénorphine HCL | Hospira | 409201232 | |
| Pince Adson-Brown | Outils scientifiques fins | 11627-12 | 12,5 cm |
| Pince coudée Dumont ; | Outils scientifiques fins | 11253-25 | Médical #5/45 11 cm |
| Pinces, attache de sutures ; | Outils scientifiques fins | 18025-10 | 10 cm |
| Héparine sodique injectable, USB | Fresenius Kabi | 504015 | 10 000 unités USP par 10 mL |
| Canule d’hydrodissection | Ambler Chirurgical | N° 1021E | 27 grammes |
| L’isoflurane | Dechra Vet. Produits | 17033-091-25 | |
| Cathéter IV | Kendall | 2619PUR | 26 g x 3/4 po |
| Système de rétraction magnétique | Outils scientifiques fins | 18200-50 | |
| Micro-pinces | Outils scientifiques fins | 18055-05 | 6 millimètre |
| Micro-pinces | Outils scientifiques fins | 18055-06 | 4 millimètre |
| Applicateur Micro Clamp | Outils scientifiques fins | 18057-14 | 14 cm |
| Micro porte-aiguille | S& T | C-14 | 14 cm |
| Microscope | Zeiss | Universel S3 | Double tête |
| Pommade ophtalmique | Puralube | 14590500 | |
| Tubes en polyimidi | Cole Parmer | 95820-04 | OD 0.0215 », ID 0.0195 », mur 0.0010 » |
| Salin | Baxter | 281324 | Chlorure de sodium à 0,9 % |
| Ciseaux chirurgicaux à ressort | S& T | SDC-15 | Émoussé 14 cm |
| Ciseaux chirurgicaux à ressort | Outils scientifiques fins | 15021-15 | Vannas 14 cm |
Références
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Réimpressions et autorisations
