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La synthèse réussie des NPs de ZnO a été confirmée par microscopie électronique à transmission (MET), comme le montre la figure 1A. On a observé que les NP de ZnO obtenus étaient de forme ronde, avec une taille moyenne de particules de 35,35 nm et un écart-type de 6,81 nm. La précipitation de ces nanoparticules a été observée par une réaction de double déplacement par ajout d’une solution de NaOH à de l’acétate de zinc, où les ions Zn2+ ont subi une hydrolyse.
À l’aide de la diffusion dynamique de la lumière (DLS), la taille moyenne et le potentiel zêta des nanoparticules synthétisées ont été déterminés à 130,4 nm et 28,92 mV, respectivement, comme le montre la figure 1B. L’écart entre la taille des NP de ZnO mesurée à l’aide de la DLS et celle obtenue à partir de l’image TEM a été attribuée à l’agrégation de nanoparticules nues. Le potentiel zêta positif a indirectement confirmé l’acquisition de NP de ZnO, qui peuvent interagir électrostatiquement avec les surfaces cellulaires bactériennes, causant potentiellement des dommages physiques. L’amplitude du potentiel zêta indique la stabilité potentielle d’un système colloïdal. Lorsque toutes les particules en suspension ont de grands potentiels zêta positifs ou négatifs, elles ont tendance à se repousser, empêchant ainsi l’agrégation. Les particules dont le potentiel zêta est supérieur à +30 mV ou inférieur à -30 mV sont généralement considérées comme stables. Les NP de ZnO synthétisés ont montré un potentiel zêta de +28,92 mV, indiquant une stabilité relative dans l’eau20.
Les spectres d’absorption des NP de ZnO ont été examinés à l’aide d’un lecteur de microplaques, révélant un pic d’absorption spécifique pour le ZnO à 360 nm (Figure 1C). Le précurseur de l’acétate de zinc n’a pas de pic unique, alors que les NP de ZnO sont connus pour avoir un pic unique à 360-370 nm. La synthèse a été confirmée par la présence du pic unique de 360 nm dans les NPs21 de ZnO synthétisés. Ces caractéristiques spécifiques d’absorption des UV ont confirmé la synthèse directe des NPs de ZnO. De plus, l’analyse par diffraction des rayons X (XRD) (Figure 1D) a révélé des pics cristallins distincts caractéristiques du ZnO. En comparant la structure wurtzite représentative des NP de ZnO (JCPDS n° 36-1415), il a été observé que tous les plans (1, 0, 0), (0, 0, 2), (1, 0, 1), (1, 0, 2), (1, 1, 0), (1, 0, 3), (2, 0, 0), (1, 1, 2) et (2, 0, 1) étaient alignés22.
L’efficacité antimicrobienne des NP de ZnO synthétisées a été évaluée à l’aide d’un test de dilution dans un microbouillon par rapport à des échantillons cliniques de P. aeruginosa et de SARM obtenus à l’hôpital universitaire Chung-Ang de Séoul, en Corée du Sud. Des images de cultures bactériennes ont été capturées pour analyse. Pour évaluer visuellement l’efficacité antimicrobienne des nanoparticules à l’aide du même facteur de dilution, des plaques épandues avec une solution bactérienne non diluée ont été utilisées (figures 2A, B). Des plaques d’épandage contenant la solution d’origine ont été utilisées pour déterminer la concentration bactéricide minimale potentielle. Étant donné que des colonies bactériennes ont été observées même à la concentration la plus élevée pour les deux souches, un effet bactéricide complet n’a pas été obtenu. Les concentrations bactériennes dans chaque groupe ont été calculées à l’aide de facteurs de dilution dénombrables. En comparant les taux de survie de chaque groupe de traitement à ceux du groupe témoin négatif, les effets antimicrobiens des NP de ZnO étaient évidents chez les souches de P. aeruginosa et de SARM. Compte tenu de la plage de cytotoxicité des NP de ZnO étudiée, différentes concentrations de ZnO ont été testées, en commençant par la concentration la plus élevée connue pour induire une toxicité, qui est de 1000 μg/mL, jusqu’à la plage non toxique de 62,5 μg/mL, par dilution en série23,24. Dans le cas de P. aeruginosa, l’activité antimicrobienne des NP de ZnO a été augmentée en fonction de la concentration (figure 2A). Cependant, une diminution visible du nombre de colonies bactériennes de P. aeruginosa à partir de la culture bactérienne non diluée (100) n’était pas évidente.
À l’inverse, les NP de ZnO ont montré une activité antimicrobienne élevée contre la bactérie à Gram positif SARM, avec une diminution notable des unités formant des colonies bactériennes (UFC), comme le confirme la comparaison des images des cultures bactériennes diluées à celles de la culture bactérienne non diluée initiale (100). Ce résultat a confirmé que les NP de ZnO synthétisées présentaient une activité antimicrobienne contre les deux souches bactériennes, en particulier une efficacité accrue contre lasouche de SARM.

Figure 1 : Caractérisation des nanoparticules d’oxyde de zinc. (A) Images de microscopie électronique à transmission de NP de ZnO sous différents grossissements. (B) Taille (à gauche) et distribution du potentiel zêta (à droite) par analyse DLS. (C) Spectre d’absorbance des NP de ZnO à l’aide d’un lecteur de microplaques. (D) Analyse XRD des NP de ZnO et de leurs pics cristallins. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 2 : Propriétés antibactériennes des NP de ZnO testées sur 5 x 10 5 UFC/mL (A) Test antibactérien contre la souche P. aeruginosa. (B) Test antibactérien contre la souche SARM. N = témoin négatif (DPBS), P = témoin positif (A/A). Les astérisques indiquent la différence statistiquement significative par rapport aux témoins, ****p ≤ 0,0001. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± d’écart-type de trois expériences indépendantes réalisées en trois exemplaires. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.