Placement périorbitaire d’une sonde laser Doppler pour la surveillance du débit sanguin cérébral avant l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez des modèles de rongeurs

Résumé

Une intervention chirurgicale mini-invasive est présentée ici, qui consiste à placer la sonde laser Doppler sur le crâne au-dessus de la région distale de l’artère cérébrale moyenne (ACM), une position périorbitaire adaptée aux rats et aux souris, afin d’évaluer le flux sanguin lors de l’occlusion transitoire de l’ACM.

Résumé

L’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO) est la méthode de référence pour la modélisation préclinique de l’AVC ischémique chez les rongeurs. Cependant, le succès de l’occlusion n’est pas garanti, même par les mains chirurgicales les plus habiles. Les erreurs se produisent principalement lorsque le filament n’est pas placé à la bonne profondeur et comprennent des cas d’absence d’infarctus ou de perforation du vaisseau, ce qui peut entraîner la mort. La flowmétrie laser Doppler (LDF) est une technique fiable qui fournit une rétroaction en temps réel sur le débit sanguin cérébral régional (CBF) pendant la procédure MCAO. Ici, nous démontrons une technique rapide de placement périorbitaire d’une sonde laser Doppler pour la mesure du CBF chez la souris et le rat. Notre raison d’être était de simplifier la mise en œuvre de la LDF, en encourageant une utilisation généralisée pour une meilleure fiabilité chirurgicale. La technique élimine le besoin d’amincissement du crâne et d’équipement spécialisé, avec un placement dans la région périorbitaire plutôt que dorsale, favorisant l’efficacité et la facilité d’adoption. Le protocole décrit ici englobe les préparations préchirurgicales, la mise en place de la sonde Doppler périorbitaire et les soins postopératoires. Les résultats représentatifs comprennent des représentations visuelles des éléments procéduraux ainsi que des tracés LDF représentatifs illustrant des chirurgies MCAO réussies, avec des cas de placement infructueux du filament entraînant des complications. Le protocole illustre la LDF dans la confirmation du placement correct du filament et offre une procédure simplifiée par rapport aux méthodes alternatives.

Introduction

La méthode d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO) a été largement utilisée chez les rongeurs depuis son introduction dans la communauté scientifique pour être appliquée aux rats en 1986¹ avec l’adaptation Longa décrite en 1990², et les adaptations pour les souris peu après³. Bien qu’elle ne soit pas décrite dans la publication de Longa, l’utilisation du signal de flowmétrie laser Doppler (LDF) pour confirmer le placement du filament a rapidement été décrite dans la littérature⁴. L’emploi de la LDF pendant la procédure MCAO est lar....

Protocole

Des souris et des rats adultes ont été utilisés pour illustrer ce protocole (25 g, C57BL/6J, Jackson Laboratories ; 250 g, Sprague Dawley, Envigo). La manipulation des animaux et les procédures expérimentales ont été effectuées avec l’approbation et conformément au comité institutionnel de protection et d’utilisation des animaux de l’Université de l’Arizona, aux lois nationales et aux principes de soins aux animaux de laboratoire¹¹. Les rats et les souris ont été logés selon un horaire de 12 heures de lumière et d’obscurité (de 7 h à 19 h) avec de la nourriture et de l’eau disponibles à volonté.

Résultats

Le placement de la sonde laser Doppler au niveau de la région MCA est représenté visuellement à la figure 1, offrant un pictogramme de la vascularisation et servant de guide visuel des perspectives sagittale et dorsale. La figure 2 résume les étapes critiques du placement et des résultats de la sonde laser Doppler chez la souris. La figure 2A présente une image d’une souris anesthésiée et préparée avec un marquage pointillé au site .......

Discussion

Le MCAO est la procédure de référence pour la modélisation de l’occlusion et de la reperfusion de l’artère cérébrale chez les rongeurs et a été la pierre angulaire de la recherche préclinique sur l’AVC, permettant l’induction d’une ischémie focale chez les rongeurs pour imiter la physiopathologie de l’AVC humain. Il s’agit d’une intervention chirurgicale exigeante avec une variabilité inter- et même intra-chirurgicale importante. Bien qu’il n’y ait aucune preuve que l’application du LDF .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ciseaux à ressort incurvés	Castroviejo	1501710
pince #5	Outils de science fine	11250-20
pince #5/45	Outils de science fine	1151-35
Forcepts Outil de cautérisation	Conmed	M18019-01
Bande de laboratoire	Fisherbrand Bande d’étiquetage	15-950
Moniteur Doppler laser	Moore Instruments  ;	MOORVMS-LDF
Logiciel LDF	Perisoft pour Windows ou moorSOFT	NA
Tondeuse à souris	Philips Norelco	MG7910
Periflux System 4000, sonde 407	L’équipement Perimed	n’est plus disponible
en film plastique	Glad	press n seal
Tondeuses à rats	oster	A5 ou similaire
Anesthésie des petits rongeurs	JD Medical	sur commande
petits ciseaux	excelta	362 ou similaire
Système de surveillance de la température avec sonde	Physitemp	TCAT-2AC Contrôleur

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