Quantification du niveau de 8-oxo-dG à l’aide d’un test ELISA pour évaluer les dommages oxydatifs à l’ADN dans les cellules MCF-7

Liu Nian; Xiaohua Li; Jiahui Du; Song-Bai Liu

doi:10.3791/66888

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Article de méthode

Quantification du niveau de 8-oxo-dG à l’aide d’un test ELISA pour évaluer les dommages oxydatifs à l’ADN dans les cellules MCF-7

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DOI :

10.3791/66888

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24 mai 2024

Liu Nian^*¹^,² , Xiaohua Li^*³ , Jiahui Du¹ , Song-Bai Liu¹^,²

¹Suzhou Key Laboratory of Medical Biotechnology, Suzhou Vocational Health College, ²Department of Chemistry and Life Sciences, Suzhou University of Science and Technology, ³Department of Thyroid and Breast Surgery, Wuzhong People’s Hospital of Suzhou City

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une méthode efficace pour détecter quantitativement les dommages oxydatifs de l’ADN dans les cellules MCF-7 par la technologie ELISA.

Résumé

La base 8-Oxo-7,8-dihydro-2'-désoxyguanosine (8-oxo-dG) est la forme prédominante de dommages oxydatifs de l’ADN couramment observés. L’altération de l’ADN a un impact profond sur l’expression des gènes et sert de facteur pivot dans la stimulation des troubles neurodégénératifs, du cancer et du vieillissement. Par conséquent, la quantification précise du 8-oxoG a une importance clinique dans l’étude des méthodologies de détection des dommages à l’ADN. Cependant, à l’heure actuelle, les approches existantes pour la détection du 8-oxoG posent des défis en termes de commodité, de rapidité, d’abordabilité et de sensibilité accrue. Nous avons utilisé la technique ELISA (Sandwich Enzyme-Linked Immunosorbent assay), une méthode colorimétrique très efficace et rapide, pour détecter les variations de la teneur en 8-oxo-dG dans des échantillons de cellules MCF-7 stimulés avec différentes concentrations de peroxyde d’hydrogène (H₂O₂). Nous avons déterminé la concentration de H₂O₂ qui a induit des dommages oxydatifs dans les cellules MCF-7 en détectant sa valeur IC₅₀dans les cellules MCF-7. Par la suite, nous avons traité des cellules MCF-7 avec 0, 0,25 et 0,75 mM H₂O₂ pendant 12 h et extrait le 8-oxo-dG des cellules. Enfin, les échantillons ont été soumis à l’ELISA. Après une série d’étapes, y compris l’étalement de la plaque, le lavage, l’incubation, le développement de la couleur, la fin de la réaction et la collecte de données, nous avons réussi à détecter des changements dans la teneur en 8-oxo-dG dans les cellules MCF-7 induits par H₂O₂. Grâce à de tels efforts, nous visons à établir une méthode pour évaluer le degré de dommages oxydatifs de l’ADN dans les échantillons cellulaires et, ce faisant, à faire progresser le développement d’approches plus rapides et plus pratiques pour la détection des dommages à l’ADN. Cette entreprise est sur le point d’apporter une contribution significative à l’exploration des analyses associatives entre les dommages oxydatifs de l’ADN et divers domaines, y compris la recherche clinique sur les maladies et la détection de substances toxiques.

Introduction

Les dommages oxydatifs de l’ADN sont la conséquence d’un déséquilibre entre la génération d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) et le système de défense antioxydant^{cellulaire 1}. Il s’agit principalement de l’oxydation de l’ADN, des bases^purine et pyrimidine ^2,3. Cette modification oxydative des bases de l’ADN compromet non seulement l’intégrité du génome, mais englobe également un large éventail de problèmes pathologiques, notamment le cancer, les maladies neurodégénératives et les maladies cardiovasculaires ^4,5. La base guanin....