Effet des solvants polyols et des solvants conventionnels sur la teneur totale en phénols, la teneur totale en flavonoïdes, les dosages antioxydants DPPH, FRAP et ABTS
La polarité du solvant doit être compatible avec celle des molécules actives ciblées afin d’améliorer l’efficacité d’extraction des substances bioactives des plantes22. Des expériences ont été menées à l’aide de divers solvants (eau, éthanol, glycérine, propylène glycol, butylène glycol, méthylpropanediol, isopentyldiol, pentylène glycol, 1,2-hexanediol et hexylène glycol) pour évaluer leur impact sur les composés bioactifs et les activités antioxydantes de l’extrait de peau d’argent du café MAE.
Effet des solvants polyols et des solvants conventionnels sur la teneur totale en phénols
La teneur totale en phénols de chaque extraction avec différents solvants a été analysée. La teneur en phénols la plus élevée a été observée dans les échantillons contenant du 1,2-hexanédiol aqueux (52,0 ± 3,0 mg de GAE/g dans un échantillon), tandis que la NPT la plus faible a été révélée dans des échantillons ayant été obtenus à l’eau (31,4 ± 4,3 mg de GAE/g dans un échantillon), et ces valeurs étaient significativement différentes de celles de toutes les autres affections. Les échantillons contenant du pentylène glycol aqueux ont donné la deuxième valeur TPC la plus élevée, suivis des échantillons contenant du butylène glycol aqueux, du méthylpropanediol et d’autres systèmes de solvants (figure 11A). En comparant des échantillons avec des solvants conventionnels (système eau et éthanol aqueux) et des échantillons avec des solvants à base de polyols, des différences significatives dans les valeurs de TPC peuvent être observées (p < 0,05).
Effet des solvants polyols et des solvants conventionnels sur la teneur totale en flavonoïdes
La teneur totale en flavonoïdes de chaque extraction avec différents solvants a été analysée. La teneur en flavonoïdes la plus élevée a été obtenue dans les échantillons contenant du 1,2-hexanédiol aqueux (échantillon de 20,0 ± 1,7 mg QE/g), démontrant une différence significative par rapport à celle de tous les autres extraits. Les échantillons contenant de l’isopentydiol aqueux ont révélé la valeur de TFC la plus faible (8,8 ± 0,7 mg QE/g échantillon), qui n’était pas significativement différente de celle des extraits aqueux de méthyl propane et d’éthanol aqueux. De plus, la deuxième valeur de TFC la plus élevée a été trouvée dans l’échantillon avec du pentylène glycol aqueux, suivi de l’hexylène glycol aqueux, du propylène glycol aqueux, du butylène glycol aqueux et de la glycérine aqueuse (figure 11B).
Effet des solvants polyols et des solvants conventionnels sur les dosages antioxydants
Les activités antioxydantes des extraits avec des polyols et des solvants conventionnels ont été évaluées à l’aide de dosages DPPH, ABTS et FRAP. La valeur la plus élevée pour le dosage de la DPPH a été mesurée dans des échantillons contenant de l’hexylène glycol aqueux (13,6 ± 0,3 mg TE/g dans un échantillon) et la plus faible dans des échantillons contenant de l’éthanol aqueux (4,5 ± 0,2 mg de GAE/g dans un échantillon), et ces valeurs étaient significativement différentes de celles des autres extraits (p < 0,05). Les deuxièmes valeurs les plus élevées de DPPH ont été observées dans des échantillons contenant du 1,2-hexanediol aqueux, suivis du pentylène glycol aqueux, du méthylpropane aqueux et d’autres systèmes de solvants (figure 11C).
La valeur ABTS la plus élevée a été mesurée dans des échantillons contenant du pentylène glycol aqueux (échantillon de 8,2 ± 0,1 mg TE/g) et la plus faible dans des échantillons contenant de l’eau (échantillon de 5,6 ± 0,04 mg de GAE/g), et ces valeurs étaient significativement différentes de celles des autres extraits (p < 0,05). Les deuxièmes valeurs ABTS les plus élevées ont été détectées dans le butylène glycol aqueux et le 1,2-hexanediol aqueux, suivis par des échantillons contenant de la glycérine aqueuse, du méthylpropane aqueux et d’autres systèmes de solvants (figure 11D).
Les valeurs FRAP les plus élevées ont été observées dans les échantillons contenant de l’hexylène glycol aqueux (21,1 ± 1,3 mg Fe (II) E/g et les plus faibles dans l’extraction à l’eau (11,5 ± 0,2 Fe (II) E/g échantillon), ces valeurs étant significativement différentes (p < 0,05) pour les solvants restants. De plus, les deuxièmes valeurs FRAP les plus élevées ont été trouvées dans des échantillons contenant du pentylène glycol aqueux, suivis du butylène glycol aqueux, de la glycérine aqueuse et d’autres systèmes de solvants (figure 11E).
Lorsque l’on compare les activités antioxydantes des échantillons avec celles des solvants conventionnels (eau et éthanol aqueux), ceux contenant des polyols ont montré des activités antioxydantes significativement plus élevées dans tous les tests antioxydants (DPPH, ABTS et FRAP) (p < 0,05).

Figure 1 : Réaction dans des récipients expérimentaux et la chambre MAE. (A) L’échantillon et le solvant sont ajoutés dans le récipient intercouche blanc d’un récipient en téflon avant l’extraction. (B) Chaque récipient est placé à l’intérieur de la chambre à micro-ondes avant de commencer l’extraction. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 2 : Outils spéciaux pour la fermeture des cuves de réaction. Après avoir ajouté l’échantillon et le solvant dans le récipient en téflon, les couvercles sont appliqués sur le dessus du récipient, placés dans le support du récipient et solidement fixés à l’aide des outils. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 3 : Méthode d’extraction. (A) Méthode d’extraction, créée en entrant dans la section méthode. (B) L’accessoire SK eT est utilisé pour le processus MAE. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 4 : Réglage de la vitesse d’agitation et de la fonction de verrouillage de la porte. (A) Les barres d’agitation magnétiques à l’intérieur de chaque récipient peuvent être activées en choisissant la vitesse d’agitation. (B) La fonction de verrouillage de la porte limite la température, ce qui permet d’ouvrir la chambre après l’extraction. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 5 : Réglage des conditions d’extraction. (A) Entrer l’icône du tableau et régler les conditions d’extraction telles que le temps, la température et la puissance des micro-ondes. (B) Ouverture du bouton de l’agitateur et choix de la vitesse du ventilateur. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 6 : Réglage du temps de refroidissement. Application du temps de refroidissement pour réduire la température intérieure dans la chambre MAE. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 7 : Démarrage du processus d’extraction. (A) Enregistrement de la méthode créée pour l’extraction. (B) Cliquez sur l’icône de lecture pour lancer le processus d’extraction. (C) Choisir le nombre de récipients pour commencer l’extraction. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 8 : Image de l’extrait final après extraction à l’aide de l’EAM. Obtention du surnageant après centrifugation. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 9 : Les 96 plaques de puits pour déterminer l’activité de balayage TPC, TFC, DPPH, l’activité de balayage ABTS et le dosage FRAP des extraits. (A) Détermination de la TPC pour la plaque étalon d’acide gallique à partir d’une concentration de 2,5 à 75 μg/mL et d’extraits d’échantillons. (B) Détermination de la TFC pour la plaque étalon de quercétine à partir de concentrations de 2,5 à 50 μg/mL et dosage de la TFC pour mesurer les extraits d’échantillons. (C) Détermination de l’activité de balayage de la DPPH pour la plaque étalon Trolox à partir de concentrations de 0,25 à 12,5 μg/mL et de la plaque de détection de l’activité de balayage de la DPPH d’extraits d’échantillons. (D) Détermination de l’activité de balayage ABTS pour la plaque étalon Trolox à partir de concentrations de 0,25 à 5 μg/mL et la plaque de détection de l’activité de balayage ABTS d’extraits d’échantillons. (E) Détermination du dosage FRAP pour la plaque étalon FeSO4 à partir de concentrations de 0,25 à 10 μg/mL et de la plaque de détection FRAP d’extraits d’échantillons. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 10 : Courbes d’étalonnage standard pour l’activité de balayage TPC, TFC, DPPH, l’activité de balayage ABTS et le test FRAP. (A) Courbe standard de détermination de TPC, tracée par les concentrations de l’étalon d’acide gallique et l’absorbance à A765. (B) La courbe standard pour la détermination de la TFC, tracée par les concentrations de l’étalon de quercétine et l’absorbance à A510. (C) La courbe standard pour déterminer l’activité de balayage de la DPPH, tracée par les concentrations de l’étalon Trolox et le % d’inhibition. (D) La courbe standard pour déterminer l’activité de balayage de l’ABTS, tracée par les concentrations de l’étalon Trolox et le % d’inhibition. (E) La courbe standard pour la mesure de l’essai FRAP, tracée par les concentrations de l’étalon de sulfate ferreux et l’absorbance à A593. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 11 : Effet des types de solvants sur l’activité de piégeage du TPC, TFC, DPPH, de l’ABTS et du dosage FRAP dans l’EAM du cuir argentique du café. (A) L’effet des types de solvants sur la teneur phénolique totale. (B) L’effet des types de solvants sur la teneur totale en flavonoïdes. (C) L’effet des types de solvants sur l’activité de piégeage de la DPPH. (D) L’effet des types de solvants sur l’activité de balayage de l’ABTS. (E) L’effet des types de solvants sur le dosage FRAP. Les valeurs sont indiquées sous forme de moyenne ± d’écart-type (n = 3). Les valeurs avec des lettres en exposant différentes expriment une différence statistiquement significative (p < 0,05). Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
Tableau 1 : Préparation de la courbe standard de l’acide gallique. Préparation de la plage de concentration standard de 2,5 à 75 μg/mL dans la plaque à 96 puits. B = blanc, 1-7 = nombre de puits sur la plaque de 96 puits. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 2 : Calcul de la concentration finale des étalons d’acide gallique Préparation de la plage de concentration standard de 2,5 à 75 μg/mL. Les concentrations finales (μg/mL) d’acide gallique sont calculées en conséquence. Concentration finale (μg/mL) = (Concentration initiale (mg/mL) × Volume initial (μL) / volume final (μL)) × (1000 μg/1 mg). Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 3 : Préparation de la courbe standard de quercétine. Préparation de la plage de concentration standard de 2,5 à 50 μg/mL dans la plaque à 96 puits. B = blanc, 1-7 = nombre de puits sur la plaque de 96 puits. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 4 : Tableau final de calcul de la concentration pour les étalons de quercétine. Préparation de la plage de concentration standard de 2,5 à 50 μg/mL. Les concentrations finales (μg/mL) de quercétine sont calculées en conséquence. Concentration finale (μg/mL) = (Concentration initiale (mg/mL) × Volume initial (μL) / Volume final (μL)) × (1000 μg/1 mg). Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 5 : Préparation de la courbe standard Trolox dans la plage de concentration de 0,25 à 12,5 μg/mL. Préparation de la plage de concentration standard de 0,25 à 12,5 μg/mL dans la plaque à 96 puits. B = blanc, C = contrôle, 1-7 = nombre de puits sur la plaque de 96 puits. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 6 : Calcul final de la concentration des étalons Trolox pour le dosage de la DPPH. Préparation de la plage de concentration standard de 0,25 à 12,5 μg/mL, y compris les concentrations finales (μg/mL) de Trolox. Concentration finale (μg/mL) = (Concentration initiale (mg/mL) × Volume initial (μL) / Volume final (μL)) × (1000 μg/1 mg). Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 7 : Préparation de la courbe standard Trolox dans la plage de concentration de 0,25 à 5 μg/mL. Préparation de la plage de concentration de l’étalon de base de 0,25 à 5 μg/mL dans la plaque à 96 puits. B = blanc, C = contrôle, 1-7 = nombre de puits sur la plaque de 96 puits. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 8 : Calcul final de la concentration des étalons Trolox pour le dosage ABTS. Préparation de la plage de concentration standard de 0,25 à 5 μg/mL, y compris les concentrations finales (μg/mL) de Trolox. Concentration finale (μg/mL) = (Concentration initiale (mg/mL) × Volume initial (μL) / Volume final (μL)) × (1000 μg/1 mg). Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 9 : Tableau final de calcul de la concentration pour les normes FeSO4 . Préparation de la préparation de la plage de concentration standard de 2,5 à 100 μg/mL, y compris les concentrations finales (μg/mL) de FeSO4. Concentration finale (μg/mL) = (Concentration initiale (mg/mL) × Volume initial (μL) / Volume final (μL)) × (1000 μg/1 mg). Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Tableau 10 : Préparation de la courbe standard FeSO4 . Préparation de la plage de concentration standard de 0,25 à 10 μg/mL dans la plaque à 96 puits. B = blanc. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.