Article de méthode

Fabrication d’un dispositif de fixation d’électroacupuncture chez la souris pour le prétraitement de l’électroacupuncture dans le modèle de souris de cardiomyopathie diabétique

DOI :

10.3791/67427

⸱

18 avril 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Orthopedics, Hubei University of Chinese Medicine, 2Department of Acupuncture, Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, 3Department of Acupuncture, Affiliated Hospital of Hubei University of Chinese Medicine, 4Hubei Province Academy of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ici, nous présentons un protocole pour établir un modèle murin de cardiomyopathie diabétique et un dispositif de fixation d’électroacupuncture chez la souris pour l’utilisation de l’électroacupuncture chez la souris, qui peut fixer les souris plus doucement pendant le traitement.

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La cardiomyopathie diabétique (CMD) est une complication du diabète qui peut évoluer vers l’insuffisance cardiaque et est limitée par l’utilisation de médicaments. L’électroacupuncture est un moyen efficace en tant que méthode de traitement externe de la médecine traditionnelle chinoise pour traiter la cardiomyopathie diabétique. Un dispositif de fixation d’électroacupuncture chez la souris peut facilement et doucement fixer les souris pendant le traitement d’électroacupuncture et exposer les points d’acupuncture sur l’abdomen et les membres des souris. Cet article décrit les méthodes utilisées pour fabriquer le dispositif de fixation d’électroacupuncture de souris avec toutes les étapes et précautions, établissant un modèle murin de cardiomyopathie diabétique avec des mesures complètes pour enregistrer de manière exhaustive les changements dans les indices biochimiques sanguins tels que la glycémie. L’expérience a été réalisée avec 3 groupes : un groupe témoin, un groupe modèle et un groupe de prétraitement, avec 10 souris dans chaque groupe. Le groupe de prétraitement a été traité par des points d’acupuncture Biaoben, un prétraitement d’électroacupuncture une fois tous les deux jours pour un total de 7 séances. Après l’électroacupuncture, les souris du groupe de prétraitement ont montré une diminution de la glycémie accompagnée d’une réduction des symptômes du diabète.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La cardiomyopathie diabétique (CMD) est une complication fréquente du diabète sucré caractérisée par des modifications de la structure cardiaque et de la fonction diastolique et contractile ventriculaire d’une lésion spécifique, évoluant ensuite vers une insuffisance cardiaque. C’est l’une des principales causes de décès chez les patients atteints de diabète sucré 1,2, et sa prévalence croissante a attiré l’attention ces dernières années3. Il a été constaté que la pathogenèse de cette maladie comprend principalement la résistance à l’insuline, la réponse inflammatoire, le métabolisme anormal des lipides, le stress oxydatif, les lésions mitochondriales 4,5.

À l’heure actuelle, le traitement clinique de la cardiomyopathie diabétique repose principalement sur des médicaments oraux pour contrôler la glycémie et atténuer les symptômes des maladies cardiaques, mais il présente certaines limites, telles que les réactions médicamenteuses, les effets sur la fonction rénale et la dépendance aux médicaments à long terme6. L’acupuncture, en tant que méthode de traitement externe de la médecine traditionnelle chinoise, a un effet mieux régulateur sur la glycémie, les lipides sanguins et la réponse inflammatoire chez les patients atteints de cardiomyopathie diabétique, et l’efficacité clinique est remarquable7. L’acupuncture n’a pas d’effets négatifs sur les fonctions gastro-intestinales et rénales, et le traitement à long terme ne produit pas de dépendance. La théorie des points d’acupuncture Biaoben est une méthode importante de sélection et d’utilisation des points d’acupuncture dans la théorie traditionnelle de l’acupuncture8. Il définit les points d’acupuncture qui peuvent améliorer les symptômes des maladies comme les points d’acupuncture Biao, et les points d’acupuncture qui peuvent réguler les fonctions de base du corps liées aux maladies et traiter les causes profondes des maladies sont appelés points d’acupuncture Ben. La stimulation des points d’acupuncture Biao et Ben en même temps que l’acupuncture peut atteindre l’objectif de traiter les maladies ainsi que d’augmenter la résistance du corps aux maladies et de prévenir l’exacerbation et la récurrence des maladies9. Il peut prévenir l’aggravation et la récurrence de la maladie. La recherche moderne a prouvé que l’acupuncture avec les points d’acupuncture Biaoben est efficace pour le diabète et ses nombreuses complications, y compris les maladies cardiaques diabétiques, la néphropathie diabétique, la rétinopathie diabétique, le pied diabétique, etc. Un schéma de sélection des points d’acupuncture conforme à la théorie des points d’acupuncture Biaoben consiste à sélectionner PC6 (Neiguan), qui peut réguler les fonctions du cœur et améliorer la réponse inflammatoire comme l’acupointBiao 12, et ST36 (Zusanli), qui peut améliorer la glycémie et la glycémie, améliorer la résistance à l’insuline et réduire le stress oxydatif, comme l’acupointBen 13.

Les modèles animaux sont un outil important dans l’étude de la cardiomyopathie diabétique car il a été démontré expérimentalement que les modèles de rats ou de souris imitent bien les anomalies structurelles et les changements fonctionnels du cœur causés par la cardiomyopathie diabétique et fournissent les échantillons nécessaires pour les indices de détection biochimiques de la cardiomyopathie diabétique14,15. L’utilisation d’aliments riches en sucre et en matières grasses combinée à une solution de streptozotocine pour induire des souris peut conduire à la formation de modèles diabétiques en 4 à 5 semaines, raccourcissant efficacement le temps de modélisation et améliorant le taux de réussite, et il n’y a pas d’exigences particulières pour l’environnement d’élevage16,17. La cardiomyopathie diabétique est une sorte de cardiomyopathie causée par les dommages à la structure et à la fonction cardiaques causés par une hyperglycémie continue. Avec l’allongement de l’évolution de la maladie, le modèle de cardiopathie diabétique peut être naturellement développé par le modèle diabétique sous l’hyperglycémie à long terme 18,19,20. Le prétraitement de l’acupuncture fait référence au prétraitement des souris après la formation du diabète et avant la formation d’une lésion myocardique évidente. Cependant, après des stimulations expérimentales répétées, les souris deviennent souvent mobiles et difficiles à immobiliser, et des techniques de manipulation expérimentales violentes peuvent causer des blessures aux souris ou les rendre maniaques ou déprimées21. Par conséquent, une méthode appropriée pour immobiliser les souris est nécessaire. Les méthodes d’immobilisation de souris couramment utilisées comprennent l’anesthésie et le cerclage22. Bien que la méthode d’anesthésie puisse mieux exposer les points d’acupuncture, elle peut affecter la conduction nerveuse et, en fin de compte, affecter les résultats expérimentaux. La méthode du cerclage est une méthode d’immobilisation physique et ne produit pas les mêmes effets physiologiques que l’anesthésie, mais les souris liées ressentiront une tension importante, une augmentation du tonus musculaire et une défécation accrue22,23. De plus, l’aiguille ne peut pas facilement atteindre la position souhaitée. Ici, nous présentons un dispositif de fixation d’électroacupuncture chez la souris qui peut être utilisé pour s’assurer que les souris ne bougent pas et expose également les points d’acupuncture pendant le traitement d’électroacupuncture afin que le traitement d’électroacupuncture puisse être effectué de manière pratique, sûre, non violente et sans séquelles.

Cet article décrit en détail la fabrication du dispositif de fixation de l’électroacupuncture chez la souris et l’établissement d’un modèle murin de cardiomyopathie diabétique. Nous avons traité la cardiomyopathie diabétique par le prétraitement de l’électroacupuncture des points d’acupuncture Biaoben, démontré comment son fonctionnement était réalisé sur le dispositif de fixation des souris, et évalué l’effet thérapeutique du prétraitement de l’électroacupuncture des points d’acupuncture Biaoben sur la cardiomyopathie diabétique en mesurant les indices liés au métabolisme des glycolipides.

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Protocole

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Toutes les expériences sur les animaux sont conformes au principe des 3R de l’éthique animale et ont été examinées et approuvées par le Comité d’éthique de l’expérimentation animale de l’Université de médecine traditionnelle chinoise du Hubei (numéro d’autorisation éthique HUCMS00309300). Ici, 30 souris de qualité SPF ont été obtenues du Centre provincial de contrôle et de prévention des maladies du Hubei (certificat de qualité NO.42010200009690).

1. Fabrication du dispositif de fixation par électroacupuncture

  1. Pour l’assemblage d’un dispositif de fixation d’électroacupuncture, procurez-vous un tube en plastique creux en acrylique transparent et un instrument de thérapie d’électroacupuncture comme corps principal (Figure 1A). Dans le tube, maintenez un corps de tube et préparez des languettes de fermeture situées dans les ouvertures à chaque extrémité. Faites des rainures dans le tube creux au centre de chaque extrémité et fixez les languettes de fermeture dans les rainures à chaque extrémité à l’aide de vis rotatives manuelles.
  2. Au milieu du tube creux, faites trois trous ovales d’environ 2 cm de long et 1 cm de large répartis les uns à côté des autres. Les trous des deux côtés sont utilisés pour retirer les membres antérieurs de la souris pour la fixation pour le traitement d’électroacupuncture des membres antérieurs, et le trou au milieu peut être utilisé pour exposer les points d’acupuncture des régions thoraciques et abdominales de la souris pour le traitement d’électroacupuncture des régions thoracique et abdominale.
  3. À l’extrémité du tube creux, faites un trou ovale symétriquement réparti des deux côtés de la rainure centrale, qui peut être utilisé pour extraire les membres postérieurs de la souris pour le traitement d’électroacupuncture des membres postérieurs (Figure 1B).
  4. Vérifiez l’intégrité du tube en plastique creux et installez les languettes de fermeture. Déplacez les languettes de fermeture dans le corps du tube pendant que les vis glissent dans les rainures, en vous assurant qu’il peut ajuster la longueur de fixation en fonction de la longueur de la souris.
  5. Allumez l’instrument de thérapie d’électroacupuncture et assurez-vous qu’il est opérationnel. Chaque bouton peut être ajusté en appuyant une fois sur cette touche (Figure 1C).
  6. Préparez l’instrument de thérapie d’électroacupuncture à placer à côté des tubes en plastique creux pour effectuer des traitements d’électroacupuncture sur des souris. L’instrument de thérapie par électroacupuncture se compose d’un appareil de thérapie par électroacupuncture et de plusieurs paires de pinces énergisantes ; Chaque paire de pinces énergisantes peut fournir deux pôles d’énergisant.
  7. Lorsque vous utilisez les clips pour clipser le manche de l’aiguille afin de dynamiser l’aiguille, utilisez un clip pour fixer l’aiguille.
  8. L’appareil de thérapie par électroacupuncture dispose de 11 boutons. Utilisez les 5 supérieurs pour régler la fréquence, le temps et la forme d’onde de l’électroacupuncture et sont utilisés de gauche à droite pour la fréquence, le temps, les ondes continues, les ondes clairsemées et denses et les ondes intermittentes. Utilisez les 6 inférieurs pour régler l’intensité actuelle de l’électroacupuncture. Chacun de ces boutons a une encoche en dessous pour fixer des clips énergisants ; Le nombre de clips énergisants peut augmenter ou diminuer avec le nombre de souris, jusqu’à un maximum de 6.

2. Etablir un modèle murin de cardiomyopathie diabétique

  1. Divisez les 30 souris en 3 groupes par la méthode de la table de nombres aléatoires : un groupe témoin, un groupe modèle et un groupe de prétraitement, avec 10 souris dans chaque groupe. Soumettez un total de 20 souris dans le groupe modèle et le groupe de prétraitement pour établir le modèle de cardiomyopathie diabétique. Traitez le groupe de prétraitement avec des points d’acupuncture Biaoben, l’électroacupuncture.
    REMARQUE : Le modèle a été construit sur une longue période de temps et une cardiomyopathie significative se développe après 16 semaines. Notre temps de traitement est du jour 36 au jour 70 (semaine 6 à semaine 10). Ce traitement a été choisi après l’établissement du diabète mais avant des lésions myocardiques importantes. Au bout de 6 semaines, le cœur de la souris a été retiré et on a constaté une cardiomyopathie diabétique importante. Par conséquent, la sélection du traitement à ce stade appartient à la catégorie du prétraitement.
  2. Nourrissez les souris du groupe témoin avec de la nourriture normale pendant 16 semaines. Nourrissez les souris du groupe modèle et du groupe de prétraitement avec un régime riche en graisses et en sucre pendant 16 semaines pour induire un état métabolique ressemblant étroitement à l’état diabétique. La composition des aliments riches en matières grasses et en sucre est de 67,0 % de nourriture standard, 10,0 % de saindoux, 2,5 % de cholestérol, 20,0 % de saccharose et 0,5 % de sels biliaires.
  3. Injecter une solution de streptozotocine par voie intrapéritonéale pour établir un modèle de cardiomyopathie diabétique chez la souris.
    1. Préparez la solution à 1 % de streptozotocine le jour 29. Dissoudre la streptozotocine dans un tampon préparé en mélangeant de l’acide citrique avec du citrate trisodique (pH = 4,4).
    2. Fournir juste de l’eau et pas de nourriture pendant 12 h le jour 29. Ensuite, administrez à chaque souris une injection intrapéritonéale unique de 150 mg/kg de solution de streptozotocine comme décrit ci-dessous.
    3. Saisissez la souris par la queue avec la main droite et sortez-la de la cage. Placez la souris sur la surface de la cage et tirez doucement sa queue vers l’extérieur. Immobilisez la souris avec la main gauche et retournez-la pour exposer l’abdomen.
    4. Injecter la souris par voie intrapéritonéale avec la main droite avec une seringue de 1 mL préparée avec la quantité appropriée de solution de streptozotocine déjà prélevée.
  4. Effectuez un traitement d’acupuncture par des points d’acupuncture Biaoben.
    1. Sélectionnez les points d’acupuncture selon la théorie des points d’acupunctureBiaoben 13 , y compris les points d’acupuncture bilatéraux PC6 et ST36. Pour le groupe de prétraitement, effectuez l’acupuncture le 36e jour, une fois tous les deux jours pour un total de 18 traitements, le traitement durant un total de 5 semaines (du 36e au 70e jour ; Figure 2).
      1. Point d’acupuncture Biao : Sélectionnez le PC6 bilatéral comme point d’acupuncture Biao ; le PC6 est situé sur la face médiale du membre antérieur, entre les sutures ulnaires-radiales à environ 3 mm des articulations du poignet. Point d’acupuncture Ben : Sélectionnez ST36 bilatéral comme points d’acupuncture Ben ; le ST36 est situé sur la face postérieure-latérale de l’articulation du genou, à environ 2 mm sous la tubérosité fibulaire.
    2. Saisissez la souris, pincez sa queue et placez-la à la surface de la cage. Gardez la bouche du tube en plastique creux en acrylique à un angle de 30° par rapport au plan horizontal, avec le petit trou au centre face au sol et la bouche du tube alignée avec la tête de la souris.
    3. Adaptez la tête de la souris à l’embouchure du tube. Faites pivoter lentement la tête de la souris dans le tube en utilisant un mouvement volontaire et une légère poussée. Tapotez doucement les fesses de la souris afin que celle-ci soit poussée de manière autonome et complète dans le tube.
    4. Ajustez les languettes de fermeture, soulevez la queue de la souris hors de la rainure, serrez l’écrou et utilisez les languettes de fermeture aux extrémités supérieure et inférieure pour limiter le mouvement de la souris. À ce stade, la souris ne peut plus se déplacer librement dans le corps du tube.
    5. À l’aide d’une pince à épiler, retirez doucement les quatre membres de la souris de chacun des quatre petits trous des deux côtés. Une fois que les quatre membres sont sortis des petits trous, fixez-les doucement à l’extérieur du corps du tube. À ce stade, les quatre membres de la souris ne pouvaient plus être déplacés.
    6. Tenez le manche de l’aiguille jetable en acier inoxydable (0,3 mm x 13 mm) avec le pouce et l’index de la main droite et tenez le tube en acrylique et les souris immobiles à l’intérieur avec la main gauche.
    7. Touchez et localisez l’endroit où se trouvent PC6 et ST36 avec le majeur de la main droite, puis piquez doucement la peau de la souris avec la pointe de l’aiguille. Insérez rapidement l’aiguille injectée obliquement sur environ 3 mm et retirez rapidement la main droite.
  5. Effectuer un prétraitement d’électroacupuncture
    1. Allumez l’appareil de thérapie par électroacupuncture et ajustez-le à l’onde intermittente, 1 Hz. Pour chaque souris, effectuez un traitement d’électroacupuncture pendant 15 min.
    2. Utilisez le clip énergisé correspondant de l’appareil de thérapie d’électroacupuncture pour tenir le manche de l’aiguille, un clip pour un manche d’aiguille.
    3. Réglez le courant du bouton à l’aide de l’élément fixe à 1 mA (Figure 3).
    4. Attendez 15 min et observez l’état des souris pendant le prétraitement d’électroacupuncture.
    5. À la fin du traitement, relâchez le clip et retirez l’aiguille d’acupuncture. Ajustez les languettes de fermeture et libérez les souris du dispositif de fixation d’électroacupuncture.
    6. Examinez tout le corps des souris et observez si les souris sont blessées ou présentent des anomalies.
  6. Effectuez des traitements d’acupuncture tous les deux jours après 7 jours d’injection de solution de streptozotocine pour un total de 18 traitements sur un appareil d’électroacupuncture de souris du jour 36 au jour 70.
  7. Fin de l’expérience le jour 112 (fin de la semaine 16).
    1. Anesthésie par injection intrapéritonéale de pentobarbital sodique et confirmation de l’anesthésie par pincement des orteils. Mesurez la fonction cardiaque des souris à l’aide d’une échocardiographie.
      1. Enregistrer le diamètre diénographique final du ventricule gauche (LVEDD), le diamètre end-systolique ventriculaire gauche (LVESD), la fraction d’éjection ventriculaire gauche (LVEF) et le raccourcissement fractionnel ventriculaire gauche (LVFS).
    2. Euthanasie des souris par luxation cervicale. Retirez le cœur, lavez-le dans une solution saline physiologique et immergez-le dans du paraformaldéhyde à 4 %.

3. Coloration à l’hématoxyline-éosine (HE)

  1. Déshydratez, encastrez, coupez en tranches, dépiaffinez le cœur et effectuez la coloration HE selon la procédure standard.
  2. Observez les changements pathologiques du tissu cardiaque de souris au microscope optique.

4. Observations sur les souris

  1. Mesurez la glycémie à l’aide d’un lecteur de glycémie les jours 27, 36 et 49.
  2. Observez la quantité de nourriture des souris, quantifiez leur consommation d’eau et leur volume d’urine chaque jour, et notez leurs changements de poids.

5. Analyse statistique

  1. Collectez des données sur la glycémie et utilisez l’ANOVA à un facteur pour identifier la signification statistique. Établissez la signification statistique comme p < 0,05.
  2. Quantifier les données par des assistants qui sont aveugles aux conditions expérimentales. Exprimez les données en moyenne ± en écart-type.

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Résultats

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Nous avons suivi la procédure décrite ci-dessus et établi un modèle murin de cardiomyopathie diabétique. Comme on peut l’observer sur les images colorées à l’HE (Figure 4), les souris du groupe témoin avaient une structure de tissu myocardique intacte, une disposition régulière des cardiomyocytes et aucune lésion évidente. Dans le groupe modèle, les cellules myocardiques étaient disposées de manière irrégulière, certaines cellules myocardiques étaient endommagées et désintégrées (flèche noir...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dans cette étude, des souris qui présentaient une glycémie élevée et des signes de diabète ont été obtenues par injection intrapéritonéale de la solution de streptozotocine, qui est une méthode de modélisation efficace et reconnue27. PC6 a été sélectionné comme point Biao, et ST36 a été sélectionné comme point Ben selon la théorie des points d’acupunctureBiaoben 28. Tous ces points se trouvent sur les membres de la souris, de sorte que les ...

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Déclarations de divulgation

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ce travail est soutenu par une subvention du projet conjoint 2022CFD024 de la Fondation des sciences naturelles du Hubei ; Fondation nationale des sciences naturelles de Chine, n° 81704142 ; Université de médecine traditionnelle chinoise du Hubei 2023 double construction de première classe clé projet de recherche scientifique spécial,2023ZZXT005 ; Étudier le mécanisme du préconditionnement de l’électroacupuncture des points d’acupuncture Biaoben sur la régulation de la ferroptose des cellules myocardiques chez les rats atteints de lésions d’ischémie-reperfusion myocardique (MIRI) dans le cadre du projet clé de l’Administration provinciale de la médecine traditionnelle chinoise du Hubei, ZY2025D001 ; Projet d’innovation des connaissances du Bureau de la science et de la technologie de Wuhan, n° 2023020201010172 ; Projet d’ingénierie des talents Hubei Shi Zhen, E Wei Han [2024]256.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
acrylique creux en plastiqueHenan ZhikeZK-GDQ
aiguilled’acupuncture Hwato0,3 mm x 13 mm
C57BL/6  ;souris Centre provincial de contrôle et de prévention
citrique monohydratéSigmaC1909
instrument de thérapie d’électroacupunctureHwatoSDZ-V
balance électroniqueHenan ZhikeZK-DST
glucomètresLifeScanOneTouch VerioVue
bandelette de test de glucoseLifeScanOneTouch Verio
streptozotocinSigmaS0130
citrate trisodique dihydratéSigmaW302600
pince à épilerLabshark130302001
des maladies du Hubei acide

Références

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Dispositif de fixation pour sourisglyc miestimulation d acupointsinjection de streptozotocineindices de la fonction cardiaqueanalyse chocardiographiquetissu myocardiqueacupoints Biaoben

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