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Article de méthode

Détection de la sensibilité aux médicaments et des interactions médicamenteuses chez Mycobacterium tuberculosis à l’aide du microtitrage de la résazurine et du test en damier

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DOI :

10.3791/67672

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24 octobre 2025

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1Department of Immunology, National Institute for Research in Tuberculosis, 2University of Madras, 3Faculty of Medical Research, Academy of Scientific and Innovative Research (AcSIR)

Dans cet article

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour visualiser et normaliser le dosage du microtitre de la résazurine (REMA) et sa variation en damier pour évaluer la sensibilité aux médicaments et les profils d’interaction de Mycobacterium tuberculosis. Cette méthode fournit des informations, in vitro, pour optimiser les combinaisons de médicaments à utiliser dans les schémas thérapeutiques et lutter contre la tuberculose multirésistante.

Résumé

L’émergence de la tuberculose multirésistante (TB-MR) nécessite des méthodes de sensibilité aux médicaments (DST) rapides et précises pour guider un traitement efficace. Cette étude présente une méthodologie combinant le dosage du microtitrage de la résazurine (REMA) et le dosage en damier pour déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI) et évaluer les interactions médicamenteuses des médicaments antituberculeux contre Mycobacterium tuberculosis. Le REMA, adapté à un format à 96 puits, tire parti de la réduction du colorant de résazurine par M. tuberculosis métaboliquement actif comme indicateur visuel de la sensibilité aux médicaments. Des concentrations variables de médicaments antituberculeux sont testées contre des isolats de M. tuberculosis , et des changements de couleur sont observés pour déterminer la CMI. Par la suite, un test en damier est utilisé pour évaluer les effets synergiques, additifs ou antagonistes potentiels entre les combinaisons de médicaments. Cette méthode simple et peu coûteuse donne des résultats en sept jours, offrant un avantage significatif par rapport aux méthodes DST traditionnelles. Cette méthode fournit des informations précieuses sur l’antibiogramme des isolats de M. tuberculosis et facilite l’identification de combinaisons de médicaments prometteuses pour améliorer les résultats du traitement contre la tuberculose multirésistante.

Introduction

La tuberculose, causée par Mycobacterium tuberculosis, reste un formidable défi de santé mondiale, exacerbé par l’émergence de souches résistantes aux médicaments. Selon l’Organisation mondiale de la santé (OMS), en 2023, on estimait à 10,6 millions le nombre de nouveaux cas de tuberculose et à 1,3 million le nombre de décès, ce qui souligne le besoin urgent de stratégies diagnostiques et thérapeutiques plus efficaces1. La tuberculose multirésistante (TB-MR) et la tuberculose ultrarésistante (TB-UR) posent des défis majeurs à la lutte contre la maladie en raison de la complexité, de la toxicité et de la durée prolongée des schémas thérapeutiques actuels 2,3.

L’introduction récente de nouveaux agents antituberculeux, tels que la bédaquiline et le délamanide, ciblant des voies biochimiques uniques chez M. tuberculosis, représente une percée dans la prise en charge de la tuberculose 4,5. Ces médicaments ont été approuvés principalement pour une utilisation dans les cas de tuberculose résistante aux fluoroquinolones et à la rifampicine dans le cadre de schémas thérapeutiques plus longs et plus courts approuvés par l’OMS 6,7. Cependant, la détermination des combinaisons médicamenteuses et des schémas posologiques optimaux, en particulier lorsque ces agents sont utilisés en conjonction avec des traitements établis, demeure un domaine de recherche critique 8,9. Les méthodes actuelles de test de sensibilité aux médicaments (DST), bien que fiables, sont souvent chronophages, gourmandes en ressources et peu pratiques pour évaluer des combinaisons complexes de médicaments dans un cadre clinique ou de recherche10. Cela souligne la nécessité de tests phénotypiques simples et évolutifs capables d’évaluer à la fois l’efficacité des médicaments et les profils d’interaction chez M. tuberculosis.

Parmi ces approches phénotypiques, le dosage du microtitrage de la résine (REMA) est devenu une méthode largement acceptée et conventionnelle pour évaluer la sensibilité aux médicaments. Le test est basé sur la réduction du colorant résazurine bleue en résorupine rose par des bactéries métaboliquement actives, servant d’indicateur visuel de la viabilité cellulaire. Bien que popularisé par Palomino et al. en 200211, le principe de l’utilisation de la resazurine pour évaluer la croissance bactérienne remonte aux travaux de Pital et al.12. Au cours des deux dernières décennies, la méthode REMA a été largement validée et intégrée dans les procédures opérationnelles standard pour la recherche mycobactérienne et les tests de diagnostic 13,14,15.

En complément du REMA, le test en damier, tel qu’introduit par Caleffi-Ferracioli et al., étend l’utilité du REMA en permettant des études d’interaction entre deux médicaments dans un format de microdilution en utilisant la même lecture basée sur la résazurine16. Bien que prometteuse en principe, cette méthode reste principalement un outil de recherche utile pour le dépistage de combinaisons médicamenteuses synergiques ou antagonistes potentielles lors d’une évaluation préclinique précoce plutôt qu’un test diagnostique de routine.

Ce manuscrit ne présente pas REMA ou sa variante en damier comme des méthodes novatrices. L’objectif de cette étude est plutôt de fournir une représentation visuelle d’une méthodologie utile et validée pour la détermination de la CMI et les tests d’interaction médicamenteuse, qui a été décrite et appliquée avec succès dans des études antérieures. Nous fournissons un protocole étape par étape avec des conseils détaillés sur la préparation de l’inoculum, le titrage des médicaments, la disposition des plaques, l’interprétation de la CMI et l’analyse des interactions en damier. Ce manuscrit vise à soutenir une utilisation plus large et plus cohérente des tests REMA et en damier dans le développement de médicaments antituberculeux et la pharmacologie expérimentale.

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Protocole

REMARQUE : Les produits chimiques et les matériaux utilisés dans les exemples d’expériences sont disponibles dans le fichier de la Table des matériaux.

1. Préparation des milieux 7H9-S

  1. Pour 100 mL de milieu 7H9-S, peser 0,47 g de poudre 7H9 et 0,1 g de casitone, puis dissoudre dans 90 mL d’eau distillée ; remuer jusqu’à dissolution complète.
  2. Stériliser le bouillon dans une fiole de 250 mL à l’aide d’un autoclave à 121 °C pendant 15 min.
  3. Une fois autoclavé et refroidi, ajoutez 10 ml de supplément d’albumine oléique dextrose catalase (OADC) et 0,5 ml de glycérol.
  4. Incuber toute la nuit à 37 °C pour vérifier la stérilité.
    REMARQUE : La stérilité du milieu 7H9-S préparé est vérifiée en l’incubant pendant une nuit à 37 °C. Le milieu doit rester clair le lendemain, sans qu’aucune turbidité ne soit observée.
  5. Stockez le fluide 7H9-S à 4 °C, à l’abri de la lumière directe.

2. Préparation de l’inoculum de M. tuberculosis

  1. Préparation de l’inoculum à partir d’une culture de M. tuberculosis cultivée en milieu solide Lowenstein Jensen (LJ)
    1. À l’aide d’une boucle d’inoculation stérile, prélever une boucle complète de culture de M. tuberculosis à partir d’un milieu LJ fraîchement cultivé (âgé de 21 à 28 jours).
      REMARQUE : Évitez soigneusement de gratter trop profondément dans le milieu, ce qui pourrait déranger les colonies plus âgées.
    2. Placez les bactéries recueillies dans une bouteille stérile contenant des billes de verre stériles et 2,5 ml de bouillon 7H9-S. Assurez-vous que les billes de verre aident à la perturbation mécanique des amas pendant le vortex.
      REMARQUE : Des cultures fraîches entre 21 et 28 jours sont essentielles pour garantir des résultats fiables des tests de sensibilité. Évitez d’utiliser des cultures plus anciennes, car elles peuvent entraîner des résultats incohérents.
    3. Fixez la bouteille de bijou et faites tourbillonner vigoureusement pendant au moins 1 min. Assurez-vous d’un mélange continu pour briser les amas bactériens, ce qui donne une suspension relativement trouble. L’objectif est une distribution homogène des bactéries dans le milieu.
    4. Transférez la suspension de culture dans une bouteille de bijou fraîche et laissez-la reposer sans être dérangée pendant 15 min. Cette étape permet aux plus gros amas bactériens de se déposer au fond.
    5. En utilisant la norme McFarland 1.0 comme référence, vérifiez la turbidité de la suspension de culture et ajustez avec du bouillon 7H9-S jusqu’à ce que la turbidité souhaitée soit atteinte.
      REMARQUE : Un étalon McFarland, généralement 1,0, est utilisé comme référence pour une turbidité équivalente à environ 1,97 × 106 UFC/mL17. L’étalon est préparé en combinant 0,1 mL de chlorure de baryum à 1 % et 9,9 1 mL d’acide sulfurique à 1 %, ce qui donne un précipité fin de sulfate de baryum, qui fournit la turbidité. La suspension bactérienne est comparée visuellement à la norme McFarland en maintenant les deux tubes sur un fond blanc avec des lignes noires. La turbidité de la suspension bactérienne est ajustée pour correspondre à la norme.
  2. Préparation de l’inoculum à partir d’une culture de M. tuberculosis cultivée en milieu liquide 7H9
    1. À l’aide d’une pipette stérile, transférez 2,5 ml de culture de M. tuberculosis (âgée de 2 à 3 semaines) dans un flacon bijou frais avec des billes de verre.
    2. Agitez le mélange pendant au moins 1 min pour assurer une suspension homogène. L’action vortex aide à briser les grumeaux.
    3. Transférez les 2,5 ml de suspension de culture dans une bouteille de bijou fraîche et laissez-la pendant 15 minutes pour permettre aux grumeaux de se déposer au fond.
    4. Comparez la turbidité à la norme McFarland 1.0 et ajustez à l’aide du bouillon 7H9-S pour atteindre la concentration requise.
  3. Dilution de l’inoculum
    1. Préparez une dilution de 1:10 : Pour diluer l’inoculum, ajoutez 1 mL de suspension bactérienne à 9 mL de bouillon 7H9-S dans un contenant stérile (cela donnera environ 1,97 × 105 UFC/mL).

3. Préparation et stockage des antibiotiques

  1. Préparation des solutions mères et de travail : Préparez les médicaments utilisés dans l’exemple d’expérience, ainsi que leurs méthodes de préparation de la solution mère et de la solution de travail, comme résumé dans le tableau 1.
    1. Isoniazide (INH ou I) : Pour préparer une solution mère d’isoniazide à 1 mg/mL, dissoudre 2 mg de poudre d’isoniazide dans 2,0 mL d’eau distillée. Stérilisez la solution à l’aide d’un filtre à seringue de 0,22 μm.
    2. Moxifloxacine (MOX ou M) : Pour préparer une solution mère de 1 mg/mL de moxifloxacine, dissoudre 2 mg de poudre de moxifloxacine dans 2,0 mL d’eau distillée. Stérilisez la solution à l’aide d’un filtre à seringue de 0,22 μm.
    3. Bédaquiline (BDQ ou J) : La bédaquiline est peu soluble dans l’eau. Pour préparer une solution mère de 1 mg/mL, dissoudre 2 mg de poudre de bédaquiline dans 2,0 mL de DMSO. Stérilisez la solution à l’aide d’un filtre à seringue de 0,22 μm.
    4. Delamanide (DEL ou D) : Semblable à la bédaquiline, le délamanide a une faible solubilité dans l’eau. Pour préparer une solution mère à 1 mg/mL, dissoudre 2 mg de poudre de délamanide dans 2,0 mL de DMSO. Stérilisez la solution à l’aide d’un filtre à seringue de 0,22 μm.
  2. Stockage : Aliquote 100 μL de chaque solution mère de médicament dans des cryoflacons stériles et les stocker à -20 °C jusqu’à 3 mois. Une fois décongelée, jetez toute solution restante. Ne pas recongeler.

4. Préparation de la solution Resazurin et stockage

  1. Dissoudre la résazurine à une concentration finale de 0,01 % ou 0,02 % dans de l’eau distillée. Filtrez la solution à travers un filtre de 0,2 μm pour la stérilisation.
  2. Conservez la solution de résazurine stérilisée à 4 °C jusqu’à 1 à 2 semaines, à l’abri de la lumière pour éviter toute dégradation.

5. Préparation de la plaque REMA

REMARQUE : Reportez-vous à la Figure 1 pour un guide visuel sur la configuration de la plaque de microtitration REMA à 96 puits. La plaque à 96 puits offre suffisamment d’espace pour effectuer des dosages de médicaments en double pour chaque médicament en six dilutions doubles.

  1. Ajouter le bouillon 7H9-S : À l’aide d’une pipette multicanaux, ajouter 100 μL de bouillon 7H9-S dans les colonnes 2 à 11, rangées B-G. Assurez-vous que la distribution est uniforme dans tous les puits.
  2. Ajouter des solutions médicamenteuses : Ajouter 100 μL de la solution d’INH fonctionnelle dans les puits B2 et B6. De même, ajoutez les solutions de travail MOX, DEL et BDQ à leurs puits respectifs (B3 et B7, B4 et B8, B5 et B9).
  3. Diluer les concentrations du médicament : À l’aide d’une pipette multicanaux, effectuer des dilutions en série en deux phases des rangées B à G (colonnes 2 à 9), en veillant à jeter les 100 μL finaux après mélange dans la rangée G.
  4. Puits de contrôle de la croissance : Ajouter 100 μL de bouillon 7H9-S dans les puits B10 et C10 pour le contrôle de la croissance.
  5. Contrôles négatifs et de stérilité : Ajouter 200 μL de bouillon 7H9-S dans les puits B11 et C11 pour servir de contrôles négatifs et de stérilité.
  6. Prévenir l’évaporation : Ajouter 200 μL d’eau distillée stérile dans tous les puits extérieurs pour minimiser l’évaporation pendant l’incubation.
  7. Plaques d’inoculation : Inoculer chaque puits avec 100 μL de suspension de culture diluée à 1:10, à l’exception du puits témoin négatif. Assurer une inoculation uniforme dans tous les puits.
  8. Sceller et incuber : Sceller les plaques dans des sacs en plastique pour maintenir la stérilité et incuber à 37 °C pendant 7 jours.

6. Test de titrage en damier REMA

REMARQUE : Reportez-vous à la figure 2A, B pour un guide visuel sur le modèle de dosage en damier REMA pour les combinaisons de médicaments (par exemple, BDQ et DEL).

  1. Diluer les médicaments verticalement et horizontalement : Diluer le premier médicament (BDQ) verticalement (rangées B-H) et le deuxième médicament (LED) horizontalement (colonnes 2-8) pour générer diverses combinaisons de deux médicaments.
    REMARQUE : Préparez la solution de travail diluée en série dans un flacon stérile (de 4 μg/mL à 0,06 μg/mL) pour un médicament dilué horizontalement.
  2. Ajouter la solution de travail BDQ pour la dilution verticale : Ajouter 100 μL de la solution de travail BDQ dans les puits B2 et B8.
  3. Ajouter le bouillon 7H9-S : À l’aide d’une pipette multicanaux, ajouter 50 μL de bouillon 7H9-S dans les colonnes C2-H8. Assurez-vous que la distribution est uniforme dans tous les puits.
  4. Diluez les concentrations du médicament : À l’aide d’une pipette multicanaux, effectuez des dilutions en deux à partir des rangées B à H (colonnes 2 à 8), en veillant à jeter les 50 μL finaux après avoir mélangé dans la rangée H.
  5. Ajouter la solution de travail DEL pour la dilution horizontale : Ajouter des solutions de travail diluées en série des médicaments de 4 μg/mL à 0,06 μg/mL dans les puits correspondants.
  6. Puits de contrôle de la croissance : Ajouter 100 μL de bouillon 7H9-S dans les puits B9 et C9 pour le contrôle de la croissance.
  7. Contrôles négatifs et de stérilité : Ajouter 200 μL de bouillon 7H9-S dans les puits B10 et C10 pour servir de contrôles négatifs et de stérilité.
  8. Plaques d’inoculation : Inoculer chaque puits avec 100 μL de suspension de culture diluée à 1:10, à l’exception du puits témoin négatif. Assurer une inoculation uniforme dans tous les puits.
  9. Sceller et incuber : Sceller les plaques dans des sacs en plastique pour maintenir la stérilité et incuber à 37 °C pendant 7 jours.

7. Incubation et interprétation des résultats

  1. Coloration à la resazurine : Après 7 jours d’incubation, ajouter 30 μL de résazurine (0,01 % à 0,02 %) dans chaque puits. Scellez et incubez la plaque pendant la nuit pour le développement de la couleur.
  2. Interpréter le changement de couleur.
    1. Examinez visuellement les puits sous une lumière blanche constante ou un éclairage équilibré à la lumière du jour.
      REMARQUE : Le contrôle de la croissance (pas de médicament) doit virer du bleu au rose, indiquant un métabolisme bactérien actif. Une couleur bleue indique une inhibition complète de la croissance. Le rose indique une croissance active, tandis que le violet (une teinte mélangée) représente une inhibition partielle.
    2. Comparez l’intensité de la couleur à la fois au témoin négatif (milieu uniquement) et au contrôle positif (croissance bactérienne sans médicament) pour une interprétation précise. Pour minimiser le biais de l’observateur, utilisez des lectures indépendantes doubles ou la photographie sur plaque.
      REMARQUE : Le jugement visuel peut varier avec les conditions d’éclairage ambiant, un éclairage constant est donc essentiel.
  3. Concentration minimale inhibitrice (CMI)
    1. Définir la CMI comme la concentration la plus basse de médicament à laquelle le puits reste complètement bleu, indiquant une inhibition de ≥99 % de l’activité métabolique. Considérez les puits de couleur violette ou rose indiquant une croissance partielle ou complète.
      REMARQUE : La détermination de la CMI par REMA se rapproche des principes de la méthode classique des proportions, dans laquelle la CMI est considérée comme la concentration la plus faible qui inhibe ≥99 % de l’inoculum par rapport au témoin sans médicament. Bien que REMA n’utilise pas le nombre d’UFC, le paramètre visuel représente un corrélat phénotypique de ce seuil basé sur les proportions. Cette interprétation s’aligne sur les protocoles colorimétriques précédemment établis11,14.

8. Calcul de l’indice de concentration inhibitrice fractionnelle (FIC)

REMARQUE : L’indice de concentration inhibitrice fractionnée (FIC) permet de déterminer l’interaction entre deux médicaments (synergie, antagonisme ou indifférence). Il est calculé sur la base des valeurs MIC obtenues à partir du test en damier.

  1. Identifiez le CMI de chaque médicament seul : À partir du test REMA, déterminez le CMI de chaque médicament lorsqu’il est utilisé individuellement.
  2. Identifier la CMI de chaque médicament en association : À partir du test de titrage en damier, identifier la CMI de chaque médicament lorsqu’il est utilisé en association avec le deuxième médicament.
  3. Calculez le FIC pour chaque médicament.
    REMARQUE : Reportez-vous au tableau 2 pour les formules utilisées pour calculer le FIC et l’indice FIC. Le tableau 3 présente la CMI consolidée basée sur le dosage REMA. Les valeurs représentatives des indices MIC et FIC sont présentées dans le tableau 4.
    1. Interprétez l’indice FIC comme suit :
      FIC ≤ 0,5 : Indiquer une synergie - les médicaments agissent ensemble pour inhiber la croissance plus efficacement que l’un ou l’autre médicament seul.
      FIC > 0,5 à < 4,0 : Indiquer l’additivité - l’effet combiné est égal à la somme des effets individuels.
      FIC ≥ 4.0 : Indiquer un antagonisme - les médicaments interfèrent avec l’activité de l’autre.
  4. Exemple : Calculer l’indice FIC pour BDQ et DEL dans H37Rv
    1. Déterminer la CMI de la BDQ pour H37Rv (p. ex., 0,125 μg/mL). En association avec la DEL, consigner la CMI du BDQ à 0,03 μg/mL.
    2. Déterminer la CMI de la LEPP pour H37Rv (p. ex., 0,063 μg/mL). En association avec le BDQ, enregistrer la CMI de la LEPP à 0,125 μg/mL.
    3. Calculer FIC pour BDQ :
      FIC(BDQ) = CMI du BDQ en combinaison/CMI du BDQ seul = 0,03 / 0,125 = 0,24
    4. Calculer FIC pour DEL :FIC(DEL) = CMI de DEL en combinaison / CMI de DEL seul = 0,125 / 0,063 = 1,98
    5. Additionnez les deux FIC pour obtenir l’indice FIC :Indice FIC = FIC(BDQ) + FIC(DEL) = 0,24 + 1,98 = 2,26
    6. Interprétez le résultat.
      REMARQUE : Un indice FIC de 2,26 se situe dans la plage d’interaction additive (>0,5 à <4,0), ce qui indique que la combinaison de BDQ et de DEL a un effet additif sur l’inhibition de la croissance de M. tuberculosis.

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Résultats

Détermination de la CMI des médicaments antituberculeux par dosage REMA
Les activités de la bédaquiline, du délamanide, de la moxifloxacine et de l’isoniazide ont été évaluées à l’aide de REMA contre le H37RV sensible aux médicaments et l’isolat clinique résistant aux médicaments de M. tuberculosis. La bédaquiline, le délamanide et l’isoniazide ont été utilisés dans la plage de concentration de (1 μg/mL à 0,03 μg/mL) et la moxifloxacine dans la plage de (2 μg/mL à 0,06 μg/mL). Les suspensions...

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Discussion

La menace mondiale posée par la tuberculose pharmacorésistante (TB-RD) est devenue un problème pressant 1,19. Il est donc urgent de mettre au point des méthodes améliorées et rapides pour les tests de sensibilité aux médicaments, en particulier pour les médicaments antituberculeux de deuxième intention et les plus récents. Ces méthodes sont essentielles pour améliorer les stratégies de traitement, gérer efficacement les médicamen...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Flacon carré de 250 mL avec bouchonSchott Duran218203655Préparation des milieux
7H9 de bouillonBecton Dickinson271310Milieu de croissance pour M. tuberculosis (Température de salle)
Plaque à 96 puits avec couvercleCorning3596Microplaques de polystyrène à fond plat transparent de 96 puits traitées TC, emballées individuellement, avec couvercle, stériles (température de la pièce)
Astuces ART (1000 &mu ; L)TARSONS528106Filtres hydrophobes en polyéthylène avec  ; Pointe de filtre en polypropylène à rack-stérile (température de la pièce)
ART-Tips (200 &mu ; L)TARSONS528104Filtres hydrophobes en polyéthylène avec  ; Pointe de filtre en polypropylène à rack-stérile (température de la pièce)
Chlorure de baryum dihydratéMerck217565Préparation McFarland Standard (Température de la salle)
Bédaquiline (BDQ)Jansen et JansenDon de Jansen et JansenMédicament antituberculeux (4 ° ; C)
CasitoneBecton Dickinson225930Supplément pour culture bactérienne (Température de salle)
Delamanide (DEL)Otsuka PharmaceuticalsDon d’Otsuka PharmaceuticalsMédicament antituberculeux (4 ° ; C)
DiméthylsulfoxydeSigma-Aldrich67-68-5Préparation du stock de médicaments (Room temparature)
Filtre 0.2 &mu ; mMilliporeSLGVR33RS0,22  ; &mu ; m PVDF, jetable, filtre à seringue stérile (température ambiante)
GlycérolMerck356350Ajouté aux milieux de culture (Room temparature)
Boucle d’inoculationSigma-AldrichI8263Pour la préparation de la suspension de culture (Température de salle)
Isoniazide (INH)Sigma-AldrichI3377-5GMédicament antituberculeux (4 ° ; C)
LJ moyen InclinaisonBD Mycobactosel221414Milieux de croissance pour M. tuberculosis (4 ° ; C)
McCartney Bijou Flacon à col étroit, 14 mLSupertek12.124.0014Pour la préparation de la suspension de culture (Température de salle)
McCartney Bijou Flacon à col étroit, 7 mLSupertek12.124.0007Pour la préparation de la suspension de culture (Température de salle)
Micropipettes (1000 &mu ; L)GilsonF144059MPour une manipulation précise des liquides (température ambiante)
Micropipettes (200 &mu ; L)GilsonFA10005MPour une manipulation précise des liquides (température ambiante)
Moxifloxacine (MOX)Sigma-AldrichSML1581-50MGMédicament antituberculeux (4 ° ; C)
Pipette multicanaux (20&ndash ; 200 &mu ; L)VWR849070024Pour le pipetage simultané à travers les puits
L’OADCBecton Dickinson211886Complément pour la culture bactérienne (4 ° ; C)
Remplisseuses de pipettesMerckZ333980Pour une manipulation précise des liquides (température ambiante)
Sel de sodium de résazurineSigma-Aldrich62758-13-8Indicateur redox pour les dosages REMA (température ambiante)
Pipettes sérologiques, 10 mLCorningCLS4100Des pipettes jetables stériles en polystyrène ont été utilisées (température de la salle)
Perles de verre plein, diam. 6 mmSigma-AldrichZ265950Pour la préparation de la suspension de culture (Température de salle)
Acide sulfurique 95&ndash ; 97%Merck100731Préparation McFarland Standard (Température de la salle)
Seringues pour filtreFourgon de distribution100032À utiliser avec des filtres de seringue
Mélangeur VortexREMICM-101 PLUSPour la préparation de la suspension de culture
Sac en polyéthylène à fermeture éclairSigma-AldrichZ162949

Références

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