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Détection et isolement du cancer dans les biopsies de la prostate à l’aide de l’histologie Raman stimulée et de l’intelligence artificielle

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DOI :

10.3791/68083

10 juin 2025

Dans cet article

Résumé

Ici, nous présentons un protocole standardisé pour détecter le cancer de la prostate à l’aide de l’histologie Raman stimulée (SRH) sur des échantillons de biopsie en raison des avantages par rapport à l’histopathologie traditionnelle, en nous concentrant sur la préparation des échantillons, l’imagerie et l’intelligence artificielle pour améliorer le rapport cancer-tissu. De plus, il prend en charge la biobanque pour la transcriptomique, les modèles d’organoïdes ou de xénogreffes, et l’identification des marges chirurgicales peropératoires.

Résumé

Le cancer de la prostate reste l’une des tumeurs malignes les plus répandues chez les hommes dans le monde, ce qui rend la détection précoce et les progrès de la médecine de précision essentiels pour une intervention et un traitement efficaces. Un protocole standardisé est présenté pour l’utilisation de l’histologie Raman stimulée (SRH) avec intelligence artificielle (IA) intégrée dans la détection du cancer de la prostate, offrant des avancées significatives par rapport aux méthodes histopathologiques conventionnelles. La SRH permet ces avancées en améliorant l’efficacité grâce à l’imagerie en temps quasi réel et sans marquage de tissus frais et non colorés, éliminant ainsi les délais associés à l’analyse traditionnelle de la biopsie.

En utilisant la microscopie à diffusion Raman stimulée (SRS) pour détecter les fréquences vibratoires spécifiques des liaisons CH2 associées aux lipides et des liaisons CH3 liées aux protéines et à l’ADN, les tissus cancéreux et bénins des biopsies de la prostate peuvent être différenciés. Le modèle d’IA améliore encore la précision du diagnostic, atteignant une précision de 98,6 % dans l’identification du cancer de la prostate. Le protocole décrit les étapes essentielles de la préparation des échantillons, de l’imagerie et de l’analyse des données, facilitant l’amélioration des processus de biobanque et permettant des applications en aval, telles que la transcriptomique et les études de xénogreffes. Cette approche accélère le flux de travail diagnostique et s’avère prometteuse pour les applications peropératoires, ce qui pourrait aider les chirurgiens à identifier les marges positives en peropératoire. De plus, la possibilité de scanner à nouveau et d’ajuster les ratios cancer/tissu permet une analyse plus personnalisée des échantillons de biopsie, améliorant ainsi la détection des tumeurs dans les tissus non traités. D’autres recherches et validations sont nécessaires pour l’adoption généralisée de la SSR dans la pratique clinique.

Introduction

Le cancer de la prostate reste l’une des principales tumeurs malignes affectant les hommes dans le monde, la détection précoce étant essentielle à la réussite d’une intervention et d’un traitement1. Historiquement, le diagnostic du cancer de la prostate reposait en grande partie sur l’évaluation histopathologique d’échantillons de biopsie de la prostate, le plus souvent par coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E)2. Bien qu’efficaces, les méthodes traditionnelles d’analyse de la biopsie de la prostate entraînent généralement une période d’attente de plusieurs jours à plusieurs semaines, selon la ville ou le pays, en raison de facteurs procéduraux et logistiques. Ces retards résultent de plusieurs étapes à forte intensité de main-d’œuvre, notamment la fixation du formol, l’incorporation de paraffine, la section et la coloration H&E. Ainsi, le temps de traitement cumulé, aggravé par le volume élevé d’échantillons de biopsie, peut retarder le diagnostic et la planification du traitement.

Les progrès récents des technologies d’imagerie, en particulier la microscopie à diffusion Raman stimulée (SRS), peuvent transformer les pratiques de diagnostic en fournissant une méthode d’imagerie robuste, sans bruit de fond et facilement interprétable 3,4. La SRS utilise deux faisceaux laser, le faisceau de pompe (ωp) et le faisceau de Stokes (ωs), qui interagissent avec l’échantillon. Lorsque la différence de fréquence (Δω = ωp −ωs) correspond à une fréquence vibratoire moléculaire spécifique (Ω), le signal est amplifié en raison du gain ou de la perte Raman stimulé. Ce processus améliore le contraste des vibrations moléculaires, ce qui permet une imagerie très sensible des tissus 3,4. La SRS permet de détecter les vibrations moléculaires associées aux vibrations d’étirement du CH2 (2 845 cm-1), corrélées aux lipides, et aux vibrations d’étirement du CH3 (2 930 cm-1), liées aux protéines et à l’ADN4. La détection du signal SRS implique généralement un schéma de transfert de modulation à haute fréquence, permettant d’isoler précisément les signaux vibratoires faibles du bruit de fond.

La microscopie SRS a des capacités de sectionnement optique qui permettent une imagerie tridimensionnelle précise sans avoir besoin de sectionner physiquement les tissus. Ceci est réalisé en alignant et en focalisant la pompe et les faisceaux laser Stokes à un endroit limité par la diffraction dans l’échantillon, où des vibrations moléculaires spécifiques sont excitées. La nature confocale de la SRS, dérivée de sa dépendance quadratique à l’intensité des lasers, garantit que les signaux sont confinés au plan focal, excluant les contributions floues et fournissant des informations chimiques hautement localisées 5,6. Cette imagerie résolue en profondeur préserve l’intégrité des tissus en éliminant le tranchage mécanique, en réduisant le temps de traitement et en maintenant le contexte biologique et moléculaire de l’échantillon.

S’appuyant sur les principes de la SRS, l’histologie Raman stimulée (SRH) utilise ces données vibratoires moléculaires pour créer des images pseudo-H&E de tissus frais et non colorés en temps réel, fournissant ainsi aux cliniciens des outils de diagnostic plus rapides et plus efficaces 7,8. Cette capacité à générer des images de haute qualité a fait de la SSR un outil indispensable pour la recherche et les applications cliniques potentielles9. Récemment, l’évaluation de la marge peropératoire à l’aide de l’HRS a fourni une rétroaction pathologique en temps quasi réel lors de l’ablation partielle de la glande et de la prostatectomie radicale, permettant des ajustements immédiats du traitement10,11.

L’imageur SRH exploite les vibrations moléculaires intrinsèques pour fournir des informations sur la composition des tissus. La SSR peut être utilisée pour différencier efficacement les tissus cancéreux de la prostate bénins en analysant les propriétés vibratoires de CH2 et CH3 7,12. L’imageur SRH capture ces vibrations et produit des images pseudo-H&E qui améliorent le contraste nucléaire, servant d’alternative rapide à l’histopathologie conventionnelle et fournissant des images de haute qualité en 2 à 8 minutes, en fonction de la taille du tissu 7,8.

L’efficacité de l’HRS pour l’examen pathologique rapide des biopsies de la prostate non traitées a été évaluée. Les pathologistes ont été formés pour interpréter les images de SRH à partir de carottes de biopsie de la prostate obtenues ex vivo à partir d’échantillons de prostatectomie8. La méthode de balayage SRH a été optimisée pour permettre l’acquisition d’images haute résolution en quelques minutes, réduisant considérablement le temps nécessaire par rapport à l’histopathologie traditionnelle. Des échantillons de biopsie contenant un mélange d’histologie bénigne et maligne ont servi d’entraînement pour les pathologistes, qui ont ensuite effectué une évaluation à l’aveugle d’un ensemble distinct de biopsies imagées par SRH et traitées par coloration H&E pour servir de vérité terrain. Les résultats ont montré que la précision moyenne du pathologiste pour l’identification du cancer de la prostate était de 95,7 %, avec une bonne concordance dans la détection des cancers cliniquement significatifs, indiquant que la SSR peut soutenir efficacement le diagnostic en temps quasi réel8.

Dans des études ultérieures, l’intelligence artificielle (IA) a été intégrée pour améliorer encore la précision du diagnostic, l’efficacité et la facilité de mise en œuvre. Ce modèle d’IA utilise des techniques d’apprentissage profond pour analyser les caractéristiques vibratoires et morphologiques capturées par la SRH, permettant la classification automatisée des échantillons de biopsie de la prostate en régions bénignes, cancéreuses et non diagnostiques, rationalisant ainsi considérablement le processus d’évaluation pathologique9. L’intégration SRH-AI a démontré une précision impressionnante, atteignant 96,5 % de détection du cancer de la prostate, avec des taux de sensibilité et de spécificité de 96,3 % et 96,6 %, respectivement9. En intégrant l’IA à la SSR, les performances diagnostiques ont été égales à celles des pathologistes expérimentés.

Grâce à l’évaluation approfondie de l’HRS avec des pathologistes et au développement d’un modèle d’IA intégré à l’imageur de l’HRS, les capacités de cette technologie ont été considérablement avancées. Ce protocole décrit les étapes détaillées de la préparation des échantillons de biopsie de la prostate, de leur imagerie à l’aide de l’imageur SRH et de l’analyse des données à l’aide d’outils assistés par l’IA. En suivant ces étapes, les chercheurs et les cliniciens peuvent tirer parti de cette nouvelle technique pour améliorer la détection, la recherche et le traitement du cancer de la prostate.

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Protocole

Ce protocole implique l’utilisation d’échantillons humains et respecte les lignes directrices de l’Université de la Colombie-Britannique en matière de soins aux humains. La recherche a été approuvée par l’Institutional Review Board (IRB) sous les numéros d’approbation éthique suivants : SRH : H23-00459, AI : H24-00585 et Biobanque : H21-03722. Un consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les sujets humains avant le prélèvement des échantillons. Toutes les procédures ont été menées dans le respect des normes éthiques institutionnelles et réglementaires afin d’assurer la protection et la confidentialité des participants.

1. Allumez l’imageur SRH

  1. Mettez l’imageur SRH sous tension (Figure 1A). Laissez le système se réchauffer pendant 30 minutes pour que le laser atteigne une température de fonctionnement optimale pour une imagerie précise.

2. Préparez la chambre de fluide

  1. Fixez une seringue de 50 ml remplie d’eau stérilisée au robinet de la seringue sur le côté gauche de l’interface de l’imageur SRH (Figure 1B). Assurez-vous que la seringue est bien ajustée pour maintenir une bonne circulation du fluide.

3. Connectez-vous au système

  1. Une fois le système chargé, utilisez l’écran tactile pour entrer le nom d’utilisateur et le mot de passe.
  2. Sélectionnez le nom d’utilisateur approprié et tapez le mot de passe. Appuyez sur Se connecter.
  3. Acceptez la clause de non-responsabilité pour reconnaître que l’étude est à des fins de recherche si elle est utilisée en dehors des États-Unis ou de l’Union européenne.

4. Créez une nouvelle étude

  1. Sélectionnez Créer une nouvelle étude dans les options d’affichage : Créer une nouvelle étude, Continuer l’étude existante et Afficher l’étude existante.

5. Entrez les informations sur le cas

  1. Saisissez les informations pertinentes sur le cas, notamment le nom, le prénom, le numéro de dossier médical, la date de naissance, le numéro d’accès, le numéro d’identification de l’essai, le nom du médecin, le numéro de la chambre, l’emplacement anatomique principal et le module d’analyse.
  2. Enregistrez les échantillons sous le nom de John Doe (par exemple).
  3. Sous Emplacement anatomique principal, sélectionnez Prostate (à des fins de recherche uniquement).
  4. Pour Mode d’analyse, choisissez Cancer de la prostate (utilisation à des fins de recherche uniquement) pour utiliser l’IA intégrée pour la détection du cancer de la prostate.

6. Finaliser la création de l’étude et remplir la chambre à fluide

  1. Appuyez sur Créer une étude après avoir saisi les informations du cas.
  2. Lorsque le système vous le demande, appuyez sur Reconnaître pour confirmer que les données seront utilisées à des fins de recherche uniquement.
  3. Remplissez la chambre de liquide avec de l’eau stérilisée comme indiqué.
  4. Appuyez sur Suivant lorsque vous y êtes invité, puis sélectionnez Acquérir dans les options affichées.
  5. Appuyez sur Charger un nouvel échantillon et le système affichera Préparer l’échantillon et charger la diapositive NIO.

7. Préparation de l’échantillon et de la lame

  1. Récupérez la lame de biopsie de la prostate. À l’aide d’une pince à tissus avec des dents, ouvrez avec précaution la lamelle fixée. Tout en maintenant la lame et la lamelle ouvertes, utilisez la pince à tissus pour placer la biopsie de la prostate à partir du support RPMI en toute sécurité dans la rainure de la lame. Fermez doucement la lamelle et fixez l’échantillon.
  2. Ouvrez le support de diapositive sur l’interface de l’imageur SRH et insérez la diapositive préparée dans le support de diapositive, en veillant à ce qu’elle soit correctement alignée. Fermez le couvercle de l’imageur SRH. Lorsque le système détecte que le couvercle est fermé, appuyez sur Suivant pour continuer.

8. Définir les paramètres d’acquisition d’image

  1. Réglez les paramètres d’imagerie suivants :
    1. Pour le nom de l’échantillon : Sélectionnez Biopsie 1 A pour la première biopsie.
    2. Pour la zone de balayage : Sélectionnez 0,4 mm x 6,1 mm, 3 régions (utilisation à la recherche uniquement) pour numériser la biopsie entière.
    3. Pour la position de numérisation : utilisez l’image à l’écran pour ajuster manuellement l’emplacement de numérisation.
  2. Appuyez sur Acquérir l’image pour continuer.
  3. Vérifiez les détails de l’échantillon affiché à l’écran et confirmez en sélectionnant Continuer.

9. Acquérir l’image de la SSR

  1. Laissez l’imageur SRH faire la mise au point automatique et acquérir des images générant l’image SRH finale.
  2. Laissez l’imageur balayer la biopsie en trois sections (balayage 1, balayage 2 et balayage 3) comme illustré à la figure 2A.
  3. Laissons l’imageur combiner les sections pour former une image SRH complète (Figure 2B), produisant une image pseudo-H&E pour l’évaluation.

10. Affichage de l’image SRH

  1. Voir l’image SRH de la biopsie de la prostate fraîche et non colorée. L’image imite la coloration H&E à l’aide d’un schéma de couleurs rose/violet qui met en évidence les vibrations moléculaires CH2 (associées aux lipides) et les vibrations moléculaires CH3 (liées aux protéines et à l’ADN).

11. Interprétation par l’IA de l’image de la SSR à des fins de recherche uniquement

  1. Appliquez la superposition AI en cliquant sur l’icône (>>) à l’écran. La superposition de l’IA identifie les régions cancéreuses en rouge, les régions non cancéreuses en vert et les régions non diagnostiques en violet (figure 3A).
  2. Examinez le graphique à barres quantifiant le pourcentage de tissus cancéreux, de tissus non cancéreux et de tissus non diagnostiques (figure 3B).
  3. Revenez à l’image originale de la SRH sans la superposition AI en cliquant sur l’icône (<<).

12. Zoom et navigation de l’image SRH

  1. Utilisez les fonctions de zoom avant et arrière de l’écran tactile pour explorer en détail les différentes régions de la biopsie.
  2. Utilisez les icônes de navigation pour vous déplacer dans l’image afin d’effectuer un examen complet de l’échantillon de biopsie.

13. Isolement des tissus sélectionnés

  1. Après l’examen initial, retirez soigneusement la biopsie de la lame. À l’aide d’une pince à tissus avec les dents, soulevez la lamelle attachée et libérez doucement la biopsie.
  2. Placez la biopsie sur un Telfa humidifié et imbibé de solution saline pour maintenir l’intégrité des tissus pendant le processus de taille.
  3. Utilisez une lame chirurgicale pour couper les zones non cancéreuses identifiées dans la superposition générée par l’IA de l’image SRH en évaluant visuellement la superposition afin de déterminer les régions optimales pour l’élimination. Concentrez-vous sur l’élimination des zones généralement situées aux extrémités de la biopsie pour augmenter le rapport cancer-tissu. Assurez-vous qu’il reste suffisamment de tissu pour le réexamen.

14. Refaites le balayage de la biopsie

  1. Effectuez un nouvel examen de la biopsie en suivant la même procédure que celle décrite aux étapes 9 à 11.
  2. Ajustez la zone et la position du balayage pour confirmer une augmentation du rapport cancer-tissu (voir la figure 3C-E). Examinez l’image mise à jour de la SSR et la superposition de l’IA pour vérifier les pourcentages de régions cancéreuses et non cancéreuses.
  3. Répétez le découpage et le balayage jusqu’à ce que le rapport souhaité soit atteint.

15. Biobanques et cryoconservation

  1. Retirez la biopsie de la lame à l’aide d’une pince à tissus avec les dents. Placez la biopsie dans un cryotube.
  2. Congelez le cryotube dans de l’azote liquide pour assurer une conservation rapide de l’échantillon.
  3. Transférez le cryotube dans de l’azote liquide dans un congélateur à -80 °C ou une installation de stockage d’azote liquide pour une conservation à long terme.

16. Exporter les données d’image

  1. Appuyez sur l’icône de l’avion en papier pour exporter les données de l’image à des fins de stockage et d’analyse plus approfondie.
  2. Pour sélectionner l’emplacement d’exportation, appuyez sur l’option Sélectionner l’emplacement d’exportation et choisissez entre USB (anonymisé), USB (complet) et iPhone (complet). Sélectionnez USB (Complet) et choisissez un disque dur externe pour l’exportation des données.
  3. Pour sélectionner la série d’images à exporter, sélectionnez Étude entière pour exporter toutes les séries d’images SRH pour le patient plutôt qu’une série spécifique.
  4. Attendez que le système affiche Exportation en cours et appuyez sur Confirmer une fois l’exportation terminée.

17. Éteignez le microscope SRH

  1. Appuyez sur Quitter et suivez les instructions d’arrêt affichées à l’écran.
  2. Sélectionnez Continuer sans lorsque vous êtes invité à archiver les données d’image (si elles sont déjà exportées).
  3. Éliminer l’échantillon conformément aux protocoles de laboratoire appropriés.
  4. Appuyez sur Suivant et videz la chambre de fluide à l’aide de la seringue fournie, comme indiqué.
  5. Appuyez sur Suivant lorsque vous y êtes invité, puis sélectionnez Oui dans les options affichées.
  6. Retirez et jetez la seringue.
  7. Appuyez sur Arrêter pour éteindre complètement le microscope SRH.

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Résultats

L’application de la SSR intégrée à l’IA a démontré la détection et la caractérisation rapides du cancer de la prostate dans les échantillons de biopsie en quelques minutes. La figure 2A décrit la procédure de balayage en plusieurs étapes de l’imageur SRH, où trois balayages distincts (balayage 1, balayage 2 et balayage 3) ont été effectués sur l’échantillon de biopsie. Chaque balayage a capturé des signatures vibratoires moléculaires uniques correspondant au contenu en lipides, en protéines ...

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Discussion

Le protocole SRH pour la détection du cancer de la prostate représente une avancée significative en imagerie médicale et en histopathologie. L’HRS permet une imagerie en temps quasi réel et sans marquage de tissus frais et non colorés, ce qui permet une détection rapide du cancer des tissus non traités sans les délais associés aux méthodes histopathologiques traditionnelles 3,4,5,6,7,8,9.

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Déclarations de divulgation

C. Freudiger est employé, actionnaire et directeur d’Invenio Imaging et détient des brevets sur la microscopie spectroscopique Raman stimulée qui sont sous licence indépendante. A. Ion-Margineanu est actionnaire d’Invenio Imaging.

Remerciements

Nous reconnaissons les contributions de l’équipe de recherche du Vancouver Prostate Centre et de NYU Langone Health, ainsi que le soutien technique fourni par Invenio Imaging. Ce travail a été financé par le Centre d’innovation du ministère de la Santé de la Colombie-Britannique.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Récipient d’azote liquide de paillasseThermo ScientificRéférence 11-670-4B
CytotubeGreiner Bio-One126279
Dumont #5 Pince fineOutils scientifiques fins11254-20
Lame de biopsie de la prostate NIOInvenio Imaging, Inc.AT0013
RPMI SolutionThermo Fisher Scientific11875093
Saline SolutionBaxter
Imageur SRH (système d’imagerie laser NIO)Invenio Imaging, Inc.
Lame chirurgicaleFisher Scientific501094395

Références

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  3. Freudiger, C. W., et al. Stimulated Raman scattering microscopy with a robust fibre laser source. Nat Photonics. 8 (2), 153-159 (2014).
  4. Freudiger, C. W., et al. Label-free biomedical imaging with high sensitivity by stimulated Raman scattering microscopy. Science. 322 (5909), 1857-1861 (2008).
  5. Hu, F., Shi, L., Min, W. Biological imaging of chemical bonds by stimulated Raman scattering microscopy. Nat Methods. 16 (9), 830-842 (2019).
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  7. Orringer, D. A., et al. Rapid intraoperative histology of unprocessed surgical specimens via fibre-laser-based stimulated Raman scattering microscopy. Nat Biomed Eng. 1, 0027(2017).
  8. Mannas, M. P., et al. Stimulated Raman histology, a novel method to allow for rapid pathologic examination of unprocessed, fresh prostate biopsies. Prostate. 83 (11), 1060-1067 (2023).
  9. Mannas, M. P., et al. Stimulated Raman histology interpretation by artificial intelligence provides near-real-time pathologic feedback for unprocessed prostate biopsies. J Urol. 211 (3), 384-391 (2024).
  10. Mannas, M. P., et al. Intraoperative margin assessment with near real time pathology during partial gland ablation of prostate cancer: A feasibility study. Urol Oncol. 43 (1), 64.e19-64.e25 (2024).
  11. Mannas, P. M., et al. MP61-18 stimulated Raman histology, a novel method for intraoperative surgical margin assessments during robotic assisted laparoscopic prostatectomy. J Urol. 209 (Supplement 4), (2023).
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Mots-clés

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