Une nouvelle méthode de fixation pour le traitement d’acupuncture chez le rat

Résumé

Ici, nous décrivons une nouvelle méthode de fixation des rats qui facilite l’acupuncture et la moxibustion sur le dos des rats.

Résumé

Les chercheurs sont toujours confrontés au problème de la difficulté de contrôler les animaux dans les expériences sur les animaux liées à l’acupuncture. Il existe déjà des méthodes pour empêcher les animaux de s’échapper des sites de traitement. Cependant, l’effet de ces méthodes de fixation est différent de l’état de traitement humain. Par conséquent, nous avons inventé une nouvelle méthode de fixation pour garder les rats couchés, silencieux et éveillés pendant le traitement.

L’équipement se compose d’une plate-forme de contention en plastique poreux, d’un tissu de coton carré et de plusieurs sangles de contention pour fixer les rats. Tout d’abord, enfilez les sangles de retenue dans la plate-forme de retenue. Pour chaque sangle, passez-la dans deux trous de la même rangée, en laissant deux trous entre eux. Après avoir positionné la première sangle, insérez l’autre sangle dans la plate-forme de la même manière, en assurant un espace de quatre rangées entre les deux sangles. Deuxièmement, saisissez la queue du rat et guidez-la dans le canal formé par deux sangles de retenue. Couvrez la tête du rat avec un chiffon carré en coton. Troisièmement, serrez la sangle de contention sur le cou pour fixer la tête et les membres antérieurs. Tenez ensuite les membres postérieurs du rat et serrez l’autre sangle pour fixer la taille et les membres postérieurs.

Cette méthode ne nécessite pas d’anesthésie. L’appareil est simple et facile à utiliser. Pour évaluer son efficacité et son innocuité, nous avons administré la procédure à 60 rats. Tous ont terminé le traitement d’acupuncture sans complications. Bien que 14 rats aient présenté de brèves périodes de lutte au cours de la procédure, aucun effet indésirable n’a été observé. Les résultats démontrent que la méthode est efficace et sûre à utiliser.

Introduction

La modélisation chirurgicale et l’intervention in vitro nécessitent des méthodes de fixation animales appropriées. Cela garantit que les animaux sont dans la position la plus maniable et relativement confortable. Nous nous concentrons sur la méthode de fixation animale pour l’intervention d’acupuncture. L’acupuncture est efficace dans le traitement de nombreuses maladies ^1,2. L’étude du mécanisme de l’acupuncture a reçu beaucoup d’attention. À l’heure actuelle, l’acupuncture et la moxibustion sont des sujets de recherche brûlants en Belgique et à l’étranger. Le mécanisme pathologique du traitement par acupuncture doit être exploré davantage et, en plus des expériences cliniques, un soutien à la recherche fondamentale est également nécessaire ^3,4. Dans la recherche fondamentale sur l’acupuncture et la moxibustion, la fixation animale est une étape technique importante.

À l’heure actuelle, les méthodes de fixation couramment utilisées comprennent le bondage, l’anesthésie, le balancement, la plate-forme haute et d’autres méthodes de fixation. Les avantages et les inconvénients de ces méthodes sont décrits ci-dessous.

La première étape de la mise en œuvre de la méthode de fixation de l’anesthésie consiste à anesthésier les rats. En utilisant cette méthode, les chercheurs courent le risque que les rats meurent. Il est également possible d’opérer directement sans contention après l’anesthésie⁵. Lors de l’utilisation de la méthode de fixation de la plate-forme chaussette-lapin, les chercheurs insèrent la tête du rat dans une chaussette taillée, étendent leurs membres antérieurs à travers les trous et fixent leurs pattes à la plate-forme du lapin avec des élastiques. Cette méthode facilite la sélection des points d’acupuncture sur les membres. Les chercheurs doivent couper la chaussette en fonction du site d’acupuncture, mais la procédure est quelque peu complexe⁶. Certains chercheurs ont mis au point un dispositif de fixation par moxibustion composé de trois parties : le siège de fixation, le clip de fixation et le support de bâtonnet de moxa. Cet appareil permet aux chercheurs d’effectuer la moxibustion sur plusieurs points d’acupuncture simultanément tout en maintenant une température relativement constante. Cependant, l’état fixe de cette méthode diffère significativement du traitement clinique de l’homme⁷. Envelopper les rats avec un tissu et les suspendre à l’aide de pinces peut réduire considérablement l’influence de la retenue. Cependant, le tissu suspendu doit être coupé à l’avance pour exposer les points d’acupuncture, ce qui rend peu pratique l’exposition du site de traitement⁸. Certains chercheurs utilisent des sangles, des cordes et une petite veste avec une bande velcro autobloquante pour fixer les rats sur une couverture de cage en forme de filet. L’appareil offre de faibles coûts de production, une grande praticabilité et une utilisation simple. Mais il faut plus d’une personne pour mener à bien le processus de contention⁹. Certains chercheurs construisent un cylindre de maintien du corps avec un treillis métallique, fixent les pattes des rats avec des pinces de maintien et fixent leur cou à l’aide d’un bâton de maintien. Cette méthode permet une retenue ferme. En utilisant cette méthode, les chercheurs peuvent mieux opérer les rats car les points d’acupuncture sur tout le corps sont exposés. Le problème est que le cylindre peut être incompatible avec la taille du rat. De plus, cette méthode applique plus de stress par rapport aux autres techniques, de sorte que les rats peuvent être plus sensibles à l’asphyxie¹⁰. La méthode de fixation à plate-forme haute tire parti de la peur de la hauteur des rats. Les chercheurs placent des rats sur la pédale à haute plate-forme à 50 cm au-dessus du sol. Les rats restent dans une position couchée naturelle sans avoir besoin de contraintes supplémentaires. Cette méthode permet d’aiguiller la tête et le dos des rats. Cette méthode simule de manière authentique l’environnement de traitement, de sorte que les résultats expérimentaux ont une bonne valeur de référence. Comme les rats ont peur des hauteurs, leur état mental devient anormal lorsqu’ils sont placés à de telles altitudes. Cela rend la méthode inadaptée à la recherche sur les maladies mentales et pourrait influencer les résultats expérimentaux¹¹. Certains chercheurs utilisent une plate-forme de contention réglable et des sangles pour fixer les rats, exposant ainsi une grande zone de traitement. Cependant, la reproduction du scénario clinique reste difficile¹².

Il est urgent de s’attaquer au problème que les méthodes de fixation ne peuvent pas simuler avec précision les conditions de traitement cliniques. Nous avons fait tous les efforts possibles pour reproduire les conditions du traitement clinique humain. La méthode décrite dans le présent document entre dans la catégorie des méthodes de bondage. L’équipement utilisé dans cette méthode comprend une plate-forme de contention et des sangles de contention, ainsi qu’un chiffon en coton pour faciliter la procédure. L’équipement est relativement simple à utiliser. Comparée à d’autres méthodes, cette méthode expose mieux les points d’acupuncture sur le dos des rats et améliore l’efficacité du traitement.

Pour tester la fiabilité de l’appareil, un total de 60 rats ont été utilisés pour l’expérience. Les 60 rats ont été divisés en deux groupes, chacun contenant 30 rats : le groupe d’électroacupuncture et le groupe d’acupuncture chaude. Les rats sont restés calmes pendant le processus de traitement, et leurs mouvements ont eu un impact minimal sur la procédure. Dans le groupe d’électroacupuncture, 22 rats ont terminé le traitement calmement sans se débattre. Au total, 8 rats se sont débattus pendant l’opération et 6 ont délogé les aiguilles. Au total, 24 rats du groupe d’acupuncture chaude sont restés calmes pendant le traitement. Les 6 autres rats ont montré un comportement difficile, mais aucun n’a délogé les boules de moxa. Ces rats qui luttaient pouvaient également se calmer après avoir été couverts et réconfortés. En fin de compte, tous les rats ont terminé le traitement avec succès.

Protocole

Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n° 82205287). Les protocoles expérimentaux utilisés dans cette étude ont été examinés et approuvés par le Comité d’éthique de l’expérimentation et de l’utilisation des animaux de l’Université de médecine chinoise de Pékin (n° BUCM-2024052704-2223) avant de réaliser les expériences. Toutes les procédures démontrées doivent être approuvées par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux (IACUC).

Les détails de l’équipement utilisé dans l’étude sont énumérés dans la table des matériaux. Le protocole peut être divisé en quatre sections : préparation de l’expérience, processus de fixation, opération de traitement et démontage de l’équipement.

1. Préparation de l’expérience (Figure 1)

1. Préparez la plate-forme de retenue en plastique poreux. La plate-forme de retenue mesure 500 mm de longueur, 300 mm de largeur et 5 mm de hauteur. Le trou mesure 7 mm de long et 3,2 mm de large. La distance entre deux trous adjacents est de 7 mm. Cet équipement sert de plate-forme pour fixer les rats.
2. Préparez les sangles de contention. Chaque sangle de retenue mesure 300 mm de longueur et 4,8 mm de largeur. Les sangles de retenue sont dentelées et disposent d’une boucle à leur extrémité, qui peut être verrouillée après l’insertion.
3. Gardez un chiffon carré en coton à portée de main. Le chiffon carré en coton mesure 30 cm 30 cm. Utilisez-le pour bloquer la vue des animaux de laboratoire.
4. Préparez l’instrument d’électroacupuncture. Utilisez cet appareil pour effectuer des procédures d’électroacupuncture.
5. Préparez les aiguilles d’acupuncture (0,25 mm de diamètre et 25 mm de longueur).
6. Gardez une paire de gants en latex de qualité laboratoire à disposition. Ces gants constituent la mesure de protection fondamentale de l’expérience.
7. Gardez à disposition une paire de gants anti-coupure, conçus pour protéger les chercheurs des morsures de rats pendant l’expérience.
8. Utilisez le moxa pour fabriquer des boules de moxa d’un diamètre de 5 mm, qui sont utilisées pour la thérapie de moxibustion ultérieure.
9. Pour éviter l’ébouillantage des rats, coupez des papiers carrés de 2 cm 2 cm.
10. Gardez la gaze stérile prête à être appliquée pour envelopper la queue du rat, en assurant la conductivité électrique pendant le traitement d’électroacupuncture.
11. Préparation avant la fixation : Avant de manipuler les rats, portez des gants en latex de qualité laboratoire et des gants anti-coupure pour éviter d’être mordu par les rats.

Figure 1 : Appareils nécessaires à l’opération. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

2. Processus de fixation

1. Enfilez deux sangles de retenue à travers la plate-forme de retenue. Insérez chaque sangle par deux trous dans la même rangée, en espacant de deux trous, avec les sangles à quatre rangées de distance les unes des autres. Cet espacement correspond au diamètre du corps du rat, ce qui limite les mouvements latéraux pendant le traitement (figure 2). Ajustez la distance en fonction de la forme des rats et des sites de traitement au besoin.
2. Saisissez la queue du rat d’une main. Le rat se déplace instinctivement vers l’avant (Figure 3A).
3. Positionnez le rat à l’entrée du canal formé par deux sangles de retenue. Le rat va percer le canal par lui-même (Figure 3B).
4. Couvrez la tête du rat avec un chiffon carré en coton et utilisez cette même main pour tenir le cou du rat. Saisissez la queue et les membres postérieurs du rat d’une autre main. Cette méthode permet de s’assurer que la posture du rat est maintenue (figure 3C).
5. Utilisez la main qui tient le côté de la tête pour appuyer doucement sur la tête et le cou du rat. Utilisez l’autre main pour insérer la sangle de retenue dans la boucle et la serrer. S’assurer que la sangle de retenue est située sur le côté arrière de la tête et les membres antérieurs afin de limiter le mouvement de la tête (figures 3D, E).
6. Tenez la queue du rat d’une main. Assurez-vous que la sangle de contention est située devant les membres postérieurs du rat. Serrez ensuite la boucle pour restreindre le mouvement de la taille (Figure 3F). Le rat immobilisé est illustré à la figure 3G.
7. Lors de la pratique de l’acupuncture sur des rats, cette méthode de fixation assure la stabilité pendant le traitement. Si le rat se débat toujours sévèrement, couvrez-lui doucement la tête avec le chiffon. Protéger tout son champ de vision et le garder dans un environnement sombre peut calmer le rat.
   1. Choisissez DU20, BL17 et BL23 comme exemples. Le choix de cette distance de fixation permet de mieux exposer les points d’acupuncture : DU20 est au milieu de sa tête, BL17 est entre les deux sangles de contention et BL23 est à la queue de la sangle de contention, resserrant la taille du rat.
   2. Faites tourner l’aiguille dans les points d’acupuncture (Figure 4A). Le rat qui termine le traitement d’acupuncture est illustré aux figures 4B et C.

Figure 2 : Assemblage de la plate-forme de retenue et de la sangle de retenue. La plate-forme de retenue avec les sangles de retenue insérées est illustrée sur la figure. Chaque sangle est insérée par deux trous dans la même rangée, en espaçant de deux trous, les sangles étant espacées de quatre rangées les unes des autres. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 3 : Le processus de fixation d’un rat. (A) Tenez la queue du rat. (B) Laissez le rat s’enfuir vers l’avant dans le canal. (C) Couvrez la tête du rat avec un chiffon de coton. Appuyez sur son cou et attrapez sa queue et ses membres postérieurs. (D, E) Serrez la sangle sur son dos. (F,G) Serrez la sangle sur sa taille. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 4 : Opération d’acupuncture sur un rat. DU20, BL17 et BL23 ont été choisis comme points d’acupuncture pour cette procédure d’acupuncture. (A) Faites tourner l’aiguille dans les points d’acupuncture. (B, C) Le rat qui termine le traitement est montré ici. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

3. Traitement d’électroacupuncture

1. Connectez l’instrument d’électroacupuncture après avoir terminé l’acupuncture. Allumez l’appareil d’électroacupuncture, appuyez sur le bouton d’onde continue pour sélectionner la forme de stimulation électrique et tournez le bouton pour régler l’intensité du courant à 1 mA et la fréquence à 2 Hz (Figure 5A).
2. En prenant l’exemple de DU20, BL17 et BL23, connectez trois paires d’électrodes comme illustré à la figure 5. Plus précisément, connectez le BL17 et le BL23 du même côté qu’une paire (Figure 5B, C). Relier la queue, enveloppée dans de la gaze imbibée de solution saline, à l’UD 20 sur la tête (figures 5D et E). La direction du flux de courant est cohérente entre les trois paires d’électrodes.
3. Tournez le bouton de réglage de la durée pour régler la durée du traitement à 15 min.

Figure 5 : Opération d’électroacupuncture sur un rat. (A) Réglez le paramètre sur onde continue et ajustez l’intensité du courant et la fréquence. (B, C) Associez BL17 et BL23 du même côté. (D, E) Enveloppez la queue avec de la gaze imbibée de sérum physiologique et connectez-la à DU20. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

4. Traitement d’acupuncture chaud

1. Préparez ces articles si un traitement d’acupuncture chaud est nécessaire : moxa, aiguille d’acupuncture (0,25 mm × 25 mm, comme utilisée précédemment) et plusieurs feuilles de papier carrées. De plus, préparez quelques boules de moxa à l’avance avant le début du traitement (Figure 1).
2. Prenez une feuille de papier carrée et utilisez une aiguille pour percer le point central du papier (Figure 6A). Par la suite, insérez l’aiguille dans le point d’acupuncture désigné (Figure 6B).
   REMARQUE : À des fins d’illustration, cette étude a sélectionné le point d’acupuncture BL23.
3. Placez délicatement les boules de moxa sur l’aiguille, puis allumez-les (Figure 6C-E).

Figure 6 : Opération d’acupuncture chaude sur un rat. (A) Prenez un papier carré et percez-en le centre avec une aiguille. (B) Insérez des aiguilles dans les points d’acupuncture. (C) Mettez les boules de moxa sur les aiguilles. (D, E) Le rat qui termine le traitement est montré ici. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

5. Démontage de l’équipement

1. Démontage de l’équipement d’électroacupuncture
   1. Une fois le traitement d’électroacupuncture terminé, éteignez l’instrument d’électroacupuncture. Ensuite, relâchez soigneusement le clip de l’électrode des aiguilles d’acupuncture. Enfin, retirez doucement les aiguilles d’acupuncture de la zone de traitement.
2. Démontage de l’équipement d’acupuncture chaud
   1. Après le traitement d’acupuncture chaud, retirez soigneusement les cendres des boules de moxa et jetez-les en les plaçant dans l’eau. Retirez ensuite délicatement les aiguilles et retirez tous les papiers attachés.
3. Démontage de l’équipement de fixation
   1. Couvrez la tête du rat avec un chiffon carré en coton tout en relâchant les sangles de contention. Desserrez la sangle de contention, en serrant d’abord la taille du rat. Ensuite, saisissez fermement les membres postérieurs et la hanche du rat d’une main.
   2. Relâchez la sangle qui se resserre autour du cou du rat avec l’autre main, puis tirez doucement le rat hors de la sangle de contention en tenant sa queue.

Résultats

Pour évaluer l’efficacité de la méthode de fixation, nous avons mené un essai sur un total de 60 rats, qui ont été divisés en deux groupes : 30 rats dans le groupe d’électroacupuncture et 30 rats dans le groupe d’acupuncture chaude. Les opérations de traitement comprenaient respectivement l’électroacupuncture et l’acupuncture chaude.

Après avoir inséré des aiguilles dans les points d’acupuncture, l’acupuncteur a effectué des manipulations de levage, de poussée...

Discussion

Les rats ont tendance à habiter des environnements sombres. Ils se sentent en sécurité lorsqu’ils sont à l’abri et réagissent calmement aux stimuli, présentant des niveaux de stress plus faibles. La méthode décrite ici tire parti de ces caractéristiques chez le rat. Les avantages de cette méthode de fixation peuvent être résumés comme suit : (i) Cette méthode peut minimiser la réponse au stress et la douleur ressenties par les animaux de laboratoire. Il s’aligne sur les principes 3R de l...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Aiguilles d’acupuncture	Pékin ZhongYan TaiHe Medical Instrument Co., Ltd.	20222200133	Les spécifications des aiguilles d’acupuncture sont de 0,25 mm de diamètre et de 25 mm de longueur.
Gants anti-coupure	Usine de produits de protection du travail de Lvdazhou dans le district de Lanshan, ville de Linyi	H0315103941	Conçu pour protéger les chercheurs des morsures de rats pendant l’expérience.
Instrument d’électroacupuncture	Suzhou Medical Appliance Factory Ltd.	20172200675	Cet appareil est utilisé pour effectuer des procédures d’électroacupuncture.
Gants en latex de qualité laboratoire	Zhonghong Pulin Medical Products Co., Ltd.	268237719221	Ces gants constituent la mesure de protection fondamentale de l’expérience.
Moxa	Beijing Tongrentang Xing’an Health Technology Co., Ltd.	152200000000613	le moxa sert de matériau pour la fabrication de boules de moxa d’un diamètre de 5 mm, qui sont utilisées pour la thérapie de moxibustion ultérieure.
Plate-forme de retenue en plastique poreux	Chuzhou Huaxin VinyIIndustry Co., Ltd.	341124000005877	La plate-forme de retenue mesure 500 mm de longueur, 300 mm de largeur et 5 mm de hauteur. Les trous mesurent 7 mm de long et 3,2 mm de large. La distance entre deux trous adjacents est de 7 mm. Cet équipement sert de plate-forme pour fixer les rats.
Sangles de retenue	Zhejiang Litai Plastic Co., Ltd.	331003000001553	Chaque sangle de retenue mesure 300 mm de longueur et 4,8 mm de largeur. Les sangles de retenue sont dentelées et disposent d’une boucle à leur extrémité, qui peut être verrouillée après l’insertion.
Tissu carré en coton	MUJI (SHANGHAI) Company Limited	WYLP20241105_1	Le tissu carré en coton mesure 30 cm et 30 cm. Il est utilisé pour bloquer la vue des animaux de laboratoire.
Papiers carrés	DELI Group Co., Ltd.	7752-1114	Pour éviter l’échaudage des rats, les chercheurs découpent des papiers carrés mesurant 2 cm et 2 cm de profondeur.
Gaze stérile	Jiangxi Zhonggan Medical Devices Co., Ltd.	20172140084	La gaze stérile est appliquée pour envelopper la queue du rat, assurant ainsi la conductivité électrique pendant le traitement d’électroacupuncture.