Les analyses et les choix non-choix pour tester la résistance de A. thaliana d'insectes broyeurs

Résumé

La résistance des plantes aux insectes herbivores mâcher peut être testée à plusieurs égards. Ici, nous montrons comment mettre en place un choix et une expérience non-choix avec la plante modèle Arabidopsis thaliana pour identifier la résistance contre les parasites des espèces Pieris rapae.

Résumé

Les larves du papillon du chou blanc petits sont un parasite en milieu agricole. Cette espèce chenille se nourrit de plantes de la famille des choux, qui comprennent de nombreuses cultures comme le chou, le brocoli, les choux de Bruxelles élevage des insectes etc a lieu sur les plantes de chou dans les serres. Au moins deux cages sont nécessaires pour l'élevage de Pieris rapae. Un pour les larves et l'autre pour contenir les adultes, les papillons. Afin d'étudier le rôle des hormones végétales et de produits chimiques toxiques dans les plantes une résistance à cet insecte ravageur, nous démontrons deux expériences. Premièrement, la détermination du rôle de l'acide jasmonique (JA - une hormone végétale souvent indiqué dans la résistance aux insectes) dans la résistance à la mastication des insectes Pieris rapae. Caterpillar croissance peut être comparée sur les plantes de type sauvage et mutants déficients dans la production de JA. Cette expérience est considérée comme "No Choice", car les larves sont contraints de survivre sur une seule plante qui synthétise ou est déficient en JA. Deuxièmement, nous démontrons une expérience qui étudie le rôle des glucosinolates, qui sont utilisées comme oviposition (ponte) des signaux. Ici, nous utilisons Arabidopsis WT et mutants déficients dans la production de glucosinolates dans un "choix" expérience dans laquelle les papillons femelles sont autorisés à choisir pour pondre leurs oeufs sur des plantes de génotype soit. Cette vidéo montre le montage expérimental pour les deux dosages ainsi que des résultats représentatifs.

Protocole

Aucune expérience du choix:

1. Soigneusement placer la plante Arabidopsis d'intérêt dans une tasse en plastique. Dans ce cas: Col-0 (WT) et un mutant déficience dans la production de JA. Assurez-vous de limiter les dommages aux feuilles. Pour cela j'utilise le dos de ce pinceau.
   
2. Utilisez un pinceau fin pour prendre une larve fraîchement écloses de la colonie sur le chou.
   
3. Placez délicatement la larve sur les plantes d'Arabidopsis.
   
4. Larve de poids au jour 4, 7, 10. ASTUCE: Faites pousser vos plants dans des conditions de jours courts (8 h de lumière) pour augmenter la croissance végétative (1 larve peut remplir son cycle de vie complet sur une plante).

Expérience choix:

1. Deux usines sont sélectionnés, un de chaque génotype. Le mieux est de faire pousser des plantes dans le même pot, afin de limiter les autres facteurs, tels que des effets plateau, etc
   
2. Placez les plantes dans une cage papillon.
   
3. Sélectionnez une femelle fertile. J'ai l'habitude de prendre un féminin qui est activement à pondre dans la colonie d'élevage.
   
4. Communiqué de la femelle dans la cage avec le choix de deux usines pendant 24 heures.
   

Astuce 1: Pour éliminer un effet d'apprentissage, ne pas réutiliser les femelles pour les tests de choix ultérieurs.

ASTUCE 2: On ne peut comparer les plantes qui ont un phénotype de croissance similaires. Sinon, vous pourriez monter une feuille de chaque génotype sur le dessus d'une fiole Erlenmeyer et de comparer leur attrait pour une femelle.

S'il vous plaît visitez examens annuels de biologie végétale pour plus d'informations sur ce protocole et l'immunité des plantes aux insectes herbivores.