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Article de méthode

Contention animale non aversive permettant l’enregistrement du réflexe optomoteur chez les écureuils terrestres

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DOI :

10.3791/68335

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25 juillet 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Retinal Neurophysiology Section, National Eye Institute, National Institutes of Health, 2Department of Ophthalmology, Faculty of Medicine, University of Murcia and Biomedical Research Institute of Murcia (IMIB-Pascual Parrilla), 3Striatech GmbH

Dans cet article

Résumé

Le protocole décrit comment mesurer la réponse optomotrice chez les écureuils terrestres à 13 lignes, une espèce à dominante conique dont les caractéristiques rétiniennes ressemblent à la macula humaine. La conception de la plate-forme améliore la manipulation et réduit l’anxiété, améliorant ainsi la capacité de l’animal à rester sur la plate-forme surélevée, permettant une évaluation non invasive des changements dans la fonction visuelle.

Résumé

Le réflexe optomoteur (OMR) fournit une évaluation comportementale de la sensibilité au contraste et de l’acuité visuelle d’un animal. Les souris ou les rats sont généralement placés directement sur une petite plate-forme circulaire à la main ; Cependant, manipuler des animaux de cette manière peut stimuler le stress et l’anxiété, ce qui introduit des facteurs de confusion lors de l’interprétation des données. Il a été démontré que des méthodes de manipulation non aversives, telles que ramasser des souris ou des rats dans un tunnel/tube familier, peuvent réduire l’anxiété. Ceci est particulièrement intéressant dans les études où les animaux présentent un stress accru, une hyperactivité ou un dysfonctionnement moteur, entraînant une incapacité à rester sur la plate-forme. Une équipe dirigée par les Drs Kiyoharu J. Miyagishima et Francisco M. Nadal-Nicolás a redessiné la plate-forme OMR conventionnelle pour fournir un confinement semi-fermé. Cela permet pour la première fois d’enregistrer le réflexe optomoteur chez l’écureuil terrestre à 13 lignes, qui est l’un des rares mammifères à pouvoir voir la couleur. Il a une traînée visuelle avec une forte densité de cônes similaires à la macula humaine, fournissant un modèle attrayant pour étudier les effets sur le système visuel du cône.

Introduction

Les écureuils terrestres offrent un modèle unique et précieux pour étudier la fonction visuelle en raison de leur mode de vie diurne et de leurs rétines dominées par les cônes, qui imitent étroitement la vision humaine1. Ceci, associé aux avantages pratiques de leur utilisation (taille plus petite, coût d’élevage inférieur) par rapport aux primates, en fait un modèle idéal pour la recherche translationnelle sur les lésions rétiniennes, les maladies ou les effets secondaires oculaires des médicaments sur les changements de vision des couleurs 2,3,4,5,6. La recherche préclinique sur les maladies de la rétine repose sur la capacité d’évaluer si un animal peut voir. Le réflexe optomoteur (OMR) offre une méthode cliniquement pertinente pour évaluer la fonction visuelle chez les animaux sans avoir besoin d’anesthésie, permettant une mesure précise de l’acuité visuelle 7,8. Dans ce test, l’animal suit un motif de rayures rotatives avec son regard. Les bandes rotatives induisent la perception d’un mouvement global dans l’environnement, déclenchant un mouvement involontaire de la tête - l’OMR. Ce réflexe sert à stabiliser visuellement l’environnement et peut être utilisé pour quantifier la capacité de vision d’un animal en ajustant progressivement la fréquence spatiale ou le contraste du stimulus. Lorsque le stimulus devient plus difficile à percevoir, l’OMR n’est finalement pas déclenché, ce qui permet de déterminer l’acuité visuelle ou le seuil de contraste. L’avantage de l’OMR est qu’il s’agit d’un réflexe. Ainsi, aucune formation n’est requise, et la fixation de la tête ou la chirurgie n’est pas nécessaire. Le réflexe est présent même chez les très jeunes animaux (à l’ouverture des yeux)9,10, ce qui permet d’étudier les maladies précoces. De plus, comme il n’est pas invasif, des mesures longitudinales peuvent être effectuées pour suivre la progression de la maladie.

La plupart des tests OMR sont effectués à l’aide de systèmes personnalisés ou commerciaux qui consistent en une plate-forme surélevée où l’animal est placé, entourée de quatre écrans affichant des motifs de rayures rotatives noires et blanches. Les bandes se déplacent dans une direction (dans le sens des aiguilles d’une montre ou dans le sens inverse des aiguilles d’une montre), créant un stimulus de mouvement qui suscite une réponse de suivi visuel de la part de l’animal 10,11,12,13,14,15,16. Une caméra est montée au-dessus de l’arène d’essai pour capturer les mouvements de la tête de l’animal évoqués visuellement en réponse au stimulus rotatif. Ces mouvements de la tête sont suivis et analysés pour déterminer la capacité de l’animal à percevoir et à réagir au mouvement, évaluant ainsi son acuité visuelle.

Bien que l’OMR soit couramment utilisé chez les souris et les rats, la mesure de la réponse optomotrice chez les écureuils terrestres à 13 lignes a été difficile en raison de leur hyperactivité et de leur incapacité à rester sur des plates-formes surélevées, même avec un conditionnement préalable. Pour contourner cela, nous avons développé une plateforme qui assure un semi-confinement, facilitant le transfert des animaux vers l’arène. L’objectif de cette méthode est de réduire le temps d’adaptation des animaux au cadre expérimental, ce qui permet d’enregistrer les animaux qui présentent un comportement non coopératif ou qui ont des difficultés à rester sur la plateforme et d’améliorer l’inclusion des animaux dans les études. Nous avons également défini un protocole pour mesurer l’acuité visuelle chez les écureuils à l’aide d’un paramètre de contraste défini expérimentalement et avons ajusté les paramètres de la caméra pour améliorer les résultats d’imagerie, permettant une analyse et un suivi automatisés.

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Protocole

Les procédures impliquant des animaux ont été menées dans le respect des lois des États-Unis et des règlements du ministère de l’Agriculture. Toutes les expériences sur des animaux ont été menées conformément aux protocoles approuvés par le Comité des animaux et des soins et de l’utilisation du National Eye Institute des National Institutes of Health. Les écureuils terrestres mâles et femelles à 13 lignes (âgés de 6 à 8 mois) utilisés dans cette étude ont été achetés à la colonie d’écureuils d’Oshkosh de l’Université du Wisconsin. Les souris (rd10 : 1 mois, CX3CR1GFP/+ : 6,5 mois) utilisées dans cette étude ont été élevées dans notre animalerie. Les animaux et leurs cages ont été sélectionnés au hasard et répartis dans des groupes expérimentaux.

1. Préparation de la plate-forme prototype et du tunnel de manutention modifié

REMARQUE : Les plates-formes plates rondes sont couramment utilisées dans les systèmes conçus pour mesurer la réponse optomotrice13. Cependant, les modèles de rongeurs hyperactifs, tels que les écureuils, ont souvent du mal à maintenir leur stabilité sur ces plateformes. Cette conception fournit un espace semi-clos, ce qui aide les animaux à s’habituer rapidement et réduit les comportements anxiogènes. Cette amélioration améliore la capacité de concentration de l’animal et minimise les cas de déséquilibre ou de chute pendant les enregistrements.

  1. Dans un logiciel de dessin CAO (par exemple, OpenSCAD ou FreeCAD), concevez la plate-forme (gris) et le boîtier (rouge) comme illustré à la figure 1.
    1. Assurez-vous que les dimensions clés de la plate-forme d’écureuil sont maintenues, à savoir la longueur et la largeur (L x l) : 129 mm x 81 mm, l’épaisseur : 7 mm et la hauteur de la paroi qui s’étend autour du périmètre : 8 mm. Utilisez le fichier de document standard CAD gratuit fourni pour la plate-forme prototype (écureuil) utilisée dans cette étude de preuve de concept (Supplementary Coding File 1).
    2. Assurez-vous que les dimensions clés du boîtier supérieur amovible (de haut en bas) sont maintenues : la longueur (119,5 cm) et la largeur (76,2 cm), la hauteur des côtés (50,8 mm) et l’épaisseur de la pièce (3 mm). Utilisez le fichier de document standard CAD gratuit fourni pour reproduire le boîtier supérieur amovible (écureuil) utilisé dans cette étude de validation de concept (fichier de codage supplémentaire 2).
  2. Ajustez le diamètre du trou traversant à la base de la plate-forme au besoin pour s’adapter au socle utilisé pour élever la plate-forme. Le diamètre illustré est de 40 mm.
  3. Imprimez la plate-forme à l’aide d’un filament blanc opaque. Cela permet à la caméra d’obtenir un contraste maximal, ce qui permet au logiciel de suivi de détecter correctement le contour de l’animal sur la plate-forme.
  4. Imprimez le boîtier supérieur amovible avec un filament foncé opaque (par exemple, rouge). Cela donne aux rongeurs une sensation d’abri, ce qui facilite leur guidage dans le tunnel avant qu’ils ne soient soulevés et transférés vers l’arène.
  5. Demandez à un machiniste de couper le tube carré transparent extrudé en acrylique à l’aide d’une scie à table de sorte que l’extrémité longue ait une longueur de ~ 101,6 mm. Assurez-vous d’utiliser des lunettes de protection et un bâton poussoir pour guider l’acrylique à travers la lame tout en protégeant vos mains contre les blessures potentielles.
  6. À l’aide de la scie à table ou d’un outil rotatif portatif équipé d’une meule de coupe abrasive, retirez l’une des longues faces rectangulaires. Cela crée un toit ouvert à travers lequel la caméra montée au-dessus aura une vue dégagée de la position de l’animal et des mouvements de la tête.
  7. Nettoyez tous les bords avec une lime à main ou du papier de verre. Assemblez le tunnel de manutention modifié à l’aide du tube carré transparent extrudé en acrylique coupé à longueur avec le boîtier supérieur amovible imprimé en 3D en plaçant le boîtier sur le dessus de la face ouverte.

2. Mise en place de l’arène OMR

  1. Désinfectez la plate-forme et l’enclos du tube carré avec un nettoyant/désinfectant avant et entre les animaux pour éliminer les signaux olfactifs indésirables.
    REMARQUE : Bien que des gants en cuir soient utilisés pour manipuler les animaux et entrer en contact direct avec eux, ils ne sont pas portés pendant les enregistrements et ne causent pas d’effets confondants durables ou observables.
  2. Déchirez un petit morceau d’essuie-tout mesurant environ 50 mm x 50 mm et pliez-le pour couvrir la surface supérieure du piédestal. Placez la plate-forme imprimée en 3D sur le piédestal (14 pouces de haut) avec le morceau de serviette en papier en place.
    REMARQUE : Le papier ajuste l’ajustement de la plate-forme, empêche les mouvements involontaires, fournit un fond blanc uniforme pour l’imagerie (si la surface du piédestal n’est pas blanche) et agit comme une couche absorbante au cas où l’animal urinerait pendant l’enregistrement, empêchant la plate-forme de devenir glissante.
  3. En portant des gants de travail en cuir, guidez doucement l’animal dans l’ensemble de l’enclos en tube carré.
  4. Transférez l’animal dans l’arène en plaçant l’enclos sur la plate-forme (figure 1J).
  5. Détachez soigneusement l’enclos supérieur amovible en laissant l’animal dans le tube carré transparent extrudé en acrylique sur la plate-forme. Fermez la porte du système OMR

3. Configuration des paramètres du logiciel OMR

REMARQUE : Le système OMR illustré utilise un appareil photo industriel compact doté d’un capteur CMOS 1/3" sensible aux IR avec un obturateur global à 25 images par seconde (ips). La caméra est équipée d’un objectif grand-angle F1.6, permettant une vue complète de haut en bas de l’arène. Des tests préliminaires d’acuité visuelle effectués sur des écureuils à l’aide du réglage de contraste standard de 100 % ont révélé que l’acuité visuelle des écureuils dépassait les limites de résolution du matériel. Les écrans de commutation dans le plan Full HD de 23,8 pouces utilisés dans la configuration ont une résolution de seulement 1920 pixels de largeur, et le logiciel est donc codé en dur avec une fréquence spatiale maximale de 2 cyc/°. À titre de comparaison, l’acuité visuelle des souris C57Bl/6 est d’environ 0,3-0,5 cyc/°. À 2 cyc/°, chaque bande a une largeur moyenne de 5,3 pixels. Avec une vitesse de rotation de 12°/s et une fréquence d’images de 60 images par seconde, le motif se décale de 0,2° par image, ce qui équivaut à 4,2 pixels par image, en supposant une vitesse de pixel uniforme. À des fréquences spatiales proches de 2 cyc/°, le motif de bandes s’approche de la limite de résolution où le repliement peut se produire, ce qui donne l’impression que le motif se déplace vers l’arrière. Pour éviter cet artefact, le logiciel est codé en dur pour plafonner la fréquence spatiale à 2 cyc/°.

Ainsi, pour les écureuils, nous avons conçu un protocole où nous effectuons le test d’acuité mais avec un contraste beaucoup plus faible. Nous avons sélectionné un réglage de contraste (12,78 %) où les écureuils étaient incapables de voir le motif rayé à 2 cycles/°.

  1. Dans le panneau vidéo en direct, assurez-vous que l’animal s’adapte bien au nouvel environnement et qu’il commence à bouger moins et à se calmer.
    1. À 2 cyc/°, chaque bande a une largeur moyenne de 5,3 pixels. Réglez la vitesse de rotation sur 12°/s et une fréquence d’images de 60 images par seconde ; Le motif se décale de 0,2° par image, ce qui équivaut à 4,2 pixels par image, en supposant une vitesse de pixel uniforme. Réglez les fréquences spatiales à une température proche de 2 cyc/° de sorte que le motif de bandes s’approche de la limite de résolution où le crénelage peut se produire, ce qui donne l’impression que le motif recule. Pour éviter cet artefact, codez en dur le logiciel pour plafonner la fréquence spatiale à 2 cyc/°.
      REMARQUE : Pour les écureuils, nous avons conçu un protocole où nous effectuons le test d’acuité mais à un contraste beaucoup plus faible. Nous avons sélectionné un réglage de contraste (12,78 %) auquel les écureuils étaient incapables de voir le motif rayé à 2 cycles/°.
  2. Télécharger le fichier de codage supplémentaire 3. Ouvrez le logiciel OptoDrum.
  3. Sous l’onglet Paramètres, cliquez sur Importer les paramètres. Chargez le fichier de codage supplémentaire 3.
  4. Sous l’onglet Paramètres, définissez le décalage du seuil d’arrière-plan sur 17, la taille minimale de l’animal [px] sur 30 et la largeur maximale de la queue [ % de la taille] sur 1.
  5. Sous les paramètres de l’appareil photo, laissez l’option Inverser la vidéo et les commandes manuelles de l’appareil photo décochées et Lumière IR désactivée.
  6. Élargissez la position et la taille de la région d’intérêt pour le suivi afin d’accueillir l’écureuil s’il se penche à l’extérieur de l’ouverture du tube. Les valeurs suggérées sont Position : X : 359, Y : 237, Size : X : 570, Y : 455. N’étendez pas le retour sur investissement sur l’écran des stimuli, car cela pourrait entraîner des faux positifs.
  7. Sélectionnez Configuration de session dans le panneau supérieur (Figure 2A).
    1. Pour l’escalier, définissez l’acuité spatiale estimée comme suit. Régler l’acuité attendue à 1.800 cyc/° (648 cycles) ; régler la résolution optimale du stimulus à 0,5 cyc/° (180 cycles) ; Réglez la résolution de mesure à 0,100 cyC/° (36 cycles).
    2. Pour l’escalier, fixez le nombre de confirmations requises comme suit. Fixé à 3 pour les essais échoués ; réglé pour les essais réussis à 2.
      REMARQUE : Le nombre d’essais réussis peut être augmenté afin de réduire davantage l’occurrence de confirmations faussement positives. Cependant, avec l’utilisation de cette plate-forme et du tunnel de manutention modifié, le taux d’erreur reste assez faible. Cela est principalement dû à l’immobilité relative des écureuils et à la rareté des mouvements de rotation de la tête en dehors de ceux provoqués par des stimuli évoqués visuellement.
  8. Sous l’onglet Escalier (Figure 2B), définissez l’anticrénelage sur width sur 3 px et laissez l’option sinusoïdale décochée.
  9. Pour les critères de test, verrouillez le contraste à 12,78 % et verrouillez la vitesse de rotation à 12 °/s.
    REMARQUE : Au réglage de contraste de 12,78 %, l’acuité spatiale des écureuils est limitée à environ 1,5-1,8 cyc/°. Ne dépassant plus les paramètres matériels maximum, cette configuration permet d’évaluer l’acuité spatiale en réponse à une maladie ou à une blessure.
  10. Une fois que deux des trois paramètres sont verrouillés, l’option Définir automatiquement les paramètres devient active (et n’est plus grisée). Cochez la case à côté de Définir automatiquement les paramètres.
  11. Réglez le sens de rotation selon que l’on s’attend à ce qu’une déficience visuelle se trouve dans un œil ou dans les deux. Notez que pour chaque œil, seul le mouvement dans la direction temporale-nasale suscite un suivi. Par conséquent, évaluez les lésions de l’œil gauche à l’aide d’une stimulation dans le sens des aiguilles d’une montre (CW), car la stimulation dans le sens inverse des aiguilles d’une montre (CCW) est censée provoquer des réponses normales. En cas de dégénérescence ou de lésion attendue dans les deux yeux, une rotation du stimulus dans les deux sens peut être utilisée.
  12. Cliquez sur Démarrer l’essai pour commencer la présentation du stimulus. La caméra ci-dessus commencera à enregistrer et à suivre les mouvements de la tête des animaux. Pendant que le stimulus est présenté, cliquez sur l’onglet Analyse pour afficher en temps réel les paramètres Vitesses angulaires (rotation de la tête), Qualité de la piste et Score. À la fin de chaque présentation de stimulus, le logiciel déterminera automatiquement s’il faut passer (indiqué par la coche verte) au Cyc/° suivant, répéter l’essai ou réduire le Cyc/° (indiqué par le X rouge).
  13. Pendant l’enregistrement, si le logiciel de suivi retourne correctement les marqueurs de nez (rouge) et de queue (vert), appuyez sur la touche Ctrl du clavier pour permettre la commande manuelle afin de corriger l’orientation tête-queue.
  14. Si l’animal tombe de la plate-forme, interrompez l’essai en appuyant sur Pause l’évaluation ou en cliquant sur la barre d’espace. Retirez le tunnel de manipulation de la plate-forme et utilisez-le avec le couvercle pour manipuler l’animal en toute sécurité et le remettre sur la plate-forme. Une fois que l’animal est prêt, cliquez sur Reprendre l’évaluation pour continuer l’essai.
  15. Une fois que tous les essais ont été terminés, cliquez sur l’onglet Résumé pour afficher les essais réussis en vert et les essais infructueux en rouge. L’essai entouré en vert indique le seuil d’acuité visuelle de l’écureuil en utilisant le contraste de 12,78 %. Remettez l’animal avec précaution dans sa cage d’origine.

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Résultats

L’OMR est considéré comme réussi une fois que le logiciel identifie le seuil visuel déterminé par la performance de l’animal dans les essais de discrimination de fréquence spatiale. Plus précisément, le seuil est défini comme suit : deux essais réussis à une fréquence spatiale donnée (mesurée en cyc/°), suivis de trois essais infructueux à la fréquence spatiale immédiatement supérieure. La RMO a été réalisée sur des spermophiles de 13 rangées (âgés de 6 à 8 mois) à l’aide de la plate-forme plate ronde standard (

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Discussion

Étapes critiques

Faciliter l’entrée dans le tunnel - Un point important à considérer est que les écureuils ont besoin de l’ensemble de l’enceinte imprimé en 3D pour servir de couvercle temporaire pour le tunnel rectangulaire en acrylique ; sans lui, ils n’entreront pas facilement. Dans notre établissement, les écureuils terrestres à 13 lignes sont régulièrement logés avec un cylindre rouge de la taille d’un rat (longueur : 15,24 cm, diamètre :...

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Déclarations de divulgation

Kiyoharu Miyagishima, Francisco Nadal-Nicolás, John Ball et Wei Li ne déclarent aucun intérêt financier concurrent. Thomas Munch est le propriétaire et le directeur de la recherche et du développement de Striatech GmbH. Boris Benkner est le fondateur et le directeur général de Striatech GmbH.

Remerciements

Cette recherche a été financée [en partie] par le programme de recherche intra-muros du NIH, National Eye Institute. Ce travail a également été soutenu par le Bureau du secrétaire adjoint à la Défense pour les affaires de santé et la Direction de la recherche et du développement de l’Agence de santé de la défense J9, par le biais du programme de recherche sur la vision sous le numéro d’attribution n°. (CDMRPL-18-0-VR180205). Les opinions, interprétations, conclusions et recommandations sont celles de l’auteur et ne sont pas nécessairement approuvées par le ministère de la Défense. Les auteurs remercient le Dr Wenxin Ma pour avoir fourni les souris RD10 et CX3CR1GFP/+ , le Dr Haohua Qian (Visual Function Core, NEI, NIH) pour la discussion perspicace et l’assistance technique avec l’OMR, l’atelier d’usinage NIMH/NINDS/NICHD pour son aide à la fabrication des composants, et Charles King (NIH Library) pour son aide à l’impression 3D.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Kit d’outils rotatifs sans fil 12V Max Lithium-ionDremel 8220F0138220JAPour couper et polir le tube carré en acrylique.
https://www.dremel.com/us/en/p/8220-1-28-f0138220aa
6-0 VICRYL ENDUIT (POLYGLACTIN 910) SutureÉthiconJ670GPour suturer la paupière.
https://www.ethicon.com/na/epc/code/j670g?lang=en-default
Tube carré en acrylique transparent incolore (2 » x 12 »)Centre de Plastique du CanalRéf. RT-300161Tunnel rectangulaire transparent (pour souris).
https://www.canalplastic.com/products/clear-colorless-acrylic-square-tube
Tube carré en acrylique transparent incolore (3 » x 12 »)Centre de Plastique du CanalRéf. RT-300168Tunnel rectangulaire clair (pour l’écureuil).
https://www.canalplastic.com/products/clear-colorless-acrylic-square-tube
DREMEL EZ SpeedClic : Disques à tronçonner en plastiqueDremelRéf. SC476Pour couper le tube carré en acrylique
Imprimante 3D F270StratasysPour imprimer des modèles 3D de qualité technique des plateformes.
https://support.stratasys.com/en/printers/fdm-legacy/uprint
Fluriso (isoflurane)VetOne  ;502017Anesthésie générale. Liquide pour inhalation.
http://vetone.net/Default/GetFile?id=7dda0c60-45fa-e711-bf2e-0024e8785118
GratuitCAD 1.0  ;Modeleur 3D paramétrique open-source
Logiciel Igor Pro Version 6.3.7.2WaveMetrics, IncPour tracer les graphiques. https://www.wavemetrics.com/
Masques d’anesthésie à profil bas pour vaporisateurs traditionnels
  ; pour SomnoFlo. Extra Large (animaux de plus de 300 g)  ;		Société scientifique KentSOMNO-0804Pour l’anesthésie générale.
https://www.kentscientific.com/products/low-profile-anesthesia-masks-for-somnosuite/
MakerBot Print pour Windows version 4.10.1.2056MakerBot Industries, LLCLogiciel d’orientation des pièces pour l’impression
Imprimante 3D de bureau MakerBot Replicator (5e génération)MakerBot Industries, LLCMP05825Pour l’impression 3D de versions prototypes des plateformes.
https://www.rnd-tech.com/product/makerbot-replicator-desktop-3d-printer-5th-gen/
Microsoft ExcelMicrosoftTableur pour analyser les données. microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel
Gants de travail en cuir polyvalentsSteiner IndustriesSPC02Pour manipuler les écureuils.
https://www.steinerindustries.com/leather-palm/product/steiner-spc02-leather-palm-work-glove
OptoDrum PlusSTRIA. TECHAppareil commercial de mesure du réflexe optomoteur (acuité visuelle et sensibilité aux contrastes) https://stria.tech/products/optodrum/  ;
Logiciel OptoDrum Version 1.7.3STRIA. TECHLogiciel permettant d’effectuer des mesures automatisées du réflexe optomoteur.
Peroxigard prêt à l’emploi (nettoyant/désinfectant)PeroxigardPRTU242101Pour nettoyer/désinfecter la plate-forme et le tube carré en acrylique entre les expériences.
https://peroxigard.com/product-information/rtu/
Appareil d’anesthésie Pureline M6000
avec concentrateur d’O2		Penn Veterinary Supply, Inc.SUPM6000Pour l’anesthésie animale.
https://www.pennvet.com/customer/portal/catalog/home?urile=wcm:path%3APennVet+Catalog/Product+Catalog/SUPM6000/Pureline+M6000+Anesthesia+Mach+w_O2+Conc
Imprimante 3D uPrint SE PlusStratasysPour imprimer des modèles 3D de qualité technique des plateformes.
https://www.makerbot.com/makerbot-print/
Filament PLA MakerBot opaque blanc,
Grande bobine pour Replicator+ (0,9 kg, 2 lb)		MakerBot Industries, LLCMP05780Du filament pour imprimer en 3D les plateformes.
https://store.ultimaker.com/3d-printer-materials/replicator-series-materials/makerbot-pla-material-large-spool-for-replicator
Traitement pharmacologique
Sulfates de néomycine et de polymyxine B
et pommade ophtalmique à la bacitracine et au zinc, USP		Bausch & LombRéf. RX-0069Triple antibiotique ophtalmique pour prévenir les infections oculaires
Chlorhydrate de proparacaïne 0,5 %Akorn17478-263-12Anesthésique local pour l’instillation ophtalmique

Références

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