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Article de méthode

Détection des acides nucléiques et du gène de résistance aux médicaments de Mycoplasma pneumoniae

830 vues

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DOI :

10.3791/68500

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19 septembre 2025

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Dans cet article

Résumé

Ce protocole offre un moyen rapide et fiable de détecter les infections à Mycoplasma pneumoniae et d’identifier la résistance aux antibiotiques. Il aide les praticiens à choisir plus rapidement les bons traitements, améliorant ainsi les soins aux patients atteints de pneumonie et favorisant une meilleure utilisation des antibiotiques

Résumé

Mycoplasma pneumoniae (Mp) représente l’un des agents pathogènes les plus répandus responsables de la pneumonie communautaire (POC) dans les populations pédiatriques. La détection des gènes de résistance à Mycoplasma pneumoniae fournit un support technique solide et une base théorique pour le diagnostic clinique précis et le traitement des infections à MP. Un diagnostic et une évaluation précis de la résistance aux médicaments dans l’infection à Mp sont essentiels pour le traitement clinique. Les méthodes de détection courantes de Mycoplasma pneumoniae comprennent la culture, la détection d’anticorps et les tests basés sur la biologie moléculaire. La culture de mp est l’étalon-or pour le diagnostic, mais nécessite un milieu spécifique, prend du temps et a une faible sensibilité. La détection du Mp par anticorps est largement utilisée ; Cependant, des faux négatifs peuvent survenir au stade précoce de l’infection. La détection basée sur la biologie moléculaire offre un délai d’exécution rapide, un faible risque de contamination, une sensibilité élevée, une spécificité élevée et n’est pas limitée par le moment du prélèvement de l’échantillon ou l’état immunitaire. Il a donc été reconnu comme un nouvel étalon-or pour le diagnostic de l’infection à Mycoplasma pneumoniae . Les agents macrolides sont le traitement de premier choix pour l’infection à Mp chez les enfants. Cependant, avec l’utilisation intensive de macrolides dans les infections des voies respiratoires chez les enfants, l’incidence de l’infection à Mycoplasma pneumoniae résistante aux médicaments a augmenté. Les patients infectés par des souches résistantes présentent une durée de fièvre significativement plus longue, une hospitalisation prolongée et une fièvre prolongée après l’administration par rapport à ceux infectés par des souches sensibles. Les sites de mutation identifiés à ce jour sont les suivants : 2063, 2064, 2067 et 2617. En Chine, les mutations ponctuelles n’ont été documentées qu’aux positions 2063 et 2064, la substitution de A à G à la position 2063 étant la plus courante. Pour ces sites, la réaction en chaîne par polymérase (PCR) combinée à la technologie des sondes fluorescentes a été utilisée pour détecter les acides nucléiques et les mutations de résistance aux médicaments de Mycoplasma pneumoniae dans des échantillons d’expectorations humaines. La détection des gènes de résistance à Mycoplasma pneumoniae offre un soutien technique crucial et une base théorique pour un diagnostic précis et un traitement efficace de l’infection à Mp.

Introduction

Mycoplasma pneumoniae (Mp) est le plus petit micro-organisme pathogène capable de survie indépendante, situé à une position intermédiaire entre les bactéries et les virus. Elle est principalement disséminée par des gouttelettes respiratoires ou des aérosols et constitue le deuxième agent pathogène le plus fréquent associé à la pneumonie communautaire (POC) chez les enfants1, responsable de 20 à 40 % des cas de POC2. Mp présente une résistance inhérente aux antibiotiques β-lactamines, tels que la pénicilline et les céphalosporines, en raison de son absence de paroi cellulaire, qu....

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Protocole

Tous les protocoles d’étude ont été examinés et approuvés par le Comité d’éthique médicale de l’Hôpital populaire de Heyuan (Approbation n°. YXYJLL-LW2025001). Tous les patients ont fourni un consentement éclairé écrit avant de participer.

1. Prélèvement d’échantillons

REMARQUE : Faites preuve de prudence en maintenant une technique d’asepsie pendant le prélèvement de l’échantillon.

  1. Prélever des échantillons d’expectorations du patient ou du patient suspect. Obtenir des échantillons dans les 3 jours suivant l’apparition de la maladie du patient.
  2. Demandez au ....

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Résultats

Après la liquéfaction, l’extraction des acides nucléiques et l’amplification par PCR par fluorescence d’échantillons d’expectorations, la valeur de départ, la valeur de fin et la valeur seuil de la ligne de base ont été modifiées après l’analyse de la courbe d’amplification. La valeur de début était 3 et la valeur de fin était 20.

Les résultats représentatifs de cette expérience étaient positifs pour l’acide nucléique Mp, et une.......

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Discussion

La PCR et ses techniques dérivées présentent une sensibilité et une spécificité supérieures à celles des méthodes sérologiques dans l’identification, le typage et la détection de la résistance aux médicaments chez Mycoplasma pneumoniae (MP). De plus, les techniques basées sur la PCR offrent une facilité d’utilisation et une réduction des coûts, ce qui en fait une alternative viable pour les diagnostics cliniques de routine36. Mp est un agent pathogène not.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.

Remerciements

Les réactifs expérimentaux sont soutenus par le Heyuan Key Laboratory of Molecular Diagnosis & Disease Prevention and Treatment, Doctors Station de la province du Guangdong.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Instrument automatisé d’extraction d’acides nucléiquesGuangzhou Da 'an Gene Co., Ltd.Intelligent 32
Filtres à emboutsCoring Life Science Co., Ltd.298220010-10 et micro ; L
Filtres à emboutsCoring Life Science Co., Ltd.030230011-50 et micro ; L
Filtres à emboutsCoring Life Science Co., Ltd.056230015-300 et micro ; L
MicrotubesCoring Life Science Co., Ltd.141249341,5 ml
Mycoplasma pneumoniae kit de détection de sites de mutation de résistance aux médicaments (méthode PCR de fluorescence)Jiangsu Mole Biotechnology Co., Ltd.20241111
Réactif d’extraction d’acides nucléaires (méthode des billes magnétiques)Shengxiang Biotechnology Co., Ltd.Référence G24004
Tubes PCRDN Biotech(Hong Kong)  ; Co., Ltd.61210030,2 ml
Instrument de PCR fluorescente en temps réelBIO-RADLe CFX96

Références

  1. Waites, K. B., Xiao, L., Liu, Y., Balish, M. F., Atkinson, T. P. Mycoplasma pneumoniae from the Respiratory Tract and Beyond. Clin Microbiol Rev. 30 (3), 747-809 (2017).
  2. Leal, S. M., et al. Evaluation of C....

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Réimpressions et autorisations

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