Les lignées cellulaires résistantes aux médicaments permettent de comprendre les mécanismes de résistance aux traitements et d’évaluer non cliniquement de nouveaux composés, de médicaments repositionnés et de thérapies combinées. Cet article présente un protocole pour créer des lignées cellulaires résistantes en exposant les lignées cellulaires parentales à des augmentations progressives de la concentration du médicament cible.
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Article de méthode
Développement de lignées cellulaires résistantes aux médicaments pour des procédures expérimentales
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le développement de lignées cellulaires résistantes aux médicaments est essentiel pour comprendre les mécanismes de résistance aux médicaments et identifier des stratégies pour surmonter l’échec du traitement du cancer. Les modèles de résistance permettent l’évaluation préclinique de nouveaux composés, de médicaments repositionnés et de thérapies combinées. Pour générer des cellules résistantes, les lignées cellulaires cancéreuses parentales sont exposées à plusieurs reprises à des concentrations croissantes du médicament cible pendant plusieurs semaines. Les cellules qui survivent et prolifèrent à chaque étape sont sélectionnées, développées et exposées à des doses de médicament plus élevées. Le développement de la résistance est confirmé par la quantification et la comparaison des valeurs de concentration inhibitrice demi-maximale (CI50) entre les cellules parentales et résistantes à l’aide de tests de viabilité cellulaire et d’analyses de régression non linéaires. Une augmentation significative des valeurs CI50 indique une adaptation réussie à la pression médicamenteuse et le développement d’une résistance. Ces lignées cellulaires résistantes aux médicaments sont disponibles pour des analyses complètes, telles que le séquençage de microréseaux et de cellules uniques, ainsi que pour diverses expériences in vitro ou in vivo . Ces modèles fournissent des outils précieux pour étudier des stratégies thérapeutiques potentielles visant à surmonter la résistance aux médicaments.
Introduction
La chimiothérapie est l’option de traitement la plus fréquemment utilisée pour les cancers locaux qui ne se prêtent pas à la chirurgie ou à la radiothérapie ou les cancers métastatiques. Les médicaments moléculaires ciblés et la chimiothérapie sont utilisés comme traitements de première intention pour de nombreuses tumeurs malignes, et leur efficacité est largement reconnue. Certains cancers présentent une résistance à certains médicaments dès le début du traitement, ce qui rend le traitement inefficace. Cependant, dans des cas plus fréquents, le traitement qui était initialement efficace devient inefficace en raison du développement ....
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Protocole
1. Culture cellulaire et tests de viabilité cellulaire
REMARQUE : Le paclitaxel est un médicament anticancéreux et est cytotoxique. Lorsque vous le manipulez, portez une blouse, des lunettes de protection et des gants, et travaillez à l’intérieur d’une armoire de sécurité pour éviter l’inhalation dans le corps. Le DMSO n’est pas hautement cytotoxique, mais lorsqu’il entre en contact avec la peau ou les muqueuses, la perméabilité des médicaments dissous augmente, alors portez une blouse, des lunettes et des gants lorsque vous le manipulez.
- Cultiver des cellules DU-145 dans une bo....
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Résultats
En utilisant cette méthode, nous avons précédemment passé 9 mois à établir avec succès des cellules DU145 résistantes au paclitaxel (DU145-TxR). Les résultats de l’essai de viabilité cellulaire ont montré que la valeur IC50 du paclitaxel pour la lignée cellulaire parentale DU145 était de 1,1 nM, tandis que la valeur IC50 pour DU145-TxR était 149,6 fois plus élevée que celle de la lignée cellulaire parentale (CI50 : 164,6 nM) (tableau 1 et figure 2
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Discussion
Le développement de lignées cellulaires cancéreuses résistantes aux médicaments est une méthode établie pour étudier la toxicité des médicaments et les mécanismes de résistance, mais le premier défi auquel les chercheurs sont confrontés est de choisir un modèle approprié pour exprimer la résistance. Une méthode courante pour créer des lignées cellulaires résistantes aux médicaments in vitro consiste à exposer la lignée cellulaire au médicament cible, mais il est nécessaire de déterminer .......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas de conflits d’intérêts potentiels.
Remerciements
Ce travail a été soutenu en partie par la subvention P01 CA093900 des National Institutes of Health.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 0,05 % Trypsine-EDTA | Gibco | 25300-054 | |
| 10 mL Pipette sérologique jetable | Fisher scientific | 13-678-11E | |
| Boîte de 100 mm | Corning | 353003 | |
| Tube conique de 15 mL | Corning | 352097 | |
| 2,0 mL Flacons cryogéniques | Corning | 431386 | |
| 96 puits Plaque | de culture cellulaireCorning | 353072 | |
| Lame de chambre de comptage cellulaire | Invitrogen | C10228 | |
| Réactif de prolifération cellulaire WST-1 | Sigma | 5015944001 | |
| Centrifuge 5702 R | eppendorf | ||
| innombrables II | Invitrogen | Compteur de cellules | |
| Diméthyl sulfoxyde | Sigma | D2650 | |
| DPBS | Gibco | D4W2J | |
| DU145 | ATCC | HTB-81 | Lignée cellulaire du cancer de la prostate |
| EVOS FLc | Thermo Fisher Scientific | Microscope numérique inversé | |
| FBS | Gibco | Gibco A5670701 | |
| Paclitaxel | Selleck | S1150 | |
| Pénicilline&ndash ; streptomycine | Invitrogen | 15140-122 | |
| RPMI 1640 | Gibco | 11875-093 | |
| Synergy H1 | BioTek | Lecteur de microplaques | |
| Trypan Blue solution 0,4 % | Invitrogen | 15250061 |
Références
- Zahreddine, H., Borden, K. L. Mechanisms and insights into drug resistance in cancer. Fron Pharmacol. 4, 28(2013).
- Emran, T. B., et al. Multidrug resistance in cancer: understanding molecular mechanisms, immunoprevention and therapeutic ap....
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Réimpressions et autorisations
