Intégration de la décoction de Yangjing Zhongyu dans les cycles de FIV/ICSI-ET chez les patientes dont la réserve ovarienne est diminuée

Résumé

Cette étude démontre que la décoction de Yangjing Zhongyu améliore les résultats de la procréation assistée chez les femmes dont la réserve ovarienne est diminuée en améliorant la qualité des ovocytes et des embryons. Dans un modèle d’insuffisance ovarienne prématurée chez le rat, la décoction a rétabli l’équilibre hormonal, favorisé le développement des follicules et modulé l’autophagie et le métabolisme des lipides.

Résumé

La décoction de Yangjing Zhongyu (YZD), une formule traditionnelle chinoise à base de plantes, a été suggérée pour améliorer la fonction ovarienne et la fertilité, mais les preuves cliniques standardisées restent limitées. Cette étude a évalué les effets de YZD chez les femmes présentant une réserve ovarienne diminuée (DOR) subissant une FIV/ICSI-ET, ainsi qu’une validation mécaniste dans un modèle de rat d’insuffisance ovarienne prématurée (POF). Au cours de l’essai clinique, les patients atteints de DOR ont reçu soit le protocole standard des antagonistes de la GnRH, seul, soit en association avec YZD. Les caractéristiques de base entre les groupes étaient comparables, et le groupe YZD a montré un nombre plus élevé d’ovocytes récupérés et d’embryons de haute qualité, ainsi que des scores améliorés du syndrome de la médecine traditionnelle chinoise. En parallèle, la POF a été induite chez le rat, et les animaux traités par YZD ont présenté une amélioration de la cyclicité œstrale, une restauration des taux sériques d’œstradiol, une réduction de l’hormone folliculo-stimulante et une histologie ovarienne plus saine. La microscopie électronique a révélé que YZD réduisait la formation excessive d’autophagosomes et l’accumulation de lipides dans les cellules ovarienne, suggérant une régulation de l’axe autophagie-métabolisme lipidique. Ensemble, ces résultats indiquent que YZD améliore la fonction de réserve ovarienne, améliore le développement de l’embryon et peut augmenter le potentiel de grossesse chez les femmes atteintes de DOR. Ce protocole standardisé fournit un cadre reproductible pour l’intégration de YZD dans les cycles de technologie de procréation assistée, soutenant ainsi son potentiel translationnel en médecine clinique de la reproduction.

Introduction

La diminution de la réserve ovarienne (DOR) est une condition clinique qui compromet la santé reproductive féminine et se caractérise par une réduction du nombre ou de la qualité des follicules ovariens¹. Cliniquement, elle se traduit par une diminution du nombre de follicules antraux, une réduction des taux d’hormone anti-müllérienne (AMH) ou des concentrations élevées d’hormone folliculo-stimulante (FSH)². Le DOR représente environ 10 % des cas d’infertilité et représente un obstacle majeur à la réussite de la conception³. Dans le contexte de la technologie de procréation assistée (TAR), la prévalence de la DOR est estimée à 19 % à 26 % aux États-Unis⁴, et elle est associée à des taux de grossesse réduits, à une incidence plus élevée de prééclampsie et à un risque accru de fausses couches récurrentes⁵. Malgré la disponibilité de multiples approches thérapeutiques, l’amélioration des résultats du TAR chez les patients atteints de DOR reste un défi considérable, soulignant la nécessité d’interventions nouvelles et efficaces⁶.

La décoction de Yangjing Zhongyu (YZD), une formulation classique de médecine traditionnelle chinoise (MTC) à plusieurs herbes, est utilisée depuis longtemps dans la pratique de la reproduction⁷. On pense qu’il améliore l’équilibre endocrinien et soutient la fonction ovarienne, améliorant ainsi les résultats des cycles de fécondation in vitro et d’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes-transfert d’embryons (FIV/ICSI-ET)⁸. Les données cliniques préliminaires suggèrent que YZD peut améliorer la réponse ovarienne, mais des études mécanistes et translationnelles rigoureuses sont encore limitées. Les voies biologiques précises par lesquelles YZD agit chez les patients DOR restent incertaines ^9,10. La littérature actuelle indique que les composés à base de plantes chinoises peuvent influencer le microenvironnement ovarien par de multiples mécanismes, tels que la modulation de l’expression de l’AMH, l’inhibition des voies de signalisation liées à l’atrésie folliculaire, y compris PI3K/AKT/mTOR, et la réduction des lésions dues au stress oxydatif. Cependant, ces hypothèses mécanistes sont en grande partie indirectes et manquent de validation expérimentale.

Cette étude comble ces lacunes en intégrant l’évaluation clinique à la vérification expérimentale. Plus précisément, nous avons examiné les effets de YZD chez les femmes atteintes de DOR subissant un TAR et étudié ses fondements mécanistes à l’aide d’un modèle de rat DOR induit par un glycoside de triptérygium. Dans les expériences sur les animaux, nous avons surveillé les marqueurs endocriniens (œstradiol et FSH), le nombre de follicules antraux, la formation d’autophagosomes et l’accumulation de lipides dans le tissu ovarien. En combinant les résultats cliniques avec des données mécanistes expérimentales, ce travail fournit un protocole standardisé pour l’incorporation de YZD dans les cycles IVF/ICSI-ET et offre de nouvelles preuves soutenant son potentiel en tant que traitement d’appoint pour améliorer la réserve ovarienne et les résultats reproductifs chez les patientes DOR. La nouveauté de cette étude réside dans sa double approche - reliant l’application clinique standardisée à des connaissances mécanistes - qui fait progresser à la fois l’application clinique et la compréhension théorique de YZD en médecine de la reproduction.

Protocole

Toutes les procédures cliniques ont été menées conformément à la Déclaration d’Helsinki et ont été approuvées par le Comité d’éthique de l’hôpital Changhai de Shanghai (Approbation n° CHEC2022 à 156). Un consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les participants. Les expériences sur les animaux ont été approuvées par le Comité d’éthique du Collège médical de Changhai (Approbation n°. CHEC2022-156) et s’est conformé aux normes nationales de soins aux animaux de laboratoire.

Caractéristiques cliniques

Recrutement et regroupement des patients
D’août 2022 à mars 2023, 78 patients infertiles diagnostiqués avec un syndrome de déficience rénale¹⁰ et cherchant à obtenir un traitement antirétroviral ont été recrutés au Centre de médecine reproductive du premier hôpital affilié de l’Université de médecine navale et au service ambulatoire de l’hôpital Yueyang de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Shanghai. Les participants ont été répartis au hasard dans un groupe témoin ou un groupe de traitement (39 cas chacun) à l’aide de la génération de nombres aléatoires SPSS 23.0.

Critères diagnostiques
Le diagnostic médical occidental fait suite à l’avis du comité 2020 de l’American Society for Reproductive Medicine (ASRM) sur les indicateurs de réserve ovarienne¹¹. Les critères comprenaient la FSH ≥ 10 UI/L, l’œstradiol ≥ 80 pg/mL, le nombre de follicules antraux (AFC) < 7 et l’AMH < 0,5 à 1,1 ng/mL. Le syndrome d’insuffisance rénale a été diagnostiqué selon la gynécologie de la médecine traditionnelle chinoise¹² et les critères d’efficacité diagnostique des syndromes MTC¹³.

Critères d’inclusion et d’exclusion
Les critères d’inclusion étaient les suivants : FIV/ICSI-ET, à l’aide d’un protocole antagoniste ; antécédents de faible réponse ovarienne (< 5 ovocytes prélevés) ; 20-40 ans ; répondre aux critères du syndrome DOR et de la MTC ; et consentement éclairé signé. Les critères d’exclusion comprenaient la pathologie de l’endomètre (polypes, tuberculose, dysplasie, cancer), les malformations utérines, les comorbidités (diabète, lupus), l’hormonothérapie récente (< 3 mois), les antécédents de chirurgie pelvienne, les anomalies chromosomiques ou l’allergie médicamenteuse. Des critères d’élimination ont été appliqués pour l’écart de protocole, les événements indésirables, le retrait ou la conception spontanée dans les 2 semaines suivant l’inscription.

Méthode de médication
Les deux groupes ont subi une évaluation de base le jour 2 et 3 des règles par échographie transvaginale et test hormonal. Le groupe témoin a reçu le schéma antagoniste : FSH recombinante ou gonadotrophine ménopausique humaine, dose initiale de 225 UI/jour par voie intramusculaire pendant 5 jours, suivie d’un ajustement posologique en fonction de la croissance des follicules. Lorsque le diamètre du follicule principal dépassait 12 mm, un antagoniste de la GnRH (0,125 mg/jour par voie sous-cutanée) a été commencé et poursuivi jusqu’au déclenchement. Lorsque ≥ 1 follicule atteignait 18 mm, ≥ 2 atteignait 17 mm ou ≥ 3 atteignait 16 mm, l’ovulation était déclenchée par 250 μg d’hCG recombinante, suivie d’un prélèvement d’ovocytes après 34 à 36 h.

Le groupe de traitement a suivi le même protocole avec l’ajout de la décoction de Yangjing Zhongyu (YZD), administrée par voie orale 2 fois par jour (matin et soir), une décoction par jour, à partir des jours 2-3 du cycle menstruel jusqu’au jour de déclenchement. La formule clinique contenait 12 g de Rehmannia, 12 g de Paeonia lactiflora, 10 g de Cornus officinalis et 12 g d’Angelica sinensis.

Indicateurs d’observation
Les critères de jugement cliniques comprenaient les paramètres de base de l’âge, de l’IMC (calculé en poids (kg)/taille² (m²)), de la durée de l’infertilité, de la FSH, de la dose/durée des gonadotrophines, des scores du syndrome de carence en yin rénal, du nombre de follicules antraux (évalué par échographie transvaginale, de 2 à 9 mm de diamètre), des ovocytes prélevés, des ovocytes de métaphase II (MII) (identifiés lors du prélèvement des ovocytes), des embryons fécondés, des clivages, des embryons de haute qualité (définis selon les critères standard du laboratoire d’embryologie), et le taux de grossesse clinique, qui a été défini comme la présence d’un sac gestationnel à l’échographie à 6-7 semaines de gestation.

Animaux d’expérimentation
Ici, 30 rats Sprague-Dawley femelles (âgés de 8 semaines, 160 à 200 g) ont été acclimatés dans des conditions contrôlées (23 ± 2 °C, 40 % à 45 % d’humidité, cycle lumière/obscurité de 12 h) avec de la nourriture et de l’eau ad libitum .

Préparation du médicament
YZD a été préparé avec Rehmannia 30 g, Angelica 15 g, Paeonia lactiflora 15 g et Cornus officinalis 15 g. Les herbes ont été décoctées dans de l’eau, filtrées à travers un filtre de 200 mailles et concentrées sous pression réduite à 70 °C. Les solutions finales pour les doses faibles, moyennes et élevées étaient de 0,34 g/mL, 0,68 g/mL et 1,35 g/mL, ce qui correspond à 0,5x, 1,0x et 1,2x de la dose clinique de YZD. Les décoctions étaient conservées à 4 °C.

Modélisation et regroupement
Un modèle DOR a été induit par injection intrapéritonéale de glycosides de triptérygium (40 mg/kg par jour pendant 15 jours). Les rats ont été répartis au hasard dans les groupes de traitement à blanc (n = 6), modèle (n = 6) et YZD (doses faibles, moyennes et élevées ; n = 6 chacun). L’administration par gavage (10 ml/kg de poids corporel) a été effectuée 1 fois par jour, à partir du premier jour de l’injection de glycosides de triptérygium et s’est poursuivie pendant 15 jours.

Cytologie vaginale
Les stades du cycle œstral ont été évalués par cytologie exfoliative vaginale. Des frottis vaginaux ont été prélevés une fois par jour (de 8 h à 10 h) avec des cotons-tiges stériles, dilués dans 30 μL de solution saline et examinés au microscope optique à un grossissement de 100x. La période d’observation a duré 15 jours consécutifs. L’indice du cycle œstral normal a été défini comme la proportion de rats présentant des cycles œstraux réguliers de 4 à 5 jours au cours de cette période.

Dosages hormonaux
Le sang total a été prélevé sous anesthésie par ponction cardiaque à la fin de la période de traitement de 15 jours, laissé coaguler à température ambiante pendant 30 min, et centrifugé à 1000 x g pendant 15 min à 4 °C pour obtenir du sérum. Les niveaux d’E2 et de FSH ont été mesurés par ELISA conformément aux instructions du fabricant.

Histologie ovarienne
Le tissu ovarien a été prélevé immédiatement après l’euthanasie par ablation chirurgicale des deux ovaires, rincé dans une solution saline froide pour éliminer le sang, puis fixé dans du paraformaldéhyde à 4 % à 4 °C pendant 24 à 48 h. Les tissus ont été déshydratés dans de l’éthanol classé, clarifiés dans du xylène, incorporés dans de la paraffine et sectionnés à 4-5 μm. Les sections ont été colorées à l’hématoxyline et à l’éosine, déshydratées, dégagées et montées.

Analyse statistique
Les données ont été analysées à l’aide de SPSS 26.0. Les variables normales ont été exprimées en moyenne ± ET et comparées par test t ; variables non normales comme médiane (IQR) et comparées par le test U de Mann-Whitney. Les variables catégorielles ont été exprimées en % et comparées par le test du khi-deux. P < 0,05 a été considéré comme statistiquement significatif. Par souci de cohérence, les mêmes méthodes statistiques ont été appliquées aux analyses de figures (pas de description distincte du test t de Student).

Sécurité et élimination des déchets
Le paraformaldéhyde, le xylène et les glycosides de triptérygique ont été manipulés dans des hottes certifiées avec des gants, des lunettes et des blouses de laboratoire ; Les déversements et les produits jetables contaminés ont été collectés dans des contenants de déchets dangereux étiquetés et éliminés conformément aux POS de biosécurité de l’établissement. Toutes les procédures impliquant du paraformaldéhyde, du xylène et des glycosides de triptérygium ont été effectuées dans des hottes avec un équipement de protection individuelle approprié (gants, blouses de laboratoire, lunettes de protection). Les déchets chimiques et les carcasses d’animaux ont été éliminés conformément aux lignes directrices de l’établissement en matière de biosécurité.

Résultats

Caractéristiques cliniques

Au cours de l’étude, 3 patients du groupe témoin se sont retirés en raison d’une infection au COVID-19, et 1 a été exclu en raison d’une fonction hépatique anormale, laissant 35 patients. Dans le groupe de traitement, 4 patients se sont retirés en raison de la COVID-19 et 35 patients ont terminé l’étude. Ainsi, un total de 70 sujets ont été inclus dans...

Discussion

Dans cette étude, nous avons étudié le rôle potentiel de la décoction de Yangjing Zhongyu (YZD) en tant que traitement d’appoint pour la diminution de la réserve ovarienne (DOR) dans la technologie de procréation assistée (ART). Les résultats cliniques ont démontré que les patientes recevant YZD en plus du protocole standard d’antagoniste ont obtenu un nombre significativement plus élevé d’ovocytes prélevés et d’embryons de haute qualité. Bien que les taux de grossesse ne diffèrent pas s...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Centrifugeuse	Séparation sérique (1000 x g, 15 min, 4 °C ; C)	Eppendorf 5810R	5811 000.012
Coton-tige-coton (stériles)	Collecte d’échantillons de cytologie vaginale	Fournitures médicales Kangjian du Jiangsu	KJ-MW-01
Kit ELISA pour E2	Quantification de l’estradiol sérique (rat)	Elabscience Biotechnology Inc.	E-EL-0152
Kit ELISA pour FSH	Quantification du FSH sérique (rat)	Elabscience Biotechnology Inc.	E-EL-R0391
Éthanol (70 et ndash ; 100%)	Déshydratation graduée pour histologie	Sinopharm Chemical Reagent Co., Chine	100092683
Lames en verre & Couvertures	Montage d’échantillons	Citotest Scientific, Chine	7101/1812
Hématoxyline & Hématoxyline Éosine	Solution de coloration pour l’histologie	Beyotime Biotechnology, Chine	C0105S
Microscope optique	Observation en histologie et cytologie	Olympus (générique, sans marque déposée)	CX23
Paraffine	Milieu d’encastrement	Leica Biosystems	39601095
Paraformoldéhyde (4 %)	Fixateur pour la préparation des tissus	Sigma-Aldrich	P6148
Solution saline (0,9 %)	Préparation du frottis vaginal	Sinopharm Chemical Reagent Co., Chine	10019318
Sprague&ndash ; Rats Dawley	Animaux expérimentaux (femelle, 8 semaines, 160 & ndash ; 200 g)	Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Tech Co., Ltd.	SCXK (Pékin) 2024-0011
Logiciels SPSS	Analyse statistique (ver. 26.0)	IBM Corp.	RRID : SCR_002865
Microscope électronique à transmission	Observation ultrastructurale	JEOL Ltd.	JEM-1400Plus
Glycosides de triptérygium	Induction du modèle de rat DOR	Fournisseur générique (sans marque déposée)	TG-001
Xylène	Réactif de dégagement pour l’histologie	Sinopharm Chemical Reagent Co., Chine	10023418