Ce protocole présente un modèle de rat reproductible utilisant des nerfs sensoriels pour imiter la douleur du névrome humain et évaluer les traitements chirurgicaux, offrant ainsi un outil précieux pour la recherche translationnelle sur le névrome.
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Article de méthode
Ce protocole présente un modèle de rat reproductible utilisant des nerfs sensoriels pour imiter la douleur du névrome humain et évaluer les traitements chirurgicaux, offrant ainsi un outil précieux pour la recherche translationnelle sur le névrome.
Ce protocole décrit un nouveau modèle chirurgical pour étudier la douleur nerveuse et le traitement chirurgical chez le rat. Les modèles traditionnels de névromes utilisent des nerfs mixtes, bien qu’il soit le plus souvent le cas que les nerfs sensoriels donnent lieu à des névromes douloureux dans le cadre clinique. En sélectionnant le nerf saphène, cette approche reflète la réalité clinique de la formation du névrome et fournit une plate-forme pertinente pour l’évaluation des stratégies chirurgicales. Cette méthode vise à reproduire la physiopathologie de la formation du névrome humain et à évaluer une intervention chirurgicale courante pour la douleur du névrome, en particulier la réinnervation musculaire ciblée (TMR), une intervention largement utilisée pour la douleur associée au névrome. L’article fournit une description détaillée, étape par étape, de la procédure, en commençant par la préparation de l’animal et les soins périopératoires. La technique chirurgicale est expliquée en tenant compte des repères anatomiques, des exigences en matière d’instruments et des considérations techniques qui améliorent la précision et la cohérence. Des mesures de surveillance et de bien-être postopératoires sont décrites pour garantir le respect des normes éthiques et la reproductibilité dans tous les laboratoires. Ce modèle est reproductible, techniquement accessible et pertinent sur le plan translationnel, car il imite la réalité clinique de la formation du névrome sensoriel. Il fournit une plate-forme pour l’évaluation des stratégies chirurgicales et la recherche préclinique sur le névrome.
Les névromes sont des tumeurs nerveuses douloureuses formées après une lésion nerveuse 1,2. Ils représentent un problème clinique important avec des conséquences sociétales de grande portée et une augmentation des coûts médicaux 3,4,5,6,7. Les options de traitement telles que la thérapie pharmacologique sont souvent symptomatiques, s’attaquant à la douleur mais ne parvenant pas à résoudre ses causes sous-jacentes8. Il a été démontré que les interventions chirurgicales ont des taux de réussite variables (56 % à 82 %), et les mécanismes à l’origine de la formation d’un névrome douloureux restent mal compris 9,10,11.
On pense que la douleur des névromes provient des faisceaux sensoriels du nerf endommagé, ce qui souligne l’importance de modéliser les contributions purement sensorielles à la douleur associée au névrome12. Les modèles animaux restent une plate-forme essentielle pour explorer les mécanismes complexes sous-jacents à la douleur du névrome et aussi pour développer des thérapies chirurgicales efficaces13. Cependant, la plupart des modèles animaux disponibles utilisent des nerfs sensoriels moteurs mixtes, ce qui limite leur applicabilité translationnelle, puisqu’environ 74 % des névromes douloureux en milieu clinique proviennent de nerfs purement sensoriels14,15.
Plusieurs modèles animaux ont été développés pour simuler la douleur neuropathique et évaluer les interventions potentielles16. Tout d’abord, le modèle des lésions de constriction chronique (CCI) a été décrit17. Ce modèle induit des lésions nerveuses partielles par le biais de ligatures lâchement liées autour du nerf sciatique, imitant les conditions de douleur neuropathique. Il donne un aperçu de la sensibilisation périphérique, de la dégénérescence axonale, des réponses inflammatoires et des modifications centrales de la moelle épinière, et est largement utilisé pour évaluer les thérapies analgésiques potentielles17,18. Deuxièmement, la lésion nerveuse épargnée (SNI) induit des lésions à deux des trois branches terminales du nerf sciatique (nerfs tibial et péronier commun), laissant le nerf sural restant intact19. Troisièmement, le modèle de transposition du neurinome tibial (TNT), développé par Dorsi et al. Le nerf tibial est transecté chirurgicalement et transposé sous-cutané pour faciliter l’évaluation de la formation du névrome et de la douleur associée16,20. Ce modèle permet une évaluation primaire de l’hypersensibilité par stimulation de Von Frey de la peau recouvrant le névrome transposé au site prétibial, et une évaluation secondaire de l’hypersensibilité dans les dermatomes adjacents du nerf suralal ou du nerf tibial résiduel. Le modèle TNT a été conçu chirurgicalement pour reproduire le développement du névrome, sans incorporer d’intervention chirurgicale ou non chirurgicale visant à prévenir ou à traiter la douleur liée au névrome20. En tant que tel, il ne permet pas d’évaluer des stratégies thérapeutiques, comme la réinnervation musculaire ciblée (RTM), dans le cadre primaire (Figure 1).
La TMR est une technique qui relie un nerf transecté (sensoriel) à une branche motrice consommable d’une cible après résection du névrome. Ce concept utilise le principe de donner au nerf quelque chose à faire, par lequel le nerf se régénérera en un nerf connecté à une cible musculaire. La philosophie vise à prévenir la formation d’un névrome en soi en permettant au nerf de se régénérer en un muscle dénervé11.
Dans la présente étude, nous décrivons un modèle de rongeur impliquant la section du nerf saphène. Ce nerf purement sensoriel est transecté, transposé au muscle gastrocnémien, et soit non traité (transposition du névrome saphène, SNT), soit coapté à une branche motrice (TMR). Ce modèle permet d’étudier les effets de la RTM appliquée au nerf saphène sur l’hypersensibilité mécanique secondaire dans les dermatomes adjacents de nerfs anatomiquement intacts, en particulier dans le territoire tibial sur la surface plantaire centrale de la patte arrière (Figure 1)21,22. Ce contexte anatomique met également en évidence la pertinence clinique chez les patients. En raison de son parcours anatomique superficiel, le nerf saphène est particulièrement vulnérable aux lésions iatrogènes ou traumatiques, notamment à la suite d’une chirurgie du genou, entraînant souvent des douleurs neuropathiques ; Notamment, 55,2 % des patients signalent des symptômes persistants malgré une chirurgie de révision telle que la neurolyse ou la neurectomie23,24.
Cette étude vise à établir un modèle de rongeur reproductible afin de reproduire le cadre clinique de la formation d’un névrome douloureux. Ce modèle est particulièrement adapté à l’étude de la physiopathologie du neurinome sensoriel pur et des effets de la RTM, tandis que son critère de jugement principal se concentre sur l’hypersensibilité mécanique secondaire.
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Ce protocole s’aligne sur les lignes directrices de la recherche éthique sur les animaux et met l’accent sur son potentiel translationnel. Numéro du projet : AVD1150020198824.
1. Mesures de Von Frey
2. Préparation préopératoire
3. Technique chirurgicale
4. Soins postopératoires
5. Élimination des déchets
6. Prélèvement d’échantillons et euthanasie
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L’évaluation de l’hypersensibilité secondaire (seuils de retrait à 50 % transformés en log) a montré des différences entre les groupes dans le dermatome tibial (Figure 5A). La section du nerf saphène sans traitement (SNT) a entraîné la sensibilité la plus élevée au cours du suivi de 6 semaines. En revanche, les animaux traités par RTM ont montré une tendance constante à une réduction de l’hypersensibilité dans le territoire tibial. La divergence entre les gr...
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Cette approche présente plusieurs points forts. La description par étapes permet une reproductibilité entre les laboratoires, la procédure peut être réalisée efficacement avec des compétences microchirurgicales et l’utilisation d’un nerf purement sensoriel renforce sa pertinence translationnelle. Ensemble, ces aspects rendent le modèle pratique pour les études comparatives et utile pour tester de nouvelles interventions. Des étapes critiques, telles que le maintien de conditions aseptiqu...
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Recherche réalisée par un doctorant (CB) soutenu par une bourse Axogen (pas de relation produit). Tous les autres auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Les auteurs remercient Sabine Versteeg pour sa contribution à l’évaluation de la douleur comportementale. Anja van der Sar et Trudy Oosterveld-Romijn (Common Animal Laboratory, Gemeenschappelijk Dieren Laboratorium) sont remerciées pour leur soutien technique dans la préparation des installations chirurgicales et de microscopie et pour leur dévouement aux animaux. Les auteurs remercient également Wim van Hecke pour son évaluation experte des échantillons de nerfs collectés.
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Carprofène | Pharmacie vétérinaire locale | N/D | La pharmacie vétérinaire locale prépare la dilution au carprofène |
| Cotonne-tiges | Nobamed | 974255 | &mdash ; |
| Rasoir électrique | Aesculap | GT421 | |
| Électrocautérité | Outils scientifiques finement | 18010-00 | &mdash ; |
| Éthanol 70 % | Interchema BV | 400406 | &mdash ; |
| Ethilon 10.0 | Johnson & Johnson | BV130-3 : code 2820G | |
| Ethilon 11.0 | Johnson & Johnson | Code BV50-3L 2881G | |
| Ethilon 4.0 | Johnson & Johnson | 1854G : code 1854G | - |
| Ethilon 6.0 | Johnson & Johnson | BV130-5 : code 2809G | |
| Ethilon 8.0 | Johnson & Johnson | BV130-5 : code 2808G | &mdash ; |
| Ethilon 9.0 | Johnson & Johnson | BV130-3 : code 2819G | |
| Gants d’examen nitrile | Sempermed GmbH | 1065920 | |
| Protection oculaire | 3M & trade ; Soins de santé | 71512-00001M | |
| Stérilisateur à perles en verre | Équipement de laboratoire VanPel | GBS300H | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software, San Diego, Californie, États-Unis | ; Version 10 | |
| Bouillotte | Science de la conduite | CS-HP-2005 | |
| Isoflo (isoflurane) | Produits vétérinaires Zoetis / Dechra | B506 | &mdash ; |
| Lidocaïne 1 % | Henry Schein | 809755 | |
| Cages à fond en maille | Stoelting Co. | 57816, 57824 | &mdash ; |
| Micro pinces | Outils scientifiques finement | 11251-35 | &mdash ; |
| Porte-aiguille micro | Outils scientifiques finement | 12076-12 | &mdash ; |
| Microciseaux | Outils scientifiques finement | 15019-10 | &mdash ; |
| Micro pince à épiler | Outils scientifiques finement | 11254-20 | &mdash ; |
| NaCl 0,9 % | Échangé | H7 1000-FRE | &mdash ; |
| Aiguille 25G et fois ; 1" | Becton, Dickinson & Entreprise | 300400 | |
| Porte-aiguille | Outils scientifiques finement | 12004-16 | &mdash ; |
| Stimulateur nerveux | ; (VARI-STIM Localisateur nerveux) | REF 856200 | |
| Logiciels RandoMice | van Eineige et al. ; Leiden | Version 1.1.7 | |
| Sonde rectale rongeur | Instruments de précision mondiaux | NC9506514 | |
| Scalpel | Outils scientifiques finement | 10003-12 | &mdash ; |
| Ciseaux | Outils scientifiques finement | 14001-12 | &mdash ; |
| Évaluateur sensoriel | Linton Instrumentation | 514007 et ndash ; 514015 | 0,6 g à 15 g monofilaments |
| Microscope chirurgical stéréoscopique | Leica | A60 F | &mdash ; |
| Compresses stériles en gaze | Nobamed | 740113 | |
| Pommade lubrifiante oculaire stérile | Alcon ; | &lrm ; B00BRLSC8S | |
| Feuille stérile avec trou | Evercare / OneMed | 1555-01 | &mdash ; |
| Lame chirurgicale n° 15 | Outils scientifiques finement | 10015-00 | &mdash ; |
| Masque chirurgical | Medline Industries, Inc. | MSK1002 | |
| Seringue Luer Lock 2 ml | Becton, Dickinson & Entreprise | 300613 | |
| Pince à épiler | Outils scientifiques finement | 11617-12 | &mdash ; |
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