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Article de recherche

Signalisation Neuregulin1-ErbB4 impliquée dans l’acupuncture favorisant la régénération de la myéline chez les rats atteints de lésions de la moelle épinière

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DOI :

10.3791/69166

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20 février 2026

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1Department of Emergency and Intensive Care Unit, Beijing Anzhen Nanchong Hospital of Capital Medical University & Nanchong Central Hospital, 2Department of Neurology, Beijing Anzhen Nanchong Hospital of Capital Medical University & Nanchong Central Hospital, 3Department of Emergency and Intensive Care Unit, First Affiliated Hospital, Kunming Medical University

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Cette étude vise à étudier les effets de l’électroacupuncture sur la régénération de la myéline dans un modèle rat de LME et à vérifier si la voie de signalisation Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 joue un rôle dans ce processus.

Résumé

Les lésions de la moelle épinière (LME) entraînent souvent de graves dysfonctionnements neurologiques, et la réparation de la myéline est une étape cruciale dans la récupération de la fonction neurologique. L’électroacupuncture (EA), une méthode thérapeutique qui combine acupuncture traditionnelle et stimulation électrique, a été largement appliquée dans le domaine de la réparation nerveuse. Cependant, les voies de signalisation spécifiques impliquées dans l’EA n’ont pas été entièrement élucidées. Cette étude vise à étudier les effets de l’EA sur la régénération de la myéline chez les rats LM et à vérifier si la voie de signalisation Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 joue un rôle dans ce processus. Les rats LME ont été induits par une blessure à clip d’anévrisme au segment spinal T10. Un cathéter en polyéthylène (PE) a été implanté dans le canal vertébral entre les espaces intervertébraux L5 à 6 et fixé sous la cutanée afin d’établir un système d’administration de médicaments à long terme. Le NRG1 exogène et son antagoniste étaient administrés par cathéter PE tous les deux jours, avec un volume de 20 μL par injection. Le traitement EA a été appliqué aux points d’acupuncture Dazhui (GV14) et Mingmen (GV4) tous les deux jours, chaque séance durant 30 minutes pendant 4 semaines consécutives. Les résultats ont montré que le traitement par l’EA favorisait significativement l’expression de la protéine basique de la myéline (MBP) dans les tissus de la moelle épinière et améliorait la fonction motrice des membres postérieurs chez les rats. De plus, le NRG1 exogène produisait des effets similaires à ceux de l’EA. En conclusion, la voie de signalisation NRG1-ErbB4 joue un rôle important dans la régénération de la myéline induite par l’EA chez les rats LME.

Introduction

La LME est une affection traumatique qui entraîne de graves déficits neurologiques, généralement manifestés par des troubles moteurs, une perte sensorielle et une dysfonction autonome, avec un taux d’incidence annuel d’environ 40 à 80 cas pour un million de personnes dans lemonde 1,2. Après une blessure, la rupture axonale et la perte de myéline sont les principales caractéristiques pathologiques qui entravent la conduction du signalneuronal 3. La myéline est formée par des oligodendrocytes du système nerveux central (SNC) et des cellules de Schwann dans le système nerveux périphérique (SNP), et son intégrité est cruciale pour la conduction rapide des impulsionsnerveuses 4. Cependant, la réponse inflammatoire, le stress oxydatif et la formation de cicatrices gliales dans le microenvironnement local après LME inhibent significativement la régénération de la myéline, conduisant à un dysfonctionnement neurologiquechronique 5. Parallèlement, la mort des oligodendrocytes (OL) après LM entraîne la démyélinisation des axones, un processus qui se développe de façon chronique et persistante. Des études ont montré que la démyélinisation axonale, tant chez les modèles humains qu’animaux, peut être efficacement réparée par régénération de lamyéline 6. Par conséquent, explorer des stratégies pour favoriser la réparation de la myéline est l’une des orientations clés dans le traitement des LME.

L’acupuncture, en tant que technique médicale traditionnelle ancienne, a été largement appliquée en pratique clinique dans de nombreux pays, dont la Chine, la Corée et le Japon 7,8. L’EA, qui combine l’acupuncture traditionnelle avec la stimulation électrique, a été largement adoptée en milieu clinique. De plus en plus de preuves montrent que l’EA a des effets thérapeutiques sur diverses maladies, notamment en favorisant la régénération de la myéline après une lésion de la moelle épinière. La sélection des points d’acupuncture est cruciale lors du traitement EA, tels que GV14 et GV49. GV14 se situe sous le processus épineux de la7e vertèbre cervicale, près de la ligne médiane de la colonne vertébrale, tandis que GV4 se situe entre les processus épineux des2e et3e vertèbres lombaires. Des études antérieures ont montré que les voies de signalisation inflammatoire, le stress oxydatif, les facteurs neurotrophiques et l’autophagie jouent un rôle dans la réparation de la myéline induite parle EA 10,11,12. De plus, de plus en plus de preuves suggèrent que certains points d’acupuncture, tels que GV14 et GV4, jouent un rôle actif dans la promotion de la régénération de la myéline lors du traitementEA 13,14,15. Cependant, les mécanismes moléculaires par lesquels l’EA régule la régénération de la myéline après une lésion de la moelle épinière n’ont pas été entièrement élucidés.

NRG1 fait partie de la famille des facteurs de croissance épidermique et, en fonction de sa région amino-terminale, il peut être classé en six types (I-VI)16. NRG1 et sa famille de récepteurs, ErbB (ErbB1/2/3/4), jouent un rôle important dans le développement et la réparation du système nerveux, notamment dans des processus tels que la migration neuronale, la différenciation, la remylinisation et la synaptogenèse. Au cours du développement du SNP, les cellules de Schwann (SC) prolifèrent et migrent le long des axones des neurones pour former la myéline, et la voie de signalisation NRG1-ErbB4 joue un rôle clé dans la maturation des cellules progénitrices de Schwanndu SNP 17,18. Des études antérieures ont montré que la voie de signalisation NRG1 est impliquée dans la différenciation des cellules souches neuronales en cellules de Schwann et favorise la réparation de la myéline après laLME 19. De plus, une étude a montré qu’après une lésion de la moelle épinière, la voie de signalisation NRG1-ErbB4 favorise la transformation des cellules progénitrices d’oligodendrocytes (OPC) en cellules de type Schwann avec un potentielde remyélinisation 20. Alex et al. ont construit un système de co-culture composé de neurones sensoriels dérivés des cellules souches pluripotentes induites par l’humain et de cellules de Schwann de rat, et ont constaté que bloquer la voie de signalisation NRG1-ErbB avec des médicaments inhibait significativement la myélinisation neuronale, fournissant une preuve directe du rôle de cette voie dans la promotion de la myélinisation des axones sensorielshumains 21. Une autre étude a également montré que le traitement EA peut augmenter l’expression de NRG1 dans la moelle épinière et soulager la douleurinflammatoire 22.

Les recherches sur l’impact de l’EA sur la voie de signalisation NRG1-ErbB4 dans les LM sont limitées, et les mécanismes sous-jacents restent incertains. Cette étude vise à étudier si la stimulation de l’EA aux points d’acupuncture GV14 et GV4 peut réguler la transduction du signal NRG1-ErbB4 et à explorer son rôle potentiel dans la promotion de la régénération de la myéline et la récupération de la fonction neurologique chez les rats LME. Il s’agit de la première étude à examiner la relation entre la voie de signalisation NRG1-ErbB4 et la régénération de myéline induite par l’EA chez les rats LME, fournissant des preuves expérimentales pour le développement de stratégies de traitement nouvelles et efficaces pour les LME.

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Protocole

Toutes les consignes éthiques ont été respectées pendant l’expérience afin de minimiser la souffrance animale. Le protocole expérimental et la conception ont été approuvés par le Comité d’expérimentation animale de l’Université médicale de Kunming (Approbation n° KMMU2021051) et menée conformément aux directives de recherche animale de l’université. Des rats mâles adultes de Sprague-Dawley (8 semaines, pesant entre 250 et 270 g, n = 60) ont été obtenus à l’Université médicale de Kunming (Yunnan, Chine).

Préparation animale

Les animaux étaient logés dans un environnement contrôlé avec une humidité constante, une température modérée et un cycle clair/obscur de 12 heures. Les animaux ont été répartis aléatoirement dans 11 groupes : groupe opération simulée (S, n = 6), groupe LM (M, n = 6), LME avec groupe de traitement EA (M + EA, n = 6), LME avec groupe traitement NRG-1β (M + NRG-1β, n = 6), LME avec groupe solvant DMSO à 5 % (M + D, n = 6), LME avec inhibiteur PD158780 et groupe traitement NRG-1β (M ++NRG-1β, n = 6), LME avec PD158780 inhibiteur et groupe de traitement EA (M + EA +, n = 6), LME avec solvant et groupe de traitement EA (M + EA + D, n = 6), LME avec shRNA et groupe de traitement EA (M + EA + shRNA, n = 6), LME contenant lentivirus contenant shRNA non ciblant et groupe de traitement EA (M + EA + NC, n = 6), LME avec groupe de traitement à shRNA (M + shRNA, n = 6). La taille actuelle de l’échantillon a été déterminée sur la base de notre expérience antérieure avec des modèles et interventions similaires, qui ont constamment montré des effets significatifs avec ce chiffre. De plus, malgré la taille de l’échantillon, nous avons observé des différences statistiquement robustes et significatives dans les principaux résultats, ce qui renforce la confiance dans les résultats rapportés.

Modèle SCI rat

Un clip d’anévrisme Yasargil (titane, force de fermeture standard de 70 g) a été utilisé pour établir un modèle de LM chez un rat en utilisant une technique de type pince (Figure 1A). Les rats ont été anesthésés avec 2 % de pentobarbital sodique (30 mg/kg, intrapéritonéale) et placés sur une table d’opération. Une incision de 3 à 4 cm a été réalisée dans la peau dorsale, suivie d’une dissection couche par couche du tissu sous-cutané et du muscle pour exposer les processus épineux thoraciques T9-11 et les arches vertébrales. Un clip vasculaire a été utilisé pour retirer le processus épineux thoracique T10 et l’arc vertébral, exposant complètement la moelle épinière. Le clip d’anévrisme de Yasargil était positionné verticalement sur tout le segment T10 et libéré rapidement après un temps de séjour de 60 s. Le modèle a été considéré comme réussi si deux signes ou plus ont été observés : (1) tremblement spasmodique du corps, (2) réflexe de remuement de la queue, et (3) marques noires visibles de pincement sur la moelle épinière. Après avoir assuré une hémostasie adéquate, l’incision a été désinfectée et suturée. Dans le groupe opératoire simulé, la même procédure a été réalisée, sauf que la moelle épinière n’a pas été pincée. Après l’opération, les rats ont reçu une solution saline normale (3 mL, intrapéritonéale) pour la réhydratation et de la pénicilline (100 000 unités, intrapéritonéale) une fois le matin et une fois le soir pendant 3 jours consécutifs afin de prévenir l’infection. Une assistance manuelle pour la miction était fournie jusqu’à ce que la miction spontanée soit rétablie (2 fois par jour).

Tubulure intrathécale des rats et administration de médicaments

Suivant la méthode de Storkson et al.23, un cathéter a été implanté dans l’espace sous-arachnoïdien chez les rats une semaine avant l’induction du modèle LM. Après anesthésie, les rats ont été fixés sur la table d’opération, et l’espace intervertébral L5-6 a été exposé. Une aiguille de 19G a été utilisée pour pénétrer verticalement la dure-mère et la membrane arachnoïdienne. L’aiguille a été avancée d’environ 1 à 2 mm, et après avoir percé la membrane arachnoïdienne, une sensation d’espace a été ressentie, suivie d’un flux clair de liquide céphalo-rachidien, indiquant une perforation réussie. Un cathéter PE-10 (polyéthylène, diamètre intérieur 0,38 mm, diamètre extérieur 1,09 mm) a été inséré dans l’espace sous-arachnoïdien le long de l’aiguille de perforation. Le cathéter a été avancé à une longueur d’environ 3 cm, avec la pointe du cathéter positionnée près du corps vertébral L3. Lors de l’insertion, des mouvements de queue et des spasmes des membres postérieurs ont été observés chez les rats, et le liquide céphalo-rachidien s’est écoulé par le cathéter, confirmant la position du cathéter dans l’espace sous-arachnoïdien.

Le NRG-1β et PD158780 ont tous deux été dissous dans du diméthylsulfoxyde (DMSO) puis dilués avec du liquide céphalorachidien artificiel (ACSF), assurant que la concentration finale de DMSO reste inférieure à 0,5 %. Les concentrations finales de travail étaient de 20 nM pour NRG-1β et de 20 μM pour PD15878024. Le deuxième jour après la LME, les rats du groupe M + NRG-1β ont reçu des injections intrathécales de 20 μL de NRG-1β tous les deux jours. Les rats du groupe M + EA + DP ont reçu 20 μL de PD158780 intrathécliquement25, 2 heures avant le traitement EA.

Traitement EA

Letroisième jour après l’opération, les rats ont été fixés sur la table de traitement pour la thérapie par électroacupuncture (EA) aux points d’acupuncture GV14 et GV4 (Figure 1B). Deux aiguilles d’acupuncture (0,25 mm x 13 mm) ont été insérées dans ces points à une profondeur de 3 à 4 mm. La thérapie EA a été administrée à l’aide d’un dispositif d’électroacupuncture à motif d’ondes denses et clairsemées (onde clairsemée à 2 Hz et onde dense à 10 Hz, avec un rapport de fréquence de 1:5)26. L’intensité de sortie était réglée à 5 (environ 0,5 mA) pendant 30 minutes, un jour sur deux.

Évaluation comportementale

La fonction locomotrice a été évaluée à l’aide de l’échelle Basso, Beattie et Bresnahan (BBB) 27, qui évalue le mouvement des membres, la démarche, la coordination et la position des pattes aux moments suivants : 0, 3, 7, 14, 21 et 28 jours après l’opération ( Figure 2D). L’échelle BBB varie de 0 (représentant la paralysie complète) à 21 (indiquant une allure normale). Toutes les évaluations ont été réalisées indépendamment par deux chercheurs qui étaient aveugles face aux devoirs expérimentaux de groupe.

Collecte d’échantillons

À la fin de l’expérience, des rats anesthésiés ont été fixés sur une plateforme de dissection pour la collecte de tissus. La cavité abdominale a été ouverte pour exposer complètement le diaphragme, qui a été soigneusement incisé avec des ciseaux à l’iris pour éviter une lésion vasculaire. La cage thoracique a ensuite été ouverte le long des deux marges costales pour exposer le cœur, après quoi une aiguille a été insérée dans le ventricule gauche à l’apex et environ 300 à 400 mL de PBS pré-refroidi ont été rapidement perfusés pour éliminer le sang systémique jusqu’à ce qu’un liquide clair s’écoule de l’oreillette droite. Pour l’analyse des protéines moléculaires, la perfusion était arrêtée à ce stade et la colonne vertébrale était disséquée. Après avoir retiré les côtes et muscles adjacents pour exposer les vertèbres, le segment T10 a été localisé, et un segment de la moelle épinière d’environ 1 cm rostral et caudal à T10 a été prélevé à l’aide de ciseaux à iris, puis congelé dans de l’azote liquide et stocké à -80 °C. Pour l’examen morphologique, la perfusion a été remplacée par 4 % de paraformoldéhyde après le PBS, la fixation réussie étant indiquée par la contraction musculaire et la rigidité du tronc. Le même segment spinal a ensuite été soigneusement disséqué pour préserver l’architecture tissulaire et postfixé dans un paraformoldéhyde à 4 °C pendant 48 heures.

Coloration à l’hématoxyline et à l’éosine

Les sections de paraffine de la moelle épinière ont été placées dans un four à 60 °C pour préchauffage pendant 30 minutes. Décirage : Xylène I pendant 15 minutes suivi de Xylène II pendant 15 minutes. Réhydratation : traitée à 100 % d’éthanol pendant 2 minutes, puis à 95 % d’éthanol pendant 2 minutes, puis 80 % d’éthanol pendant 2 minutes, puis 70 % d’éthanol pendant 2 minutes, Et enfin de distiller de l’eau pendant 5 minutes. La coloration à l’hématoxyline a été effectuée pendant 7 minutes, suivie d’un rinçage à l’eau distillée pour enlever la solution résiduelle de taches. La différenciation en alcool à 1 % d’acide chlorhydrique a été effectuée pendant 3 secondes, suivie d’un rinçage à l’eau distillée pour éliminer la solution de tache résiduelle. J’ai fait un bluissement avec de l’eau à 5 % d’ammoniac pendant 2 minutes, suivi d’un lavage de la solution de bleuissement résiduelle. Une coloration à l’éosine pendant 30 secondes a été réalisée, suivie d’un rinçage à l’eau distillée pour éliminer la solution de tache résiduelle. La déshydratation des sections a été réalisée avec 70 % d’éthanol pendant 10 s, puis 80 % d’éthanol pendant 10 s, et enfin 100 % d’éthanol pendant 30 s. Le nettoyage s’est fait en traitant avec du Xylène pendant 5 minutes. Après montage, les lames étaient séchées à l’air et les images capturées après séchage.

Coloration Luxol Fast Blue

Les sections ont été décirées deux fois avec du xylène pendant 10 minutes chacune, puis colorées avec une solution de coloration à la myéline LFB, et incubées toute la nuit à 37 °C. Le lendemain, un excès de solution de coloration a été retiré à l’aide d’éthanol à 90 %. Les sections ont été différenciées dans une solution de différenciation Luxol pendant 10 s (C0631S), suivies d’une immersion dans 75 % d’éthanol pendant 30 s jusqu’à ce que la substance grise apparaisse claire. Enfin, les sections ont été contre-colorées avec une solution colorante à l’éosine pendant 1 minute.

Plaque western

Les échantillons de protéines ont été bouillis dans de l’eau pendant 5 minutes. Un total de 5 μL de marqueur protéique a d’abord été chargé dans le gel d’électrophorèse, suivi d’un chargement séquentiel des échantillons de protéines testées. L’électrophorèse était initiée à 80 V jusqu’à ce que les bandes de repère soient clairement séparées, après quoi la tension était portée à 130 V et maintenue jusqu’à la fin de l’électrophorèse. Des membranes PVDF pré-découpées étaient activées dans le méthanol pendant 1 minute, puis placées sur du papier filtre, et recouvertes du gel préparé. Le transfert de protéines a été effectué à un courant constant de 300 mA, avec un temps de transfert ajusté selon le poids moléculaire (± 10 min). Après le transfert, la membrane PVDF a été placée dans une boîte d’incubation, rincée avec un tampon TBST pendant 5 minutes, puis bloquée avec 5 % de lait écrémé à température ambiante sur un shaker pendant 2 heures. La membrane a ensuite été lavée 3 fois avec un tampon TBST pendant 5 minutes chacune avant l’incubation avec des anticorps primaires, notamment GAPDH (1:2000), Tubuline (1:2000), NRG1 (1:1000), ErbB4 (1:1000) et MBP (1:1000), toute la nuit à 4 °C avec un léger secouement. Le lendemain, la membrane a été lavée 3 fois avec un tampon TBST pendant 5 minutes chacune, puis incubée avec un anticorps secondaire, anti-lapin de chèvre (1:4000), à température ambiante sur un shaker pendant 2 heures. Après le lavage avec TBST, les bandes protéiques ont été visualisées en chimiluminescence. Importez l’image de WB dans le logiciel ImageJ et effectuez la soustraction de fond en utilisant un rayon de boule roulante de 50 pixels. Pour les bandes inclinées, utilisez l’outil Ligne segmentée pour redresser les bandes. Utilisez l’outil Rectangle pour sélectionner les bandes cibles et générer un profil de densité en sélectionnant Tracer les voies pour visualiser les valeurs en niveaux de gris des bandes. Utilisez l’outil Baguette Magique pour segmenter les pics et extraire les valeurs en niveaux de gris. Après avoir sauvegardé les données, utilisez le logiciel GraphPad Prism pour créer des graphiques à barres.

Immunofluorescence

Les sections de paraffine ont été décirées deux fois avec du xylène pendant 10 minutes chacune, puis réhydratées à travers une série éthanol graduée. La ponction d’antigènes a été réalisée en faisant bouillir les sections dans une solution d’acide citrique à 5 % pendant 15 minutes, suivie d’un blocage avec du sérum de chèvre à 10 % pendant 2 heures. Les sections ont ensuite été incubées toute la nuit à 4 °C avec les anticorps primaires suivants : NRG-1 monoclonal de souris (1:200), ErbB4 monoclonal de lapin (1:300) et MBP monoclonal humain (1:300). Après trois lavages avec du sérum physiologique tamponné au phosphate contenant 0,1 % de Triton X-100 (PBST) pendant 10 minutes chacun, les sections ont été incubées pendant 1 heure dans l’obscurité avec les anticorps secondaires suivants : IgG anti-souris marqué FITC (1:500), IgG anti-lapin marqué FITC (1:500), et IgG anti-humain marqué FITC (1:500). Les sections ont été lavées 3 fois avec du PBST pendant 10 minutes chacune, puis fixées et montées avec un réactif antifade pour préserver les signaux fluorescents. Les lames étaient stockées à 4 °C dans l’obscurité. Après avoir localisé les cellules cibles sous une lentille objective 10x à l’aide d’un microscope à fluorescence, passez à une lentille 40x pour capturer l’image de fluorescence.

Réaction en chaîne par polymérase en temps réel (RT-PCR)

Les amorces pour ErbB4 et le gène de référence GAPDH ont été conçus à partir du site web du NCBI. Les séquences des amorces étaient les suivantes : amorce avant ErbB4 : ACAGCCCCCCTCCTGCCTAC ; Amorce inversée ErbB4 : ATCTCAGCCGTTGCACCCT ; Premier avant GAPDH : CCCAGCTTAGGTTCATCATCATCAGGT ; Amorce inversée GAPDH : TACGCCAAATCCGTTCACA. Un tissu de la moelle épinière d’environ la taille d’un soja a été placé dans un tube centrifugeuse de 1,5 mL, et 600 μL de réactif d’extraction d’ARN total ont été ajoutés. Le tissu a été complètement homogénéisé et incubé sur la glace pendant 5 minutes, suivi d’une centrifugation à 12 000 x g pendant 5 minutes à 4 °C. Le surnageant a été transféré dans un nouveau tube de 1,5 mL, et 400 μL de chloroforme ont été ajoutés. Le mélange a été soigneusement mélangé et centrifugé à 12 000 x g pendant 5 minutes à 4 °C. Le surnageant a de nouveau été transféré dans un nouveau tube, et 400 μL d’isopropanol ont été ajoutés. La solution a été incubée à température ambiante pendant 10 minutes, suivie d’une centrifugation à 12 000 x g pendant 10 minutes. Le surnageant a été jeté et la pellete d’ARN a été lavée avec 400 μL d’éthanol à 75 %. Après centrifugation à 7 500 x g pendant 5 minutes à 4 °C, le surnageant était jeté et le tube inversé pour sécher à l’air sur une surface propre. Le pellet d’ARN a été dissous dans 60 μL d’eau sans ARN, mélangé soigneusement, et la concentration d’ARN a été mesurée. La pureté et la concentration de l’ARN ont été enregistrées en mesurant l’absorbance à 260 nm et 280 nm, garantissant le rapport 260/280 autour de 2,0. Pour la synthèse de l’ADNc, la Réaction 1 (contenant la gomme gADN, etc.) et la Réaction 2 (contenant la transcriptase inverse, etc.) ont été soigneusement mélangées, et le mélange a été incubé à 95 °C pendant 15 minutes. Le système de réaction PCR à fluorescence a été préparé selon les instructions du kit de synthèse d’ADNc. Un échantillon de 2 μL a été ajouté à 23 μL de mélange de réaction PCR, et l’amplification a été réalisée selon le protocole du kit de PCR quantitative à fluorescence. La température de recuit a été réglée à 60 °C, et les conditions d’amplification étaient les suivantes : pré-dénaturation : 95 °C pendant 30 s, 1 cycle ; Réaction PCR : 95 °C pendant 3 secondes, 60 °C pendant 30 secondes, 40 cycles ; L’analyse de la courbe de dissociation a été réalisée comme suit : 95 °C pendant 5 s, 60 °C pendant 30 s, suivis d’une augmentation progressive de 60 °C à 95 °C avec acquisition continue du signal de fluorescence. Les valeurs de Ct ont été mesurées et calculées à l’aide du logiciel Bio-Rad, et les niveaux relatifs d’ARNm ont été déterminés à l’aide de la méthode 2-ΔΔCt .

Consignes de sécurité et de manipulation

Fixation sur le paraformeldéhyde : Utilisez le paraformaldéhyde exclusivement dans une hotte bien ventilée. Portez toujours un équipement de protection individuelle (EPI) approprié, comprenant un masque, des gants, une blouse de laboratoire et des lunettes de sécurité. Conservez la solution de paraformaldéhyde dans un récipient hermétiquement fermé, à l’abri du soleil direct et des sources de chaleur. Éliminez le paraformoldéhyde des déchets conformément aux directives de sécurité des laboratoires de l’Université médicale de Kunming en le plaçant dans un contenant à déchets dangereux.

Solution DMSO : Le DMSO peut être absorbé par la peau et pénétrer dans le corps. Portez des équipements de protection adaptés, y compris des gants et des lunettes de sécurité, lors de la manipulation. Conservez le DMSO dans un contenant scellé à température ambiante, à l’écart des agents oxydants forts. Éliminez les déchets DMSO conformément aux directives de sécurité des laboratoires de l’Université médicale de Kunming en les plaçant dans un contenant à déchets dangereux.

Anesthésie pentobarbitale : Le Pentobarbital est une substance contrôlée et ne doit être manipulé que par du personnel autorisé. Évitez toute exposition accidentelle lors de la manipulation et assurez-vous d’une bonne ventilation pendant l’utilisation. Portez un équipement de protection approprié. Conservez le pentobarbital dans un placard verrouillé à température ambiante, sous la supervision de personnel autorisé. Éliminer les déchets de pentobarbital conformément aux directives de l’Université médicale de Kunming pour les substances contrôlées, en garantissant une autorisation d’utilisation appropriée et des procédures d’élimination des déchets.

Élimination générale des déchets : Tous les produits chimiques et réactifs dangereux doivent être éliminés conformément aux directives de gestion des laboratoires de l’Université médicale de Kunming. Veillez à ce que tous les déchets soient correctement étiquetés et placés dans des contenants appropriés pour une élimination sûre.

Analyse statistique

Toutes les expériences ont été menées en triple exemplaire ou plus. Les valeurs de densité de bande des protéines cibles ont été normalisées à celles du groupe témoin afin de faciliter la comparaison entre les groupes. Les données sont présentées sous forme de médiane (intervalle interquartile) ou moyenne ± écart-type, n représentant le nombre de rats. Pour les données distribuées normalement, les différences significatives entre les groupes ont été évaluées à l’aide d’une analyse unidirectionnelle de la variance (ANOVA). Pour les données non distribuées normalement, le test H de Kruskal-Wallis a été appliqué pour comparer les groupes. La signification statistique a été fixée à p < 0,05.

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Résultats

La coloration H&E et le score BBB démontrent les effets protecteurs de l’EA sur les rats LM

La coloration H&E a été utilisée pour examiner la morphologie et la structure des cellules du cor postérieur de la moelle épinière (Figure 2D). Les résultats de la S&E ont révélé que dans le groupe S, les cellules de la corne postérieure étaient soigneusement disposées, avec des contours cellulaires bien définis et des noya...

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Discussion

Cette étude démontre que le traitement EA soulage la cavitation et la démyélinisation de la moelle épinière après LME, favorisant la remyélinisation par une régulation à la hausse de l’expression de la protéine MBP, et améliore par conséquent la fonction motrice des membres postérieurs chez les rats. De plus, nous avons identifié la voie de signalisation NRG-1/ErbB4 comme un médiateur critique de la remyélinisation neuronale et un mécanisme thérapeutique potentiel par lequel l’EA favoris...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Remerciements

Nous remercions les auteurs pour leurs contributions à cette étude. Cette étude a été financée par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (NSFC 81960817, 82260387) et le Programme spécial de recherche fondamentale du Plan Science et Technologie du Département provincial des sciences et technologies du Yunnan (202301AS070020). Projet de recherche scientifique et de développement du North Sichuan Medical College (CBY22-QNA20)

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Kit de détection des protéines BCA & nbsp ;Beyotime BiotechnologyP0012SAnalyse quantitative des protéines
Dispositif d’électroacupunctureInstrument d’électroacupuncture Huatuo, SDZ-V, Suzhou&mdash ;Équipements thérapeutiques
IgG anti-humain marqué par FITCBeyotimeA0556Anticorps secondaire fluorescent
IgG anti-souris marqué FITCBeyotimeA0568Anticorps secondaire fluorescent
IgG anti-lapin marqué FITC pour la chèvreBeyotimeA0562Anticorps secondaire fluorescent
Microscope à fluorescenceOlympe&mdash ;&mdash ;
MBP monoclonal humainAbcamab209328Anticorps spécifique
Solution de coloration à la myéline LFBSolarbioG3240Tache de la gaine de myéline
Millipore ECLMilliporeWBKLS0100Réactifs de détection
NRG-1 monoclonal de souris  ; Santa CruzSC-57384Anticorps spécifique
Nanodrop ND-1000LabTech&mdash ;
NRG1-1 bêtaNovoprotein Technology CoC753NRG1-1 bêta recombinant humain
PD158780Technologie GlpBioGC15925Inhibiteur du facteur de croissance épidermique (EGFR) de la tyrosine kinase
Conduit PE-10Becton, Dickinson and Company427401Injection intrathécalienne
Pénicilline sodique pour injectionHarbin Zhongjing Biotechnology Co80451182Traitement anti-infectieux postopératoire
ErbB4 monoclonal de lapinAbcamab109273Anticorps spécifique
RNAiso Plus KitTakara9109Réactifs RT-PCR
Kit de réactifs RTTakaraRR037ARéactifs RT-PCR
Anticorps secondaireBeyotime Biotechnology&mdash ;Anticorps spécifique
Pentobarbital sodiqueSigma-Aldrich69020100Anesthésie animale
Clip d’anévrisme de YasargilRebstock Instruments GmbH&mdash ;Construction d’un modèle de lésion de la moelle épinière chez le rat

Références

  1. McDonald, J. W., Sadowsky, C. Spinal-cord injury. Lancet. 359 (9304), 417-425 (2002).
  2. Mohammadi, E., Villeneuve, L. M., Smith, Z. A. Spinal Cord Injury: The Global Incidence, Prevalence, and Disability From the Global Burden of Disease Study 2019. Spine. 48 (24), 1767(2023).
  3. Anjum, A., et al. Spinal Cord Injury: Pathophysiology, Multimolecular Interactions, and Underlying Recovery Mechanisms. Int J Mol Sci. 21 (20), 7533(2020).
  4. Fang, M., Chen, L., Tang, T., Qiu, M., Xu, X. The committed oligodendrocyte precursor cell, a newly-defined intermediate progenitor cell type in oligodendroglial lineage. Glia. 71 (11), 2499-2510 (2023).
  5. Hellenbrand, D. J., et al. Inflammation after spinal cord injury: a review of the critical timeline of signaling cues and cellular infiltration. J Neuroinflammation. 18 (1), 284(2021).
  6. Pukos, N., et al. Chronic demyelination and myelin repair after spinal cord injury in mice: A potential link for glutamatergic axon activity. Glia. 71 (9), 2096-2116 (2023).
  7. Birch, S., Robinson, N. Acupuncture as a post-stroke treatment option: A narrative review of clinical guideline recommendations. Phytomedicine. 104, 154297(2022).
  8. Jiang, K., Sun, Y., Chen, X. Mechanism Underlying Acupuncture Therapy in Spinal Cord Injury: A Narrative Overview of Preclinical Studies. Front Pharmacol. 13, 875103(2022).
  9. Wang, X., et al. Electroacupuncture at Dazhui (GV14) and Mingmen (GV4) protects against spinal cord injury: the role of the Wnt/β-catenin signaling pathway. Neural Regen Res. 11 (12), 2004-2011 (2016).
  10. Li, S. S., et al. Electroacupuncture treatment improves motor function and neurological outcomes after cerebral ischemia/reperfusion injury. Neural regen res. 17 (7), 1545-1555 (2022).
  11. Liu, C., et al. Electroacupuncture promotes oligodendrocyte differentiation and myelin repair in a rat model of vascular dementia: Investigation of the mechanism from NF-κB-mediated inflammation. Neuroscience. 572, 21-34 (2025).
  12. Tong, T., et al. Electroacupuncture ameliorates chronic unpredictable mild stress-induced depression-like behavior and cognitive impairment through suppressing oxidative stress and neuroinflammation in rats. Brain Res Bull. 206, 110838(2024).
  13. Ahn, S. M., et al. Electroacupuncture ameliorates memory impairments by enhancing oligodendrocyte regeneration in a mouse model of prolonged cerebral hypoperfusion. Sci Rep. 6, 28646(2016).
  14. Kong, Y., Yang, J., Fan, Y. Q., Wang, W. S., Zhang, Y. T. "Huayu Tongluo" moxibustion improves learning-memory ability and promotes myelin regeneration by regulating Sonic Hedgehog signaling pathway in vascular dementia rats. Zhen Ci Yan Jiu. 48 (6), 578-584 (2023).
  15. Chen, W. C., et al. Influence of electroacupuncture of Dazhui (EX-B2) and Mingmen (GV4) on NR2B expression in anterior horns of spinal cord in rats with acute spinal cord injury. Zhen Ci Yan Jiu. 44 (2), 95-101 (2019).
  16. Mei, L., Nave, K. A. Neuregulin-ERBB signaling in the nervous system and neuropsychiatric diseases. Neuron. 83 (1), 27-49 (2014).
  17. Birchmeier, C., Bennett, D. L. Neuregulin/ErbB Signaling in Developmental Myelin Formation and Nerve Repair. Curr Top Dev Biol. 116, 45-64 (2016).
  18. Chen, S., et al. Neuregulin 1-erbB signaling is necessary for normal myelination and sensory function. J Neurosci. 26 (12), 3079-3086 (2006).
  19. Bartus, K., et al. ErbB receptor signaling directly controls oligodendrocyte progenitor cell transformation and spontaneous remyelination after spinal cord injury. Glia. 67 (6), 1036-1046 (2019).
  20. Tao, F., et al. Role of neuregulin-1/ErbB signaling in stem cell therapy for spinal cord injury-induced chronic neuropathic pain. Stem cells. 31 (1), 83-91 (2013).
  21. Clark, A. J., et al. Co-cultures with stem cell-derived human sensory neurons reveal regulators of peripheral myelination. Brain. 140 (4), 898-913 (2017).
  22. Wan, C., et al. Neuregulin1-ErbB4 Signaling in Spinal Cord Participates in Electroacupuncture Analgesia in Inflammatory Pain. Front Neurosci. 15, 636348(2021).
  23. Tseropoulos, G., et al. Immobilized NRG1 Accelerates Neural Crest like Cell Differentiation Toward Functional Schwann Cells Through Sustained Erk1/2 Activation and YAP/TAZ Nuclear Translocation. Adv Sci (Weinh). 11 (33), e2402607(2024).
  24. Luo, M., et al. Neuronal activity-dependent myelin repair promotes motor function recovery after contusion spinal cord injury. Brain Res Bull. 166, 73-81 (2021).
  25. Hesp, Z. C., Goldstein, E. Z., Miranda, C. J., Kaspar, B. K., McTigue, D. M. Chronic oligodendrogenesis and remyelination after spinal cord injury in mice and rats. J Neurosci. 35 (3), 1274-1290 (2015).
  26. Levy, G., et al. Gtf2i-encoded transcription factor Tfii-i regulates myelination via Sox10 and Mbp regulatory elements. Nat Commun. 16 (1), 8518(2025).
  27. Cescon, M., et al. Gut microbiota depletion delays somatic peripheral nerve development and impairs neuromuscular junction maturation. Gut Microbes. 16 (1), 2363015(2024).
  28. Ayar, Z., et al. The effect of low-level laser therapy on pathophysiology and locomotor recovery after traumatic spinal cord injuries: a systematic review and meta-analysis. Laser Med Sci. 37 (1), 61-75 (2022).
  29. Ghane, N., Beigi, M. H., Labbaf, S., Nasr-Esfahani, M. H., Kiani, A. Design of hydrogel-based scaffolds for the treatment of spinal cord injuries. J Mater Chem B. 8 (47), 10712-10738 (2020).
  30. Laskin, J. J., Waheed, Z., Thorogood, N. P., Nightingale, T. E., Noonan, V. K. Spinal Cord Stimulation Research in the Restoration of Motor, Sensory, and Autonomic Function for Individuals Living With Spinal Cord Injuries: A Scoping Review. Arch Phys Med Rehabil. 103 (7), 1387-1397 (2022).
  31. Li, G., et al. Epidural Spinal Cord Stimulation Promotes Motor Functional Recovery by Enhancing Oligodendrocyte Survival and Differentiation and by Protecting Myelin after Spinal Cord Injury in Rats. Neurosci Bull. 36 (4), 372-384 (2020).
  32. Csomó, K. B., et al. A Minimally Invasive, Fast Spinal Cord Lateral Hemisection Technique for Modeling Open Spinal Cord Injuries in Rats. J Vis Exp. (181), e63534(2022).
  33. Li, J. J., et al. Animal Models for Treating Spinal Cord Injury Using Biomaterials-Based Tissue Engineering Strategies. Tissue eng part b-re. 28 (1), 79-100 (2022).
  34. Coman, I., Barbin, G., Charles, P., Zalc, B., Lubetzki, C. Axonal signals in central nervous system myelination, demyelination and remyelination. J Neurol Sci. 233 (1-2), 67-71 (2005).
  35. Inouye, H., Kirschner, D. A. Evolution of myelin ultrastructure and the major structural myelin proteins. Brain Res. 1641 (Pt A), 43-63 (2016).
  36. Chen, X., Li, H. Neuronal reprogramming in treating spinal cord injury. Neural Regen Res. 17 (7), 1440-1445 (2022).
  37. Huang, S., et al. Protective Effect of Electroacupuncture on Neural Myelin Sheaths is Mediated via Promotion of Oligodendrocyte Proliferation and Inhibition of Oligodendrocyte Death After Compressed Spinal Cord Injury. Mol Neurobiol. 52 (3), 1870-1881 (2015).
  38. Kang, Z., et al. Electroacupuncture promotes regeneration and repair of myelin sheath of corpus callosum in demyelination mice. Zhen Ci Yan Jiu. 45 (1), 1-7 (2020).
  39. Zhu, K., et al. Electroacupuncture Promotes Remyelination after Cuprizone Treatment by Enhancing Myelin Debris Clearance. Front Neurosci. 10, 613(2017).
  40. Lu, J. Y., et al. Effects of electroacupuncture at different acupoints on the histomorphology of neurogenic bladder and the expression of hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels in interstitial cells of Cajal in a rat model of suprasacral spinal cord injury. Ann Palliat Med. 9 (6), 3830-3838 (2020).
  41. Tu, W. Z., et al. The regulatory effect of electro-acupuncture on the expression of NMDA receptors in a SCI rat model. Life Sci. 177, 8-14 (2017).
  42. Ding, Z., et al. Neuregulin-1 converts reactive astrocytes toward oligodendrocyte lineage cells via upregulating the PI3K-AKT-mTOR pathway to repair spinal cord injury. Biomed Pharmacother. 134, 111168(2021).
  43. Kataria, H., et al. Neuregulin-1 promotes remyelination and fosters a pro-regenerative inflammatory response in focal demyelinating lesions of the spinal cord. Glia. 66 (3), 538-561 (2018).
  44. Schmitd, L. B., et al. Deletion of murine Sarm1 results in a microenvironment that delays peripheral nerve regeneration after injury. Sci Transl Med. 17 (819), eadp9155(2025).
  45. Hu, X., et al. Pan-ErbB inhibition impairs cognition via disrupting myelination and aerobic glycolysis in oligodendrocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (45), e2405152121(2024).
  46. Størkson, R. V., Kjørsvik, A., Tjølsen, A., Hole, K. Lumbar catheterization of the spinal subarachnoid space in the rat. J Neurosci Methods. 65 (2), 167-172 (1996).
  47. Rahimi-Movaghar, V., Jazayeri, S. B. When do we start Basso, Beattie, and Bresnahan assessment after experimental spinal cord injury. Acta Med Iran. 51 (8), 5183(2013).

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