Les reconstructions vasculaires chez les receveurs, y compris la veine cave inférieure suprahépatique (SHIVC), la veine porte et la veine cave inférieure infrahépatique (IHIVC), sont les procédures clés pour une transplantation hépatique orthotopique de souris réussie. Nous fournissons ici des techniques de suture et des conseils pour la reconstruction SHIVC et IHIVC dans le modèle de greffe de foie de souris.
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Article de méthode
Techniques de suture pour la reconstruction vasculaire dans la transplantation hépatique orthotopique de souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
La recherche translationnelle utilisant des modèles animaux est essentielle pour résoudre les problèmes cliniques liés aux transplantations d’organes. Bien que la transplantation hépatique orthotopique (LT) de souris soit un outil utile pour étudier les mécanismes de régénération hépatique, les lésions d’ischémie-reperfusion et les réponses immunitaires après LT, les défis techniques de cette procédure limitent sa faisabilité. Les aspects clés du succès de la LT orthotopique chez la souris sont la reconstruction vasculaire chez les receveurs, y compris la veine cave inférieure suprahépatique (SHIVC), la veine porte (PV) et la veine cave inférieure infrahépatique (IHIVC). En plus des difficultés techniques rencontrées lors de la reconstruction de ces vaisseaux, la limitation du temps de la phase anhépatique à moins de 20 minutes rend cette procédure plus difficile. Bien qu’une technique de brassard puisse être utilisée pour la reconstruction PV, une technique de suture sûre et rapide est nécessaire pour reconstruire le SHIVC pendant la phase anhépatique. Pour la reconstruction de l’IHIVC, bien que les techniques de brassard et de suture soient applicables, la technique de suture permet de réduire le temps d’opération lors de la chirurgie du donneur et de la préparation de la table arrière et peut maintenir une lumière vasculaire plus grande que la technique du brassard. Nous fournissons ici des lignes directrices pour la reconstruction SHIVC et IHIVC à l’aide d’une technique de suture pour faciliter la LT orthotopique de souris.
Introduction
Grâce aux progrès des techniques chirurgicales, des médicaments immunosuppresseurs et de la médecine intensive, la transplantation d’organes est devenue une thérapie standard pour les maladies d’organes en phase terminale. La transplantation hépatique (LT) est actuellement le seul traitement curatif pour les maladies hépatiques en phase terminale et certaines tumeurs malignes hépatiques. La recherche translationnelle utilisant des modèles animaux est essentielle pour résoudre les problèmes cliniques de LT. Comme divers animaux génétiquement modifiés sont disponibles dans des modèles murins, l’orthotopique LT de souris est un outil important pour explorer les connaissances mécanistes de la régénération hépatique, des lésions d’ischémie-reperfusion et des réponses immunitaires après LT1. Cependant, comme les défis techniques de cette procédure limitent sa faisabilité, les groupes de recherche travaillant sur ce modèle sont limités 2,3,4,5,6,7,8,9,10.
L’orthotopique LT de souris a été décrit pour la première fois par Qian et al. en 19912. La procédure chirurgicale, développée en appliquant des techniques orthotopiques LT chez le rat, comprend trois étapes : la chirurgie du donneur, la préparation de la greffe hépatique sur la table arrière et l’opération du receveur6. Les parties techniquement difficiles de la LT de souris sont la reconstruction biliaire et vasculaire chez les receveurs, y compris la veine cave inférieure suprahépatique (SHIVC), la veine porte (PV) et la veine cave inférieure infrahépatique (IHIVC). En plus des techniques chirurgicales, la phase anhépatique entre le clampage et la libération du flux PV doit être dans les 20 minutes pour une orthotopie de souris LT 2,6,11 réussie. De plus, d’après notre expérience, le temps total de reperfusion entre le clampage PV et la libération de l’IHIVC devrait être inférieur à 30 minutes pour atteindre la survie à long terme chez la souris LT. Ceci est cohérent avec le rapport précédent pour le rat LT décrivant le moment préférable de l’état hémodynamique systémique instable comme étant d’environ 30 min12. Ainsi, les difficultés techniques et les contraintes de temps de la souris LT rendent cette procédure plus difficile.
Bien que la technique du brassard puisse être utilisée pour la reconstruction PV, une technique de suture est nécessaire pour reconstruire le SHIVC pendant la phase anhépatique. Par conséquent, une technique de suture sûre et rapide est essentielle pour l’anastomose SHIVC. Bien que les techniques de brassard et de suture soient applicables pour la reconstruction de l’IHIVC, la plupart des études précédentes ont utilisé une technique de brassard 5,6,7,11,13. Cependant, l’utilisation d’une technique de brassard dans la reconstruction de l’IHIVC conduit à une durée d’opération plus longue dans les opérations du donneur et de la table arrière. De plus, l’insertion d’un brassard peut être plus difficile que la suture pour les débutants en raison de la marge courte de la veine cave inférieure receveuse (VCI)13.
Nous fournissons ici des lignes directrices pour une reconstruction réussie de SHIVC et IHIVC à l’aide d’une technique de suture chez la souris orthotopique LT.
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Protocole
Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvées par le Comité d’expérimentation animale de l’Université de Kyoto et effectuées conformément aux directives de protection des animaux de l’Université de Kyoto. Les chirurgies de souris ont été effectuées sous anesthésie générale en utilisant l’inhalation d’isoflurane. Le vaporisateur a été réglé à 3 % d’isoflurane avec 1 L/min d’oxygène pour induire l’anesthésie. Après laparotomie, l’isoflurane a été réduit à 1 % pour maintenir l’anesthésie. Les outils microchirurgicaux utilisés dans ce protocole, y compris ceux utilisés dans notre protocole de reconstruction vasculaire13 publié précédemment, sont énumérés dans la table des matériaux. Un microscope a été nécessaire pour effectuer l’orthotopie LT13 de la souris. Un coussin chauffant a été utilisé pour maintenir la température corporelle de la souris13.
1. Animaux
- Utilisez une souris de 25 à 30 g.
REMARQUE : Bien que des souris pesant de 20 à 35 g puissent être utilisées, les souris d’environ 25 g conviennent à la fois aux donneurs et aux receveurs. Comme l’âge et la stéatose hépatique affectent les résultats de la LT, des souris appropriées doivent être sélectionnées pour chaque objectif des expériences.
2. Dissection de l’IHIVC dans le foie du donneur
- Isolez l’IHIVC des tissus environnants. Scellez les veines lombaires avec un électrocautérisation si nécessaire.
- Retirez la graisse de l’IHIVC pour exposer la paroi du vaisseau.
- Disséquer l’IHIVC au-dessus de l’artère rénale et de la veine droites (Figure 1).
REMARQUE : Si la technique de suture est utilisée pour la reconstruction de l’IHIVC, la dissection de la veine rénale droite dans le site donneur n’est pas nécessaire. La chirurgie du donneur prend généralement moins de 30 minutes lors de l’application de la technique de suture pour la reconstruction IHIVC.
3. Dissection du SHIVC dans le foie du donneur
- Après perfusion de la solution de stockage à partir du PV, coupez les parois antérieure et postérieure du SHIVC (Figure 1).
REMARQUE : L’isolation de la paroi postérieure SHIVC du diaphragme crus est cruciale pour obtenir une marge suffisante pour la reconstruction.
4. Préparation de la greffe de foie sur la table arrière
- Fixez un brassard au PV, comme décrit précédemment13.
- Fixez un clip de serrage à l’IHIVC.
- Retournez le foie et exposez le moignon de SHIVC.
- Placez une suture de maintien en nylon 10-0 sur les deux bords du SHIVC et maintenez-les avec des pinces bulldog.
REMARQUE : La préparation de la table arrière prend environ 10 minutes sans fixation du brassard à l’IHIVC.
5. Reconstruction de la SHIVC chez le bénéficiaire
- Encerclez le SHIVC avec de la soie 4-0 pour rétracter le foie vers le bas.
- Réduire la concentration d’isoflurane à 0,3-0,5 % avant la phase anhépatique.
- Clampez l’IHIVC au-dessus de la veine rénale droite à l’aide d’une microserrefine.
- Fixez le PV à l’aide d’une pince Pean13.
- Clampez le SHIVC avec le diaphragme à l’aide d’une pince bulldog tout en rétractant le foie vers le bas.
- Coupez la paroi antérieure du SHIVC, puis coupez la paroi postérieure (Figure 1).
REMARQUE : L’isolement de la paroi postérieure du SHIVC par rapport au diaphragme crus chez le receveur et les donneurs est crucial pour obtenir une marge suffisante pour la reconstruction. - Après avoir disséqué le PV et l’IHIVC près du foie du receveur, retirez le foie du receveur (Figure 1).
- Placez le greffon hépatique préparé dans la cavité abdominale du receveur et placez le foie de manière appropriée.
- Placez et ligaturez une suture de maintien à l’extrémité droite du SHIVC et maintenez-la avec une pince bulldog pour tirer la suture vers la face ventrale du receveur (Figure 2A).
REMARQUE : Le côté droit du SHIVC se trouve profondément dans la cavité abdominale. Tirez le côté droit du SHIVC de manière à ce que la paroi postérieure soit placée devant. - Placez et ligaturez une suture de maintien à l’extrémité gauche du SHIVC.
- Commencer la suture continue avec une méthode intraluminale sur la paroi postérieure du SHIVC à partir du côté gauche (Figure 2A).
- Lorsque vous atteignez l’extrémité droite de la paroi postérieure du SHIVC, tournez la table d’opération de 90° dans le sens inverse des aiguilles d’une montre.
REMARQUE : Tournez la table d’opération de 90° dans le sens des aiguilles d’une montre pour les chirurgiens gauchers. Alternativement, les chirurgiens peuvent suturer la paroi antérieure de l’avant vers l’arrière sans rotation. - Poursuivez la suture avec une suture superposée sur la paroi antérieure du SHIVC à partir du côté droit (Figure 2A).
REMARQUE : Environ six à huit points de suture pour la paroi postérieure et huit à dix points de suture pour la paroi antérieure sont nécessaires. La suture à l’extrémité gauche de la paroi antérieure est importante pour prévenir les saignements. - Après avoir rincé l’air dans le SHIVC, ligaturez la suture continue avec la suture de maintien sur le côté gauche du SHIVC.
- Tournez la table d’opération de 90° dans le sens des aiguilles d’une montre pour rétablir la position du receveur dans sa position d’origine.
- Après la reconstruction et la reperfusion du PV, défixez le SHIVC.
REMARQUE : Il faut 10-15 minutes pour la reconstruction SHIVC. Comme le temps de clampage PV peut affecter les résultats de LT, le temps anhépatique (du clampage PV au débrouillage PV) doit être fixé jusqu’à 20 min en fonction de l’habileté du chirurgien. Après la reperfusion PV, l’isoflurane est réinitialisé à 1 % pour maintenir l’anesthésie.
6. Reconstruction de l’IHIVC chez le bénéficiaire
- Placez et ligaturez des sutures de maintien avec du nylon 10-0 aux deux extrémités de l’IHIVC.
- Tenez les sutures de hauban avec des pinces bouledogue pour tirer vers les deux côtés, de sorte que le moignon IHIVC devienne large et droit.
- Commencer la suture continue avec une méthode intraluminale sur le côté gauche de la paroi postérieure (Figure 2B).
- Après avoir atteint le côté droit, continuez à suturer encore et encore sur la paroi antérieure à partir du côté droit du receveur (Figure 2B).
REMARQUE : La rotation de la table d’opération n’est pas nécessaire pour la reconstruction de l’IHIVC. Environ six à huit points de suture pour chaque paroi postérieure et antérieure suffisent. - Rincez l’air dans l’IHIVC.
- Desserrez les clips IHIVC du côté greffé, puis du côté receveur.
REMARQUE : Il n’est pas nécessaire de ligaturer la suture continue avec la suture de maintien du côté gauche de l’IHIVC. Il faut compter 8 à 10 minutes pour la reconstruction de l’IHIVC. Le temps total de reperfusion entre le serrage PV et la libération de l’IHIVC doit être de 30 minutes.
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Résultats
Une souris receveuse s’est rétablie de l’anesthésie dans les 30 minutes lorsque la reconstruction vasculaire a été réalisée avec succès à l’aide d’une greffe de foie normale sans temps ischémique prolongé à froid. Un taux de réussite de >90 % peut être considéré comme qualifié pour cette procédure. Nous avons examiné les courbes d’apprentissage d’un chirurgien pour les taux de récupération post-LT (récupération de l’anesthésie), le temps anhépatique (du clampage à la libération du flux PV) et le temps de reperfusion t...
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Discussion
Cet article a documenté les techniques détaillées pour la reconstruction du SHIVC et de l’IHIVC avec une technique de suture chez la souris orthotopique LT. La reconstruction vasculaire, en particulier l’anastomose SHIVC, qui nécessite une technique de suture pendant la phase anhépatique, est une compétence cruciale pour une LT de souris réussie. En plus de la technique de suture sûre et sécurisée, une suture rapide est nécessaire pour maintenir la phase anhépatique dans les 20 minutes p...
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par la Société japonaise pour la promotion de la science (numéro de subvention : 24K19356).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 10-0 Micro suture | AROSurgical Instruments Corporation | T4A10N07 | |
| Cathéter intraveineux de 16 g | TERUMO | SR-FF2032 | Brassard IHIVC |
| Cathéter intraveineux de 20 g | TERUMO | SR-FF1651 | Brassard PV |
| 8-0 tresse de soie | Natsume Seisakusho | Réf. CR9-80B2 | 8-0 soie |
| Solution de stockage frigorifique Belzer UW | Astellas | liquide de préservation des organes | |
| Pince Bulldog | B BRAUN | FB329R | Pince Bulldog |
| Pinces Bulldog | Natsume Seisakusho | C-42-S-2 | Pour le serrage SHIVC |
| C57BL/6 souris ; ; | Oriental Bio Service | ||
| Forceps | Outils scientifiques fins | 11231-30 | |
| Solution d’inhalation d’isoflurane | Viatris | Anesthésique | |
| Micro pointes émoussées 0,1 mm x 0,06 mm ; | Outils scientifiques fins | 11253-20 | Micropinces droites |
| Micro ciseaux | Muranaka Medical Instruments | 451-609-13 | |
| Micro serrefine | Outils scientifiques fins | 18055-03 | Pour le serrage IHIVC |
| Micro serrefine | Outils scientifiques fins | 18055-04 | Pour le serrage PV |
| Micro Serrefine Clamp Applicateur avec Lock | Outils scientifiques fins | 18056-14 | Applicateur à clip de récipient |
| Micro Serrefines ; | Outils scientifiques fins | 18055-4 | Clip de récipient |
| Micro suture foeceps | Aesculap | FD281R | |
| Applicateur à pince Micro-serrefine | Outils scientifiques fins | 18056-14 | |
| Porte-aiguille | Aesculap | FD231R | |
| No.11 Lames de rechange | Rasoir de sûreté FEATHER | 11 | Lames |
| Ciseaux ophtalmiques, manche rond | B BRAUN | FD103R | Microciseaux |
| Récipient en plastique de forme rectangulaire ; | Daiso | 10 cm de long, 15 cm de large et 6 cm de haut | |
| Pointes SuperGrip | Outils scientifiques fins | 00649-11 ; | Micropinces incurvées |
| SZX7 | Olympe | SZX7 | Microscope |
| Ciseaux Vannas | Instruments de précision mondiaux | 501232 | |
| Clip vasculaire | BEAR Medic Corporation | TKF-1-30 | Pour le clampage IHIVC sur le greffon hépatique |
Références
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- Tanaka, K., et al. Vascular reconstruction with the cuff technique in mouse orthotopic liver transplantation. J Vis Exp. (202), e66215(2023).
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Réimpressions et autorisations
