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Article de méthode

Développement et standardisation d’une microméthode ex vivo pour la quantification intracellulaire de la vincristine dans les cellules primaires de la LLA par LC-MS/MS

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DOI :

10.3791/69535

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23 janvier 2026

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1Leukemia Biology Laboratory, Boldrini Children's Center, 2Mass Spectrometry Laboratory, Boldrini Children's Center, 3Boldrini Children's Center

Dans cet article

Résumé

Ce protocole visait à établir et optimiser une méthode LC-MS/MS pour la quantification relative de l’accumulation de vincristine dans les cellules primaires pédiatriques LL.

Résumé

Quantifier la vincristine intracellulaire (VCR) dans les cellules primaires de leucémie lymphoblastique aiguë pédiatrique (LLA) est essentiel pour comprendre les différences spécifiques à chaque échantillon dans l’absorption des médicaments et pour soutenir des études expérimentales utilisant du matériel rare du patient. Ici, nous présentons une microméthode LC-MS/MS simplifiée, spécifiquement optimisée pour les cellules ALL primaires obtenues par xénogreffes dérivées du patient (PDX), en répondant à des défis clés tels que la disponibilité limitée des cellules, la petite taille cellulaire et la nécessité d’une récupération reproductible après plusieurs étapes de lavage. Des tests temporels allant de 1 à 5 heures ont démontré qu’une période d’incubation de 3 heures donne les niveaux de magnétoscope intracellulaire les plus élevés et les plus constants, avec une variabilité plus faible entre les réplications. L’optimisation des méthodes a également établi que l’utilisation de 2,5 × 106 cellules par condition améliore la robustesse analytique comparée à 1 × 106 cellules, qui ont montré une plus grande dispersion lors d’expériences répétées. D’autres améliorations cruciales comprenaient l’utilisation du méthanol froid pour améliorer l’efficacité des précipitations des protéines et l’intégration d’un standard interne pour surveiller et minimiser la variation procédurale. La méthode permet une quantification sensible et précise du magnétoscope intracellulaire sur les plages de concentration pertinentes, bien que la dose la plus faible testée (0,01 μM) n’ait pas été quantifiable après l’incubation de 3 heures. Dans l’ensemble, cette microméthode offre une approche pratique, reproductible et évolutive pour mesurer un magnétoscope intracellulaire sur des échantillons primaires ALL. Sa conception soutient des analyses comparatives, la validation de modèles ex vivo et de futures applications méthodologiques visant à intégrer la quantification intracellulaire des médicaments dans des évaluations pharmacologiques plus larges.

Introduction

La leucémie lymphoblastique aiguë (LLA) représente environ 25 % de tous les cancers infantiles et reste la malignité pédiatriquela plus fréquente 1,2. Bien que les avancées thérapeutiques aient nettement amélioré les taux de survie, dépassant désormais 90 %, la complexité biologique de la LLA continue de motiver les efforts pour développer des outils qui caractérisent mieux la maladie au niveaucellulaire 3.

Les alcaloïdes de Vinca, en particulier les magnétoscopes, sont des composants clés de TOUS les protocoles de traitement4. Parce que le magnétoscope exerce ses effets cytotoxiques intracellulaires, comprendre son absorption et son accumulation dans les cellules leucémiques est fondamental pour des études portant sur la réponse aux médicaments, la pharmacodynamique et le comportement cellulaire dans les systèmes ex vivo. Cependant, la plupart des approches disponibles pour évaluer les niveaux intracellulaires de médicaments reposent sur des mesures indirectes ou des méthodes semi-quantitatives, limitant la reproductibilité et la sensibilité 5,6,7.

Parallèlement, de nombreuses recherches reposent encore fortement sur les lignées cellulaires leucémiques, qui manquent d’hétérogénéité biologique et de pertinence clinique des cellules primaires dérivées du patient. Les échantillons primaires présentent souvent des défis tels que le nombre limité de cellules, la qualité variable des échantillons et la nécessité de techniques analytiques très sensibles capables de détecter des composés intracellulaires à faibleabondance 8.

La chromatographie liquide-spectrométrie de masse tandem (LC-MS/MS) fournit la spécificité et la sensibilité nécessaires à la quantification précise des agents chimiothérapeutiques, mais les protocoles standardisés pour mesurer directement le magnétoscope intracellulaire dans les cellules leucémiques primaires restent rares. Établir des microméthodes robustes compatibles avec un matériel patient limité peut faciliter un large éventail d’applications, notamment le profilage pharmacologique, l’évaluation des interactions médicamenteuse-cellule, et des études comparatives entre sous-types de maladies ou conditions thérapeutiques.

Dans ce protocole, nous décrivons le développement et l’optimisation d’une microméthode pour la quantification ex vivo du magnétoscope intracellulaire dans les cellules leucémiques primaires utilisant LC-MS/MS. Pour obtenir suffisamment de matériel pour le développement de la méthode, des échantillons de patients ont été transplantés dans des souris immunodéficientes NSG pour générer les modèlesPDX 9. Après une expansion in vivo , les cellules leucémiques humaines ont été isolées et cryopréservées10. Ensuite, ils ont été décongelés, incubés avec un magnétoscope, lavés, lysés et analysés par LC-MS/MS pour déterminer les niveaux intracellulaires de médicaments.

Cette méthode présente plusieurs avantages : elle nécessite un petit nombre de cellules (2,5 millions), est sensible et rapide, et compatible avec des échantillons primaires cliniquement pertinents. Parce qu’il mesure directement la teneur intracellulaire de médicaments, il constitue un outil quantitatif fiable pour les chercheurs étudiant l’absorption des médicaments, les réponses cellulaires aux chimiothérapeutes ou d’autres questions pharmacologiques dans les cancers hématologiques.

Dans l’ensemble, ce protocole élargit la boîte à outils analytiques disponible pour l’étude de la LLA pédiatrique et peut être facilement adapté à d’autres médicaments ou types d’échantillons, soutenant ainsi de futures recherches sur la biologie leucémique, le comportement des médicaments et la pharmacologie de précision.

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Protocole

Les échantillons de leucémie utilisés dans cette étude ont été prélevés à partir de fioles bio-banquées de patients traités au Centro Infantil Boldrini, qui ont autorisé l’utilisation de leurs cellules via un formulaire de consentement éclairé. Le projet a été approuvé par le Comité d’éthique institutionnelle (CAAE 34601120.7.0000.5376). Les protocoles pour la génération de PDX chez les animaux ont été mis en œuvre conformément aux règlements et directives éthiques du Comité d’éthique animale (Comissão de Ética no Uso de Animais) du Centro Infantil Boldrini (CEUA/Boldrini 0011-2020).

1. Préparation de l’échantillon et incubation du médicament (Jour 1)

  1. Préparation du stock et solutions de travail
    1. Pèser 2,5 mg de sulfate de vincristine (poids moléculaire : 923 g/mol) et dissoudre dans 2,0 mL de diméthylsulfoxyde (DMSO) dans un microtube de 2,0 mL pour préparer une solution d’origine de 1,354 mM. Vortex jusqu’à ce que ce soit complètement dissous.
      ATTENTION : Le DMSO est un irritant ; Portez des gants et manipulez le produit dans une hotte chimique.
    2. Préparez la solution de travail de 100 μM en mélangeant 147,71 μL de la solution de stock du magnétoscope avec 1 852,28 μL de DMSO dans un microtube de 2,0 mL. Vortex complètement.
    3. Distribuez 500 μL de la solution de travail dans quatre microtubes de 0,6 mL et conservez à -20 °C pendant plusieurs mois. Évitez de décongeler les aliquotes plus de trois fois.
    4. Préparez une solution de travail de vinblastine (VINB) à 100 μM en mélangeant 181,81 μL d’une solution d’origine de 1,1 mM (sulfate de vinblastine 1 mg/mL, poids moléculaire : 909,07 g/mol) avec 1 818,19 μL d’eau ultrapure stérile dans un microtube de 2,0 mL. Vortex jusqu’à homogène.
    5. Au contraire, la solution VINB fonctionne de la même manière que pour le magnétoscope.
    6. Préparez une solution de méthanol + 0,1 μM de VINB en mélangeant 49,95 mL de méthanol avec 50 μL de la solution de travail VINB dans un tube de 50 mL. Vortex jusqu’à homogène. Conservez-le à -20 °C jusqu’à 3 mois.
      ATTENTION : Le méthanol est toxique et inflammable ; manier avec l’équipement de protection approprié dans une hotte à fumée.
    7. Préparez une solution d’acide formique à 0,1 % d’eau + 0,1 % en mélangeant 49,95 mL d’eau ultrapure avec 50 μL d’acide formique dans un tube de 50 mL. Vortex well. Conserver à température ambiante (RT).
      ATTENTION : L’acide formique est corrosif ; Manipuler avec des gants et une protection oculaire.
  2. Dégel et lavage des cellules primaires
    1. Dégelez les échantillons de cellules cryopréservées en faisant doucement tourner le flacon dans un bécher contenant 15 mL d’eau distillée à 37 °C jusqu’à ce qu’il soit complètement décongelé.
      REMARQUE : Des informations concernant les protocoles de collecte et de congélation des cellules se trouvent dans des publicationsprécédentes 9,10.
    2. Transférez le contenu du flacon dans un tube conique de 50 mL contenant 10 à 15 mL de PBS stérile 1x avec une pipette Pasteur jetable stérile. Centrifugez à 300 × g pendant 5 minutes en temps de réflexe.
    3. Écartez le surnageant en inversant le tube.
    4. Resuspendez la pellete dans 10 mL de milieu AIM V avec une pipette Pasteur jetable. Comptez les cellules viables et mesurez la taille moyenne des cellules à l’aide d’un compteur automatisé.
      REMARQUE : Il est recommandé d’utiliser des cellules présentant au moins 80 % de viabilité par rapport au nombre total de cellules collectées.
    5. Calculez le volume nécessaire pour collecter 2,5 × 106 cellules viables en utilisant une proportion simple basée sur la concentration mesurée. Par exemple, si la concentration est de 5 × 106 cellules/mL, le volume requis est de 0,5 mL.
      REMARQUE : Effectuez chaque traitement en triple exemplaire pour la reproductibilité des données. Conservez la taille moyenne des cellules fournies dans le compteur automatisé de cellules ; Utilisez-le pour calculer le volume des cellules.
  3. Organisation du traitement de la toxicomanie
    1. Calculez le volume de solution de travail du magnétoscope nécessaire pour atteindre une concentration finale de 1 μM sur un volume total de 2,0 mL. Faites un vortex sur la solution d’origine avant de pipeter.
    2. Ajoutez un milieu AIM V, puis 2,5 × 106 cellules, et enfin la solution magnétoscope sur un microtube de 2,0 mL. Faites un vortex brièvement puis faites tourner légèrement vers le bas (5 s) pour récupérer tout liquide du bouchon du tube.
    3. Incubez les tubes ouverts à 37 °C, 5 % de CO2 pendant 3 heures.
    4. Après l’incubation, fermez les couvercles et centrifugez les échantillons à 300 × g pendant 5 minutes en RT.
    5. Éliminez soigneusement le surnageant à l’aide d’une pipette, puis ajoutez 1 mL de PBS à RT dans le tube.
    6. Répétez la centrifugation à 300 × g pendant 5 minutes en RT, retirez le surnageant, puis lavez le PBS deux fois supplémentaires, pour un total de trois lavages.
    7. Retirez soigneusement tout surnageant à l’aide d’une pipette, resuspendez la pellete dans 100 μL de PBS, puis faites un vortex jusqu’à ce que la pellete soit complètement resuspendue.
    8. Ajoutez 400 μL de méthanol froid + 0,1 μM de vinblastine (-20 °C) directement sur l’échantillon, évitant ainsi le contact avec les parois du tube.
    9. Conservez les échantillons toute la nuit à -80 °C.
      REMARQUE : Les échantillons peuvent être conservés à -80 °C pendant quelques semaines (arrêt sûr).

2. Traitement des échantillons pour LC-MS/MS (Jour 2)

  1. Extraction d’échantillons
    1. Pré-refroidissez la centrifugeuse à 4 °C avant de retirer les échantillons du congélateur à -80 °C.
    2. Immédiatement après avoir sorti les échantillons du congélateur, centrifugez-les à 13 000 × g pendant 20 minutes à 4 °C.
    3. Transférez 300 μL de surnageant dans un microtube de 1,5 mL.
    4. Séchez complètement les échantillons à l’aide d’un concentrateur sous vide à 40-45 °C pendant 1 h et 40 minutes.
      REMARQUE : Les granulés séchés peuvent être conservés à -20 °C pendant quelques semaines (arrêt sûr).
    5. Resuspendez chaque pellet dans 400 μL d’eau + 0,1 % d’acide formique (préparé auparavant). Faites le vortex doucement jusqu’à ce que la pellete soit complètement dissoute.
    6. Centrifugez à nouveau les échantillons à 13 000 × g pendant 20 minutes à 4 °C.
    7. Transférer 300 μL de surnageant dans un flacon à bouchon vissé de 2,0 mL pour une analyse LC-MS/MS.

3. Installation et acquisition de données LC-MS/MS

  1. Préparation de la phase mobile et conditionnement de colonne
    1. Préparez le solvant A en mélangeant de l’eau ultrapure avec de l’acide formique à 0,1 %.
    2. Préparez le solvant B en mélangeant l’acétonitrile avec de l’acide formique à 0,1 %.
      ATTENTION : L’acétonitrile est toxique et inflammable ; Une poignée dans une hotte chimique.
    3. Sonicez chaque solvant dans un bain ultrasonore pendant 5 minutes. Reliez les bouteilles au module de la pompe et purgez le système à débit élevé pour éliminer les contaminants.
    4. Installer une colonne BEH C18 à phase inversée (1,7 μm, 2,1 mm × 50 mm).
      REMARQUE : Pour réaliser l’analyse, cette étude a utilisé un système chromatographique Acquity H-Class couplé à un spectromètre de masse triple-quadrupôle Xevo TQS-Micro.
    5. Utilisez un gradient binaire composé des solvants A et B, tous deux préparés auparavant.
    6. Faites passer le gradient chromatographique de 5 % à 95 % du solvant B pendant les 2 premières minutes, suivi de 2 minutes de solvant A pour le lavage de la colonne et le rééquilibrage.
    7. Réglez le débit à 0,2 mL/min pendant les 4 minutes de tirage. Maintenir la température de la colonne à 40 °C et injecter 10 μL de chaque échantillon.
  2. Configuration de la méthode LC-MS/MS
    1. Ouvre le logiciel LC-MS/MS. Cliquez sur Fichier > Nouvelle méthode > MS pour lancer une nouvelle méthode.
    2. Allez dans l’onglet Fonction et réglez le type de fonction sur surveillance des réactions multiples (MRM). Saisissez les transitions d’ions et les paramètres listés dans le tableau 1 pour le magnétoscope et le VINB (norme interne).
    3. Réglez le temps d’acquisition à 4 minutes. Cliquez sur Postuler pour sauvegarder.
      REMARQUE : Ne pas dépasser 4 minutes pour assurer un rééquilibrage de colonne entre les injections.
    4. Configurez les paramètres UHPLC sous Méthode d’entrée > Éditez la méthode LC et enregistrez comme fichier .mth (Tableau 2).
    5. Définissez les paramètres sources sous l’onglet Tune selon le tableau 3. Sauvegarder en fichier .tun.
    6. Sauvegarder la méthode complète : fichier > enregistrer sous et exporter en fichier .mth.
  3. Créer une liste d’exemples et commencer la partie
    1. Dans l’écran d’accueil du logiciel, ouvrez la liste d’échantillons et créez une liste avec les noms des échantillons, les volumes d’injection, les positions des fioles et la méthode à utiliser.
    2. Placez un flacon avec de l’eau ultrapure dans le plateau de l’autoéchantillonneur et désignez-le comme un blanc. Faites un test blanc entre chaque série d’injections triples pour éviter un report.
      REMARQUE : Avant de commencer la course, assurez-vous que la pression de colonne (ΔP) est stable et inférieure à 10 psi.
    3. Sélectionnez les lignes souhaitées dans la liste d’exemples et cliquez sur Exécuter > OK pour commencer l’acquisition des données.

4. Analyse des données

  1. Visualisation et exportation de données
    1. Après la course, consultez les chromatogrammes en sélectionnant un échantillon et en cliquant sur Chromatogramme dans la barre de menu supérieure.
    2. Sur l’écran d’accueil, cliquez sur TargetLynx, sélectionnez les fichiers qui viennent d’être exécutés, puis cliquez sur Traiter > sélectionner la méthode vincristine > OK, pour générer des tables de sortie.
    3. Cliquez sur Signaler > Export Table et enregistrez les données traitées sous forme de fichier .csv ou .xlsx.
      REMARQUE : Exportez les zones de pic brutes pour l’analyte et la norme interne.
  2. Organisation des données et calcul du ratio
    1. Ouvrez le fichier exporté et créez les colonnes suivantes :
      1. Échantillon : Ajoutez le nom de l’échantillon ou du flacon.
      2. Run : Indiquez à quel réplique correspond la valeur.
      3. Zone du magnétoscope : Saisissez la zone sous le pic pour la vincristine.
      4. Zone VINB : Entrez la zone sous le pic pour la vinblastine.
      5. Ratio VCR/VINB : Normalisez chaque valeur VCR en la divisant par sa valeur VINB correspondante.
    2. Ajoutez des colonnes pour les valeurs d’écart-type de la surface du magnétoscope, de la surface VINB et du rapport VCR/VINB pour chaque ensemble triple.
      REMARQUE : La normalisation à l’aide de la norme interne permet de corriger la variation du volume d’extraction ou d’injection.
  3. Résultats du tracé
    1. Ouvrez le logiciel de graphisme préféré et sélectionnez le format de tableau groupé .
    2. Choisissez Entrer ou importer les données dans une nouvelle table, et dans Options, sélectionnez Saisi 3 valeurs répliquées dans des sous-colonnes côte à côte.
    3. Tracez uniquement les rapports VCR/VINB normalisés pour chaque échantillon, en omettant les valeurs brutes de surface.

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Résultats

Les résultats chromatographiques représentatifs obtenus après des tests d’accumulation intracellulaire utilisant des cellules primaires ALL PDX incubées avec VCR et VINB sont présentés à la Figure 1. Les échantillons ont été préparés en utilisant 2,5 × 106 cellules par condition. Dans les conditions chromatographiques décrites, le magnétoscope a été constamment maintenu à 2,85 minutes avec un effet matriciel minimal, et la forme de pic était symétrique et bien résolue. Ces profils...

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Discussion

Une évaluation précise des niveaux intracellulaires de médicaments dans les cellules leucémiques primaires est essentielle pour comprendre la manipulation des médicaments au niveau cellulaire et pour soutenir le développement d’essais fonctionnels complétant le profilage moléculaire. Les approches analytiques existantes nécessitent souvent un grand nombre de cellules, impliquent de longues étapes de traitement ou reposent sur des lectures indirectes qui ne reflètent pas la véritable disp...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs déclarent ne pas exister de conflit d’intérêts.

Remerciements

Nous remercions le Centro Infantil Boldrini ainsi que tous les patients qui ont fait don de leurs échantillons pour l’étude. Adrielli C. Soares a reçu une bourse de la Coordinación de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES) et de la Fondation de recherche de São Paulo (FAPESP, 2023/18389-3). José A. Yunes a reçu une bourse de productivité du National Counsel of Technological and Scientific Development (CNPq, 308399/2021-2021-8). Ce travail a été soutenu par un financement de recherche du ministère brésilien de la Santé via le programme PRONON (Programa Nacional de Apoio à Atenção Oncológica, NUP 25000.211174/2019-45).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Fiole à bouchon à vis de 2,0 mLDébit8-2400Utilisé avec des inserts en verre à ressort (5 x 29 mm) de la même société (Cat. 5-29015)
Fiole à bouchon à vis de 2,0 mLDébit8-2400Utilisé avec des inserts en verre à ressort (5 x 29 mm) de la même société (Cat. 5-29015)
AcétonitrileMerck (Sigma-Aldrich)100030
AcétonitrileMerck (Sigma-Aldrich)24010152
AIM VThermo Fisher Scientific12055091
Système chromatographique Acquity UPLC H-ClassWaters Co.https://www.waters.com/nextgen/br/pt/products/chromatography/chromatography-systems/acquity-uplc-h-class-plus-system.html?srsltid=AfmBOoo0mjNgaucBI-Exv97cEmWE96_lVkqKi2IR0IPtA-h1feG-WvtW
Comtesse 3 FLThermo Fisher ScientificA49892
DMSOMerck (Sigma-Aldrich)D 8418
Falcon 50 mLSarstedt62.547.254
Acide formiqueMerck (Sigma-Aldrich)F0507
Bouteille en verreMerck (Sigma-Aldrich)41121800
IncubateurPHCBIMCO-50M-PE
MéthanolMerck (Sigma-Aldrich)34860
Microtube 1,5 mLEppendorf41121702
Microtube 2,0 mLEppendorf30120094
PBSMerck (Sigma-Aldrich)PPB006
Speevac miVacFisher Scientific56340
Le logiciel d’acquisition de donnéesWaters Co.MassLynx
Spectromètre de masse triple quadrupôle Xevo TQ-S microWaters Co.https://www.waters.com/nextgen/us/en/products/mass-spectrometry/mass-spectrometry-systems/xevo-tq-s-micro.html?srsltid=AfmBOoqqmLRNfHGqvtnwaL7xYOOEXPV3NJ9qYNH9HAwqXKXrMvLRQXSW
Sonicateur ultrasoniqueQuimisQ335D
Vinblastine 1 mg/mLLibbshttps://www.libbs.com.br/nossos-produtos/antineoplasico-faulblastina/Vinblastine sulfate
VincristineCayman Chemicals11764

Références

  1. Inaba, H., Pui, C. H. Advances in the diagnosis and treatment of pediatric acute lymphoblastic leukemia. J Clin Med. 10 (9), 1926(2021).
  2. Pui, C. H., et al. Childhood acute lymphoblastic leukemia: progress through collaboration. J Clin Oncol. 33 (27), 2938-2948 (2015).
  3. Gaudichon, J., et al. Mechanisms of extramedullary relapse in acute lymphoblastic leukemia: reconciling biological concepts and clinical issues. Blood Rev. 36, 40-56 (2019).
  4. Dhyani, P., et al. Anticancer potential of alkaloids: a key emphasis on colchicine, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine and vincamine. Cancer Cell Int. 22, 206(2022).
  5. Mateus, A., Matsson, P., Artursson, P. Rapid measurement of intracellular unbound drug concentrations. Mol Pharmaceutics. 10 (6), 2467-2478 (2013).
  6. Chien, H. C., et al. Rapid method to determine intracellular drug concentrations in cellular uptake assays: application to metformin in organic cation transporter 1-transfected human embryonic kidney 293 cells. Drug Metab Dispos. 44 (3), 356-364 (2016).
  7. Calcagno, A. M., Ambudkar, S. V. Analysis of expression of drug resistance-linked ABC transporters in cancer cells by quantitative RT-PCR. Methods Mol Biol. 637, 121-132 (2010).
  8. Richter, M., et al. From donor to the lab: a fascinating journey of primary cell lines. Front Cell Dev Biol. 9, 648272(2021).
  9. Borgmann, A., et al. Childhood ALL blasts retain phenotypic and genotypic characteristics upon long-term serial passage in NOD/SCID mice. Pediatr Hematol Oncol. 17 (8), 635-650 (2000).
  10. Rosati, M. M., Corrêa, J. R., de Sousa Mariano, S., Cardoso, A., Andrés Yunes, J. Murine model of leukemia relapse to induction chemotherapy for acute lymphoblastic leukemia. J Vis Exp. (224), e68797(2025).
  11. Dams, R., Huestis, M. A., Lambert, W. E., Murphy, C. M. Matrix effect in bioanalysis of illicit drugs with LC-MS/MS: influence of ionization type, sample preparation, and biofluid. J Am Soc Mass Spectrom. 14 (11), 1290-1294 (2003).
  12. Yang, Y., Cruickshank, C., Armstrong, M., Mahaffey, S., Reisdorph, R., Reisdorph, N. New sample preparation approach for mass spectrometry-based profiling of plasma results in improved coverage of metabolome. J Chromatogr A. 1300, 217-226 (2013).
  13. Zhang, J., Dasgupta, A., Ayala, R., Bonapace, C., Kassim, S., Faustino, P. J. Internal standard variability: root cause investigation, parallelism for evaluating trackability and practical considerations. Bioanalysis. 16 (15), 771-776 (2024).

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Réimpressions et autorisations

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