Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de recherche

Wen Yang Ding Chuan Tang atténue le remodelage des voies respiratoires asthmatiques en inhibant l’activation des fibroblastes M2 alimentés par les macrophages M2

195 vues

⸱

DOI :

10.3791/69737

⸱

24 mars 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Traditional Chinese Medicine, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University, 2Department of Respiratory, The First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine, 3Department of Clinical Pharmacy, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University, 4Department of Central Laboratory, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University, 5Department of Stomatology, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University, 6Department of Magnetic Resonance, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University

Dans cet article

Résumé

Cet article décrit une étude sur la régulation de la fibrose des fibroblastes pulmonaires par la décoction Wenyang Dingchuan par inhibition de la polarisation des macrophages M2.

Résumé

Étudier les effets du Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) sur la fonction des fibroblastes, le remodelage des voies respiratoires dans l’asthme et le mécanisme sous-jacent. L’IL-4 a été utilisée pour induire la polarisation M2 des macrophages RAW264.7, puis les macrophages polarisés ont été traités avec WYDCT pour étudier son effet sur les fibroblastes pulmonaires de souris. Les cellules RAW264.7 polarisées ont été soumises à différents traitements puis co-cultivées avec des fibroblastes. Les niveaux de marqueurs M1 et M2, la morphologie cellulaire et la concentration d’IL-6 ont été évalués. Le niveau de la protéine STAT3 a été analysé. La viabilité des fibroblastes, la prolifération, la formation de colonies, l’expression du PCNA, ainsi que l’expression de la fibronectine, COL1A1 et α-SMA ont été analysées à l’aide de divers tests, notamment la PCR en temps réel, Western blot, CCK-8, Edu, immunofluorescence et formation de colonies. La WYDCT a inversé les changements morphologiques induits par l’IL-4 dans les cellules RAW264.7, réduit les niveaux des marqueurs M2 (Arg-1, CD206) et IL-6, et diminué l’expression de STAT3 dans les cellules RAW264.7, tandis que la supplémentation avec IL-6 a rétabli l’effet de la WYDCT sur les marqueurs M2. De plus, la WYDCT a inhibé la viabilité et la prolifération des fibroblastes, réduit l’expression du PCNA et diminué les marqueurs de fibrose (fibronectine, COL1A1, α-SMA), suggérant que la WYDCT inhibe la viabilité, la prolifération et la fibrose des fibroblastes pulmonaires en supprimant la polarisation des macrophages M2, dans laquelle la voie de signalisation IL-6/STAT3 peut jouer un rôle clé.

Introduction

L’asthme, également appelé asthme bronchique, est une affection inflammatoire persistante des voiesrespiratoires. Fréquemment liée à l’exposition aux allergènes, aux températures froides et aux irritants de nature physique et chimique, cette affection se caractérise par l’infiltration des cellules inflammatoires, la constriction réversible des voies respiratoires, la sécrétion de mucus etle bronchospasme 2. Actuellement, il y a au moins 300 millions de patients asthmatiques dans le monde, et la prévalence augmente d’année entroisième année. En 2015, 400 000 personnes sont décédées de l’asthme, ce qui en fait un grave problème de santé mondial 4,5. La Chine fait également face au même problème, avec des études montrant un taux de prévalence de l’asthme de 4,2 %, représentant environ 45,7 millions de patients adultes, avec des taux de contrôle inférieurs àceux des pays développés de 6,7 %. Le bien-être des personnes touchées par cette maladie est fortement compromis, entraînant une lourde pression financière pour les familles.

La remodelation des voies respiratoires est considérée comme un facteur crucial dans le traitement de l’asthme, difficile àcontrôler. Par conséquent, le traitement de l’asthme chronique persistant devient un point clé. La pratique clinique consiste souvent à utiliser des corticostéroïdes inhalés en combinaison avec des bronchodilatateurs, ce qui peut efficacement soulager les symptômes chezles patients 9. Cependant, ces traitements comportent certains effets secondaires et peuvent être moins efficaces pour améliorer les symptômes chez certains patients. De plus, l’asthme a tendance à réapparaître après l’arrêt du traitement. Des recherches ont montré que l’activation des fibroblastes pulmonaires est liée au remodelage des voies respiratoires lors de la progression de l’asthme10. À leur activation, les fibroblastes pulmonaires subissent une transformation phénotypique et sécrètent des protéines clés pour entraîner le dépôt de la matrice extracellulaire (ECM) — la caractéristique pathologique centrale du remodelage des voies respiratoires. Plus précisément, la fibronectine sert de premier échafaudage pour l’assemblage de la MEC, favorisant le recrutement et l’adhésion d’autres composants matriciels ; COL1A1 (chaîne α1 du collagène de type I) est la principale protéine structurale de la MCE, et son accumulation excessive entraîne un épaississement et une rigidité des parois des voies respiratoires ; α-SMA (actine musculaire α-lisse) marque la transformation des fibroblastes en myofibroblastes dotés de fortes capacités contractiles et sécrétrices, accélérant encore le dépôt de la MEC et la fibrose des voies respiratoires.

L’IL-6 est le facteur de signalisation cytoplasmique le plus important pour l’activation de la voieSTAT3 11. Une IL-6 élevée active la voie STAT3. Dans les tissus pulmonaires asthmatiques de souris, l’expression de STAT3 et d’ARNm et de protéines phosphorylés est significativement augmentée. La voie de signalisation IL-6/STAT3 est l’une des cibles du traitement de l’asthme. Des études ont confirmé que l’activation de la voie de signalisation IL-6/STAT3 est associée à une inflammation des voies respiratoires dans l’asthme, et inhiber cette voie peut réduire l’inflammationdes voies respiratoires 12,13. IL-6/STAT3 est également associé à la polarisation M2 des macrophages. Des études étrangères ont démontré que l’expression d’IL-6 réduit significativement l’activation en aval de STAT3, ce qui est corrélé à une diminution du nombre de surfaces tumorales, d’une prolifération diminuée et d’un nombre réduit de macrophages M2 dans lefoie 14.

Les cellules immunitaires appelées macrophages peuvent être classées en phénotypes distincts, à savoir l’activation classique (M1) et l’activation alternative (M2), chacune remplissant des rôlesuniques 15. Les macrophages M1 peuvent provoquer des réactions inflammatoires et des lésions tissulaires, tandis que les macrophages M2 favorisent la prolifération cellulaire et facilitent la cicatrisation des plaies ainsi que la réparation tissulaire. Des recherches ont montré que le remodelage des voies respiratoires dans l’asthme est associé aux macrophagesM2 16. Des expériences in vitro ont démontré que l’induction de la polarisation M2 des macrophages avec IL-4 augmente significativement la capacité de prolifération des cellules α-SMA-positives17. Inhiber la polarisation des macrophages M2 est une approche efficace pour traiter le remodelage des voies respiratoires dans l’asthme.

L’asthme appartient à la catégorie des « Xiao Bing » en médecine traditionnelle chinoise. Les facteurs pathologiques de Xiao Bing concernent principalement le mucu. La production de mucus résulte d’un déséquilibre entre le Yin et le Yang dans les viscères, combiné à des facteurs externes tels que des agents pathogènes exogènes, l’alimentation et des conditions post-maladie, qui affectent le mouvement des fluides corporels, entraînant stagnation et accumulation. Avec l’exploration continue des mécanismes de la médecine traditionnelle chinoise dans le traitement de l’asthme, de plus en plus d’études ont montré que la médecine traditionnelle chinoise a des effets significatifs dans l’atténuation de l’inflammation des voies respiratoires, la réduction de la sécrétion excessive de mucus et l’inhibition du remodelagedes voies respiratoires 18,19. Chez Xiao Bing, c’est le poumon principalement affecté, suivi de la rate et des reins. Les patients atteints de Xiao Bing présentent un qi pulmonaire déficient et une défense faible contre les agents pathogènes externes, entraînant une perte de la diffusion du qi pulmonaire et des lésions répétées et prolongées du yang qi, entraînant une déficience du yang pulmonaire. La carence en yang entraîne une circulation anormale des fluides corporels, qui se condensent en mucos. Lors des crises prolongées, le mucus froid affecte le yang de la rate et des reins, entraînant un schéma de déficit en yang pulmon-rate-rein, un déséquilibre du yin et du yang, une prédominance excessive ou une déficience de la constitution, et une circulation anormale des fluides corporels. Le poumon ne peut pas disperser les liquides, la rate ne peut pas transformer l’eau et l’essence, et les reins ne peuvent pas vaporiser et transformer les liquides, ce qui entraîne la condensation du mucus et la formation de la stase, qui se manifeste par de l’asthme. Par conséquent, la carence en yang est la cause principale de Xiao Bing, et la stase du mucosement en est la caractéristique. Wen Yang Ding Chuan Tang est composé de 12 herbes médicinales chinoises, dont Epimedium (15 g), Ephedra (transformée) (10 g), Ginseng (15 g), Astragalus (15 g), Ginkgo biloba (15 g), Flos Farfarae (15 g), Grain d’abricot amer (15 g), Pinellia ternata (transformée) (10 g), Schisandra chinensis (10 g), Ver de terre (10 g), Persica (10 g) et Réglisse (10 g). Cette formule à base de plantes est dérivée de la formulation modifiée de Ding Chuan Tang dans le livre « She Sheng Zhong Miao Fang » et a pour effet de réchauffer le yang, de renforcer le qi, de résoudre le mucus, de favoriser la circulation sanguine et de soulager la toux et l’asthme. L’efficacité clinique de ce traitement a été établie, ce qui a conduit à des recherches expérimentales actuelles sur son mécanisme de traitement du remodelage des voies respiratoires dans l’asthme.

Comparé aux thérapies pharmacologiques actuelles pour l’asthme, telles que les corticostéroïdes inhalés, les β2-agonistes et les biologiques à base d’anticorps monoclonaux ciblant l’IgE ou l’IL-5, Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) propose une stratégie thérapeutique potentiellement multi-cible et plus sûre. Les corticostéroïdes conventionnels soulagent efficacement l’inflammation des voies respiratoires mais sont souvent associés à des effets secondaires tels que l’immunosuppression, un déséquilibre hormonal et une rechute lors du sevrage. Les agents biologiques, bien que plus spécifiques, sont coûteux et limités à certains phénotypes d’asthme. En revanche, la WYDCT, dérivée de la théorie de la médecine traditionnelle chinoise de « réchauffement du yang et résolution du mucus », exerce des effets complets sur la régulation de l’équilibre immunitaire, la réduction de l’inflammation des voies respiratoires et la suppression du remodelage des voies respiratoires, comme démontré par des études cliniques etexpérimentales 20. Sa composition multicomposante peut simultanément moduler la polarisation des macrophages, l’activation des fibroblastes et la libération de cytokines, offrant ainsi une amélioration plus large et potentiellement plus durable de la pathologie de l’asthme.

Dans cette étude, l’extrait d’eau de Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) a été préparé à partir de douze herbes dans un ratio traditionnel fixe, concentré dans une solution de stock finale de 1 g/mL (équivalent brut de médicament), puis filtré pour une utilisation en culture cellulaire. L’extrait a été appliqué à des concentrations de 50, 100 et 200 μg/mL, sélectionnées sur la base d’essais préliminaires de viabilité cellulaire afin d’assurer la non-cytotoxicité tout en maintenant l’activité pharmacologique. Le modèle in vitro impliquait la polarisation M2 induite par IL-4 des macrophages RAW264.7 et la co-culture avec des fibroblastes pulmonaires de souris (cellules L929), ce qui nous a permis d’évaluer les effets paracrines des macrophages sur l’activation des fibroblastes et les réponses liées à la fibrose. Ces détails fournissent un cadre reproductible pour de futures études explorant les caractéristiques dose-réponse et les voies mécanistiques de la WYDCT dans le remodelage des voies respiratoires.

Sur la base des résultats ci-dessus, nous supposons que Wen Yang Ding Chuan Tang exerce ses effets anti-remodelage des voies respiratoires dans l’asthme en inhibant la polarisation M2 des macrophages et en supprimant l’activation des fibroblastes.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

Cette étude a été menée conformément aux directives internationales, nationales et institutionnelles pour le traitement humain des animaux et en conformité avec la législation pertinente. Plus précisément, toutes les procédures impliquant des souris ont été approuvées par le Comité de Soins Éthiques Animaux du Troisième Hôpital Affilié du Qiqihar Medical College (AECC-2022-009). Les souris étaient hébergées dans des conditions de laboratoire standard avec accès à la nourriture et à l’eau de manière occasionnelle, et tous les efforts étaient faits pour minimiser la souffrance. Des critères d’évaluation humains ont été établis et surveillés tout au long de l’étude.

1. Préparation de l’extrait WYDCT

Les 12 herbes de Wen Yang Ding Chuan Tang ont été pesées selon le ratio traditionnel : Epimedium (15 g), Éphédre transformée (10 g), Ginseng (15 g), Astragalus (15 g), Ginkgo biloba (15 g), Flos Farfarae (15 g), Grain d’abricot amer (15 g), Pinellia ternata transformée (10 g), Schisandra chinensis (10 g), Ver de terre (10 g), Persica (10 g), et la réglisse transformée (10 g).

Dix fois le volume d’eau distillée a été ajouté, et le mélange a été bouilli pendant 30 minutes. L’extraction a été répétée deux fois, et les filtrats ont été combinés. L’extrait combiné a été concentré sous pression réduite jusqu’à une concentration équivalente à un médicament brut de 1 g/mL. L’extrait était filtré à travers une membrane de 0,22 μm, aliquoté, puis stocké à −20 °C. Les concentrations de travail (50, 100 et 200 μg/mL) étaient préparées par dilution immédiatement avant utilisation.

2. Culture cellulaire et polarisation M2

Les cellules RAW264,7 (ATCC, USA) ont été décongelées et semées à une densité de 1 × 10⁶ cellules par plat de 10 cm dans 10 mL de DMEM complétés avec 10 % de sérum bovin fœtal, 100 U/mL de pénicilline et 100 μg/mL de streptomycine. Les cellules ont été incubées à 37 °C dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de CO₂ pendant 24 heures jusqu’à ce que la confluence soit atteinte entre 80 % et 90 %.

Le milieu de culture a ensuite été remplacé par du DMEM frais contenant 20 ng/mL d’IL-4, et les cellules ont été incubées pendant 24 heures supplémentaires pour induire la polarisation M2. Après l’incubation, les cellules ont été lavées deux fois avec PBS puis traitées avec de l’extrait WYDCT (solution de 10 mg/mL diluée aux concentrations finales indiquées) pendant 24 heures. Pour les expériences de supplémentation en IL-6, 50 ng/mL d’IL-6 ont été ajoutés lors du traitement WYDCT.

Les cellules traitées avec 0,1 % de DMSO servaient de témoins négatif. La morphologie cellulaire a été examinée au microscope inversé, et des images représentatives ont été capturées.

3. Isolement et culture des fibroblastes pulmonaires de souris

Les souris ont été euthanasiées conformément aux protocoles éthiques approuvés. Les lobes pulmonaires étaient prélevés et placés dans la solution salée équilibrée de Hanks à froid. Les vaisseaux sanguins visibles et le tissu conjonctif ont été retirés, et le tissu pulmonaire a été réduit en petits morceaux (~1 mm3).

Les fragments de tissu ont été digérés dans une trypsine à 0,25 % pendant 40 minutes à 37 °C avec une légère agitation, suivis d’une seconde digestion à 0,25 % de trypsine pendant 30 minutes. La suspension cellulaire a été centrifugée à 300 × g pendant 5 minutes, le surnageant a été jeté, et la pellete a été resuspendue dans du DMEM complétée avec un sérum bovin fœtal à 10 %.

La suspension a été incubée pendant 100 minutes pour permettre l’adhérence des fibroblastes, après quoi les cellules ont été centrifugées à nouveau à 300 × g pendant 5 minutes pour améliorer la purification. Les fibroblastes purifiés ont été ensemencés dans des plaques de culture appropriées et incubés à 37 °C dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de CO₂ jusqu’à atteindre environ 80 % de confluence.

4. Co-culture de fibroblastes avec un milieu conditionné

Le surnageant a été prélevé à partir de cellules RAW264,7 traitées et centrifugé à 3000 × g pendant 10 minutes à 4 °C. Le milieu de culture des fibroblastes a été remplacé par le milieu collecté conditionné par les macrophages. Les fibroblastes ont été incubés pendant 24 heures à 37 °C dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de CO₂ avant les essais fonctionnels. Après incubation, des fibroblastes ont été prélevés pour l’extraction d’ARN et de protéines pour des analyses ultérieures de qRT-PCR et Western blot.

5. Viabilité cellulaire (test CCK-8)

Les fibroblastes ont été ensemencés à une densité de 5 × 10³ cellules par puits dans des plaques de 96 puits contenant 100 μL de milieu de culture. Les cellules ont été soumises aux traitements indiqués pendant 24 heures. Par la suite, 10 μL de réactif CCK-8 ont été ajoutés à chaque puits, et les plaques ont été incubées pendant 2 heures à 37 °C. La densité optique (OD) a été mesurée à 450 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques. La viabilité cellulaire a été calculée à (OD_treated / OD_control) × 100 %. Toutes les expériences ont été réalisées avec trois répliques biologiques.

6. Essai de formation de la colonie

Les cellules ont été ensemencées à une densité de 1 × 10³ cellules par puits dans des plaques à 6 puits, avec trois puits réplicatifs par condition. Les plaques étaient incubées pendant 10 à 14 jours jusqu’à la formation de colonies visibles. Les colonies ont été teintées à 0,1 % de violet cristallin pendant 10 minutes à température ambiante. Après la teinture, les colonies ont été lavées et photographiées. Le colorant lié a été dissous dans de l’acide acétique à 30 % pendant 15 minutes, et la densité optique a été mesurée à 590 nm. Trois expériences indépendantes ont été réalisées.

7. Essai de prolifération EdU

Les cellules ont été traitées comme indiqué pendant 24 heures. Par la suite, 100 μL d’EdU à 50 μM ont été ajoutés à chaque puits, et les cellules ont été incubées pendant 2 heures à 37 °C. Les cellules ont été fixées dans 4 % de paraformoldéhyde pendant 30 minutes puis trempées avec 2 mg/mL de glycine pendant 5 minutes. Les cellules ont été perméabilisées avec 0,5 % de Triton X-100 dans PBS, lavées et incubées avec une solution de coloration Apollo pendant 30 minutes. Les noyaux ont été contre-colorés avec Hoechst 33342 (1×) pendant 30 minutes. Des cellules EdU positives ont été observées et imagées à l’aide d’un microscope à fluorescence.

8. ELISA pour IL-6

Le surnageant de la cellule RAW264.7 a été centrifugé à 3000 × g pendant 15 minutes à 4 °C. Les niveaux d’IL-6 ont été mesurés à l’aide d’un kit Beyotime ELISA selon les instructions du fabricant. L’absorbance a été mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques, et les concentrations d’IL-6 ont été calculées selon une courbe standard.

9. Immunofluorescence

Les fibroblastes ont été fixés dans de l’acétone pré-refroidie pendant 10 minutes et lavés trois fois avec du PBS. Les cellules ont été perméabilisées avec du Triton X-100 à 0,1 % pendant 10 minutes et bloquées avec 1 % de BSA dans le PBS pendant 30 minutes. Les cellules ont ensuite été incubées avec un anticorps primaire contre le PCNA (1:100) pendant la nuit à 4 °C. Après trois lavages avec PBS, les cellules ont été incubées avec un anticorps secondaire conjugué au FITC (1:200) pendant 1 h à température ambiante. Les noyaux ont été contre-colorés avec du DAPI, lavés et imagés à l’aide d’un microscope à fluorescence.

10. qRT-PCR

L’ARN total a été extrait à l’aide du réactif Trizol (Beyotime, Chine) selon le protocole du fabricant. La transcription inverse a été réalisée avec le kit de synthèse d’ADNc, utilisant 2 μg d’ARN et des amorces aléatoires. Des réactions PCR ont été préparées dans un volume de 20 μL contenant 10 μL de SYBR Green Master Mix, 0,5 μL de chaque amorce spécifique à un gène (concentration finale 0,5 μM) et 1 μL de gabarit d’ADNc. Les amorces utilisées comprenaient CD16, iNOS, Arg-1, CD206, la fibronectine, COL1A1, α-SMA et GAPDH (séquences fournies).

Les conditions de cycle thermique consistaient en une dénaturation initiale à 95 °C pendant 5 minutes, suivie de 40 cycles à 95 °C pendant 30 s, 60 °C pendant 30 s, et 72 °C pendant 30 s. L’analyse de la courbe de fusion a été réalisée de 60 °C à 95 °C par incréments de 0,5 °C afin de vérifier la spécificité de l’amplification.

Analyse des données : L’expression relative a été calculée à l’aide de la méthode 2^−ΔΔCT et normalisée en GAPDH. Les amorces étaient les suivantes : CD16 (souris) : 5′- AGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGG-3′ et 5′- TGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGG-3′, iNOS (souris) : 5′-TGCTCCCCAGGAGATGTTGT-3′ et 5′-TGGTCTGGTAGGCTGTAGGG-3′, Arg-1 (souris) : 5′- GCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGG-3′ et 5′- GGTGGCTTTGCTGGTCTGTC-3′-3′ ��, CD206 (souris) : 5′- GGCTTCTATGAGCTGGGTGA-3′ et 5′- CTGGGCTTCTGTGTGTTGTT-3′, fibronectine (souris) : 5'-CGTGTGAAGGTGTCTCTGC-3' et 5'-GAGGTCACAGTGTCTTGCT-3', COL1A1 (souris) : 5'-CCCTGGACACCTGGCTTTTT-3' et 5'-GCGGGTCCCCTTCTCTCTC-3', α-SMA (souris) : 5'-CTGGAACAGCACAGCTTCTC-3' et 5'-GGGACATAGCACAGCTTCTC-3', GAPDH (souris) : 5′- TGTGTCCGTCGTGGATCTGA -3′ et 5′- CCTGCTTCACCACCTTTGAT-3′.

11. Tache occidentale

Les cellules ont été lysées à l’aide d’inhibiteurs de protéases contenant un tampon RIPA. Les concentrations en protéines ont été déterminées à l’aide d’un test BCA. Pour SDS-PAGE, 60 μg de protéines ont été chargés dans chaque voie d’un gel de polyacrylamide à 10 % et séparés à 120 V pendant 1,5 à 2 heures. Les protéines ont été transférées sur une membrane PVDF à l’aide d’une méthode de transfert humide à 100 V pendant 1 heure. Après un blocage avec 5 % de lait écrémé dans TBS-T pendant 1 h à température ambiante, la membrane a été incubée avec des anticorps primaires (dilution 1:1000) pendant la nuit à 4 °C. Après des lavages avec TBS-T, la membrane a été incubée avec des anticorps secondaires conjugués à HRP (dilution 1:5000) pendant 1 h à température ambiante. Après des lavages supplémentaires, les bandes protéiques ont été détectées à l’aide d’un réactif chimiluminescence ECL et imagées avec un système d’imagerie chimioluminescence. Les intensités des bandes ont été quantifiées à l’aide du logiciel ImageJ, et les niveaux de protéines ont été normalisés en GAPDH comme contrôle interne.

12. Analyse statistique

Les données ont été analysées à l’aide de SPSS 17.0. Les variables continues étaient exprimées en moyenne ± écart-type (DE). Les comparaisons entre deux groupes ont été réalisées à l’aide d’un test t non apparié, tandis que les comparaisons entre plusieurs groupes ont été réalisées par ANOVA unidirectionnelle suivies du test post hoc LSD. Une valeur p inférieure à 0,05 était considérée comme statistiquement significative.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Effets du WYDCT sur la polarisation M2 des cellules RAW264.7 des macrophages

Nous avons observé la morphologie cellulaire de RAW264.7 à l’aide d’un microscope optique. Comme montré à la Figure 1A, la stimulation de l’IL-4 provoquait un allongement des cellules, ce qui donnait une forme plus allongée, semblable à un fuseau, comparée aux cellules non traitées. De plus, les cellules stimulées par l’IL-4 ont montré une granularité cytoplasmatique accr...

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

L’objectif de cette étude était d’explorer l’impact de la WYDCT sur l’activité des fibroblastes et le remodelage des voies respiratoires dans l’asthme, ainsi que les mécanismes sous-jacents. Les résultats actuels démontrent que la WYDCT peut inhiber la polarisation M2 des macrophages RAW264,7, ce qui affecte ensuite la viabilité, la prolifération et la fibrose des fibroblastes pulmonaires de souris. De plus, la voie de signalisation IL-6/STAT3 a joué un rôle clé dans la médiation de ces ...

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Remerciements

Nous remercions sincèrement tous les partenaires qui ont contribué à ce projet de recherche. Ce travail a été soutenu par les frais de fonctionnement de la recherche scientifique fondamentale de l’Université dans la province du Heilongjiang en 2022 (n° 2022-KYYWF-0827), pour lesquels nous sommes reconnaissants.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Réactif d’hybridation Apollo 643Guangzhou RiboBio Co., Ltd.C10371-2
Arginase-1 (E4U1I) souris mAb  ;Cell Signaling Technology, Inc.43933T
Kit de détermination de la concentration en protéines BCABeyotime Biotechnology Co., Ltd.P0012
BeyoBlot HRP conjuguée à la souris anti-lapin native IgG (H+L)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.A0210
Incubateur à dioxyde de carboneShanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd.HF240
CD206/MRC1 (E6T5J) XP® ; Rabbit mAbCell Signaling Technology, Inc.24595T
Kit de comptage cellulaire-8Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0037
COL1A1 (E8F4L) XP Lapin mAb  ;Cell Signaling Technology, Inc.72026T
DiméthylsulfoxydeBeyotime Biotechnology Co., Ltd.ST038-100ml
Médium à haute teneur en sucre DMEMSociété biologique de Grand Island11965092
EDUBeyotime Biotechnology Co., Ltd.ST067-250mg
Fc&gamma ; RIII/CD16 (F6K6G) Lapin mAb  ;Cell Signaling Technology, Inc.71345T
Sérum fœtal pour veauSociété biologique de Grand IslandA5256701
Fibronectine/anticorps FN1 & nbsp ;Cell Signaling Technology, Inc63779S
FITC-IgG (H+L) conjugué pour la chèvreBeyotime Biotechnology Co., Ltd.A0568
Instrument de PCR quantitative à fluorescenceYarui Biotechnology Co., Ltd.MA-6000
Hoechst 33342 Solution de coloration à cellules vives (100X)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C1029
iNOS (E1W4J) Rabbit mAbCell Signaling Technology, Inc.70706SF
Microscope inverséGuangzhou Mingmei Optoelectronics Technology Co., Ltd.MI52-N
LRRK2 T1348N mut RAW 264.7ATCCSC-6005
Tampon de perméabilisation à mmunostaining (avec Triton X-100)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.P0096-100ml
Kit IL-6 ELISA de sourisBeyotime Biotechnology Co., Ltd.PI326
Cellules fibroblastiques pulmonaires de sourisWuhan Procell Life Technology Co., Ltd.CP-M006
PCNA (PC10) Souris mAbCell Signaling Technology, Inc.2586T
Pénicilline-streptomycineSociété biologique de Grand Island15140148
Recombinant Murine IL-4Beyotime Biotechnology Co., Ltd.P5916-5 & mu ; g
Murine recombinante IL-6Beyotime Biotechnology Co., Ltd.P5925-10&mu ; g
Instrument d’étiquetage enzymatique ReduRayto Life SciencesRT-6100
Stat3 (124H6) Souris mAb  ;Cell Signaling Technology, Inc.9139T
Développé couché supercleanJinan BioBase Biotech Co., Ltd.BBS-SDC
SynGAP-& alpha ; 2 (E4Y6I) Lapin mAb  ;Cell Signaling Technology, Inc.56927T
Tampon de lyse et d’extraction Thermo Fisher Scientific RIPAThermoFisher89901
Trizol (réactif d’extraction totale d’ARN)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.R0016
&bêta ;-Anticorps ActinCell Signaling Technology, Inc.4967S

Références

  1. Chetta, A., Calzetta, L. Bronchial asthma: An update. Minerva Med. 113 (1), 1-3 (2022).
  2. Medoff, B. D., Thomas, S. Y., Luster, A. D. T cell trafficking in allergic asthma: The ins and outs. Annu Rev Immunol. 26, 205-232 (2008).
  3. Ding, S., Zhong, C. Exercise and asthma. Adv Exp Med Biol. 1228, 369-380 (2020).
  4. Bateman, E. D., et al. Global strategy for asthma management and prevention: GINA executive summary. Eur Respir J. 31 (1), 143-178 (2008).
  5. GBD Risk Factor Collaborators. Global, regional, and national comparative risk assessment of 84 behavioural, environmental and occupational, and metabolic risks or clusters of risks, 1990-2016: A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 390 (10100), 1345-1422 (2017).
  6. Huang, K., et al. risk factors, and management of asthma in China: A national cross-sectional study. Lancet. 394 (10196), 407-418 (2019).
  7. Bousquet, J., et al. Next-generation Allergic Rhinitis and Its Impact on Asthma (ARIA) guidelines for allergic rhinitis based on Grading of Recommendations Assessment, Development and Evaluation (GRADE) and real-world evidence. J Allergy Clin Immunol. 145 (1), 70-80.e3 (2020).
  8. Varricchi, G., et al. Biologics and airway remodeling in severe asthma. Allergy. 77 (12), 3538-3552 (2022).
  9. Cardet, J. C., Papi, A., Reddel, H. K. 34;As-needed" inhaled corticosteroids for patients with asthma. J Allergy Clin Immunol Pract. 11 (3), 726-734 (2023).
  10. Zhou, Z., et al. TGF-β1 promotes SCD1 expression via the PI3K-Akt-mTOR-SREBP1 signaling pathway in lung fibroblasts. Respir Res. 24 (1), 8(2023).
  11. Sun, J. Y., et al. An IL-6/STAT3/MR/FGF21 axis mediates heart-liver cross-talk after myocardial infarction. Sci Adv. 9 (14), eade4110(2023).
  12. Francisco, D., et al. Surfactant protein-A protects against IL-13-induced inflammation in asthma. J Immunol. 204 (10), 2829-2839 (2020).
  13. Xue, Y., et al. STAT3 and IL-6 contribute to corticosteroid resistance in an OVA and ozone-induced asthma model with neutrophil infiltration. Front Mol Biosci. 8, 717962(2021).
  14. Zhao, J., et al. PRMT1-dependent macrophage IL-6 production is required for alcohol-induced HCC progression. Gene Expr. 19 (2), 137-150 (2019).
  15. Landis, R. C., Quimby, K. R., Greenidge, A. R. M1/M2 macrophages in diabetic nephropathy: Nrf2/HO-1 as therapeutic targets. Curr Pharm Des. 24 (20), 2241-2249 (2018).
  16. Wang, Q., et al. Targeting M2 macrophages alleviates airway inflammation and remodeling in asthmatic mice via miR-378a-3p/GRB2 pathway. Front Mol Biosci. 8, 717969(2021).
  17. Wang, J., et al. FIZZ1 promotes airway remodeling through the PI3K/Akt signaling pathway in asthma. Exp Ther Med. 7 (5), 1265-1270 (2014).
  18. Bao, H. R., et al. Sinomenine attenuates airway inflammation and remodeling in a mouse model of asthma. Mol Med Rep. 13 (3), 2415-2422 (2016).
  19. Wei, L., et al. Effects of Shiwei Longdanhua formula on LPS-induced airway mucus hypersecretion, cough hypersensitivity, oxidative stress and pulmonary inflammation. Biomed Pharmacother. 163, 114793(2023).
  20. Wen, L., et al. Modified Dingchuan Decoction treats cough-variant asthma by suppressing lung inflammation and regulating the lung microbiota. J Ethnopharmacol. 306, 116171(2023).
  21. Shapouri-Moghaddam, A., et al. Macrophage plasticity, polarization, and function in health and disease. J Cell Physiol. 233 (9), 6425-6440 (2018).
  22. Fang, J., et al. TcpC inhibits M1 but promotes M2 macrophage polarization via regulation of the MAPK/NF-κB and Akt/STAT6 pathways in urinary tract infection. Cells. 11 (17), (2022).
  23. Nam, S. Y., et al. NecroX-5 ameliorates inflammation by skewing macrophages to the M2 phenotype. Int Immunopharmacol. 66, 139-145 (2019).
  24. Zhao, B., et al. Matrine suppresses lung cancer metastasis via targeting M2-like tumour-associated-macrophages polarization. Am J Cancer Res. 11 (9), 4308-4328 (2021).
  25. Braune, J., et al. IL-6 regulates M2 polarization and local proliferation of adipose tissue macrophages in obesity. J Immunol. 198 (7), 2927-2934 (2017).
  26. Zhang, B., et al. Hyperglycemia modulates M1/M2 macrophage polarization via reactive oxygen species overproduction in ligature-induced periodontitis. J Periodontal Res. 56 (5), 991-1005 (2021).
  27. Wang, Y., et al. Xuanfei Baidu Decoction protects against macrophage-induced inflammation and pulmonary fibrosis via inhibiting IL-6/STAT3 signaling pathway. J Ethnopharmacol. 283, 114701(2022).
  28. Liu, G., et al. Therapeutic targets in lung tissue remodelling and fibrosis. Pharmacol Ther. 225, 107839(2021).
  29. Ramaesh, K., Billson, F. A., Madigan, M. C. Effect of bile acids on fibroblast proliferation and viability. Eye (Lond). 12 (4), 717-722 (1998).
  30. Zhu, B., et al. Formononetin ameliorates ferroptosis-associated fibrosis in renal tubular epithelial cells and in mice with chronic kidney disease by suppressing the Smad3/ATF3/SLC7A11 signaling. Life Sci. 315, 121331(2023).
  31. Han, D., et al. Hesperidin inhibits lung fibroblast senescence via IL-6/STAT3 signaling pathway to suppress pulmonary fibrosis. Phytomedicine. 112, 154680(2023).

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Étiquettes

Macrophages M2voie IL-6 STAT3fibroblastes pulmonairespolarisation des macrophagesmarqueurs de la fibroseWestern blotPCR en temps réel
Contactez-nous
Recommander à la bibliothèque

Confidentialité

Conditions d’utilisation

Politiques

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Tous droits réservés.