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Article de méthode

In Vitro Évaluation des effets potenciatrics des molécules d’origine végétale sur les biocides conventionnels

193 vues

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DOI :

10.3791/70172

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8 mai 2026

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Dans cet article

Résumé

Ce protocole fournit un cadre systématique pour évaluer comment les phytochimiques peuvent renforcer les effets bactéricides des biocides traditionnels en utilisant la modélisation de l’activité bactéricide et des tests d’interaction combinatoire, qui visent à identifier des mélanges synergiques améliorant le contrôle microbien et réduisant l’utilisation globale de biocides.

Résumé

Développer des approches innovantes et efficaces pour renforcer l’activité antimicrobienne des biocides conventionnels est une stratégie prometteuse pour améliorer le contrôle microbien à des fins de désinfection en santé. Dans ce contexte, nous décrivons un protocole détaillé pour évaluer les effets potenciaisateurs des phytochimiques d’origine végétale sur les biocides synthétiques. Ces produits d’origine végétale sont des candidats attrayants comme adjuvants biocides en raison de leur diversité structurelle, de leur bioactivité et souvent de leur toxicité plus faible. Le flux de travail décrit ici permet de déterminer les concentrations bactéricides minimales (MBC) et de générer systématiquement à la fois des courbes dose-réponse et temps-réponse pour chaque produit testé individuellement (biocides et phytochimiques) et pour leurs combinaisons doubles ou triples. Les données obtenues permettent une modélisation mathématique avancée, notamment la détermination de l’indice fractionnaire de concentration bactéricide (FBCI) et l’évaluation des interactions entre les produits testés concernant les effets synergiques, additifs ou antagonistes à l’aide du logiciel Combenefit. En ce sens, il est possible d’identifier des produits naturels prometteurs comme des agents d’amélioration des biocides, d’optimiser l’efficacité des antimicrobiens et de concevoir des stratégies de désinfection plus durables et plus sûres susceptibles de réduire les concentrations requises des biocides synthétiques. Cela améliore le contrôle microbien et minimise les risques environnementaux et sanitaires associés à une utilisation excessive de biocides.

Introduction

Les infections associées aux soins de santé (IAA) comptent parmi les défis de santé publique les plus critiques et préoccupants dans lemonde 1. De manière alarmante, ils sont fortement associés à la propagation de micro-organismes multirésistants aux médicaments (MDR) et à la persistance de la charge biologique bactérienne à la surface des hôpitaux, souvent en raison de pratiques de désinfection inappropriéesou inefficaces 2,3. De plus, la contamination croisée entre patients, personnel de santé et équipements médicaux amplifie encore ce

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Protocole

REMARQUE : La méthodologie proposée a été adaptée de la norme européenne EN 127653.

1. Préparation de la culture

  1. Cryopréservez les souches bactériennes testées, Escherichia coli CECT 434 et Staphylococcus aureus CECT 976, en les stockant dans des cryovials contenant du glycérol à 30 % (v/v) à -80 °C.
  2. Pour la récupération, cultivez les bactéries dans des plaques d’agar de comptage de plaques (PCA) et laissez-les croître, pendant 24 heures à 25 °C, en incubant les plaques.
  3. Préparez des cultures cultivées toute la nuit d....

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Résultats

Cette étude a évalué l’activité bactéricide des quatre composés testés — BAC, PAA, SAL et EUG — par rapport à E. coli CECT 434 et S. aureus CECT 976. Comme montré dans les figures 1 et 2, BAC, PAA, SAL et EUG ont montré un effet apparent dépendant de la concentration sur la cultivabilité. Le tableau 2 présente les valeurs de MBC pour les molécules testées après exposition et 24h après expositio.......

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Discussion

Le protocole présenté dans cette étude fournit un cadre intégré pour évaluer l’activité bactéricide de deux biocides couramment utilisés – BAC et PAA – et de deux phytochimiques prometteurs – EUG et SAL – individuellement et en combinaison (combinaisons doubles et triples), face à E. coli et S. aureus. Plusieurs étapes de ce protocole sont particulièrement cruciales pour garantir la reproductibilité et une interprétation précise des interactions antimicrobiennes. Cela inclut la standardi.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont ni intérêts financiers concurrents ni conflits d’intérêts dans la rédaction de cet article et n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par : Project InnovAntiBiofilm (réf. 101157363) financé par la Commission européenne (Horizon-Widera 2023- Access-02/Horizon-CSA) ; Projets MultAntiBiofilm (réf. COMPETE2030-FEDER00852000 ; Nº 17121) et HCAI_Disinfect (réf. COMPETE2030-FEDER-00752300 ; Nº 16360) financé par le programme opérationnel Competitiveness Factors - COMPETE, et des fonds nationaux par la Fondation pour la Science et la Technologie (FCT) ; LEPABE, UID/00511/2025 (https://doi.org/10.54499/UID/00511/2025) et UID/PRR/00511/2025 (https://doi.org/10.54499/UID/PRR/00511/2025) et ALiCE, LA/P/0045/2020 (https://doi.org/10.54499/LA/P/0045/2020)....

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Chlorure de benzalkonium   ;Merck, Espagne8.14363.0100Biocide
Mega Star 600R centrifugéeVWR, États-UnisVWR Mega Star 600R-
Combenefit - Version 2.021Cancer Research UK Cambridge Institute, Cambridge, Royaume-Uni-Logiciels pour l’évaluation du synergisme
CuvettesVWR, AllemagneVWRI634-06781,5 mL cuvettes pour l’ajustement de la densité optique
Eau détruite--Pour la préparation aux médias
Diméthyl Sulfoxyde (DMSO)VWR, France23500.322Solvant organique
Boucles d’inoculation jetablesVWR, ItalieVWRI612-935710 & mu ; Boucles d’inoculation en L
Tubes d’EppendorfVWR, ChineVWRI525-11641,5 mL tubes à verrouillage eppendorf   ;
Escherichia coliCollection de culture de type espagnol (CECT)434Souche de référence utilisée dans cette étude
ÉthanolVWR, France83813.36Pour la désisfection de la pièce, du matériau et des mains
Eugénol 99 %Sigma-Aldrich, États-Unis163333Phytochimique
Tubes FalconVWR, États-UnisVWRI525-1085Tubes Falcon de 15 mL
Tubes FalconVWR, BelgiqueVWRI525-1109Tubes Falcon de 50 mL
GraphPad Prism 9.0 pour Windows 11La Jolla, Californie, États-Unis-Logiciels pour l’analyse mathématique et statistique
LécithineAlfa Aesar, AllemagneQ04A010-
L-histidineMerck, États-Unis1.04351.0025-
Incubateur orbitalVWR, États-UnisVWR 5000I Shaker incubateur 230V-
Acide peracétique 15 %AppliChem, Allemagne143495-1211Biocide
Plaques de PetriVWR, ItalieVWRI391-0582-
Pipette 1 - 10 mLVWR, États-Unis-
Pipette 100 - 1000 & mu ; LVWR, États-Unis-
Pointes de pipette 100 à 1000 et mu ; LFrilabo, Portugal1-202-50-0-
Pippette 20 - 200 & mu ; LVWR, États-Unis-
Pointes de pipette 1 - 10 mLVWR, BelgiqueVWRI613-7094-
Pointes de pipette 2 - 200 & mu ; LVWR, MexiqueVWRI613-6418-
Agar de comptage de plaquesVWR, Belgique84608-0500Isolement et culture des micro-organismes
Polysorbate 80VWR, États-Unis20E2756726-
Chlorure de potassium - KCl  ;VWR, Belgique11D110008-
Phosphate de dihydrogène de potassium - KH2PO4VWR, Allemagne26931.263-
Acide saciliqueSigma-Aldrich, États-Unis84210-500GPhytochimique
SaponineVWR, Allemagne21A124103-
Chlorure de sodium - NaClVWR, Belgique27788.297-
Phosphate d’hydrogène sodique - Na2HPO4VWR, Belgique28026.26-
Sodium Thiosulphate - Na2S2O3VWR, États-Unis18D2056589-
SpectrophotomètreVWR, États-UnisSpectrophotomètre UV-1600PCAjustement de la densité optique
Staphylococcus aureusCollection de culture de type espagnol (CECT)976Souche de référence utilisée dans cette étude
Bouillon de soja tryptique   ;Merck, Allemagne1.05459.0500Isolement et culture des micro-organismes
Eau ultrapure--Pour la préparation de l’échantillon

Références

  1. Salam, M. A., et al. Antimicrobial resistance: A growing serious threat for global public health. Healthcare. 11 (13), 1946(2023).
  2. Szabó, S., et al. An overview of healthcare associat....

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Réimpressions et autorisations

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