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Article de méthode

Étude des effets de la thymoquinone sur la neurotoxicité induite par le bisphénol A, la signalisation Keap-1/Nrf-2, le stress oxydatif et le comportement chez les rats

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DOI :

10.3791/70242

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24 mars 2026

 , 
1Department of Physiology, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University, 2Department of Histology and Embryology, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University

Dans cet article

Résumé

Cette étude visait à étudier les effets de la thymoquinone sur le stress oxydatif, la voie de signalisation Keap-1/Nrf-2, ainsi que le comportement dans le plasma, le cortex cérébral et l’hippocampe des rats exposés au bisphénol A.

Résumé

L’exposition chronique à faible dose au bisphénol A (BPA), un perturbateur endocrinien environnemental largement utilisé, est de plus en plus associée à une neurotoxicité médiée par le stress oxydatif. La thymoquinone (TQ), un constituant bioactif de Nigella sativa, présente de puissantes propriétés antioxydantes ; cependant, son potentiel neuroprotecteur contre la toxicité induite par le BPA reste incomplètement compris. Compte tenu de la nature omniprésente de l’exposition au BPA, il devient de plus en plus important d’identifier des stratégies neuroprotectrices efficaces et accessibles. Cette étude a étudié les effets de la TQ sur le stress oxydatif, la signalisation Keap-1/Nrf-2, le comportement et les altérations histopathologiques chez les rats exposés au BPA. Un total de 24 rats albinos Wistar adultes mâles ont été répartis aléatoirement en quatre groupes (n = 6/groupe) : témoin, BPA, BPA + 10 mg/kg TQ (BPA+TQ I), et BPA + 20 mg/kg TQ (BPA+TQ II). Le BPA (50 μg/kg) et le TQ ont été administrés de façon intragastrale pendant 30 jours. L’exposition au BPA a provoqué des troubles comportementaux importants, un stress oxydatif, une perturbation de la signalisation Keap-1/Nrf-2, ainsi que des lésions histopathologiques marquées dans l’hippocampe et le cortex cérébral. Le traitement TQ a significativement amélioré l’activité locomotrice et le comportement de type dépression, réduit la peroxydation lipidique et les niveaux d’oxyde nitrique, restauré la capacité antioxydante liée au glutathion, et normalisé l’expression de Keap-1 et Nrf-2 (p < 0,001). Ces effets protecteurs étaient plus prononcés à la dose TQ plus élevée. Pris ensemble, ces résultats démontrent que la thymoquinone atténue la neurotoxicité induite par le BPA grâce à la modulation du stress oxydatif et de la voie de signalisation Keap-1/Nrf-2, soulignant son potentiel en tant qu’agent neuroprotecteur contre l’exposition environnementale au BPA.

Introduction

Le bisphénol A (BPA) est un composé synthétique largement utilisé dans les plastiques et les résines époxy, et est couramment détecté dans les matériaux d’emballage alimentaires, les systèmes d’eau, les dispositifs médicaux et les produitsménagers 1. L’exposition continue à l’environnement a suscité des inquiétudes quant à ses effets neurotoxiques potentiels, en particulier dans des conditions chroniques à faible dose qui reflètent une exposition humaine réelle.

Bien que des agences de régulation telles que la Food and Drug Administration des États-Unis et l’Agence de protection de l’environnement aient défini 50 μg/kg/jour comme le niveau sans effet indésirable observé, les preuves expérimentales et épidémiologiques émergentes indiquent que des altérations comportementales et cognitives peuvent survenir à des doses plus faibles. Par conséquent, l’apport quotidien tolérable en Europe a été réduit à 4 μg/kg/jour, soulignant la nécessité d’étudier les effets mécanistiques de l’exposition environnementale auBPA 1,2.

Le stress oxydatif est considéré comme un mécanisme central sous-jacent à la neurotoxicité induite par le BPA. Le BPA perturbe l’équilibre rédox cellulaire en diminuant les défenses antioxydantes telles que le glutathion (GSH) et en augmentant les marqueurs de peroxydation lipidique, dont le malondiadéhyde (MDA)3,4. Cependant, les mécanismes de régulation en amont qui contrôlent les réponses antioxydantes sous exposition au BPA restent insuffisamment caractérisés.

La voie de la protéine associée ECH (Keap-1)/facteur érythroïde 2 (Nrf-2) liée au facteur érythroïde 2 (Nrf-2) de type Kelch est un mécanisme de défense antioxydant endogène principal. Sous des conditions de stress oxydatif, Nrf-2 se dissoce de Keap-1, se transloce vers le noyau et active l’expression génique dépendante des élémentsde réponse antioxydante 5. Malgré son rôle établi dans la défense cellulaire, la modulation régionale de la signalisation Keap-1/Nrf-2 dans le cerveau lors d’une exposition environnementale au BPA n’a pas été étudiée de manière exhaustive en lien avec les résultats comportementaux.

La thymoquinone (TQ), le principal composant bioactif de l’huile de graine de Nigella sativa, est une benzoquinone lipophile capable de traverser la barrière hémato-encéphalique. TQ présente des propriétés antioxydantes, anti-inflammatoires et anti-apoptotiques, en partie grâce à l’activation de la signalisation du Nrf-2 et à l’augmentation de la capacité antioxydanteendogène 5,6. Bien que des études antérieures aient démontré les effets protecteurs de la QT dans divers modèles de neurotoxicité, une approche méthodologique intégrée évaluant les marqueurs de stress oxydatif, la signalisation Keap-1/Nrf-2 et les paramètres comportementaux dans le même paradigme d’exposition au BPA faitdéfaut 5,6,7.

Ici, nous décrivons un protocole expérimental reproductible pour évaluer les biomarqueurs du stress oxydatif, l’expression des voies Keap-1/Nrf-2 et les altérations comportementales dans un modèle de rat d’exposition au BPA écologiquement pertinent, ainsi qu’à évaluer les effets neuroprotecteurs de la thymoquinone dans plusieurs régions cérébrales.

Nous avons émis l’hypothèse que l’exposition à faible dose de BPA induit des troubles comportementaux par la dysrégulation médiée par le stress oxydatif de la voie de signalisation Keap-1/Nrf-2, et que la thymoquinone atténue ces effets en rétablissant l’équilibre redox et en activant les réponses antioxydantes dépendantes du Nrf-2.

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Protocole

Toutes les procédures expérimentales ont été approuvées par le Comité d’éthique locale de l’expérimentation animale institutionnelle (Approbation n° : 68429034/07).

Animaux et conception expérimentale
Vingt-quatre rats albinos Wistar adultes mâles (200-250 g) ont été prélevés auprès du Experimental Animal Research Laboratory et hébergés individuellement dans des conditions contrôlées (cycle clair/sombre de 12 heures, 24 ± 2 °C) avec un accès ad libitum à la nourriture standard et à l’eau du robinet. Les animaux étaient acclimatés aux conditions de laboratoire avant l’expérience, qui a duré 32 jours.

Les rats ont été assignés aléatoirement à des groupes expérimentaux en utilisant une méthode de randomisation simple générée par ordinateur pour minimiser le biais de sélection, avec un nombre égal d’animaux attribué à chaque groupe (n = 6/groupe) : témoin, BPA, BPA + 10 mg/kg thymoquinone (BPA + TQ I), et BPA + 20 mg/kg thymoquinone (BPA + TQ II). La taille de l’échantillon a été déterminée par une analyse de puissance a priori à l’aide du logiciel G*Power (version 3.1). Sur la base des tailles d’effet rapportées dans des études antérieures 5,6,7 évaluant la neurotoxicité induite par le BPA et les interventions antioxydantes, en particulier pour les mesures biochimiques et comportementales, une puissance statistique de 0,80 a été supposée pour l’ANOVA unidirectionnelle. Dans ces conditions, un minimum de six animaux par groupe était requis pour détecter des différences statistiquement significatives entre les groupes expérimentaux.

Le BPA (50 μg/kg) et le QT (10 ou 20 mg/kg) ont été administrés de façon intragastrale par gavage une fois par jour pendant 30 jours. Tous les traitements étaient fraîchement préparés et administrés à un volume total de 1 mL/kg. La dose de BPA utilisée dans la présente étude (50 μg/kg/jour) a été sélectionnée en fonction de sa désignation comme niveau sans effet indésirable observé et de la dose de référence par l’Agence de protection de l’environnement des États-Unis et la Food and Drug Administration des États-Unis. Cette dose a été largement utilisée dans des études expérimentales pour modéliser l’exposition au BPA environnementale et pour étudier d’éventuelles altérations neurocomportementales et biochimiques survenant à des niveaux d’exposition auparavant considérés comme sûrs. Il est important de noter que l’accumulation de preuves expérimentales indique que des effets neurologiques et comportementaux néfastes peuvent survenir à cette dose ou en dessous, ce qui soutient sa pertinence pour l’évaluation de la toxicité du BPA à faibledose 1,2. Le choix des doses de TQ (10 et 20 mg/kg) s’est basé sur des études expérimentales antérieures démontrant son efficacité neuroprotectrice et antioxydante sans induire de toxicité 5,6,7. Ces doses ont été largement utilisées dans des modèles de rongeurs liés à la neurotoxicité, au stress oxydatif et à la neuroinflammation, et sont bien en dessous des seuils de toxicité rapportés pour une administration répétée. Aucune étude pilote de détermination de la dose n’a été menée ; La sélection des doses a été guidée par la préséance de la littérature et des profils de sécurité établis afin d’assurer à la fois l’efficacité et la pertinence translationnelle.

Le BPA a été administré pendant 30 jours consécutifs. Des évaluations comportementales ont été réalisées les jours 31 et 32 suivant l’exposition finale. Les animaux ont été sacrifiés au 32e jour après avoir terminé tous les tests comportementaux. Cette chronologie a été conçue pour permettre suffisamment de temps à l’évaluation comportementale tout en minimisant les effets potentiels de confusion liés à la manipulation aiguë ou au stress procédural sur les analyses biochimiques, moléculaires et histopathologiques ultérieures. La thymoquinone a été administrée 1 fois par jour immédiatement après le BPA par la même voie intragastrique. Des tests comportementaux ont été réalisés après les dernières administrations de BPA et de QT (QB). La chronologie expérimentale est résumée à la Figure 1.

Mesure du poids corporel
Le poids corporel a été mesuré à l’aide d’une balance de précision numérique calibrée (sensibilité ±0,1 g). Chaque rat a été pesé individuellement le matin avant l’administration du traitement, et les mesures ont été prises les jours 1, 10, 20 et 32 dans des conditions standardisées afin de minimiser la variabilité (Figure 2).

Évaluations comportementales
Tous les paramètres comportementaux ont été notés par un seul observateur aveuglé à l’allocation de groupe afin de minimiser le biais et la variabilité entre observateurs. Les animaux ont été habitués à la salle de test pendant au moins 30 minutes avant les tests comportementaux afin de réduire le stress induit par la nouveauté.

L’utilisation combinée du test en champ ouvert (OFT) et du test de nage forcée (FST) permet une évaluation complète de la toxicité neurocomportementale induite par le BPA, car il a été démontré que le BPA modifie à la fois la réactivité émotionnelle et l’activité locomotrice chezles rongeurs 2,3. Les résultats locomoteurs dérivés de l’OFT ont été pris en compte lors de l’interprétation de l’immobilité de la FST afin de minimiser les effets de confusion potentiels liés à une activité motrice modifiée.

FST : Le comportement de type dépression a été évalué à l’aide du test de nage forcé au 32e jour, précédé d’une séance pré-test de 15 minutes réalisée 24 heures plus tôt. Les rats étaient placés individuellement dans des bassins cylindriques (35 cm de diamètre, 50 cm de hauteur) remplis d’eau (30 cm de profondeur, 25 ± 1 °C) et laissés nager pendant 5 minutes. Les comportements d’immobilité, de natation et d’escalade ont été enregistrés à l’aide d’une caméra vidéo et analysés hors ligne pour évaluer le désespoircomportemental 7.

OFT : Les comportements anxieux et l’activité locomotrice spontanée ont été évalués à l’aide du test en champ ouvert au jour 31. Chaque rat était placé individuellement dans une arène blanche en plexiglas (90 cm x 35 cm) divisée en 24 carrés égaux et laissé libre d’exploration pendant 5 minutes. Les mouvements étaient enregistrés à l’aide d’une caméra vidéo. Le temps passé dans les zones centrales et périphériques ainsi que le nombre de croisements avec les quatre pattes ont été quantifiés comme indices de comportement et de locomotion liés àl’anxiété 8.

Collecte d’échantillons
Au 32e jour, les rats ont été profondément anesthésiques avec de la kétamine intramusculaire (45 mg/kg) et de la xylazine (5 mg/kg). Une profondeur d’anesthésie adéquate a été confirmée par l’absence du réflexe de retrait pédal. Le sang a été prélevé par ponction cardiaque à l’aide d’une seringue stérile, et environ 3 à 5 mL de sang ont été prélevés sur chaque animal. L’euthanasie a été complétée par exsanguination sous anesthésie profonde. Les échantillons sanguins ont été transférés dans des tubes contenant des anticoagulants et centrifugés à 3 000 x g pendant 10 à 15 minutes à 4 °C. Le plasma séparé était aliquoté et stocké à −80 °C jusqu’à l’analyse biochimique.

L’hippocampe et l’hémisphère cérébral gauche ont été rapidement disséqués, pesés, congelés dans de l’azote liquide et stockés à −80 °C pour des analyses biochimiques ultérieures, tandis que l’hémisphère cérébral droit a été fixé dans du formol tampon neutre à 10 % pour des évaluations histopathologiques et immunohistochimiques. Pour assurer la cohérence méthodologique et minimiser la variabilité entre échantillons, l’hémisphère gauche a été systématiquement alloué aux mesures biochimiques et l’hémisphère droit aux analyses morphologiques chez tous les animaux. Il est important de noter que la fixation du formol était strictement limitée aux tissus destinés aux procédures histologiques et immunohistochimiques, et aucun tissu fixe n’était utilisé pour les tests biochimiques à base de protéines, empêchant ainsi la dégradation des protéines liée à la fixation. Pour les évaluations biochimiques, des quantités définies de tissu cérébral congelé (typiquement 50-100 mg par essai) ont été homogénéisées à l’aide de tampons d’homogénéisation spécifiques à l’analyse et de rapports tissu-tampon standardisés selon les besoins de chaque paramètre biochimique. Toutes les analyses ont été réalisées en utilisant des quantités tissulaires égales dans chaque dossage entre groupes expérimentaux.

La concentration totale de protéines dans les homogénéates tissulaires a été déterminée à l’aide d’un test protéique fluorométrique selon les instructions du fabricant. Tous les paramètres biochimiques ont été mesurés à l’aide de concentrations protéiques standardisées et égales dans chaque test afin d’assurer la comparabilité entre échantillons et groupes expérimentaux.

Évaluation des paramètres de stress oxydatif
La peroxydation lipidique a été évaluée en mesurant les niveaux de MDA à l’aide de la méthode des substances réactives à l’acide thiobarbiturique (TBARS) dans des échantillons de plasmaet de tissus 7. Les niveaux réduits de thiol (RSH) et de GSH ont été déterminés spectrophotométriquement à l’aide de tests basés sur le 5,5′-dithiobis-(2-acide nitrobenzoïque) (DTNB) 7. Les niveaux totaux d’oxyde nitrique (NO) dans les homogénéats plasmatiques et tissulaires ont été mesurés à l’aide de la réaction de Griess après réduction dunitrate 7. Tous les paramètres biochimiques sont exprimés sous forme de protéine nmol/g ou de tissu μmol/g, comme indiqué dans les figures 3 et 4. Tous les tests biochimiques ont été réalisés en duplication, et les valeurs moyennes ont été utilisées pour l’analyse statistique.

En plus des analyses du tissu cérébral, des estimations biochimiques ont été réalisées dans des échantillons sanguins afin d’évaluer l’état oxydatif systémique induit par l’exposition au BPA. Les niveaux de peroxydation lipidique plasmatique ont été déterminés par la méthode TBARS, et les résultats ont été exprimés comme équivalents MDA. Les niveaux réduits de sulfhydryle (RSH) ont été mesurés à l’aide de DTNB, et les niveaux totaux de NO ont été évalués à l’aide de la réaction de Griess après réduction du nitrate, comme décritprécédemment 7. Les valeurs d’absorbance ont été enregistrées spectrophotométriquement à 532 nm (TBARS), 412 nm (RSH) et 540 nm (NO). Tous les tests ont été réalisés en double dans des conditions standardisées.

Le BPA est un toxique environnemental omniprésent qui pénètre dans la circulation systémique et exerce des effets multiorganiques ; Par conséquent, les marqueurs de stress oxydatif circulants fournissent des informations complémentaires reflétant le déséquilibre redoxglobal 1,2. L’évaluation des paramètres biochimiques sanguins permet d’évaluer la relation entre les altérations oxydatives centrales et périphériques et renforce la pertinence translationnelle des résultats, car ces marqueurs sont couramment utilisés dans les études environnementales et cliniques pour surveiller la toxicité liée à l’exposition.

Analyse du western blot
L’analyse Western blot a été réalisée pour déterminer les niveaux de protéines Keap-1 et Nrf-2 dans les tissus hippocampiques. Environ 50 mg de tissu ont été homogénéisés dans 500 μL de tampon RIPA contenant un cocktail inhibiteur de protéase. Les homogénates ont été centrifugés à 14 000 x g pendant 10 minutes à 4 °C, et les surnatants ont été collectés. Les concentrations de protéines ont été déterminées à l’aide d’un test de quantification fluorométrique des protéines selon les instructions du fabricant, et les concentrations ont été calculées à partir d’une courbe d’étalonnage standard. Des quantités égales de protéines (30 μg) ont été mélangées avec un tampon de Laemmli contenant du β-mercaptoéthanol, chauffées à 95 °C pendant 5 minutes, séparées sur des gels SDS-PAGE à 10 %, puis transférées sur des membranes PVDF à 110 V pendant 60 à 90 minutes. Les membranes ont été bloquées avec 3 % de BSA et incubées toute la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires contre Keap-1 et Nrf-2 (1:3000) et β-actine (1:1000), suivies d’une incubation avec des anticorps secondaires conjugués à HRP. Les bandes protéiques ont été visualisées par chimiluminescence, et les intensités des bandes ont été quantifiées par analyse densitométrique puis normalisées en β-actine.

Analyse histopathologique
Des échantillons de tissu cérébral de l’hémisphère droit ont été fixés dans du formol tampon neutre à 10 % pendant 72 heures, déshydratés par une série éthanol graduée, éliminés dans le xylène et intégrés dans la paraffine selon les procédures histologiquesstandard 9. Les tissus frais étaient réservés aux analyses biochimiques. Des sections coronales (5 μm) ont été obtenues aux niveaux du cortex hippocampal et entorhinal sur la base d’un atlas cérébralde rat 10. Quatre coupes consécutives par animal ont été montées sur des lames en verre pour des évaluations histologiques et immunohistochimiques, assurant une épaisseur de section et une localisation anatomique constantes. Les sections ont été déparaffinées, réhydratées et colorées avec de l’hématoxyline et de l’éosine (H&E) selon les protocoles de colorationde routine 11. L’examen histopathologique a été réalisé sous microscopie optique par un seul observateur entraîné, aveugle aux groupes expérimentaux, afin de minimiser les biais et d’éliminer la variabilité entre les observateurs.

Analyse immunohistochimique
Les régions d’intérêt, dont l’hippocampe et le cortex entorhinal, ont été sélectionnées en fonction de leur vulnérabilité à la neurotoxicité induite par le BPA et de leur rôle dans la régulation cognitive etémotionnelle 1,2. Une coloration immunohistochimique pour Nrf-2 et Keap-1 a été réalisée sur des sections cérébrales plongées dans la paraffine. Les sections ont été déparaffinées dans le xylène, réhydratées par des séries d’éthanol graduées, puis soumises à une récupération d’antigènes induite par la chaleur dans un tampon de citrate (pH 6,0). L’activité endogène de la peroxydase a été éteinte avant l’incubation.

Les sections ont été incubées toute la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires contre Nrf-2 (1:100) et Keap-1 (1:200). La détection a été réalisée à l’aide d’un système de détection HRP à base de polymère, disponible commercialement et prêt à l’emploi, contenant des anticorps secondaires spécifiques à chaque espèce conjugués à la peroxydase de raifort, conformément aux instructions du fabricant. L’immunoréactivité a été visualisée en utilisant la 3,3′-diaminobenzidine (DAB) comme chromogène, suivie d’une contre-coloration à l’hématoxyline. Certaines sections ont été déshydratées, dégagées et couvertes par un coussin de couverture.

Les sections témoins négatives ont été traitées en parallèle sans incubation primaire d’anticorps. Pour l’analyse quantitative, trois sections non adjacentes par animal ont été évaluées. Les images ont été prises sous des réglages d’exposition identiques pour tous les groupes. Seize champs non chevauchants par section ont été analysés à l’aide du logiciel ImageJ. Les régions d’intérêt ont été délimitées manuellement, la coloration de fond a été soustraite, et l’immunoréactivité exprimée sous forme de valeur grise moyenne. La valeur moyenne par animal a été calculée et utilisée pour l’analyse statistique.

Notation histopathologique
Les altérations histopathologiques ont été évaluées de manière semi-quantitative sur des coupes colorées à H&E. Dix champs sélectionnés au hasard, non chevauchants, par section ont été examinés, et les paramètres pathologiques ont été notés indépendamment. La gravité des lésions dans l’hippocampe et le cortex entorhinal a été évaluée à l’aide d’une échelle de quatre points basée sur la proportion de cellules concernées : score 0 (<5 %), score 1 (≤ un tiers), score 2 (un tiers à deux tiers) et score 3 (> deux tiers). Les scores moyens par animal ont été utilisés pour l’analyse statistique.

Analyse statistique
Les données ont été analysées à l’aide du logiciel SPSS (version 29.0) et sont présentées en moyenne ± écart-type (SD). La taille de l’échantillon a été déterminée sur la base d’études antérieures et d’analyses de puissance, indiquant que six animaux par groupe fournissent >80 % de puissance pour détecter des différences biologiquement pertinentes. La normalité de la distribution des données a été évaluée à l’aide du test de Shapiro-Wilk. L’homogénéité des variances a été évaluée à l’aide du test de Levene. Des comparaisons de groupe ont été réalisées à l’aide d’une analyse unidirectionnelle de la variance (ANOVA), suivies du test post hoc de Tukey. La signification statistique a été fixée à p < 0,05.

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Résultats

Poids corporel
Aucune différence statistiquement significative de poids corporel n’a été observée entre les groupes aux jours 1 et 32 de l’étude (F(3,20)=2,750, p > 0,05 ; Figure 2).

Résultats des tests comportementaux
L’analyse d’essai en champ ouvert a révélé que l’exposition au BPA a significativement réduit l’activité locomotrice, comme l’indique un nombre réduit de croisements ...

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Discussion

La présente étude a évalué les effets du BPA, un composant structurel des plastiques polycarbonatés jugés sûrs par l’USEPA à une dose de 50 μg/kg 1,2, sur le stress oxydatif, la signalisation Keap-1/Nrf-2, le comportement et les altérations histopathologiques du cerveau du rat. De plus, les effets neuroprotecteurs potentiels de la TQ, un composé naturel aux propriétés antioxydantes bien documentées, ont été étudiés à deux doses d...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à déclarer.

Remerciements

Ce projet a été soutenu par le Bureau de coordination des projets de recherche scientifique de l’Université (numéro de projet TIP. A4.24.003).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)Thermo Scientific  69-78-3 
Benchtop centrifuge NF048Nüve43560
Beta_Actin ThermoFisher Scientific, United States7D2C10
Bisphenol AMerck239658
BSA solution  Proteintech, United States)66201-1-Ig
Butylated hydroxytolueneSigma Aldrich128-37-0
Dijital Homojenizatör Daihan Scientifichttps://www.artlaboratuvarcih
azlari.com/urun/daihan-hg-
15d-dijital-homojenizator-set
-a?srsltid=AfmBOorx_az06ulc
HpSzKZsuP8-47Za4BkvLOM2
2Xhp00tgwWhJ-86Vc
Hematoxylin–eosin Bio OpticaW01030708
Hydrochloric acidMerck7647-01-0
Image J software program NIH; Washington, U.S.A.https://imagej.net/ij/
Immunohistochemical staining kit Lab VisionTM UltraVisionTM Large Volume Detection System: anti-polyvalentHRP, TA-125-HL
Leica Autocut 14051956472Germanyhttps://www.leicabiosystems.
com/histology-equipment/mic
rotomes/histocore-autocut/
Light microscope Nikon, Eclipse Ni-U, 940728
N-(1-Naphthyl)ethylenediamineThermo Scientific 1465-25-4
Nano Microplate ReaderBMG LABTECHSPECTROstar Nano
phosphate-buffered saline MerckP4417
Primary antibodies Keap-1 ProteintechCat No. 10503-2-AP, 1:200
Primary antibodies Nrf-2 ProteintechCat No. 16396-1-AP, 1/100
Qubit Protein BR Assay Kit ThermoFisher Scientific-INVITROGENQ33211
sodium citrateMerck03-04-6132
Sodium Dodecyl SulfateThermo Scientific 151-21-3
sodium hydroxideMerck1310-73-2
Sodium nitrateMerck7631-99-4
Streptavidin Peroxidase Thermo Scientific SHRP248-B
sulfanilamideThermo Scientific  63-74-1 
thiobarbituric acid Merck504-17-6
TQ CAYMAN 490-91-5
Tricarballylic acid, 99%Thermo Scientific Chemicals 139360500
Trichloroacetic acidThermo Scientific Chemicals76-03-9
Tris-HClThermo Scientific  1185-53-1 
Vanadium(III) chlorideSigma Aldrich7718-98-1
West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate and the iBright 750 Thermo Fisher Scientific systemhttps://www.clinxsci.com/product/mini
_chemiluminescence_imaging_system
?gad_source=1&gad_campaignid=
16224184202&gbraid=0AAAAAoN6
UOOtoB8UD0deumBAMD8Xi-1l-&g
clid=CjwKCAjwgeLHBhBuEiwA
L5gNEXtK2CNSLS1GqllMuNgkrFYD
aW7yK585njQjFja485Fkwj9lRUEKD
BoCgLoQAvD_BwE
Zinc sulfate solutionMerck7733-02-0

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