Conception expérimentale et préparation du graphique
L’expérience a été menée en juillet et début août 2023 et 2024. En général, la saison de culture du soja dans l’Ohio se déroule approximativement d’avril à novembre. Les sites utilisés pendant la saison de croissance 2023 étaient situés dans le comté de Clinton (39,488, -83,769) et le comté d’Union (40,296, -83,283), Ohio. Les sites utilisés lors de la saison de croissance 2024 étaient situés dans le comté de Clinton (39,489, -83,762), le comté de Preble (39,893, -84,611) et le comté de Licking (39,948, -82,501), Ohio.
L’expérience a utilisé un design randomisé de blocs complets pour contrôler les effets spatiaux dans le champ de soja. Dans chaque bloc, 5 parcelles étaient désignées pour un traitement spécifique. Les traitements comprenaient deux stades de croissance (R3 et R5) et deux périodes d’application (en milieu de matinée et en milieu de journée), ainsi qu’un groupe témoin non traité. Cela a conduit aux 4 applications suivantes de pesticides sur les parcelles de chaque bloc : R3 en milieu de matinée, R3 en milieu de journée, R5 en milieu de matinée, R5 en milieu de journée. Les applications en milieu de matinée ou en milieu de journée se faisaient dans une fenêtre de ~2 heures, les applications en milieu de matinée étant environ centrées autour de 10h00 et celles de midi autour de 12h30. En plus des 5 parcelles de traitement de chaque bloc, 3 parcelles étaient désignées comme pièces de rechange pouvant être transférées dans les parcelles de traitement en cas de mauvaise croissance ou d’établissement du soja. Les stades des plants de soja ont été déterminés à l’aide de guides de stade tels que celui publié par l’Université du Minnesota,Extension 39.
Des blocs de parcelles de soja étaient espacés d’environ 1,016 m (40 in) pour permettre aux chercheurs de marcher facilement entre eux. Les parcelles de soja mesuraient 1,9 m sur 8,5 m (0,0016 ha ; 6,25 ft sur 28 ft), et la variété de soja utilisée pour tous les sites était Pioneer P35T155E (Corteva, Indianapolis, IN). 6 rangées ont été plantées dans chaque parcelle et espacées de 38 cm (15 pouces). Un taux de semis de 370 658 graines par hectare (150 000 graines par acre) a été utilisé. Les abeilles impliquées dans l’expérience provenaient toutes de populations locales. Aucune abeille supplémentaire n’a été ajoutée par les chercheurs. Les auteurs ne connaissaient aucune connaissance des ruchers stationnaires ou migrateurs près des sites expérimentaux. Tous les matériaux utilisés pour l’expérience sont listés dans le tableau des matériaux.
Préparation des pesticides
Les pesticides utilisés étaient le fongicide Fitness (principe actif de propiconazole à 41,8 %) et l’insecticide Fastac EC (ingrédient actif à 10,9 % d’alpha-cyperméthrine). Les taux d’application du pesticide étaient de 6 fl oz/ac (438,47 mL/ha) pour le fongicide SBI et 3,8 fl oz/ac (277,70 mL/ha) pour l’insecticide pyréthroïde. Pour préparer les pesticides à l’application, 9,375 mL de fongicide SBI et 5,937 mL d’insecticide pyréthroïde ont été mélangés à de l’eau pour obtenir un volume final de 3 L en tant que mélange en cuve. Des gants résistants aux produits chimiques étaient portés lors de la préparation du mélange. La concentration finale de fongicide SBI dans le réservoir était de 3,125 mL par litro. La concentration finale d’insecticide pyréthroïde dans le bac était de 1,979 mL par L.
Application de pesticides
Ce mélange a été appliqué sur des parcelles individuelles de soja dans chaque bloc à l’aide d’un pulvérisateur portatif sur mesure. Le mélange de pesticides était appliqué au sommet de la canopée du soja, à une vitesse de ~5 km par heure. Après avoir commencé le processus d’application du pesticide pour un traitement donné, il a fallu ~10 minutes pour que toutes les parcelles reçoivent l’application. Pour chaque aquarium de 3 L, une surface de ~0,027 ha peut être couverte avec le mélange de pesticides. Le volume de pulvérisation consommé par hectare est d’environ 113 L. Cela signifie que ~0,18 L du mélange du réservoir a été appliqué par parcelle. Pour éviter la dérive des pesticides vers d’autres parcelles causée par le vent, les applications étaient évitées lors des jours venteux. Un équipement de protection individuelle complet (chemise à manches longues et pantalon long, gants résistants aux produits chimiques, chaussures ainsi que chaussettes, et lunettes de protection) était porté lors de l’application du pesticide. S’il y avait un excès de mélange de pesticides après la fin d’une application, il était éliminé conformément aux recommandations de l’agence de contrôle environnemental de l’État.
Installation/utilisation de l’enregistreur
La configuration générale et l’utilisation des enregistreurs audio sont similaires à un protocole décrit par d’autresauteurs 40. Des enregistreurs audio portatifs (Sony ICD-PX370) étaient fixés à des piquets en plastique à contre-pied avec un ruban adhésif à crochet, et de la mousse à cellules ouvertes était placée sur le microphone comme pare-brise. Une housse imperméable imprimée en 3D en forme de cône était fixée sur le pieu à ~3 cm au-dessus de l’enregistreur pour le protéger des intempéries.
Des enregistreurs audio étaient ensuite placés au centre de chaque parcelle ~24 heures avant la première application de pesticide et laissés en marche pendant au moins 24 heures après chaque application. Douze enregistreurs ont été déployés pour chaque jour d’application, quatre pour chaque groupe à l’heure de la journée (milieu de matinée, midi, contrôle) dans R3 et R5.
Traitement des données audio
Tous les enregistrements audio étaient traités via l’outil d’apprentissage automatique « buzzdetect » 41 , disponible à l’adresse : https://github.com/OSU-Bee-Lab/buzzdetect. Cet outil a été entraîné à distinguer les bruits de bourdonnement des insectes d’autres sons fréquemment présents dans l’environnement expérimental, comme les voitures, les moissonneuses-batteuses ou les avions. Le programme n’est pas capable de distinguer le bourdonnement d’Apis mellifera des autres espèces d’abeilles. Cependant, buzzDetect est capable de distinguer les bruits de bourdonnement de certains autres bruits d’insectes non bourdonnants, bien que des bruits spécifiques (comme les criquets, principalement la nuit) restent difficiles à distinguer. Des instructions plus précises pour faire fonctionner buzzDetect se trouvent à l’adresse suivante : https://buzzdetect.readthedocs.io/en/latest/gui/. Après analyse audio, R42 a été utilisé pour calculer le taux de détection dans des intervalles de 1 heure et 8 heures.
Données sur la défoliation
Les évaluations de la défoliation ont été réalisées en évaluant visuellement les feuilles de la canopée supérieure du soja sur 10 plantes de chaque parcelle impliquée dans l’expérience, incluant tous les traitements et les parcelles témoins non traitées comme recommandé par l’Extension43 de l’Université du Nebraska. Ces évaluations ont été réalisées 24 heures après l’application du pesticide durant la phase de croissance R5.
Données de rendement
Le soja était récolté, et le rendement mesuré en boisseaux par acre à l’aide d’une moissonneuse-batteuse et d’un système de pesée à grains. Les mesures de rendement ont été ajustées à 13 % d’humidité. Les parcelles avaient chacune 6 rangées ; seules les 4 rangées centrales ont été récoltées pour mesurer le rendement.
Analyse statistique
Toutes les statistiques ont été réalisées en R42. Les données ont été analysées soit avec des modèles linéaires à effets mixtes via le packagelme4 44 , soit une régression bêta via le packageglmmTMB 45. Les données brutes de BuzzDetect sont disponibles dans les documents complémentaires. Trois principaux types de données ont été analysés pour cette étude. Données moyennes d’activité des abeilles sur 1 h et 8 h suivant l’application d’un pesticide, le rendement de chaque parcelle de soja et la défoliation observée au stade de croissance R5.
L’activité moyenne des abeilles a été obtenue en calculant la proportion de temps positifs pour le bourdonnement des abeilles dans une fenêtre de 8 ou 1 heure. La fenêtre d’une heure vise à estimer les effets aigus de l’application de pesticides sur l’activité des abeilles, tandis que la fenêtre de 8 heures vise à estimer les effets aigus et résiduels. Les données de toxicité résiduelle ne sont pas disponibles pour l’alpha-cyperméthrine, mais la toxicité résiduelle pour d’autres pyréthroïdes a été rapportée à ~8 h aprèsl’application initiale 46. Comme le calcul de l’activité des abeilles est proportionnel, les différences d’activité ont été analysées à l’aide de la régression bêta réalisée avec le package R « glmmTMB ». Les modèles ont examiné les taux moyens de détection pour 1 h ou 8 h après l’application d’un pesticide et leur variation lors de la comparaison des parcelles traitées aux parcelles témoins (la condition « pulvérisée »), le stade de croissance du soja, l’heure de la journée d’application du pesticide, ou un stade de croissance et un terme d’interaction à l’heure de la journée. La comparaison entre les graphiques traités et témoins est référencée par la variable « pulvérisée » dans les formules du modèle à 1 heure et à 8 heures.
Dans le modèle de fenêtre d’une heure, les effets fixes étaient la condition « pulvérisée », le stade de croissance, l’heure de la journée, ainsi qu’un stade de croissance et un terme d’interaction à l’heure de la journée. Le modèle avait à la fois un terme d’interaction d’un an et un terme d’interaction par site ajusté comme effets aléatoires. La formule complète du modèle était la suivante :
(1)
Le taux de détection variable reflète la moyenne des détections d’abeilles observées par rapport à la fenêtre totale d’observation — dans ce cas, 1 h. La variable pulvérisée correspond à la question de savoir si une parcelle a reçu une application de pesticide ou s’il s’agissait d’une parcelle témoin non traitée. La variable time_of_day correspond au fait que les détections aient été capturées après l’application de pesticides en milieu de matinée ou en milieu de journée pour la période souhaitée. Le stade variable correspond au stade de croissance dans lequel les détections ont été capturées.
Dans le modèle à fenêtre de 8 heures, les effets fixes étaient le stade de croissance et la condition « pulvérisée ». Le modèle de 8 heures inclut les horaires de pulvérisation nocturnes à midi, ce qui rend la comparaison injuste entre les horaires de mi-matinée et de midi. Cela s’explique par le fait que les heures d’application en milieu de journée ne permettent pas de détecter l’intégralité des 8 heures de toxicité résiduelle dues à l’inactivité des abeilles en soirée, une grande partie de ces fenêtres de 8 heures. Par conséquent, les applications de midi ont été exclues du modèle, tout comme les termes « heure de la journée » et « heure de la journée : étape ». La formule complète de ce modèle était la suivante :
(2)
Les variables taux de détection, pulvérisation et étape ont les mêmes significations dans cette formule que dans la formule utilisée pour les fenêtres d’une heure. La seule différence est que le taux de détection variable est calculé pour une fenêtre de 8 heures. Les données de rendement ont été analysées à l’aide d’un modèle linéaire à effets mixtes. Le modèle a examiné les boisseaux par acre pour chaque parcelle et comment le rendement variait selon le traitement. L’effet fixe dans le modèle était le traitement, ainsi que le site et l’année étaient adaptés comme effets aléatoires. La formule complète du modèle s’écrit comme suit :
(3)
La défoliation des feuilles de soja a été mesurée en pourcentage moyen de surface foliaire manquante par parcelle. Un modèle linéaire à effets mixtes a été utilisé pour comparer l’effet de l’heure de la journée d’application du pesticide sur le pourcentage de défoliation. L’effet fixe dans le modèle était l’heure de la journée à laquelle les parcelles étaient pulvérisées. Le site et l’année ont été ajustés comme effets aléatoires. La formule complète du modèle est la suivante :
(4)
Tous les protocoles utilisés dans cette étude sont compilés dans le Fichier Supplémentaire 1.