Le récepteur du mannose de type C 2 prédit un mauvais résultat dans le gliome et est associé à des phénotypes invasifs ainsi qu’à des modifications liées à la β-caténine/EMT

Résumé

Des analyses de cohortes publiques et des expériences basées sur des cellules de gliome identifient le MRC2 comme un marqueur de mauvais pronostic, associé à une prolifération accrue, à la migration, à l’invasion et aux modifications liées à la β-caténine et à l’EMT dans le gliome.

Résumé

Le gliome reste une malignité mortelle du système nerveux central, et des biomarqueurs supplémentaires améliorant la stratification pronostique et éclairant l’exploration thérapeutique sont encore nécessaires. Cette étude a évalué le récepteur de la mannose de type C 2 (MRC2/Endo180) en intégrant des cohortes transcriptomiques publiques avec une validation in vitro . Des profils d’expression et des annotations cliniques correspondantes ont été obtenus à partir du Cancer Genome Atlas (TCGA) et du projet Genotype-Tissue Expression (GTEx) pour les comparaisons tumeur-normales et le dépistage pan-cancer, et les associations pronostiques ont été examinées plus en détail dans la cohorte Chinese Glioma Genome Atlas (CGGA). L’expression de MRC2 a été évaluée dans les lignées cellulaires de gliome par transcription inverse par PCR quantitative (RT-qPCR) et immunoblotting, et un knockdown stable de MRC2 a été établi dans les cellules U87 et U251 à l’aide d’ARN en épingle courte lentivirale (shRNA). La croissance cellulaire et la clonogénicité ont été évaluées à l’aide de tests CCK-8 et de formation de colonies, tandis que la migration et l’invasion ont été évaluées à l’aide de tests à membrane poreuse insérée. Les marqueurs liés à la transition (EMT) β-caténine/épithélial-mésenchymatose ont été analysés par immunoblotting. Dans les ensembles de données, le MRC2 était élevé en gliome, et une expression plus élevée était associée à une survie globale moins bonne, une survie spécifique à la maladie et un intervalle sans progression. In vitro, la déplétion de MRC2 a réduit la prolifération, la clonogénicité, la migration et l’invasion, accompagnées d’une diminution des niveaux de protéines CDK4 et CDK6 ainsi que de modifications des marqueurs liés à la β-caténine et à l’EMT. Ensemble, ces résultats soutiennent MRC2 comme biomarqueur pronostique candidat associé à des phénotypes de gliome agressif et justifient une investigation mécaniste et in vivo supplémentaire.

Introduction

Les gliomes représentent les tumeurs primaires les plus courantes apparaissant dans le système nerveux central et représentent une fraction importante des néoplasies^{intracrâniennes 1,2}. Les études épidémiologiques estiment une incidence de l’ordre de quelques cas pour 100 000 personnes chaque année, avec des différences géographiques et liées au sexe rapportées entre^{les populations 3,4}. Cliniquement, les gliomes couvrent un large éventail de comportements : les gliomes de grade inférieur peuvent suivre une évolution prolongée, tandis que les maladies de haut grade — en particulier le glioblastome — restent rapidement mortelles pour la plupart des patients 5,6,7,8. Les classifications modernes de l’OMS intègrent l’histologie avec des caractéristiques moléculaires clés (par exemple, mutation IDH, altération du promoteur TERT, méthylation du promoteur MGMT et co-délétion 1p/19q), ce qui affine le diagnostic et informe le pronostic ^9,10. Bien que la prise en main multimodale combine chirurgie, radiothérapie et chimiothérapie, la récidive est fréquente, et les résultats à long terme pour les tumeurs de haut grade restent faibles. Par conséquent, identifier des marqueurs pronostiques supplémentaires et des vulnérabilités ciblables reste une priorité urgente.

MRC2 (récepteur du mannose de type C 2 ; également appelé Endo180/CD280/uPARAP) est un membre transmembranaire de la famille des récepteurs de lectine de type^{C 11}. Il est enrichi dans les compartiments stromales et immunitaires, tels que les fibroblastes et macrophages, et participe au renouvellement de la matrice extracellulaire (ECM), au remodelage lié à la fibrose et aux interactions tumeur-microenvironnement^12,13. Structurellement, MRC2 contient une région riche en cystéine N-terminale, un domaine de fibronectine de type II qui lie le collagène, plusieurs domaines de type C de type lectine, un segment transmembranaire et une queue^{cytoplasmique 14,15}. Par l’internalisation et le remodelage du collagène, le MRC2 peut faciliter la motilité cellulaire et l’invasion tissulaire, et un MRC2 élevé a été associé à un comportement agressif dans plusieurs cancers, notamment le sein, le pancréas, la prostate, le mélanome et^{le glioblastome} 11,14,16,17,18 . Des travaux antérieurs suggèrent également des liens entre MRC2 et les programmes de signalisation pro-invasifs (par exemple, les voies associées au TGF-β), l’activité métalloprotéinase matricielle et les changements phénotypiques de type EMT, ainsi que des rôles dans les états fibroblastiques et macrophages associés^{au cancer} 17,18,19,20,21 . Cependant, la signification clinique de la MRC2 dans le gliome et les conséquences fonctionnelles de la dysrégulation de la MRC2 dans les cellules gliomes restent floues.

Bien que le MRC2 ait été impliqué dans le remodelage extracellulaire de la matrice et le comportement invasif dans plusieurs tumeurs, sa signification clinique dans le gliome n’a pas été établie de manière systématique à travers des cohortes transcriptomiques indépendantes, et ses effets associés au phénotype dans les cellules gliomes n’ont pas été évalués dans un cadre intégré combinant analyse publique de données avec validation fonctionnelle. Cette étude a donc émis l’hypothèse que MRC2 est associé à des résultats cliniques défavorables et à des phénotypes malins dans le gliome. Pour répondre à cette question, un dépistage pan-cancéreux, la validation indépendante des cohortes de gliome et des expériences de knockdown stable dans des lignées cellulaires de gliome ont été intégrées afin d’évaluer la signification pronostique de MRC2 et son association avec la prolifération, la migration, l’invasion et les changements des marqueurs liés à la β-caténine/EMT. Parce que le MRC2 appartient à la famille des récepteurs du mannose et que la progression du gliome est également façonnée par le microenvironnement tumoral, une analyse exploratoire supplémentaire de l’expression de MRC1 selon le statut IDH a été incluse afin de fournir des informations contextuelles sur les différences liées au système immunitaire entre les sous-types de gliome.

La nouveauté de ce travail réside dans l’évaluation combinée de MRC2 à travers des ensembles de données publics sur le gliome et des tests fonctionnels in vitro , fournissant ainsi des preuves cliniques et expérimentales complémentaires de sa pertinence dans le gliome. Comparé aux analyses à cohorte unique ou aux études uniquement cellulaires, ce flux de travail intégré offre plusieurs avantages pratiques. L’intégration de TCGA, GTEx et CGGA permet une validation intercohorte et réduit la dépendance à un seul ensemble de données. De plus, le couplage des analyses de cohorte publique avec des tests de knockdown des cellules de gliome relie les associations cliniques aux preuves au niveau du phénotype. Enfin, l’utilisation de lectures complémentaires, incluant la RT-qPCR, l’immunoblotting, la CCK-8, la formation de colonies et les tests d’insertion membranaire poreuse permet d’évaluer en parallèle les changements transcriptionnels, au niveau protéique, prolifératifs et liés à la motilité. La conception globale de l’étude et le flux de travail analytique sont résumés à la Figure 1. Ensemble, cette stratégie améliore la robustesse et l’interprétabilité biologique des résultats par rapport aux approches bioinformatiques uniquement ou à un seul dossage.

Protocole

Cette étude a utilisé des ensembles de données publiques et dé-identifiées (TCGA, GTEx et CGGA) et a établi des lignées cellulaires commerciales. Aucun participant humain nouvellement recruté, aucune information identifiable sur les patients ou des spécimens dérivés des patients n’a été impliqué. Toutes les analyses ont été réalisées conformément aux directives institutionnelles et internationales pertinentes pour l’utilisation des données publiques. Par conséquent, aucune approbation éthique institutionnelle supplémentaire ni consentement éclairé n’a été requis pour cette étude.

1. Flux de travail bioinformatique et prétraitement des données

Des profils d’expression génique et des annotations cliniques correspondantes ont été obtenus à partir de ressources publiques, notamment The Cancer Genome Atlas (TCGA), le projet Genotype-Tissue Expression (GTEx) et le Chinese Glioma Genome Atlas (CGGA). Les matrices d’expression et les métadonnées cliniques ont été importées dans R et harmonisées selon les identifiants de l’échantillon. Les entrées dupliquées ou non appariées ont été retirées, et des échantillons dépourvus d’informations essentielles sur la survie ont été exclus des analyses de survie. Les valeurs d’expression de MRC2 et les variables clinicopathologiques correspondantes ont été extraites pour les analyses en aval. Pour les comparaisons tumorales-normales, l’expression de MRC2 a été comparée entre types de cancer à partir de données TCGA uniquement lorsque des tissus normaux appariés étaient disponibles, et en utilisant des données intégrées TCGA–GTEx lorsque des contrôles normaux supplémentaires étaient nécessaires. Pour les analyses axées sur le gliome, les patients des cohortes TCGA-LGG et CGGA ont été stratifiés en groupes à haute et faible expression selon le niveau médian d’expression de la cohorte MRC2. L’analyse de survie de Kaplan-Meier, l’analyse des caractéristiques opérationnelles du récepteur (ROC) dépendantes du temps et la régression des risques proportionnels de Cox ont ensuite été réalisées pour évaluer la pertinence pronostique de MRC2. Les modèles de Cox incluaient les covariables disponibles telles que l’âge, le sexe, le grade de l’OMS et d’autres variables clinicopathologiques, selon la complétude des données au sein de chaque cohorte. Des analyses de sous-groupes ont été réalisées selon des variables telles que l’âge, le sous-type histologique, le grade OMS, le statut de mutation IDH, le statut de codélétion 1p/19q et les informations liées au traitement, lorsque disponibles. Les figures ont été générées en utilisant des flux de travail de tracé statistique standard dans R et GraphPad Prism.

2. Analyses pan-cancéreuses et analyses de survie

L’expression de MRC2 a été comparée entre tumeurs et tissus normaux entre types de cancer à l’aide des ensembles de données TCGA et GTEx. Les différences ont été visualisées à l’aide de boîtes et résumées à l’aide de diagrammes radar. Des analyses de régression des risques proportionnels de Cox ont été réalisées pour évaluer les associations entre l’expression de MRC2 et la survie globale (OS), la survie spécifique à la maladie (DSS) et l’intervalle sans progression (PFI) entre les types de cancer. Les rapports de risque et les niveaux de signification correspondants ont été visualisés à l’aide de parcelles forestières et de cartes thermiques.

3. Validation pronostique et analyses de sous-groupes dans les cohortes de gliomes

Dans la cohorte de gliome de grade inférieur (TCGA-LGG), les patients ont été stratifiés en groupes à haute et faible expression MRC2. Des analyses de survie de Kaplan–Meier ont été réalisées pour comparer OS, DSS et PFI entre groupes. Des courbes de caractéristiques de fonctionnement du récepteur (ROC) dépendantes du temps ont été générées pour évaluer la performance prédictive. Des analyses de régression de Cox univariées et multivariées ont été réalisées pour évaluer la valeur pronostique indépendante de MRC2. La validation externe a été réalisée à l’aide du jeu de données de gliomes CGGA, incluant l’analyse de survie de Kaplan–Meier, l’analyse ROC et la régression de Cox. Des analyses de sous-groupes ont été réalisées pour évaluer l’expression de MRC2 à travers des variables clinicopathologiques, notamment l’âge, le grade tumoral, le sous-type histologique, le statut de mutation IDH, le statut de codélétion 1p/19q et les variables liées au traitement.

4. Expression de MRC1 dans les gliomes mutants IDH versus les gliomes sauvages de type IDH

L’association entre l’expression de MRC1 et le statut de mutation IDH a été évaluée à l’aide de la plateforme web GlioVis et du jeu de données TCGA GBMLGG. Les cas ont été regroupés selon le statut annoté de l’IDH en gliomes mutants IDH et de type sauvage IDH. L’expression de l’ARNm MRC1 a été interrogée dans le jeu de données sélectionné, et les niveaux d’expression entre les deux groupes ont été comparés à l’aide de la fonction d’analyse statistique intégrée à la plateforme. Les distributions d’expressions par groupes étaient affichées telles qu’elles étaient générées par la plateforme, et la signification statistique était définie comme P < 0,05.

5. Culture cellulaire

Les lignées cellulaires de gliome humain et les astrocytes humains normaux ont été prélevés à partir de dépôts cellulaires établis. Les cellules ont été cultivées dans le milieu d’Eagle modifié (DMEM) de Dulbecco, complétés avec un sérum fœtal bovin (FBS) à 10 % et maintenus à 37 °C dans un incubateur humidifié contenant 5 % de CO₂ et environ 95 % d’humidité relative. Les cellules U87 et U251 ont été sélectionnées pour des expériences de perte de fonction car le dépistage de base sur le panel cellulaire de gliome testé a montré que ces deux lignées cellulaires exprimaient des niveaux relativement plus élevés de MRC2 et étaient donc adaptées aux analyses fonctionnelles basées sur le knockdown.

6. Réduction lentivirale de MRC2

Des ARN en épingle courte (shRNA) ciblant MRC2 et un témoin non ciblant ont été clonés en vecteurs lentiviraux. Les particules lentivirales étaient produites par co-transfection de cellules HEK293T avec des plasmides de transfert et en emballant les plasmides à l’aide d’un réactif de transfection standard. Les surnatants viraux étaient collectés à 48 h et 72 h après la transfection, centrifugés à 2 100 × g pendant 5 minutes pour éliminer les cellules d’emballage et les débris cellulaires, puis passés à travers un filtre de 0,45 μm avant utilisation ou stockage immédiat à −80 °^{C 19}. Les surnadants contenant des virus étaient utilisés immédiatement ou aliquotés et stockés à −80 °C. Les cycles répétés de gel-dégel ont été évités. Les cellules de gliome ont été infectées par des particules lentivirales en présence de polybrène. Après l’infection, des cellules ont été sélectionnées avec de la puromycine afin d’établir des lignées cellulaires de knockdown stables. Les séquences utilisées étaient les suivantes : sh-MRC2-1 : 5′-GAAATGAATGAGCAGCAAGAA-3′ ; sh-MRC2-2 : 5′-CCGGTATTGCTATAAGGTGTT-3′ ; sh-NC : 5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3′.

7. Validation du knockdown de MRC2 par RT-qPCR et immunoblotting

L’ARN total a été extrait à l’aide d’un réactif TRIzol, et l’ADNc a été synthétisé à l’aide d’un kit de transcription inverse selon les instructions du fabricant. La PCR quantitative a été réalisée en utilisant la chimie verte SYBR dans les conditions de cycle suivantes : dénaturation initiale à 95 °C pendant 30 s, suivie de 40 cycles à 95 °C pendant 5 s et 60 °C pendant 30 s, avec une analyse de la courbe de dissociation effectuée à la fin de l’amplification. Les séquences d’amorces étaient les suivantes : MRC2 avant, 5′-GGCAAGGAAGAAGTGCGTGT-3′ ; MRC2 en marche arrière, 5′-CTTTGGTGTTGCTGCTGCTT-3′ ; GAPDH avant, 5′-TCCACCCATGGCAAATTCC-3′ ; et GAPDH inverse, 5′-TCGCCCCACTTGATTTTGG-3′. L’expression relative de l’ARNm a été calculée à l’aide de la méthode comparative C_t (2^-ΔΔCt) avec le GAPDH comme contrôle^{interne 20}. Un immunoblotting a été réalisé en parallèle pour confirmer la réduction de MRC2 au niveau protéique. Pour la RT-qPCR, trois réplications biologiques indépendantes ont été analysées, et chaque échantillon a été analysé en triplique technique technique.

8. Essai de prolifération cellulaire

La prolifération cellulaire a été évaluée à l’aide du test CCK-8. Les cellules ont été ensemencées en plaques de 96 puits à une densité appropriée et cultivées pour les périodes indiquées. À chaque moment, un réactif CCK-8 était ajouté à chaque puits et incubé selon les instructions du fabricant, après quoi l’absorption à 450 nm était mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques. Au moins trois réplications biologiques indépendantes ont été réalisées.

9. Essai de formation de la colonie

Les cellules ont été ensemées à faible densité en plaques à six puits et cultivées pendant 10 à 14 jours. Les colonies ont été fixées avec du paraformoldéhyde à 4 % pendant 15 minutes à température ambiante et colorées à 0,1 % de violet cristallin pendant 15 minutes. Les colonies ont été lavées avec du sérum physiologique tamponné phosphate (PBS), séchées à l’air et comptées manuellement ou à l’aide du logiciel d’analyse^{d’image 21}. Au moins trois réplications biologiques indépendantes ont été réalisées.

10. Tests de migration et d’invasion cellulaires

La migration et l’invasion cellulaire ont été évaluées à l’aide de tests à insertion membranaire^{poreuse 22}. Pour les tests d’invasion, les inserts supérieurs étaient pré-recouverts de gel de matrice extracellulaire ; Pour les tests de migration, des inserts non revêtus étaient utilisés. Des cellules suspendues dans un milieu sans sérum étaient ajoutées dans la chambre supérieure, et un milieu contenant du sérum était placé dans la chambre inférieure comme chimiottractant. Après l’incubation, les cellules non migratrices de la surface supérieure de la membrane ont été délicatement retirées à l’aide d’un coton-tige. Les cellules ayant migré ou envahi la surface inférieure ont été fixées avec 4 % de paraformoldéhyde pendant 15 minutes, colorées au violet cristallin à 0,1 % pendant 15 minutes, rincées avec du sérum salubre tamponné de phosphate froid, séchées à l’air et imagées au microscope inversé à un × 200 de grossissement. Les cellules ont été comptées dans cinq champs microscopiques sélectionnés au hasard par insert. Au moins trois réplications biologiques indépendantes ont été réalisées.

11. Analyse du Western blot

Les cellules ont été lysées dans un tampon RIPA complété avec des inhibiteurs de protéase, et la concentration en protéines a été déterminée à l’aide d’un test BCA. Des quantités égales de protéines totales ont été séparées par SDS-PAGE et transférées dans les membranes de PVDF. Les membranes ont été bloquées dans 5 % de lait écrémé pendant 1 heure à température ambiante et incubées avec des anticorps primaires toute la nuit à 4 °C. Les anticorps primaires et dilutions de travail suivants ont été utilisés pour le western blotting : anti-MRC2 (1:5 000), anti-CDK4 (1:1 000), anti-CDK6 (1:2 000), anti-β-caténine (1:5 000), anti-E-cadherine (1:10 000), anti-N-cadherine (1:3 000) et anti-β-actine (1:5 000). Après lavage, les membranes ont été incubées avec des anticorps secondaires anti-IgG de chèvre conjugués à la peroxydase de raifort, ou avec des anticorps secondaires anti-lapins de chèvre (1:5 000) pendant 1 h à température ambiante. Les signaux étaient visualisés à l’aide de la chimiluminescence, et les intensités des bandes étaient quantifiées et normalisées en β-actine. Au moins trois réplications biologiques indépendantes ont été réalisées.

12. Analyse statistique

Des analyses statistiques ont été réalisées à l’aide de R et de GraphPad Prism. Les courbes de survie ont été comparées à l’aide du test log-rank. Des modèles de régression des allocations proportionnelles de Cox ont été utilisés pour les analyses univariées et multivariées. Pour les expériences cellulaires, les données sont présentées en moyenne ± SD. Avant le test paramétrique, la normalité était évaluée à l’aide du test de Shapiro–Wilk. Pour les données distribuées normalement, les différences entre deux groupes ont été évaluées à l’aide du test t de Student, et des comparaisons entre plusieurs groupes ont été réalisées à l’aide d’ANOVA unidirectionnelle. Si les hypothèses de normalité n’étaient pas satisfaites, les tests non paramétriques correspondants étaient utilisés. Les valeurs p ont été ajustées pour plusieurs tests à l’aide de la procédure de taux de fausse découverte de Benjamini^{–Hochberg 23,24}. Un P à deux faces < 0,05 était considéré comme statistiquement significatif.

Résultats

Expression pan-cancéreuse et paysage pronostique de MRC2
Des analyses pan-cancéreuses ont d’abord été réalisées pour caractériser le schéma d’expression et la pertinence pronostique de MRC2 dans les cancers humains. Des comparaisons basées sur les ensembles de données TCGA et GTEx ont montré que l’expression de MRC2 différait significativement entre les tissus tumoraux et normaux dans plusieurs types de cancer (Figure 2A, 2B

Discussion

La thérapie standard pour le gliome repose sur une résection maximale et sûre suivie de radiothérapie et de chimiothérapie, le plus souvent le témozolomide⁴. Néanmoins, l’infiltration diffuse limite fréquemment l’ablation chirurgicale complète et contribue à une rechute inévitable, en particulier dans les maladies de haut^{grade 3,25}. Plusieurs caractéristiques moléculaires — notamment la méthylation du prom...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Anticorps anti-CDK4	Proteintech Group, Inc., États-Unis	11026-1-AP	Anticorps primaire contre le western blotting. RRID : AB_2078702.
Anticorps anti-CDK6	Proteintech Group, Inc., États-Unis	66278-1-IG	Anticorps primaire contre le western blotting. RRID : AB_2881661.
Anticorps anti-E-cadherine	Proteintech Group, Inc., États-Unis	20874-1-AP	Anticorps primaire contre le western blotting. RRID : AB_10697811.
Anticorps anti-MRC2	Proteintech Group, Inc., États-Unis	86028-1-RR	Anticorps primaire contre le western blotting. RRID : AB_2879692.
Anticorps anti-N-cadherine	Proteintech Group, Inc., États-Unis	22018-1-AP	Anticorps primaire contre le western blotting. RRID : AB_2813891.
Anticorps anti-&bêta-actine	Proteintech Group, Inc., États-Unis	66009-1-IG	Anticorps de contrôle de charge pour le western blotting. RRID : AB_2687938.
Anticorps anti-&bêta ;-caténine	Proteintech Group, Inc., États-Unis	51067-2-AP	Anticorps primaire contre le western blotting. RRID : AB_2086128.
Kit de test protéique BCA	Beyotime Biotechnology, Chine	P0012	Kit de test protéique BCA pour la détermination de la concentration en protéines.
Kit de comptage cellulaire-8 (CCK-8)	Laboratoires Dojindo, Japon	CK04-500T	Analyse de viabilité/prolifération cellulaire.
Système d’imagerie chimiluminescence	Uvitec Limited, France	Manuel avancé Alliance Q9	Système d’acquisition d’image pour la détection des taches occidentales.
Incubateur CO2	Équipement de laboratoire générique	Non spécifié	Incubateur humidifié CO2 utilisé pour la culture cellulaire à 37 °C ; C et 5 % CO2.
Solution de violet cristal (0,1 %)	Beyotime Biotechnology, Chine	C0121-100 mL	Solution de coloration violette cristalline utilisée à une concentration de travail de 0,1 %.
DMEM, glycémie élevée	Gibco, Thermo Fisher Scientific, États-Unis	C11995500BT	Milieu basal pour la culture cellulaire de gliome.
Sérum fœtal bovin (FBS)	ExCell Bio, Chine	FSP500	Supplément sérique pour culture cellulaire.
GlioVis	gliovis.bioinfo.cnio.es	Non applicable	Plateforme web pour la visualisation et l’analyse des ensembles de données d’expression des tumeurs cérébrales, en particulier des gliomes.
GraphPad Prism	GraphPad Software, États-Unis	Version 10.4.0	Logiciels d’analyse statistique et de graphisme. RRID : SCR_002798.
HEK293T cellules	Collection de culture typographique de l’Académie chinoise des sciences, Shanghai, Chine	GNHu43	Gamme cellulaire d’emballage utilisée pour la production de lentiviraux. RRID : CVCL_0063.
IgG anti-souris de chèvre conjugué à HRP (H+L)	Proteintech Group, Inc., États-Unis	SA00001-1	Anticorps secondaire contre le blot occidental. RRID : AB_2722565.
IgG anti-lapin de chèvre conjugué HRP (H+L)	Proteintech Group, Inc., États-Unis	SA00001-2	Anticorps secondaire contre le blot occidental. RRID : AB_2722564.
Astrocytes humains	Collection de culture typographique de l’Académie chinoise des sciences, Shanghai, Chine	Non disponible publiquement	Des astrocytes humains normaux utilisés comme contrôle non tumoral ; numéro de catalogue non disponible publiquement.
Microscope inversé	Équipement de laboratoire générique	Non spécifié	Microscope inversé utilisé pour l’acquisition d’images dans les tests de migration et d’invasion.
Matrice de matrigel	Corning, États-Unis	354234	La matrice membranaire du socle utilisée pour recouvrir les inserts lors des essais d’invasion.
Lecteur de microplaques	Équipement de laboratoire générique	Non spécifié	Lecteur de microplaques utilisé pour la mesure d’absorption à 450 nm dans les tests CCK-8.
Kit de préparation gel PAGE, 10 %	EpiZyme, Chine	PG212	Kit de préparation du gel SDS-PAGE.
Kit de préparation gel PAGE, 7,5 %	EpiZyme, Chine	PG111	Kit de préparation du gel SDS-PAGE.
Solution de paraformoldéhyde (4 %)	Beyotime Biotechnology, Chine	P0099-100 mL	Fixateur de paraformoldéhyde à 4 % pour la formation de colonies et les tests de migration/invasion.
Solution de pénicilline-streptycine	Gibco, Thermo Fisher Scientific, États-Unis	15140163	Complément antibiotique pour culture cellulaire.
Polybrene	Beyotime Biotechnology, Chine	C0351-1 mL	Solution de bromure d’hexadiméthrine (10 mg/mL) utilisée pour faciliter la transduction lentivirale.
Marqueur protéique prévenu	Elabscience, Chine	E-IR-R331	Marqueur de poids moléculaire des protéines.
Kit de réactifs PrimeScript RT	Takara Bio Inc., Japon	RR047A	Kit de transcription inversée pour la synthèse d’ADNc.
Puromycine	Beyotime Biotechnology, Chine	ST551-10 mg	Puromycine dihydrochlorure utilisé pour la sélection de cellules de knockdown stables.
Membrane PVDF	Beyotime Biotechnology, Chine	FFP20	Membrane PVDF hydrophile (0,45 & micro ; m) pour le transfert western blot.
R	Fondation R pour l’informatique statistique, Autriche	Version 4.5.1	Environnement informatique statistique utilisé pour les analyses bioinformatiques. RRID : SCR_001905.
Tampon de lyse RIPA	Beyotime Biotechnology, Chine	P0013B	Tampon de lyse RIPA (fort) pour l’extraction des protéines.
TAMPON DE CHARGEMENT SDS-PAGE (5 fois)	Beyotime Biotechnology, Chine	P0015L	Tampon de chargement d’échantillons de protéines.
SYBR Premix Ex Taq II	Takara Bio Inc., Japon	RR066A	QPCR Master mix.
Inserts Transwell, 8.0-& micro ; m taille des pores	Corning, États-Unis	3422	Inserts en culture cellulaire avec un 8.0 & micro ; membrane polycarbonate de taille m ; Format standard à 24 puits pour les tests de migration et d’invasion.
Réactif Trizol	Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, États-Unis	10296010CN	Réactif d’extraction d’ARN.
Cellules gliomes U251	Collection nationale de cultures cellulaires authentifiées, Chine	SCSP-559	Lignée cellulaire de gliome humain utilisée pour les tests de knockdown et fonctionnels. RRID : CVCL_0021.
Cellules gliomes U87	Collection nationale de cultures cellulaires authentifiées, Chine	SCSP-5432	Lignée cellulaire de gliome humain utilisée pour les tests de knockdown et fonctionnels. RRID : CVCL_0022.