L’oxydation de Fenton assistée par la vitamine C améliore la destruction oxydative d’Helicobacter pylori in vitro

Résumé

Cette étude examine comment la vitamine C module le comportement cinétique d’une réaction de Fenton dans des conditions in vitro . Les sondes à colorants chimiques et les tests bactériens montrent que le dosage contrôlé de vitamine C modifie le comportement oxydatif de la réaction et est associé à une activité antibactérienne accrue contre Helicobacter pylori dans un système modèle simplifié.

Résumé

L’infection par Helicobacter pylori reste un fardeau sanitaire mondial majeur, et la prévalence croissante de la résistance aux antibiotiques souligne la nécessité de stratégies antibactériennes alternatives. Cette étude a examiné si le dosage de vitamine C pouvait moduler l’oxydation de Fenton et renforcer l’activité antibactérienne oxydative contre H. pylori dans des conditions acides in vitro définies. L’activité oxydative a été évaluée à l’aide de la décoloration par Acid Orange 7 comme lecture chimique indirecte et d’un test de fluorescence à l’acide térephtalique comme indicateur relatif de la formation de produits associés aux radicaux hydroxyliques dans les réactions de peroxyde de fer complétées de vitamine C. L’efficacité antibactérienne a été évaluée en exposant H. pylori standardisé des suspensions dans du sérum à base d’urée au pH 3 jusqu’au peroxyde d’hydrogène et du fer ferreux avec ou sans supplémentation progressive en vitamine C, suivies d’un dénombrage des unités formant des colonies. La supplémentation en vitamine C a modifié les lectures oxydatives et a été associée à une réduction plus importante des bactéries viables par rapport à la chimie conventionnelle de Fenton. Des expériences de sauvetage utilisant la déferoxamine et la thiourée ont atténué l’activité antibactérienne, soutenant l’hypothèse que cette activité est associée à des processus oxydatifs médiés par le fer et liés aux radicaux. La coloration à fluorescence vivante/morte et la microscopie électronique à balayage ont permis des observations visuelles qualitatives cohérentes avec les résultats de l’épuration de l’unité formant des colonies (UFC). Collectivement, ces résultats indiquent que le dosage contrôlé de vitamine C peut moduler les réactions oxydatives à base de Fenton et renforcer l’activité antibactérienne contre H. pylori dans un modèle in vitro acide simplifié.

Introduction

H. pylori, une bactérie à Gram négatif à forme spirale appartenant au genre Helicobacter, a montré par des études de santé des populations une forte prévalence d’infection à travers les zones géographiques, le sexe et l’âge, avec un taux de prévalence mondial d’environ 50 ^%1. L’Agence internationale de recherche sur le cancer (CIAR) a classé H. pylori comme cancérogène de groupe 1, soulignant son lien étroit avec le cancer gastrique et le lymphome du tissu lymphoïde associé à la muqueuse (MALT). Actuellement, la prise en charge clinique de l’infection par H. pylori repose principalement sur des schémas pharmacologiques. Les agents les plus étudiés incluent les inhibiteurs de la pompe à protons (IPP), qui suppriment la sécrétion d’acide gastrique ; des composés de bismuth, qui améliorent l’efficacité des antibiotiques ; et des antibiotiques tels que l’amoxicilline, la clarithromycine et le métronidazole. Cependant, il a été démontré que la monothérapie est insuffisante pour une éradication complète, ce qui a conduit à l’utilisation généralisée de schémas combinés, communément appelés triple thérapie. Cette approche consiste généralement en un IPP, de la clarithromycine, et soit de l’amoxicilline, soit du métronidazole, administrés pendant environ deux^{semaines 3}. Avec la prévalence croissante des souches de H. pylori résistantes aux antibiotiques, l’efficacité de la triple thérapie a fortement diminué, ce qui a conduit à l’adoption d’une thérapie quadruple combinant un IPP, du bismuth et deux^{antibiotiques 3}. Néanmoins, ces schémas dépendent encore fondamentalement des antibiotiques, et la résistance aux antibiotiques reste un défi majeur dans la prise en charge^{clinique 4,5}. Par conséquent, l’exploration de stratégies antibactériennes alternatives indépendantes des antibiotiques a suscité un intérêt croissant.

Au-delà de ses effets pathologiques directs, l’infection par H. pylori a également été associée à des altérations de l’homéostasie des micronutriments gastriques. Des études cliniques et épidémiologiques ont rapporté des concentrations réduites de vitamine C dans le suc gastrique et le sérum des individus^{infectés 6}, ce qui pourrait être lié à une inflammation muqueuse, une sécrétion altérée ou une augmentation de la consommation^{oxydative 7,8,9}. Parallèlement, l’infection à H. pylori a été liée à une carence en fer par plusieurs mécanismes incluant, notamment une réduction de l’acidité gastrique, une absorption alimentaire du fer altérée et une compétition bactérienne pour le fer^{disponible 10}. Ces observations mettent en lumière l’environnement biochimique complexe accompagnant l’infection par H. pylori et soulignent la pertinence des processus liés au redox et au fer dans les conditions gastriques acides.

Les espèces réactives de l’oxygène (ROS) ont suscité un intérêt considérable dans la recherche antimicrobienne en raison des propriétés oxydatives de ces espèces. Les ROS désignent une classe de molécules chimiquement réactives formées lors de la réduction partielle de l’oxygène, telles que l’anion superoxyde (O₂•⁻), le peroxyde d’hydrogène (H₂O₂), l’oxygène singlete (¹O₂) et les radicaux hydroxyles (•OH), entre autres. Dans les systèmes biologiques, les ROS sont largement impliqués dans le métabolisme physiologique normal et sont essentiels à la diversité des activités régulatrices^{cellulaires 11}. Notamment, de nombreuses études ont démontré qu’un excès de ROS peut perturber les membranes cellulaires bactériennes par la peroxydation lipidique, entraînant des altérations de la structure et de la fonction des membranes, aboutissant finalement à une inactivation^{bactérienne 12}. En conséquence, les approches antimicrobiennes basées sur les ROS ont suscité l’intérêt comme une voie potentielle pour étudier les effets antibactériens non antibiotiques contre H. pylori 13,14,15,16. Parmi les différentes méthodes de génération ROS, la réaction de Fenton a attiré une attention particulière pour sa production radicale très efficace. La réaction de Fenton est un procédé d’oxydation^{avancé 17} dans lequel des ions ferreux (Fe²⁺) réagissent avec H₂O₂ dans des conditions acides pour produire des radicaux hydroxyliques (•OH), qui possèdent un fort potentiel oxydatif et peuvent oxyder des biomolécules intracellulaires.

Fe²⁺ +H→Fe³⁺+•OH+OH^-

Fe³⁺+ H→Fe²⁺+•OOH+ H⁺

H₂O→OH+•OOH+H₂O

Plus précisément, à un pH d’environ 2,8–4,5, H₂O₂ subit une décomposition catalytique par Fe²⁺, générant •OH tandis que Fe²⁺ est oxydé en Fe³⁺. Fe³⁺ réagit alors avec H₂O₂ pour régénérer Fe²⁺, établissant un cycle redox Fe²⁺/Fe³⁺ qui maintient une production continue de^{ROS 18}. Cependant, la réduction de Fe³⁺ à Fe²⁺ est relativement lente, constituant l’étape limitante de débit et réduisant par conséquent l’efficacité globale de la réaction de Fenton. Des études indiquent que l’introduction d’un agent réducteur approprié dans le système réactionnel de Fenton peut accélérer la réduction de Fe²⁺ vers Fe²⁺, améliorant ainsi la génération de ROS. La vitamine C a un rôle redox dépendant du contexte. Dans les systèmes contenant du fer, il peut favoriser la réduction du Fe²⁺ en Fe²⁺ et ainsi soutenir le cycle de Fenton, tandis qu’à des concentrations plus élevées ou sous différentes conditions de réaction, il peut aussi agir comme antioxydant ou récupérateur^{radical 19}.

Sur la base de ce contexte, la présente étude étudie un système de réaction de Fenton assisté par la vitamine C comme une approche chimiquement ajustable pour moduler l’activité oxydative dans des conditions acides in vitro ^{définies 20,21}. La vitamine C a été utilisée comme agent réducteur pour faciliter la régénération du Fe²⁺ et ainsi modifier le comportement oxydatif efficace de la réaction de Fenton. Le système expérimental utilisé ici était un modèle simplifié de solution saline acide-urée et n’était pas destiné à reproduire pleinement le microenvironnement gastrique physiologique, qui contient du mucus, des composants tampons, des cellules hôtes, des facteurs immunitaires et divers substrats organiques. Dans ce modèle contrôlé, l’activité oxydative a été caractérisée à l’aide de données chimiques et évaluée en parallèle avec les réponses phénotypiques bactériennes, fournissant une base expérimentale pour sonder les effets antibactériens associés aux ROS contre H. pylori in vitro.

Protocole

Déclaration d’éthique
Cette étude était une étude bactérienne in vitro et n’impliquait pas de participants humains, de sujets animaux ou de matériaux dérivés du patient. Par conséquent, l’approbation du comité d’éthique institutionnelle et l’approbation de l’éthique animale n’étaient pas requises.

Évaluation de la dégradation d’AO7 dans le système Fenton assisté par la vitamine C
Pour évaluer l’effet de la vitamine C sur le comportement oxydatif observable de la réaction de Fenton, la dégradation de l’Acid Orange 7 (AO7) a été utilisée comme lecture chimique indirecte de l’activité oxydative. Ce test ne quantifie pas spécifiquement les espèces réactives individuelles de l’oxygène. J’ai préparé 100 mL de solution AO7 à 5 mg/L et ajusté la solution au pH 3. Ajout d’H₂O₂ et de FeSO₄ à des concentrations finales de 2,2 mM et 0,055 mM, respectivement. Ajout de vitamine C soit sous forme de bolus unique au début de la réaction, soit selon un schéma de dosage en trois étapes. Pour l’expérience dose-réponse, des rapports molaires Fe^{: 2}⁺ de 0, 0,12, 0,24, 0,48, 2, 4, 6 et 8 ont été utilisés, correspondant respectivement à des concentrations finales de vitamine C de 0, 0,0066, 0,0132, 0,0264, 0,110, 0,220, 0,330 et 0,440 mM, lorsque FeSO₄ est utilisé à 0,055 mM. Pour la condition d’addition en trois étapes, j’ai divisé la même quantité totale de vitamine C en trois aliquotes égales et ajouté une aliquote à 3, 5 et 7 minutes après l’initiation de la réaction. Par exemple, à un ratio^{Vc :Fe 2}⁺ de 0,48, on ajoutait de la vitamine C à 0,0088 mM par aliquote, donnant une concentration totale finale de 0,0264 mM.

J’ai remué la solution de réaction en continu dans l’obscurité pendant 10 minutes tout en maintenant la température en dessous de 30 °C. J’ai prélevé 2 mL d’échantillons avant et après la réaction. Mesuré l’absorbance à 483 nm à l’aide d’un spectrophotomètre UV-Vis, et calculé le taux de dégradation de l’AO7 à l’aide de l’équation 1 :

Taux de dégradation ( %) = [(A₀ − A₁) / A₀] × 100 % (1)

Ici, A₀ représente l’absorption de l’échantillon avant la réaction, tandis que A₁ représente l’absorption de l’échantillon après la réaction.

Évaluation du signal de fluorescence •OH associé à l’aide d’une sonde TA
Pour évaluer les signaux de fluorescence associés aux radicaux hydroxyles sous les mêmes conditions acides in vitro que celles des expériences antibactériennes, un système chimique sans cellules a été mis en place en utilisant le térephtalate disodique (TA, 1 mM) comme sonde de fluorescence. Ce test a été utilisé comme indicateur relatif de la formation de produit associé au •OH et n’a pas été interprété comme une quantification absolue de la génération de radicaux hydroxyliques. Sept groupes étaient inclus : (1) blanc (1 mM TA uniquement dans le tampon de réaction), (2) H₂O₂ seul, (3) Fe²⁺ seul, (4) Vc seul (ajout par étapes), (5) Fenton conventionnel (Fe²⁺ + H₂O₂), (6) Fenton assisté par la vitamine C avec ajout de bolus Vc (Fe²⁺ + H₂O₂ + Vc, bolus), et (7) Fenton assisté par Vc avec addition progressive de Vc (Fe²⁺ + H₂O₂ + Vc, par étapes). Dans la condition d’addition par étapes, la Vc était introduite à 3, 5 et 7 minutes après l’initiation de la réaction en aliquotes égales, tandis que la condition de bolus recevait la même quantité totale de Vc qu’une seule addition.

Les aliquotes ont été collectées sur une période de réaction de 10 minutes, immédiatement alcalinisées avec du NaOH pour atténuer les réactions radicales supplémentaires et stabiliser la fluorescence, puis stockées à 4 °C avant la mesure. L’intensité de fluorescence du produit dérivé de la TA a été mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques (Ex/Em : 315/425 nm). La génération de radicaux s’exprimait sous forme d’intensité de fluorescence après soustraction à blanc et était utilisée comme indicateur relatif de la génération de radicaux. Au moins trois expériences indépendantes ont été réalisées, et les données ont été présentées sous forme de profils de parcours temporels et de comparaisons de points d’arrivée à 10 minutes.

Évaluation de la performance antibactérienne par comptage des colonies
Les souches de H. pylori étaient stockées à −80 °C dans un bouillon d’infusion cérébrale-cérébrale (BHI) contenant 25 % de glycérol. La souche principale utilisée pour le test principal de comptage des colonies, le test de sauvetage, le test d’interférence matricielle, la coloration à fluorescence vivante/morte et l’analyse par microscopie électronique à balayage était H. pylori G27. Avant chaque expérience, des bactéries étaient striées sur les plaques d’agar sanguin Columbia et incubées pendant 3 jours à 37 °C dans des conditions microaérophiles comprenant 5 % d’O₂, 10 % de CO₂ et 85 % de N^₂22.

Testage de comptage en colonie dans la souche primaire
A utilisé l’énumération par unité formatrice de colonies (UFC) pour évaluer l’activité antibactérienne sous différentes conditions de traitement. Comprenaient les groupes suivants : témoins non traité, H₂O₂ seul, vitamine C seule, réaction de Fenton conventionnelle, et réaction de Fenton assistée par la vitamine C. Si un groupe Fe²⁺-seul n’a pas été inclus dans l’expérience originale, il faut éviter d’interpréter le test primaire comme séparant complètement les effets feroironiques uniquement des effets oxydatifs médiés par la réaction de Fenton. Prélève H . pylori en culture et resuspend la bactérie dans une solution physiologique séline. Ajusté la densité optique à 600 nm (OD₆₀₀) à 0,5, puis transféré la suspension dans une solution physiologique de solution physiologique contenant 3 mM d’urée ajustée au pH 3. Ajout de H₂O₂, FeSO₄ et de vitamine C selon le groupe de traitement assigné. Des concentrations finales de 2,2 mM H₂O₂ et 0,055 mM de FeSO₄ ont été utilisées. Pour le traitement Fenton assisté par la vitamine C, ajoutez la vitamine C en trois aliquotes égales à 3, 5 et 7 minutes, avec une concentration totale finale de 0,0264 mM.

Après 10 minutes de traitement, chaque échantillon a été immédiatement dilué 100 fois dans du sérum tampon phosphaté (PBS, pH 7,4) afin de neutraliser la suspension acide et de réduire le transfert d’oxydants résiduels et de fer dans l’étape de placage. Plaqué la suspension bactérienne diluée sur des plaques d’agar sanguin Columbia et incubée à 37 °C pendant 3 jours sous des conditions microaérophiles de 5 % O₂, 10 % de CO₂ et 85 % de N₂. Comptage les UFC et calculé l’activité antibactérienne comme une réduction log₁₀ par rapport au témoin non traité à l’aide de l’équation 2 :

log₁₀ réduction de l’UFC = log₁₀ (_contrôle de l’UFC) − log10 (_{UCC traitée}) (2)

Essai de sauvetage
Pour examiner si l’activité antibactérienne du système Fenton assisté par la vitamine C était associée à la disponibilité du fer et à des processus liés aux radicaux, des expériences de sauvetage ont été réalisées en utilisant la déferoxamine (DFO) comme chélateur de fer et la thiourée comme récupérateur de radicaux hydroxyles. DFO ou thiourée a été ajoutée à la suspension bactérienne 5 minutes avant l’ajout de FeSO₄ et H₂O₂. DFO et thiourée ont été utilisés à des concentrations finales de 100 μM et 5 mM, respectivement.

Six groupes expérimentaux ont été inclus : témoins non traité, Fenton assisté par la vitamine C, Fenton assisté par la vitamine C avec DFO, Fenton assisté par la vitamine C avec thiourée, DFO seul, et thiourée seule. Tous les autres paramètres expérimentaux, y compris le pH, le fond saline/urée, la concentration en H₂O₂, la concentration en FeSO₄, le calendrier de dosage de vitamine C, la durée du traitement, la dilution/neutralisation avant le placage et les conditions d’incubation, étaient identiques à ceux utilisés dans le test de comptage des colonies primaires. L’activité antibactérienne a été quantifiée par énumération de l’UFC et exprimée en log₁₀ réduction de l’UFC par rapport au témoin non traité.

Validation multi-détriment
Pour fournir un soutien limité en croisement des souches pour l’effet antibactérien observé dans la souche primaire, le test de comptage des colonies a été appliqué à deux souches de référence supplémentaires de H. pylori , ATCC 43504 et ATCC 26695. Pour chaque souche, trois groupes expérimentaux ont été inclus : témoins non traité, réaction de Fenton conventionnelle, et réaction de Fenton assistée par la vitamine C avec ajout progressif de vitamine C. Les conditions et procédures expérimentales étaient identiques à celles utilisées dans le test de comptage des colonies primaires. L’activité antibactérienne s’est exprimée sous forme de réduction logarthÁ₁₀ de l’UFC par rapport au témoin non traité pour chaque souche. Chaque expérience a été réalisée avec n = 3 réplications biologiques indépendantes, et les données ont été présentées sous forme de points individuels avec une moyenne ± un écart-type.

Essai d’interférence matricielle
Pour évaluer si les composants de la matrice organique pouvaient atténuer l’activité antibactérienne du système Fenton assisté par la vitamine C, un modèle d’interférence protéique a été mis en place à l’aide d’albumine sérique bovine (BSA). La BSA a été incluse à des concentrations finales de 0, 1 et 3 g· L⁻¹. À chaque concentration de BSA, trois groupes expérimentaux étaient inclus : (1) témoins non traité, (2) Fenton conventionnel (Fe²⁺ + H₂O₂), et (3) Fenton assisté par la vitamine C avec ajout progressif de vitamine C. Le test a été réalisé en utilisant la souche primaire selon le même protocole décrit dans le test de comptage des colonies primaires, avec des conditions de pH identiques, un fond de sérum physiologique/urée, des concentrations de réactifs, une durée de traitement (10 min) et des procédures de placage. L’activité antibactérienne s’est exprimée sous forme de réduction log₁₀ de l’UFC par rapport au contrôle non traité à chaque concentration de BSA. Chaque expérience a été réalisée au moins trois fois de manière indépendante. La comparaison principale portait sur la question de savoir si la condition de Fenton aggravée restait supérieure, ou du moins pas plus faible, à la condition de Fenton conventionnelle dans des conditions contenant des protéines.

Coloration bactérienne vivante/morte par fluorescence
Après traitement, la suspension bactérienne a été diluée 100 fois en PBS comme décrit ci-dessus afin de réduire les résidus acides et oxydatifs. Centrifugé la suspension à 1 800 × g pendant 10 minutes à température ambiante et jeté le surnageant. A resuspendu la pellete bactérienne dans 200 μL de solution physiologique. Ajout de SYTO9 et d’iodure de propidium (PI) à des concentrations finales de 6 μM et 30 μM, respectivement. J’ai incubé la suspension dans le noir pendant 20 minutes à température ambiante. On a placé 5 à 10 μL de la suspension bactérienne tachée sur une lame en verre propre et on l’a recouverte d’une gaine de protection. Images de fluorescence acquises à l’aide d’un microscope à fluorescence avec des canaux de fluorescence verts et rouges sous des réglages d’exposition identiques pour tous les groupes de traitement. Capturé au moins trois champs sélectionnés au hasard pour chaque groupe. On a utilisé les images comme preuve visuelle qualitative des motifs de coloration vivants/morts plutôt que comme mesure quantitative de la viabilité bactérienne.

Analyse de la morphologie bactérienne par microscopie électronique à balayage
Après traitement, les échantillons bactériens ont été prélevés et fixés dans du glutaraldéhyde à 2,5 % préparé dans un tampon phosphate 0,1 M (pH 7,4) à 4 °C pendant 12 heures. Après fixation, les échantillons étaient lavés avec un tampon phosphate pour éliminer les résidus de fixation. Les échantillons ont ensuite été déshydratés séquentiellement dans des solutions d’éthanol graduées de 50 %, 70 %, 90 % et 100 %. Après déshydratation, un séchage au point critique était effectué. Les échantillons séchés étaient montés sur des morceaux de MEB et recouverts d’une fine couche dorée d’environ 10 nm. La morphologie bactérienne a été examinée à l’aide de microscopie électronique à balayage à une tension accélérée de 5 kV. Des images représentatives ont été obtenues à faible et à fort grossissement pour chaque groupe de traitement. Les images de MEB ont été utilisées comme observations morphologiques qualitatives plutôt que comme preuves quantitatives d’un mécanisme de dommage défini.

Analyse statistique
Les analyses statistiques ont été réalisées à l’aide de GraphPad Prism version 10.0. Toutes les expériences quantitatives ont été réalisées avec n = 3 réplications biologiques indépendantes, et les données sont présentées en moyenne ± écart-type (DS). Pour les tests de fluorescence TA, des comparaisons statistiques entre plusieurs groupes de traitement ont été réalisées à l’aide d’une analyse unidirectionnelle de la variance (ANOVA), suivie du test de comparaisons multiples de Tukey. Pour les tests de comptage des colonies dans la souche primaire impliquant plusieurs conditions de traitement, des comparaisons statistiques ont été réalisées à l’aide d’ANOVA unidirectionnelle suivie du test de comparaison multiple de Tukey. Pour les tests de sauvetage, des comparaisons entre groupes ont été réalisées à l’aide d’ANOVA unidirectionnelle, suivies du test de comparaison multiple de Dunnett, avec le groupe de Fenton assisté par la vitamine C comme référence. Pour des expériences limitées de validation croisée, les réductions log₁₀ de l’UFC ont été comparées entre les groupes Fenton conventionnel et Fenton assisté par la vitamine C au sein de chaque souche à l’aide d’un test t à deux queues non apparié. Pour les tests d’interférence matricielle, une ANOVA bidirectionnelle a été réalisée avec le traitement et la concentration de BSA comme facteurs, y compris le terme d’interaction. Des comparaisons par paires entre les traitements à chaque concentration de BSA ont été réalisées à l’aide du test de comparaisons multiples de Šídák. La signification statistique a été définie comme P < 0,05. Les niveaux de signification sont indiqués par *p < 0,05, ** P < 0,01, ***P < 0,001 et ****p < 0,0001.

Résultats

Évaluation de la dégradation d’AO7 dans le système Fenton assisté par la vitamine C
La dégradation de l’AO7 a été utilisée comme sonde chimique pour examiner comment la vitamine C influence le comportement oxydatif observable de la réaction de Fenton dans des conditions acides. En l’absence de vitamine C, le système Fenton conventionnel entraînait une dégradation partielle de l’AO7 sur une période de réaction de 10 minutes. Lorsque la vitamine C a été introduite, l’ét...

Discussion

La présente étude a examiné si le dosage de vitamine C pouvait moduler le comportement oxydatif et les lectures antibactériennes d’un système à base de Fenton dans des conditions acides in vitro définies. Dans les tests chimiques et microbiologiques, la supplémentation progressive en vitamine C a modifié le comportement de réaction observable et a été associée à une activité antibactérienne plus importante contre H. pylori que la réaction de Fenton conventionnelle dans ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Acid Orange 7 (AO7)	Aladdin Reagent (Shanghai) Co., Ltd.	O113230	Utilisé comme colorant modèle pour l'analyse de dégradation de l'AO7.
Albumine sérique bovine (BSA)	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	B885114	Utilisé pour l'analyse d'interférence de la matrice.
Bouillon Brain Heart Infusion (BHI) en poudre	Sichuan Hapyear Bio-engineering Co., Ltd.	N/A	Utilisé pour la culture bactérienne et la cryoconservation.
Gélose de sang de Columbia (5% de sang de mouton)	Changde Bkmam Biotechnology Co., Ltd.	110701028.0	Utilisé pour la culture bactérienne et l'énumération des UFC.
Sécheur à point critique (EM CPD300)	Leica Microsystems	EM CPD300	Utilisé pour la préparation des échantillons pour le MEB après déshydratation par éthanol dégradé.
Déféroxamine (DFO)	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	D873692	Utilisé comme chélateur du fer dans l'analyse de sauvetage.
Téréphtalate disodique	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	D835937	Utilisé comme sonde de fluorescence TA pour la détection des signaux associés aux •OH.
Éthanol absolu	Sigma-Aldrich	E7023	Utilisé pour préparer la série d'éthanol dégradé pour la déshydratation des échantillons pour le MEB.
Microscope à fluorescence (DMi8)	Leica Microsystems	DMi8	Utilisé pour l'imagerie fluorescente de cellules vivantes/mortes.
Solution de glutaraldéhyde	Sigma-Aldrich	G5882	Utilisé pour la fixation des échantillons bactériens avant le MEB.
Glycérol	Sigma-Aldrich	G5516	Utilisé pour la cryoconservation bactérienne dans le bouillon BHI.
GraphPad Prism 10	GraphPad Software, LLC	Prism 10	Utilisé pour l'analyse statistique et la création de graphiques.
Helicobacter pylorisouche ATCC 26695	American Type Culture Collection (ATCC)	700392	Souche de référence supplémentaire utilisée pour la validation limitée entre souches.
Helicobacter pylorisouche ATCC 43504	American Type Culture Collection (ATCC)	43504	Souche de référence supplémentaire utilisée pour la validation limitée entre souches.
Helicobacter pylorisouche G27	Centre des maladies infectieuses, Hôpital West China, Université du Sichuan	N/A	Souche principale utilisée pour le comptage des colonies, l'analyse de sauvetage, l'analyse d'interférence de la matrice, la coloration vivant/mort et le MEB.
Solution de peroxyde d'hydrogène	Sigma-Aldrich	H1009	Utilisé comme substrat peroxyde dans les analyses de réaction Fenton.
Sulfate de fer(II) monohydraté (FeSO4·H2O)	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	F904376	Utilisé comme source d'ions ferreux dans la réaction Fenton.
Lecteur de microplaque (Synergy H1)	Agilent BioTek	Synergy H1	Utilisé pour mesurer la fluorescence dérivée du TA (Ex/Em = 315/425 nm).
Tampon de phosphate (PBS), pH 7,4	Sigma-Aldrich	P4417	Utilisé pour la dilution/neutralisation post-traitement avant l'ensemencement et le lavage des échantillons.
Solution saline physiologique (solution de chlorure de sodium à 0,9%)	Millipore	567442	Utilisé pour la suspension bactérienne et la préparation du modèle de solution saline-urée acide.
Microscope électronique à balayage (INSPECT F)	FEI Company	INSPECT F	Utilisé pour l'analyse de la morphologie bactérienne.
Hydroxyde de sodium	Sigma-Aldrich	S5881	Utilisé pour alcaliniser les aliquotes d'analyse TA et stabiliser la fluorescence.
Dispositif de revêtement par pulvérisation (EM ACE200)	Leica Microsystems	EM ACE200	Utilisé pour appliquer le mince revêtement en or avant l'imagerie par MEB.
Kit de double coloration bactérienne vivante/morte SYTO 9/PI	Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd.	MX4234	Utilisé pour la coloration bactérienne vivante/morte basée sur la fluorescence.
Thiourée	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	T81602	Utilisé comme capteur de radicaux dans l'analyse de sauvetage.
Urée	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	U820349	Utilisé pour préparer le modèle de solution saline-urée acide.
Spectrophotomètre UV-Vis (UV-2600i Plus)	Shimadzu Corporation	UV-2600i Plus	Utilisé pour mesurer l'absorbance de l'AO7 à 483 nm.
Vitamine C (acide L-ascorbique)	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	A800295	Utilisé comme réducteur dans le système Fenton assisté par la vitamine C.