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Article de recherche

Lésions de la muqueuse gastrique induites par le clopidogrel associées au stress du réticulum endoplasmique chez le rat

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DOI :

10.3791/72097

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28 août 2026

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1Gastroenterology Department, Dagang Hospital of Binhai New Area, 2Clinical Laboratory, Tianjin Adicon Clinical Laboratories Co., Ltd.

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Cette étude examine les lésions de la muqueuse gastrique associées au traitement par le clopidogrel chez le rat et les cellules épithéliales gastriques, en mettant en évidence leur lien avec les modifications moléculaires liées au stress du réticulum endoplasmique, à l'apoptose et à l'inflammation systémique.

Résumé

Le clopidogrel est largement utilisé comme agent antiplaquettaire pour la prévention et le traitement des maladies thrombotiques artérielles, mais son utilisation clinique peut être limitée par des effets indésirables gastro-intestinaux, notamment des lésions de la muqueuse gastrique. Étant donné que la survie des cellules épithéliales est essentielle au maintien de l'intégrité de la muqueuse gastrique, nous avons émis l'hypothèse que les lésions épithéliales gastriques induites par le clopidogrel s'accompagneraient de modifications des marqueurs liés au stress du réticulum endoplasmique et à l'apoptose. Pour tester cette hypothèse, des cellules épithéliales gastriques humaines GES-1 ont été traitées avec différentes concentrations de clopidogrel, et la viabilité cellulaire, l'apoptose, la distribution dans le cycle cellulaire et les modifications moléculaires ont été évaluées à l'aide du test au kit de comptage cellulaire-8 (CCK-8), de la cytométrie en flux, de la réaction de polymérisation en chaîne en temps réel quantitative (qRT-PCR) et du Western blot. Parallèlement, des rats Sprague-Dawley ont reçu du clopidogrel par gavage afin de créer un modèle de lésion gastrique in vivo. Les modifications pathologiques de la muqueuse gastrique ont été évaluées par coloration à l'hématoxyline-éosine, et les niveaux sériques de cytokines inflammatoires ont été mesurés par dosage immunoenzymatique (ELISA). Le clopidogrel a réduit la viabilité des cellules GES-1, favorisé l'apoptose et modifié la progression du cycle cellulaire. Chez les rats, le clopidogrel a induit une érosion, un œdème et une infiltration de cellules inflammatoires au niveau de la muqueuse gastrique, accompagnés d'une augmentation des concentrations sériques d'interleukine (IL)-1β, d'IL-6 et de facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α). Le clopidogrel a également augmenté l'expression des marqueurs du stress du réticulum endoplasmique que sont la protéine homologue à C/EBP (CHOP) et le facteur de transcription activateur 5 (ATF5), augmenté l'expression de la protéine Bcl-2 associée à X (Bax), diminué l'expression de la lymphome de cellules B 2 (Bcl-2) et augmenté le rapport Bax/Bcl-2 dans les tissus gastriques ainsi que dans les cellules GES-1. Ces résultats suggèrent que la lésion de la muqueuse gastrique induite par le clopidogrel est associée à une augmentation de l'expression des marqueurs liés au stress du réticulum endoplasmique et à une perturbation de l'équilibre Bax/Bcl-2, bien qu'une voie causale directe reliant le stress du réticulum endoplasmique à l'apoptose mitochondriale n'ait pas été établie dans cette étude.

Introduction

Les systèmes immunitaires inné et adaptatif de la muqueuse gastrique, composés de cellules épithéliales, de cellules immunitaires et de molécules de signalisation, agissent de concert pour maintenir l'intégrité de la muqueuse et constituent une barrière physiologique essentielle contre les facteurs nocifs1,2. Cette fonction protectrice est essentielle à l'homéostasie gastro-intestinale, et sa perturbation peut contribuer au développement de maladies gastriques, notamment la gastrite3. Cliniquement, les lésions médicamenteuses de la muqueuse gastrique sont une complication fréquente, les anti-inflammatoires non stéroïdiens et les agents antiplaquettaires figurant parmi les causes les plus courantes4. L'intégrité de la muqueuse gastrique dépend d'un équilibre dynamique entre la prolifération cellulaire et l'apoptose5. Une exposition chronique à des facteurs environnementaux, notamment les médicaments, peut perturber cet équilibre, favoriser l'apoptose et entraîner des lésions de la muqueuse6,7. Le réticulum endoplasmique joue un rôle central dans le maintien de l'homéostasie intracellulaire. En cas de stress cellulaire, l'accumulation de protéines mal repliées ou non repliées active la réponse aux protéines mal repliées, incluant la voie de signalisation PERK/eIF2α/ATF4/CHOP, qui peut induire l'apoptose et modifier l'expression des protéines de la famille de la lymphome B-cellulaire 2 (Bcl-2)8. ATF5 est également impliqué dans les réponses au stress mitochondrial et dans la communication entre le dysfonctionnement mitochondrial et le stress du réticulum endoplasmique9. De récentes données cliniques indiquent que le maintien d'un traitement antiplaquettaire, notamment par le clopidogrel, est associé à des lésions progressives de la muqueuse gastrique et intestinale10.

Le clopidogrel est un agent antiplaquettaire largement prescrit qui nécessite une activation métabolique avant de se lier de façon irréversible aux récepteurs plaquettaires P2Y12, inhibant ainsi l'agrégation plaquettaire induite par le diphosphate d'adénosine et produisant des effets antithrombotiques11. Cette bioactivation se produit principalement par l'intermédiaire des enzymes hépatiques du cytochrome P450. Par conséquent, l'exposition directe de cellules épithéliales gastriques en culture au composé parent du clopidogrel ne reproduit pas le contexte métabolique et pharmacocinétique complet du traitement par clopidogrel in vivo. Toutefois, des données croissantes suggèrent que le traitement par le clopidogrel pourrait être associé à des ulcères gastriques récidivants et à des saignements gastro-intestinaux, soulignant l'importance d'un équilibre entre l'efficacité antithrombotique et la sécurité gastro-intestinale12,13,14. Bien que ces effets indésirables aient été rapportés, les mécanismes sous-jacents aux lésions de la muqueuse gastrique associées au clopidogrel restent incomplètement compris, ce qui limite le développement de stratégies préventives et thérapeutiques ciblées. Dans la présente étude, nous avons examiné les effets du clopidogrel sur la muqueuse gastrique à l'aide de rats Sprague–Dawley et de cellules GES-1. Les rats ont reçu du clopidogrel par gavage, et des expériences complémentaires in vitro ont été réalisées à l'aide de cellules GES-1. Des analyses histopathologiques, moléculaires et cellulaires ont été menées afin d'évaluer si les lésions de la muqueuse gastrique induites par le clopidogrel sont associées à un stress du réticulum endoplasmique et à l'apoptose. Ainsi, cette étude s'est concentrée sur la caractérisation des modifications moléculaires associées aux lésions gastriques induites par le clopidogrel, plutôt que sur l'établissement d'une voie de signalisation causale. Nos résultats apportent des connaissances supplémentaires sur les changements moléculaires associés aux lésions de la muqueuse gastrique induites par le clopidogrel et pourraient contribuer à des études futures visant à prévenir et à gérer ces effets indésirables.

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Protocole

Toutes les procédures expérimentales sur les animaux ont été examinées et approuvées par le comité d'éthique pour les expérimentations animales du laboratoire de la société Dr. Can Biotechnology (Zhejiang) Co., Ltd. L'étude a été menée conformément aux directives institutionnelles relatives aux soins et à l'utilisation des animaux de laboratoire. Le numéro d'approbation en matière d'éthique animale était DRK-20251015210.

Animaux et lignées cellulaires

L'approbation éthique couvrait l'utilisation de 20 rats Sprague-Dawley de qualité SPF. Un total de 12 rats mâles Sprague-Dawley de qualité SPF, âgés de 6 à 8 semaines et pesant entre 280 et 300 g au début de l'expérience, ont été inclus dans la présente étude. Les rats ont été obtenus auprès de la société Hangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Hangzhou, Chine ; numéro de licence de production SCXK [Zhejiang] 2024-0004) et répartis aléatoirement en deux groupes, témoin et traité au clopidogrel, avec six rats par groupe. Les rats ont été logés dans un environnement contrôlé à environ 22 °C, sous un cycle lumière/obscurité de 12 h, avec un accès libre à une nourriture standard et à de l'eau de boisson stérilisée. Tous les rats ont été laissés en période d'acclimatation d'une semaine avant le début de l'expérience. Le clopidogrel hydrogénosulfate a été suspendu dans du carboxyméthylcellulose sodique (CMC-Na) à 0,5 % à une concentration de 0,781 mg/mL. Les rats du groupe traité au clopidogrel ont reçu du clopidogrel hydrogénosulfate par gavage oral à 10 mL/kg de poids corporel (équivalent à 1 mL/100 g de poids corporel et à une dose de 7,81 mg/kg) une fois par jour pendant 3 jours consécutifs. Les rats du groupe témoin ont reçu un volume équivalent de CMC-Na à 0,5 %. La dose et la durée du traitement de 3 jours ont été choisies selon un modèle rapporté précédemment de modèle rat chez le rat soumis à une administration orale de clopidogrel à court terme. Après le dernier gavage effectué le jour 3, la nourriture a été retirée pendant 12 h, tandis que l'eau a été fournie ad libitum. Les rats ont été anesthésiés dans une chambre d'induction avec 3 % d'isoflurane dans l'oxygène, puis l'anesthésie a été maintenue avec 1,5 % à 2,0 % d'isoflurane administré par un embout nasal. La profondeur adéquate de l'anesthésie a été confirmée par l'absence de réflexes cornéen et de retrait plantaire. Le sang a été prélevé par ponction cardiaque terminale sous anesthésie profonde. Alors qu'ils restaient profondément anesthésiés, les rats ont été euthanasiés par exsanguination suivie d'une thoracotomie bilatérale. Le décès a été confirmé par l'absence de respiration spontanée et d'activité cardiaque pendant au moins 5 minutes, ainsi que par l'absence de réflexes cornéen et de retrait plantaire. L'estomac a ensuite été rapidement prélevé, ouvert le long de la grande courbure et rincé délicatement avec une solution saline glacée.

La lignée cellulaire épithéliale de la muqueuse gastrique humaine GES-1 a été obtenue auprès de iCell Bioscience Inc. (Shanghai, Chine ; n° de catalogue iCell-h062) et a été authentifiée par profilage des répétitions tandem courtes par le fournisseur. Les cellules ont été cultivées en milieu RPMI-1640 complété avec 10 % de sérum bovin fœtal (SBF) et 1 % de pénicilline–streptomycine, dans un incubateur humidifié à 37 °C avec 5 % de CO₂. Les cellules de bas passage, comprises entre les passages 3 et 10, ont été utilisées pour les expériences. Lorsque la confluence cellulaire atteignait environ 80 % à 90 %, les cellules étaient repiquées selon un ratio de division de 1:3. Les cellules en phase de croissance logarithmique ont été utilisées pour les expériences ultérieures. Pour le test CCK-8, les cellules ont été ensemencées dans des plaques de 96 puits à raison de 6 × 103 cellules/puits. Pour l’analyse de l’apoptose et du cycle cellulaire, les cellules ont été ensemencées dans des plaques de 6 puits à environ 5 × 105 cellules/puits et ont été laissées s’attacher avant le traitement par le clopidogrel.

Produits chimiques et solutions

Du clopidogrel hydrogénosulfate (n° de catalogue C874834 ; pureté ≥ 99 %) a été utilisé pour les expériences animales et cellulaires. Une solution mère de clopidogrel a été préparée en dissolvant 100 mg de poudre de clopidogrel dans du diméthylsulfoxyde (DMSO) afin d'obtenir une solution mère à 1 M. Cette solution mère a ensuite été diluée aux concentrations de travail requises avant utilisation. La solution mère à 1 M a été diluée de façon sériée avec du DMSO pour préparer des solutions d'administration à 1000× aux concentrations de 10, 100, 200, 400, 600, 800 et 1000 mM. Juste avant le traitement, chaque solution d'administration à 1000× a été ajoutée au milieu de culture complet dans un rapport de 1:1000 (v/v) afin d'obtenir des concentrations finales de clopidogrel respectivement de 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 et 1,0 mM. Le groupe contrôle au véhicule a reçu un volume équivalent de DMSO sans clopidogrel. Ainsi, la concentration finale de DMSO a été maintenue à 0,1 % (v/v) dans tous les groupes. Les cellules GES-1 en culture ne reproduisent pas la bioactivation hépatique du clopidogrel médiée par le cytochrome P450. Par conséquent, un traitement direct au clopidogrel a été utilisé comme modèle exploratoire d'exposition au composé parent. La gamme de concentrations a été choisie afin de caractériser les réponses cellulaires dépendantes de la concentration dans les conditions expérimentales, et ne doit pas être interprétée comme équivalente aux concentrations plasmatiques ou tissulaires gastriques cliniquement atteignables.

Subculture cellulaire

Le milieu complet a été préparé en ajoutant au milieu de culture basal du sérum de veau fœtal (FBS) et de la pénicilline-streptomycine. Lorsque la confluence cellulaire a atteint environ 80 %, le milieu de culture a été retiré et les cellules ont été lavées trois fois avec une solution saline tamponnée au phosphate stérile (PBS). Les cellules ont ensuite été digérées avec une solution de trypsine–acide éthylènediaminotétraacétique (EDTA) pendant environ 1 à 2 minutes. Après un détachement partiel des cellules, du milieu complet a été ajouté pour interrompre la digestion. La suspension cellulaire a été centrifugée à 1 200 × g pendant 3 minutes. Après élimination du surnageant, le culot cellulaire a été resuspendu dans 1 à 2 mL de milieu complet et semé dans de nouvelles boîtes de culture selon les besoins expérimentaux.

Dosage de viabilité cellulaire au CCK-8

Des cellules GES-1 en phase de croissance logarithmique ont été semées dans des plaques de 96 puits à raison de 6 × 103 cellules/puit et cultivées toute la nuit afin de permettre l'attachement cellulaire. Après adhérence, les cellules ont été traitées avec différentes concentrations de clopidogrel (0, 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 et 1,0 mM) pendant 24 h. Le groupe témoin a reçu la même concentration finale de solvant. Après traitement, une solution CCK-8 a été ajoutée à chaque puit et incubée à 37 °C selon les instructions du kit. L'absorbance à 450 nm a été mesurée à l'aide d'un lecteur de microplaques. La viabilité cellulaire a été calculée en pourcentage par rapport au groupe témoin. Sur la base des résultats de la relation concentration-réponse, un traitement avec 0,1 mM de clopidogrel pendant 24 h a été sélectionné pour les analyses ultérieures d'apoptose, du cycle cellulaire, de qPCR et de Western blot.

Analyse par cytométrie en flux

Les cellules GES-1 ont été ensemencées dans des plaques de 6 puits et traitées avec du clopidogrel à 0,1 mM pendant 24 h après l'attachement des cellules. Après le traitement, les cellules en suspension et les cellules adhérentes ont été collectées. Les cellules adhérentes ont été digérées par la trypsine sans EDTA, lavées deux fois avec du PBS froid et resuspendues dans du tampon de liaison. Les cellules ont été marquées à l’aide d’un kit d’apoptose Annexine V-FITC/PI selon les instructions du fabricant. Après une incubation à température ambiante à l’abri de la lumière, les cellules apoptotiques ont été détectées à l’aide d’un cytomètre en flux RaiseCyte 2L6C. Les données ont été acquises à l’aide du logiciel RaiseFlower et analysées avec le logiciel FlowJo (version 10.8.1). Les populations de cellules apoptotiques précoces, tardives et l’apoptose totale ont été quantifiées à l’aide du logiciel FlowJo.

Analyse cytométrique en flux de la distribution du cycle cellulaire

Les cellules GES-1 ont été ensemencées dans des plaques de 6 puits et traitées avec du clopidogrel à 0,1 mM pendant 24 h. Après le traitement, les cellules ont été récoltées, lavées avec du PBS et fixées dans de l'éthanol à 70 % prérefroidi à 4 °C. Les cellules fixées ont ensuite été lavées pour éliminer l'éthanol résiduel et incubées avec une solution de coloration contenant la RNase A et l'iodure de propidium, à l'abri de la lumière, selon les instructions du fabricant. La distribution du cycle cellulaire a été analysée à l'aide d'un cytomètre en flux. Les données ont été acquises à l'aide du logiciel d'acquisition et analysées avec le logiciel FlowJo. Les distributions du cycle cellulaire ont été ajustées selon le modèle de Watson, et les pourcentages de cellules présentes dans les phases G0/G1, S et G2/M ont été calculés.

PCR quantitatif en temps réel (qPCR)

L'ARN total a été extrait des cellules GES-1 et des échantillons de tissu gastrique de rat à l'aide d'un kit d'extraction d'ARN, conformément aux instructions du fabricant. Pour les échantillons de tissu, les muqueuses gastriques ont été rapidement collectées, homogénéisées en conditions de basse température, puis soumises à l'extraction d'ARN. La concentration et la pureté de l'ARN ont été déterminées par mesure de l'absorbance à 260 et 280 nm. Des quantités équivalentes d'ARN ont été rétrotranscrites en ADN complémentaire (ADNc) à l'aide d'un kit de rétrotranscription avec élimination de l'ADN génomique. Une PCR quantitative en temps réel a été réalisée en utilisant un mélange maître PCR à base de SYBR Green. Chaque réaction a été effectuée dans un volume total de 20 µL contenant 10 µL de mélange maître 2×, 1 µL d'ADNc, 0,4 µL d'amorce sens, 0,4 µL d'amorce antisens et 8,2 µL d'eau ddH₂O sans RNase. Les conditions de cyclage thermique étaient les suivantes : dénaturation initiale à 95 °C pendant 10 min, suivie de 40 cycles de dénaturation à 95 °C pendant 10 s, d'hybridation à 60 °C pendant 30 s et d'élongation à 72 °C pendant 30 s. Les niveaux d'expression de CHOP, ATF5, Bcl-2 et Bax ont été déterminés. Le gène GAPDH a été utilisé comme gène de référence interne. L'expression relative des gènes a été calculée selon la méthode 2−ΔΔCt. Les séquences des amorces sont indiquées dans le Tableau supplémentaire 1.

Immunotransfert par méthode Western Blot

Des protéines totales ont été extraites à partir de cellules GES-1 et d'échantillons de tissus gastriques de rat. Pour les échantillons cellulaires, les cellules GES-1 traitées ont été lavées avec du PBS froid et lysées à l'aide d'un tampon de lyse RIPA (radioimmunoprécipitation assay) contenant un inhibiteur de protéase. Pour les échantillons tissulaires, les tissus de la muqueuse gastrique ont été homogénéisés dans du tampon RIPA en conditions de basse température, puis centrifugés afin de récupérer le surnageant. Les concentrations protéiques ont été déterminées à l'aide d'un dosage protéique BCA. Un total de 20 µg de protéine par piste a été séparé par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium (SDS-PAGE) et transféré sur des membranes de polyvinylidène difluorure (PVDF). Après blocage avec de l'albumine sérique bovine (BSA), les membranes ont été incubées toute la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires dirigés contre CHOP (1:1000), ATF5 (1:1000), Bcl-2 (1:1000), Bax (1:1000) et β-actine (1:5000). Après lavage, les membranes ont été incubées avec les anticorps secondaires marqués à la peroxydase de raifort correspondants (1:10000). Les bandes protéiques ont été visualisées à l'aide d'un réactif d'amplification de la chimiluminescence et capturées à l'aide d'un système d'imagerie chimiluminescente. Les intensités des bandes ont été quantifiées à l'aide d'un logiciel d'analyse d'images et normalisées par rapport à la β-actine.

Évaluation histopathologique

Des échantillons de tissu gastrique ont été prélevés sur des rats Sprague–Dawley après un traitement par le clopidogrel et fixés dans du formol tamponné neutre à 10 %. Les échantillons ont été déshydratés, clarifiés, inclus en paraffine et coupés à une épaisseur de 4 µm. Les coupes en paraffine ont été colorées à l'hématoxyline et à l'éosine. Les modifications histopathologiques ont été évaluées de manière qualitative au microscope optique en fonction de la morphologie de la muqueuse, de l'intégrité épithéliale, de l'œdème et de l'infiltration par les cellules inflammatoires. Des images représentatives ont été capturées. Aucun système de notation histologique n'a été appliqué.

Immunohistochimie

Des coupes de tissu gastrique incluses dans la paraffine ont été déparaffinisées dans le xylène et réhydratées à l’aide d’une série d’éthanol à concentration décroissante. Une récupération antigénique induite par la chaleur a été réalisée dans un tampon citrate. L’activité peroxydasique endogène a été bloquée avec un peroxyde d’hydrogène à 3 % pendant 10 minutes, et la liaison non spécifique a été bloquée avec un sérum de chèvre normal pendant 30 minutes à température ambiante. Les coupes ont ensuite été incubées toute la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires dirigés contre CHOP, ATF5, Bcl-2 et Bax. Après un lavage au PBS, les coupes ont été incubées avec l’anticorps secondaire marqué à la peroxydase de raifort correspondant. Les signaux immunoréactifs ont été visualisés à l’aide d’une solution chromogène DAB, suivie d’une contre-coloration à l’hématoxyline. Les coupes ont été déshydratées, clarifiées, montées et examinées au microscope optique. Des images représentatives ont été prises, et la surface colorée positive a été quantifiée à l’aide d’un logiciel d’analyse d’image.

Coloration en immunofluorescence

Des coupes de tissu gastrique incluses dans la paraffine ont été déparaffinisées, réhydratées, puis soumises à une récupération d'antigène induite par la chaleur dans un tampon citrate. Après blocage par un sérum de chèvre normal pendant 30 min, les coupes ont été incubées toute la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires dirigés contre CHOP (1:50), ATF5 (1:100), Bcl-2 (1:50) et Bax (1:200). Après lavage au PBS, les coupes ont été incubées pendant 1 h à température ambiante à l'abri de la lumière avec les anticorps secondaires fluorescents correspondants (1:500), puis contre-colorées avec le DAPI. Les images ont été acquises à l’aide d’un microscope à fluorescence avec un grossissement ×200. Trois champs choisis aléatoirement et non superposés par animal ont été analysés à l’aide du logiciel Image-Pro Plus 6.0, et l’intensité de fluorescence a été exprimée sous la forme IOD/Surface. Trois animaux par groupe ont été inclus dans l’analyse.

Dosage immuno-enzymatique (ELISA)

Des échantillons sanguins ont été prélevés chez des rats Sprague–Dawley après traitement et laissés à coaguler à température ambiante. Le sérum a été séparé par centrifugation et stocké à −80 °C jusqu'à l'analyse. Les concentrations sériques d'IL-1β, d'IL-6 et de TNF-α ont été mesurées à l'aide de kits ELISA conformément aux instructions du fabricant. L'absorbance a été mesurée à l'aide d'un lecteur de microplaques, et les concentrations en cytokines ont été déterminées à partir des courbes standards.

Analyse statistique

Les analyses statistiques ont été effectuées à l'aide d'un logiciel d'analyse statistique. Les données sont présentées sous la forme de la moyenne ± écart-type (SD). La normalité et l'homogénéité des variances ont été évaluées à l'aide du test de Shapiro–Wilk et du test de Levene, respectivement. Les comparaisons entre deux groupes ont été réalisées à l'aide du test t de Student. Les comparaisons entre plusieurs groupes ont été effectuées à l'aide d'une analyse de variance à un facteur suivie du test a posteriori (post hoc) de Dunnett. Une valeur de P < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Toutes les expériences sur cellules ont été réalisées à partir d'au moins trois réplicats biologiques indépendants.

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Résultats

Le clopidogrel réduit la viabilité des cellules GES-1 et augmente l'apoptose in vitro

Nous avons d'abord étudié si le clopidogrel affecte la viabilité et l'apoptose des cellules GES-1. Des tests CCK-8 ont montré que le traitement par le clopidogrel réduisait significativement la viabilité des cellules GES-1 (Figure 1A,B), indiquant une diminution de la viabilité cellulaire. Compte tenu de la réduction globale de la viabil...

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Discussion

Le clopidogrel est largement utilisé pour la prévention et le traitement des maladies cardiovasculaires ; toutefois, son utilisation clinique est associée à des risques de saignement et à des complications gastro-intestinales, notamment des ulcères peptiques, des hémorragies et des perforations19. Par conséquent, comprendre les modifications moléculaires associées aux lésions gastriques induites par le clopidogrel est essentiel pour améliorer la prévention et la prise en charge de ces effets indés...

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Déclarations de divulgation

Conflit d'intérêts :

Les auteurs déclarent ne pas avoir d'intérêts financiers concurrents connus ni de relations personnelles pouvant avoir semblé influencer les travaux rapportés dans cette étude.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par le projet « Recherche fondamentale sur la voie de signalisation CHOP/ATF5/Bcl-2 dans l'apoptose des cellules épithéliales de la muqueuse gastrique induite par le clopidogrel » (numéro de projet 2023BWKY009).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Kit de détection de l'apoptose Annexine V-FITC/PIElabscienceE-CK-A211Kit de détection de l'apoptose
Anticorps anti-ATF5Proteintech67066-1-APAnticorps primaire
Kit d'essai BCA pour protéinesSolarbioPC0020Dosage de la concentration en protéines
Anticorps anti-BaxProteintech50599-1-APanticorps primaire
Anticorps anti-Bcl-2Proteintech26593-1-APAnticorps primaire
βAnticorps anti-actineProteintech66009-1-Iganticorps primaire
Tampon de blocageBeyotimeP0252Solution de blocage pour immunotransfert Western blot
Kit de comptage cellulaire CCK-8KeyGen BiotechKGA317Essai de viabilité cellulaire
Kit de synthèse d'ADNcTransGen BiotechAU341Kit de synthèse de l'ADN complémentaire de premier brin avec élimination de l'ADN génomique
Kit de détection du cycle cellulaireLianke BiotechnologyCCS012Kit d'analyse du cycle cellulaire
Anticorps CHOPProteintech15204-1-APanticorps primaire
Clopidogrel hydrogénosulfate (Pureté ≥99%)MacklinC874834Médicament expérimental
Kit de chromogène DABBeyotimeP0201MSubstrat pour immunohistochimie
Diméthylsulfoxyde (DMSO)MedChemExpressHY-Y0320CSolvant
Réactif de chimiluminescence améliorée (ECL)MeilunbioMA0186Substrat chimiluminescent
Sérum fœtal bovin (SFB)Gibco10099-141Supplément pour culture cellulaire
Ligne cellulaire épithéliale gastrique humaine GES-1iCell BioscienceiCell-h062Ligne cellulaire épithéliale gastrique humaine
Hématoxyline et Éosine (H&E) Kit de colorationBeyotimeC0105SColoration histologique
Anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort (HRP)ProteintechRGAM001/RGAR001Anticorps secondaire
Solution de peroxyde d'hydrogèneAbsintheABS9333-100mLRéactif de blocage de la peroxydase endogène
IL-1β Kit ELISAMEIMIANMM-0047R2Dosage des cytokines sériques
Kit ELISA pour l'IL-6MEIMIANMM-0190R2Dosage des cytokines sériques
Lecteur de microplaquesBeijing Liuyi BiotechnologyWD-2102BMesure de l'absorbance
Solution de pénicilline-streptomycineSolarbioP1400Solution d'antibiotique
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)ServicebioG4202-500ML1× PBS
Membrane de polyfluorure de vinylidène (PVDF)MilliporeIPVH00010Membrane pour immunotransfert
Diluant pour anticorps primaireBeyotimeP0023ADiluant d'anticorps
Marqueur de poids moléculaire des protéinesYeasenWJ103Échelle de protéines pré-étiquetées
Mix maîtresse de PCR quantitative en temps réel (SYBR Green)CWBioCW3008réactif de qPCR
Tampon de lyse RIPA (Radioimmunoprecipitation Assay)SolarbioR0010Tampon d'extraction des protéines
RNase ALianke BiotechnologyCCS012Réactif pour l'analyse du cycle cellulaire
Milieu RPMI-1640ServicebioG4535-500MLMilieu de culture basal pour cellules
Rats Sprague-DawleyHangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd.N/Aqualité SPF
TNF-α Kit ELISAMEIMIANMM-0180R2Dosage des cytokines sériques
Kit de purification d'ARN totalTransGen BiotechER501-01kit d'extraction d'ARN
Solution de trypsine-EDTASolarbioT1300Réactif de dissociation cellulaire

Références

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