Le protocole de l'étude a été examiné et approuvé par le Comité d'éthique de l'Hôpital affilié n°1 de l'Université médicale de Chongqing (n° 2024-020-01). L'étude a été enregistrée de manière prospective auprès du Registre national de la recherche médicale, Chine (numéro d'enregistrement : MR-50-24-036087 ; date d'enregistrement : 6 septembre 2024). Un consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les participants avant leur inclusion, y compris un consentement pour la publication de photographies faciales anonymisées. L'étude a été menée conformément à la Déclaration d'Helsinki.
Conception de l'étude
Il s'agissait d'une étude clinique prospective, randomisée, en visage partagé, d'une durée de 12 semaines. Le peel au mélange d'acides utilisé dans cette étude contenait de l'acide AHA (4 %), de l'acide salicylique (2 %) et de l'acide azélaïque (1,5 %), avec une concentration totale en acides d'environ 7,5 %. Le pH de la formulation était de 3,6. Avant le début de l'étude, l'affectation des participants aux bras traitement et contrôle a été déterminée à l'aide d'une séquence aléatoire générée dans un tableur par un statisticien aveugle, puis mise en œuvre par un médecin également aveugle. Le côté traité a reçu un peeling au mélange d'acides deux fois par semaine pendant 3 semaines (six séances au total). La zone traitée a été nettoyée doucement avec un nettoyant doux et non gras, puis complètement séchée, avant l'application du peel en une couche fine et uniforme (~2 mL par demi-visage). La formulation a été appliquée selon une séquence standardisée, partant du front et des tempes, puis vers les joues, le nez, la région périorale et le menton, en évitant les paupières, les lèvres, les surfaces muqueuses et la peau lésée. Le produit est resté en contact avec la peau pendant 15 minutes, puis a été neutralisé à l'eau. Le critère clinique de fin était une érythème légère et uniforme, accompagnée d'un picotement ou d'une sensation de chaleur supportable, sans brûlure excessive, œdème, cloques ou blanchiment étendu. Après rinçage, un masque apaisant et hydratant a été appliqué pendant 15 minutes.
Les participants ont reçu pour consigne d'éviter les produits topiques irritants, l'exfoliation, le grattage et l'exposition directe au soleil, et d'utiliser une crème solaire à large spectre pendant la journée. Cette phase de traitement de 3 semaines a été suivie par une période de suivi de 9 semaines. Le côté contrôle n'a reçu aucune intervention durant les 3 premières semaines. Après cette période d'attente initiale, le côté contrôle a bénéficié du même traitement d'application de 3 semaines d'un peeling aux acides composés, suivi d'une période de suivi de 6 semaines. Cinq séances par demi-visage ont été administrées par du personnel médical formé à l'hôpital, tandis qu'une séance par demi-visage a été réalisée par le participant à domicile selon des instructions standardisées fournies par les investigateurs. Le participant a reçu des instructions écrites et orales standardisées concernant la quantité et la répartition du produit, la séquence d'application et la zone de traitement, le temps d'exposition prescrit et la procédure de retrait. Un aperçu schématique du plan d'étude et du flux opérationnel expérimental est présenté dans Figure 1.
Inclusion des patients
Trente patients âgés de 18 à 60 ans ayant un diagnostic clinique d'acné vulgaire modérée (AV) ont été inclus dans l'étude. Les participants éligibles, de tout sexe, devaient satisfaire aux critères diagnostiques d'acné modérée (AV), correspondant au stade 2 (31 à 50 lésions, incluant des comédons, des papules et des pustules) ou au stade 3 (51 à 100 lésions, incluant de nombreuses papules et pustules, des lésions inflammatoires plus volumineuses occasionnelles, et moins de trois nodules). Les patients ont été exclus s'ils présentaient une peau photo-sensible ou avaient pris des médicaments photo-sensibilisants au cours des 4 semaines précédentes ; s'ils avaient été fortement exposés au soleil au cours du mois précédent ou prévoyaient une exposition importante au soleil dans le mois suivant le traitement ; s'ils présentaient des cicatrices, une infection active ou des plaies non cicatrisées au site de traitement ; s'ils avaient un trouble diagnostiqué d'immunodéficience ; une insuffisance cardiaque, hépatique ou rénale sévère ; ou une affection psychiatrique documentée. Les 30 participants éligibles ont tous terminé l'étude et ont été inclus dans l'analyse finale.
Évaluations des résultats
Évaluations objectives
Analyse de l’érythème et des porphyrines
Dans des conditions environnementales standardisées (température, humidité et éclairage fixes), un système d’imagerie faciale a été utilisé pour capturer des images du front bilatéral, des joues, de la mâchoire et d'autres zones touchées au moment du point de départ et à chaque consultation de suivi. Ce système a permis une quantification objective de l’intensité de l’érythème et des niveaux de porphyrines.
Prélèvement de la microflore et immunohistochimie
Le profilage du microbiome cutané a été réalisé à partir de prélèvements microbiens effectués sur le côté traité avant le traitement et à la semaine 3. L'ADN microbien a été extrait des écouvillons à l'aide du kit d'extraction spécifié, conformément au protocole du fabricant, puis l'ADN récupéré a été quantifié. La région bactérienne de l'ARNr 16S a été amplifiée à l'aide des amorces universelles 341F (5’-CCTACGGGNGGCWGCAG-3’) et 805R (5’-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3’). L'amplification a commencé par une dénaturation à 98 °C pendant 30 s, suivie de 32 cycles de 98 °C pendant 10 s, 54 °C pendant 30 s et 72 °C pendant 45 s. Une extension finale a été réalisée à 72 °C pendant 10 min.
Les amplicons de PCR ont été purifiés à l'aide des billes spécifiées et quantifiés avant l'évaluation de la bibliothèque. La qualité des produits a été évaluée à l'aide d'un bioanalyseur et d'un kit de PCR quantitative, après quoi les amplicons éligibles ont été regroupés pour le séquençage. Les lectures brutes démultiplexées ont été traitées en supprimant d'abord les séquences des amorces avec Cutadapt. Les lectures en lecture double ont été assemblées avec FLASH, et fqtrim a été utilisé pour exclure les lectures dont les scores de qualité étaient inférieurs à 20, la longueur inférieure à 100 pb ou les bases ambiguës représentaient plus de 5 % de la séquence. Les étiquettes nettoyées ayant passé le filtrage de qualité ont été conservées pour l'analyse ultérieure. Les chimères ont été éliminées à l'aide de Vsearch, et DADA2 a été utilisé pour débruiter les lectures restantes et générer des variants de séquence d'amplicon (ASV).
L'annotation des espèces a été réalisée dans QIIME2 à l'aide du module complémentaire feature-classifier contre les bases de données SILVA et NT-16S. QIIME2 a également été utilisé pour calculer la diversité alpha et bêta. La composition bactérienne a été évaluée à partir des profils d'abondance relative. Les différences d'abondance au niveau du genre ont été testées à l'aide du test de Wilcoxon, une valeur de P < 0,05 étant considérée comme significative. L'analyse de la taille de l'effet par discrimination linéaire a été effectuée avec nsegata-lefse, en utilisant des seuils de LDA ≥3,0 et de P < 0,05.
Parmi les participants inclus, 10 patients ont été sélectionnés aléatoirement pour une analyse immunohistochimique de médiateurs inflammatoires, notamment l'IL-1α, l'IL-6, l'IL-17, le TGF-β et le TLR2. Des échantillons de biopsie cutanée (2 mm) ont été prélevés sur des lésions d'acné actives au moment du début de l'étude (semaine 0) et à la semaine 3 après désinfection avec un iodophore. Les échantillons ont été fixés dans du paraformaldéhyde à 4 %, inclus en paraffine et coupés en sections de 4 µm. Les sections incluses en paraffine (4 µm) ont été déparaffinisées et réhydratées. La récupération des antigènes a été réalisée à l'aide d'un tampon EDTA (pH 9,0) chauffé au micro-ondes. La peroxydase endogène a été bloquée avec du H2O2 à 3 %, puis les sections ont été traitées avec du sérum de chèvre à 3 % afin de réduire la liaison non spécifique des anticorps. Les sections ont ensuite été incubées avec les anticorps primaires toute la nuit à 4 °C : IL-1α (1:400), IL-6 (1:400), IL-17A (1:400), TGF-β (1:400) et TLR2 (1:300). Ensuite, les sections ont été incubées avec un kit d'anticorps secondaire polymère-HRP pendant 30 minutes à température ambiante, suivies d'une détection chromogène par DAB et d'une contre-coloration à l'hématoxyline. Les contrôles négatifs ont été incubés avec du PBS à la place des anticorps primaires. Les images ont été acquises à l'aide d'un scanner numérique avec un grossissement de 400×. Cinq champs ont été sélectionnés aléatoirement par section, et l'évaluation a été effectuée par deux dermatologues en insu.
Évaluations subjectives
Évaluation globale par l'investigateur
Au moment du début de l'étude et à la semaine 12, un dermatologue, ignorant de l'affectation au traitement, a évalué la gravité de l'acné sur l'ensemble du visage à l'aide du système de classification globale de l'acné (GAGS).
Auto-évaluation par le patient
À la fin de la période de traitement et de suivi, les participants ont évalué leur amélioration clinique perçue à l’aide d’une échelle d’auto-évaluation à quatre points. Les scores étaient définis comme suit : 0, aucune amélioration ou aggravation ; 1, amélioration légère ; 2, amélioration modérée ; et 3, amélioration évidente.
Évaluation aveugle du résultat
Afin de réduire les biais d'évaluation, un dermatologue ignorant de l'attribution du traitement a évalué indépendamment l'amélioration clinique à l'aide de photographies prises au moment de la ligne de base.
Surveillance de la sécurité
Les événements indésirables ont été évalués à chaque visite de suivi afin d'évaluer la sécurité du traitement.
Analyse statistique
Avant le début de l'étude, la taille de l'échantillon a été estimée afin de détecter un changement du score GAGS du visage entier entre la ligne de base et la semaine 12. Le calcul de la taille de l'échantillon était fondé sur une étude pilote portant sur un peeling à l'acide composé, en supposant une taille d'effet standardisée intra-participant de 0,60, un seuil de significativité bilatéral de 0,05 et une puissance de 80 %, ce qui nécessitait 24 participants évaluables. En tenant compte d'un taux d'abandon prévu de 20 %, l'effectif cible d'inscription était fixé à 30 participants.
L'analyse statistique a été réalisée à l'aide de logiciels statistiques et de graphiques (voir le Tableau des matériaux). Les données continues ont été décrites en fonction de leur distribution. Les variables approximativement distribuées de façon normale ont été rapportées comme moyenne ± écart-type, tandis que les variables non normalement distribuées ont été résumées par la médiane avec l'intervalle interquartile ou l'étendue, selon le cas. Les données catégorielles ont été exprimées en effectifs et en pourcentages.
La distribution des données a été évaluée à l'aide du test de Shapiro-Wilk et confirmée par un examen visuel des histogrammes et des graphiques Q-Q. Étant donné que la taille de l'échantillon était faible et que plusieurs variables ne suivaient pas une distribution normale, les analyses principales ont été réalisées à l'aide de tests non paramétriques. Les résultats principaux, notamment les scores GAGS, la zone rouge et les niveaux de porphyrines, ont été analysés à l'aide du test de Wilcoxon apparié pour échantillons appariés.
Des tailles d'effet et des intervalles de confiance à 95 % ont été calculés pour les résultats cliniques principaux. Pour les comparaisons appariées non paramétriques, la corrélation des rangs bisériale pour échantillons appariés a été utilisée comme mesure de la taille d'effet. La corrélation des rangs de Spearman a été appliquée pour évaluer les relations entre variables continues ou ordinales. Les tests statistiques étaient bilatéraux, et les résultats ont été considérés comme significatifs pour une valeur de P < 0,05.
Des analyses du microbiome ont été réalisées sur des échantillons prélevés du côté du traitement chez les mêmes participants. La diversité alpha a été évaluée à l'aide des indices de Shannon et de Simpson. Les changements observés dans les indices de diversité alpha entre les échantillons de base et ceux post-traitement ont été évalués à l'aide du test de Wilcoxon signé par paires.
La composition de la communauté bactérienne a été résumée par l'abondance relative aux niveaux de phylum, de famille et de genre. Les taxons présentant une faible abondance ou une faible prévalence ont été conservés pour l'analyse descriptive. Les différences d'abondance relative de taxons spécifiques entre les échantillons de base et ceux post-traitement ont été évaluées à l'aide de tests non paramétriques appariés. Pour les analyses du microbiome, les tests au niveau des taxons étaient exploratoires, et les valeurs P non ajustées sont indiquées. Tous les tests étaient bilatéraux, avec un seuil de significativité fixé à P < 0,05.