La pilule Zuogui module le couplage ostéoblastes-ostéoclastes chez les rats ovariectomisées : une étude factorielle trois par trois

Résumé

Cette étude évalue les effets de la pilule Zuogui sur l'ostéoporose post-ménopausique chez des rats ovariectomisés en utilisant un plan factoriel trois par trois. Les résultats soutiennent des effets synergétiques des composants Yin et Yang sur le métabolisme osseux et les marqueurs associés de la voie EphB4/ephrinB2, bien que les preuves mécanistiques restent associatives plutôt que causales.

Résumé

L'ostéoporose post-ménopausique est provoquée par un déséquilibre entre la formation et la résorption osseuses associé à une carence en œstrogènes. Cette étude a quantifié les effets indépendants et combinés de sous-formulations nourrissant le Yin du Zuogui Pill dans un modèle de rat ovariectomisé, et a examiné leur lien avec la voie EphB4/ephrinB2/RhoA/phosphatase alcaline. Conformément aux recommandations ARRIVE 2.0, 130 rats femelles Sprague-Dawley spécifiques sans agents pathogènes ont été répartis au hasard en 13 groupes (n=10/groupe), dont neuf groupes organisés selon un plan factoriel trois par trois. Les critères d'évaluation comprenaient le P1NP, le CTX-1, la densité minérale osseuse fémorale mesurée par absorptiométrie à rayons X à double énergie (DXA), l'histologie trabéculaire, ainsi que l'expression des ARN messagers et des protéines analysées par transcription inverse suivie de réaction de polymérase en chaîne quantitative et par immunoblotting. La formule complète (I2A2) était associée à une augmentation du P1NP, à une diminution du CTX-1 et à une densité minérale osseuse plus élevée par rapport au groupe témoin. Une analyse factorielle a révélé une interaction Yin-Yang entre le P1NP et la DMO, suggérant une synergie pharmacologique. Les modifications moléculaires observées étaient associées à une augmentation de l'expression d'EphB4, d'ephrinB2 et de la phosphatase alcaline, ainsi qu'à une réduction de l'expression de RhoA. Ces résultats appuient une association entre le traitement par le Zuogui Pill, l'amélioration des phénotypes osseux et la modulation des marqueurs de cette voie ; une dépendance causale de la voie devra être confirmée par des expériences utilisant des inhibiteurs, des gènes d'extinction (knockdown) et des cultures cellulaires en co-culture.

Introduction

L'ostéoporose post-ménopausique (OPPM) touche une grande population de femmes et se caractérise par une perturbation associée au déficit en œstrogènes de l'équilibre entre la formation et la résorption osseuses^1,2. Le système récepteur-ligand EphB4/ephrineB2 assure la communication entre ostéoblastes et ostéoclastes ; la signalisation via EphB4 favorise la différenciation des ostéoblastes et l'activité de la phosphatase alcaline (ALP), tandis que la signalisation rétrograde via l'ephrineB2 peut inhiber l'ostéoclastogenèse par des mécanismes liés à RhoA^3,4. La diminution du couplage dans l'os déficient en œstrogènes fournit une justification mécanistique à l'évaluation d'interventions agissant sur les deux voies cellulaires du remodelage osseux.

Les traitements actuels de l'ostéoporose, notamment les agents antirésorptifs et anabolisants, réduisent le risque de fracture mais peuvent être limités par l'observance thérapeutique, le coût, les contre-indications, les effets de rebond ou des événements indésirables lors d'une utilisation à long terme⁵. Par conséquent, les traitements candidats qui améliorent la formation osseuse tout en limitant une résorption excessive restent d'un intérêt scientifique majeur.

La pilule Zuogui (ZGP ; Zuo Gui Wan) est une prescription classique à composants multiples utilisée en médecine traditionnelle chinoise pour traiter la carence en essence rénale, un tableau théorique associé à une faiblesse osseuse. Les composants nourrissant le Yin comprennent Rehmannia glutinosa (racine préparée, Shu Di Huang, 24 g), Dioscorea opposita (rhizome, Huai Shan Yao, 12 g), Cornus officinalis (fruit, Shan Zhu Yu, 12 g), Lycium barbarum (fruit, Gou Qi Zi, 12 g), la gélatine de plastron de Chinemys reevesii (gélatine dérivée du plastron, Gui Ban Jiao, 12 g) et Cyathula officinalis (racine, Chuan Niu Xi, 9 g). Les composants renforçant le Yang comprennent Cuscuta australis (graine, Tu Si Zi, 12 g) et la gélatine de corne de cerf de Cervus elaphus (gélatine dérivée de la corne, Lu Jiao Jiao, 12 g). Selon la théorie classique, le principe de recherche du Yang dans le Yin prévoit que les plantes renforçant le Yang peuvent potentialiser une base nourrissant le Yin plutôt que d'agir comme des additifs simples et indépendants. Des preuves cliniques et des études précliniques ont rapporté une activité anti-ostéoporotique de la ZGP ou d'interventions contenant la ZGP, notamment des effets sur la DMO, l'ostéogenèse et le comportement pharmacocinétique^6,7,8,9,10.

La nouveauté de cette étude réside dans la séparation formelle, selon un plan factoriel trois par trois, des composants nourrissant le Yin et renforçant le Yang chez des rats ovariectomisés (OVX), avec une évaluation simultanée des phénotypes osseux et des marqueurs de la voie EphB4/ephrinB2/RhoA/ALP. Ce dispositif expérimental teste la théorie de la compatibilité des formules de manière plus directe que les études utilisant uniquement la prescription complète ou un seul comparateur, tout en reconnaissant que les modifications des marqueurs de la voie restent associatives, sauf si elles sont bloquées ou inhibées de façon mécanistique¹¹.

Protocole

Toutes les procédures de cette étude ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins aux animaux et d'utilisation de l'Université médicale de Mongolie-Intérieure (n° d'approbation : YKD202404105) et ont été réalisées conformément aux lignes directrices ARRIVE 2.0¹².

Conception de l'étude

L'étude a été réalisée sur la plateforme expérimentale animale de l'Université médicale de Mongolie-Intérieure. Un plan factoriel complet 3×3 a été appliqué avec deux facteurs : la formulation de base nourrissant le Yin (I ; trois niveaux de dose : 0, 27, 54 g d'équivalent de drogue brute) et la formulation renforçant le Yang (A ; trois niveaux de dose : 0, 8, 16 g d'équivalent de drogue brute), donnant lieu à neuf cellules factorielles plus quatre groupes de référence. Le plan factoriel est présenté dans Tableau 1. I2A2 représente la formule complète de ZGP à la dose équivalente clinique. La conversion des doses a utilisé la méthode de la surface corporelle (facteur rat : humain = 6,25)¹³.

Animaux, randomisation et aveugle

Cent trente rats femelles Sprague-Dawley spécifiques sans pathogènes (6 mois, 220–250 g) ont été répartis selon une table de nombres aléatoires générée par ordinateur. Les codes de répartition ont été placés dans des enveloppes scellées séquentiellement par un chercheur n'ayant pas participé à l'évaluation des résultats. Les rats ont été logés par groupes de 3 à 4 par cage ventilée, sous un cycle lumière/obscurité de 12 h, à 22 ± 2 ^oC et une humidité de 50 à 60 %, avec un accès libre à l'eau, une alimentation standard pour rongeurs dont la teneur en calcium et en phosphore était documentée, une activité en cage et un enrichissement environnemental. Les analyses moléculaires, les scores histologiques, la quantification d'images et la densitométrie ont été réalisées par des investigateurs ignorant la répartition des groupes. La taille de l'échantillon a été déterminée par une analyse de puissance a priori, conduisant à n = 10 par groupe.

Modèle OVX et traitement médicamenteux

Une OVX bilatérale a été réalisée sous isoflurane inhalé délivré par un vaporisateur de précision. L'anesthésie a été induite à 3–4 % dans l'oxygène et maintenue à 1,5–2,5 % au moyen d'un embout nasal. La profondeur adéquate a été confirmée par la disparition des réflexes de retrait podal et palpébral, avec une respiration stable. La réussite de l'OVX a été évaluée par l'absence de cycle œstral vaginal au jour 5 et par la réduction de la DMO à 12 semaines après la chirurgie. Après la validation du modèle, un traitement par gavage a été administré pendant 8 semaines (1 mL/100 g/jour). Les décoctions ont été préparées par extraction aqueuse séquentielle à ébullition douce (100 °C, reflux), avec un volume 10 fois supérieur pendant 2 h, suivi d'un volume 8 fois supérieur pendant 1,5 h, filtrées à travers quatre couches de gaze médicale, puis concentrées sous pression réduite jusqu'à 0,968 g de drogue brute/mL. L'extrait concentré a été conservé à 4 °C et utilisé dans les 7 jours suivant sa préparation. Les témoins positifs étaient les granulés Gusukang (1,8 g/kg/jour) et le diéthylstilbestrol (0,04 mg/kg/jour). À la fin de l'expérience, les rats ont été profondément anesthésiés avec 5 % d'isoflurane jusqu'à disparition des réflexes podal et cornéen, puis saignés à blanc et soumis à une dislocation cervicale. Le décès a été confirmé par l'arrêt du battement cardiaque et de la respiration. Les carcasses et tissus ont été éliminés comme déchets biologiques ; les résidus chimiques ont été jetés comme déchets dangereux ; les aiguilles ou lames ont été placées dans des conteneurs homologués pour objets tranchants.

Mesures des résultats

Les taux sériques de P1NP et de CTX-1 ont été mesurés par ELISA sandwich (Jiyinmei)¹⁴. La DMO fémorale a été quantifiée par DXA. L'histologie trabéculaire a été évaluée par coloration à l'hématoxyline-éosine à un grossissement de 200x. L'expression génique a été analysée par RT-qPCR en utilisant la méthode 2^-ΔΔCt, normalisée à la glyceraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH). L'expression protéique a été évaluée par immunotransfert et quantification à l'aide d'ImageJ (voir Tableau des matériaux). Les masses moléculaires observées et les informations relatives aux catalogues des anticorps sont indiquées dans le Tableau supplémentaire 1. Les séquences des amorces étaient les suivantes : EphB4 sens/antisens, 5'-CTAGACTCTTTCCTGCGGCT/GGGAACTTGTGTAGGTGGGA-3' ; ephrinB2, 5'-CGGACAAGGCCTGGTACTAT/ACAGTTGAGCAGTGGGGTAT-3' ; RhoA, 5'-GTTTATGTGCCCACGGTGTT/ACTATCAGGGCTGTCGATGG-3' ; ALP, 5'-CGGACACAAGCATTCCCAGA/TGGTGGAGCTGAACAGGCTT-3' ; GAPDH, 5'-ACAGCAACAGGGTGGTGGAC/TTTGAGGGTGCAGCGAACTT-3'.

Analyse statistique

La normalité a été évaluée à l'aide du test de Shapiro-Wilk, et l'homogénéité des variances a été évaluée à l'aide du test de Levene avant l'analyse paramétrique. Les données sont exprimées en moyenne ± écart-type (ET), et toutes les barres d'erreur des graphiques quantitatifs indiquent l'écart-type. Une ANOVA factorielle à deux facteurs a été appliquée aux neuf cellules factorielles afin d'estimer les effets principaux et l'interaction I par A, avec l'éta carré partiel (ηp²) comme mesure de la taille de l'effet. Des comparaisons par paires entre les 13 groupes ont été effectuées à l'aide d'une ANOVA à un facteur avec correction de Bonferroni. Les analyses statistiques ont été réalisées à l'aide de GraphPad Prism. Les symboles de significativité sont définis de manière cohérente comme suit : *, **, ***, **** indiquent p <0,05, p <0,01, p <0,001, p <0,0001 par rapport au modèle ; #, ##, ###, #### indiquent les mêmes seuils par rapport à la forme complète de ZGP.

Résultats

Validation du modèle par cytologie vaginale

La réussite de l'OVX a été confirmée chez tous les animaux ovariectomisés, comme en témoigne l'arrêt du cycle œstral dans les 5 jours suivant la chirurgie (Figure 1A), tandis que les animaux soumis à une intervention factice conservaient un cycle de 4 jours (Figure 1B). À 12 semaines, la DEXA a montré une DMO fémorale plus faible dans le groupe modèle OVX par rapport aux tém...

Discussion

Le terme d'interaction factorielle soutient une relation non additive entre les composants nourrissant le Yin et ceux renforçant le Yang dans le ZGP. Ce résultat est conforme au principe traditionnel de recherche du Yang dans le Yin, selon lequel les composants renforçant le Yang devraient activer ou potentialiser la base nourrissant le Yin¹⁵. Ce résultat doit être interprété comme une synergie pharmacologique au niveau de la formulation. Il ne permet pas d'identifier les constituants actifs indiv...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Eau ammoniacale à 1 %	N/A	N/A	Solution de bleuissement après la différenciation à l'hématoxyline.
Alcool acide chlorhydrique à 1 %	N/A	N/A	Solution de différenciation pour la coloration à l'hématoxyline.
Mélange qPCR 2x	N/A	N/A	Mélange maître pour PCR quantitative. Volume de réaction source : 12,5 µL par réaction.
Solution de paraformaldéhyde à 4 %	N/A	N/A	Fixation des échantillons de fémur et de tibia gauche pour l'analyse histologique.
Tampon de charge 5x	N/A	N/A	Dénaturation des échantillons avant électrophorèse.
Anticorps primaire ALP	Affinity Biosciences	N/A	Anticorps pour immunoblot. Dilution source : 1:2000. RRID et numéro de lot requis pour JoVE.
Paire d'amorces ALP	N/A	N/A	L'ARNm de l'ALP a été mesuré par qRT-PCR, mais le tableau parent ne fournit pas les séquences des amorces ALP. Confirmation par l'auteur requise.
Réactif d'anticorps biotinylé	Fourni avec le kit ELISA, Jiyinmei	Composant du kit	Ajouté dans les puits d'échantillons pendant l'ELISA.
Gélatine de bois de cerf de Cervus elaphus, Lu Jiao Jiao	Beijing Tongrentang	N/A	Composant reconstituant le Yang. Dose totale dans la formule source : 12 g, ratio 4. La gélatine a été fondue dans la décoction.
Gélatine de plastron de Chinemys reevesii, Gui Ban Jiao	Beijing Tongrentang	N/A	Composant nourrissant le Yin. Dose totale dans la formule source : 12 g, ratio 4. La gélatine a été fondue dans la décoction.
Chloroforme	N/A	N/A	Séparation des phases lors de l'extraction de l'ARN.
Plateau de refroidissement	Leica	1150	Support cryo ou refroidi pour le protocole de coupe.
Cornus officinalis, Shan Zhu Yu	Beijing Tongrentang	N/A	Composant nourrissant le Yin. Dose totale dans la formule source : 12 g, ratio 4.
Cuscuta australis, Tu Si Zi	Beijing Tongrentang	N/A	Composant reconstituant le Yang. Dose totale dans la formule source : 12 g, ratio 4.
Cyathula officinalis, Chuan Niu Xi	Beijing Tongrentang	N/A	Composant nourrissant le Yin. Dose totale dans la formule source : 9 g, ratio 3.
PBS traité au DEPC	N/A	N/A	Rinçage des vertèbres lombaires L4 à L5 avant congélation dans l'azote liquide.
Diéthylstilbestrol	N/A	N/A	Contrôle positif de médecine occidentale. Dose source : 0,04 mg/kg/jour, 1 mL/100 g/jour. Le document source contient également une incohérence dans la nomenclature chinoise qui devrait être harmonisée sous le nom diéthylstilbestrol.
Dioscorea opposita, Huai Shan Yao	Beijing Tongrentang	N/A	Composant nourrissant le Yin. Dose totale dans la formule source : 12 g, ratio 4.
Mélange de dNTP	N/A	N/A	Inclus dans la réaction de transcription inverse.
Réactif chimiluminescent ECL	N/A	N/A	Réactif de détection pour immunoblot.
Réactif chromogène ELISA A	Fourni avec le kit ELISA, Jiyinmei	Composant du kit	Réactif de développement de la couleur pour ELISA.
Réactif chromogène ELISA B	Fourni avec le kit ELISA, Jiyinmei	Composant du kit	Réactif de développement de la couleur pour ELISA.
Solution d'arrêt ELISA	Fourni avec le kit ELISA, Jiyinmei	Composant du kit	Utilisée pour interrompre la réaction colorimétrique de l'ELISA.
Réactif ELISA marqué par enzyme	Fourni avec le kit ELISA, Jiyinmei	Composant du kit	Ajouté dans les puits non blancs lors de l'ELISA.
Anticorps primaire EphB4	Proteintech	N/A	Anticorps pour immunoblot. Dilution source : 1:2000. RRID et numéro de lot requis pour JoVE.
Paire d'amorces EphB4	N/A	Produit PCR de 232 pb	Sens : CTAGACTCTTTCCTGCGGCT ; Antisens : GGGAACTTGTGTAGGTGGGA. L'erreur typographique dans le tableau parent « Rat RphB4 » doit être corrigée en « Rat EphB4 ».
Anticorps primaire ephrinB2	Affinity Biosciences	N/A	Anticorps pour immunoblot. Dilution source : 1:2000. RRID et numéro de lot requis pour JoVE.
Paire d'amorces ephrinB2	N/A	Produit PCR de 172 pb	Sens : CGGACAAGGCCTGGTACTAT ; Antisens : ACAGTTGAGCAGTGGGGTAT.
Éthanol, absolu et concentrations décroissantes à 95 %, 85 %, 75 %	N/A	N/A	Déshydratation et réhydratation par gradient lors de la coloration à l'hématoxyline-éosine.
Rats femelles Sprague-Dawley	Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.	Numéro de certificat animalier et licence non fourni dans l'article source	Femelles saines non gestantes, spécifiques sans pathogènes, âgées de 6 mois. La version chinoise indique un poids de 230 à 270 g ; un brouillon anglais antérieur indique 220 à 250 g. Vérifier une plage finale avant soumission.
Anticorps primaire GAPDH	Servicebio	N/A	Anticorps de contrôle de chargement. Dilution source : 1:2000. RRID et numéro de lot requis pour JoVE.
Paire d'amorces GAPDH	N/A	Produit PCR de 253 pb	Sens : ACAGCAACAGGGTGGTGGAC ; Antisens : TTTGAGGGTGCAGCGAACTT.
Logiciel GraphPad Prism	GraphPad Software	Version 9.4.1 ; RRID : SCR_002798	Analyse statistique et création de graphiques. La normalité, l'homogénéité des variances, l'ANOVA, la correction de Bonferroni et les tailles d'effet doivent être conservées dans les fichiers de sortie.
Granulés Gusukang	Liaoning Wohua Kangchen Pharmaceutical Co., Ltd.	N/A	Contrôle positif de médecine traditionnelle chinoise. Dose source : 1,8 g/kg/jour ou 0,5 mL/100 g/jour.
Solution de coloration à l'hématoxyline	Zhuhai Beisuo Biotechnology Co., Ltd.	N/A	Coloration histologique. Le protocole source prévoit une coloration à l'hématoxyline de 5 minutes.
Microcentrifugeuse à grande vitesse	N/A	TG16W	Centrifugation pour les procédures de sérum et d'acides nucléiques.
Absorptiomètre à rayons X à double énergie Hologic	Hologic	N/A	Analyse de la densité minérale osseuse. Le document source mentionne des analyses fémorales in vivo et ex vivo.
Logiciel ImageJ	National Institutes of Health	RRID : SCR_003070	Quantification densitométrique des bandes d'immunoblot. La version n'est pas précisée dans l'article source.
Cuisinière à induction	Midea	N/A	Listée dans le tableau des instruments du document source chinois.
Isoflurane	N/A	N/A	Anesthésie pour l'ovariectomie bilatérale et le positionnement en DEXA. Le protocole révisé devrait préciser l'induction, le maintien, la voie d'administration et les critères de profondeur anesthésique.
Isopropanol	N/A	N/A	Précipitation de l'ARN lors de l'extraction.
Azote liquide	N/A	N/A	Congélation rapide des échantillons de vertèbres lombaires.
Lycium barbarum, Gou Qi Zi	Beijing Tongrentang	N/A	Composant nourrissant le Yin. Dose totale dans la formule source : 12 g, ratio 4.
Lecteur de microplaques	N/A	AMR-100	Détection de l'absorbance en ELISA à 450 nm.
Laveur de microplaques	N/A	APW-200	Étape de lavage pour les plaques ELISA.
Transcriptase inverse MMLV	N/A	N/A	Enzyme de transcription inverse.
Colle de montage neutre	Sinopharm Group	N/A	Milieu de montage pour les lames colorées à l'hématoxyline-éosine.
Sérum physiologique	N/A	N/A	Solvant administré par gavage pour les groupes contrôle blanc, faux opéré et modèle.
Amorce oligo(dT)18	N/A	N/A	Utilisée pour la transcription inverse.
Pénicilline	N/A	N/A	Prophylaxie des infections postopératoires. Dose source : 20 000 U/kg par voie intramusculaire pendant 3 jours.
Cuiseur sous pression	Xinfei	N/A	Listé dans le tableau des instruments du document source chinois.
Inhibiteur de protéase	N/A	N/A	Ajouté lors de l'extraction des protéines.
Tampon de lyse protéique	N/A	N/A	Extraction des protéines à partir de tissu osseux pour immunoblot.
Membrane PVDF	N/A	N/A	Membrane de transfert pour immunoblot activée par le méthanol.
Appareil de qRT-PCR	N/A	N/A	PCR quantitative en temps réel avec transcription inverse pour EphB4, ephrinB2, RhoA, ALP et GAPDH.
Kit ELISA Rat CTX-1	Jiyinmei	JYM0026Ra	ELISA sandwich pour le terminal C des téllopeptides du collagène de type 1 sérique. Détection à 450 nm.
Kit ELISA Rat P1NP	Jiyinmei	JYM0030Ra	ELISA sandwich pour le propeptide N-terminal du procollagène de type 1 sérique. Détection à 450 nm.
Rehmannia glutinosa, Shu Di Huang	Beijing Tongrentang	N/A	Composant nourrissant le Yin. Dose totale dans la formule source : 24 g, ratio 8.
Anticorps primaire RhoA	Proteintech	N/A	Anticorps pour immunoblot. Dilution source : 1:2000. RRID et numéro de lot requis pour JoVE.
Paire d'amorces RhoA	N/A	Produit PCR de 177 pb	Sens : GTTTATGTGCCCACGGTGTT ; Antisens : ACTATCAGGGCTGTCGATGG. Terminologie harmonisée de RHoA à RhoA.
Inhibiteur de RNase	N/A	N/A	Inclus dans la réaction de transcription inverse.
Eau sans RNase	N/A	N/A	Dissolution de l'ARN après séchage.
Microtome rotatif	Leica	2245	Coupe histologique.
Anticorps secondaire pour immunoblot	N/A	N/A	Dilution source : 1:15000. La réactivité d'espèce hôte et le RRID sont requis pour JoVE.
Lait écrémé, 5 %	N/A	N/A	Réactif de blocage pour immunoblot, 2 h à température ambiante.
Machine de dépôt et de cuisson des lames	Jinhua Yidi	N/A	Préparation des lames pour histologie.
Pentobarbital sodique, 3 %	N/A	N/A	Anesthésie terminale avant prélèvement sanguin par l'aorte abdominale dans le document source chinois. La procédure finale d'euthanasie et la méthode de confirmation doivent être vérifiées.
Diluant pour échantillons standards	Fourni avec le kit ELISA, Jiyinmei	Composant du kit	Utilisé pour les dilutions sérielles standards dans la procédure ELISA.
Tampon TBST	N/A	N/A	Tampon de lavage pour immunoblot.
Incubateur thermostaté agité	Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.	N/A	Incubation et agitation en laboratoire.
Réactif TRIzol	N/A	N/A	Extraction d'ARN à partir de 100 mg de tissu osseux.
Microscope droit	Leica	DM1000	Imagerie histologique à l'hématoxyline-éosine à 200x.
Incubateur thermostaté à double enceinte	N/A	GNP-9080	Incubation pour les procédures d'analyse.
Solution de coloration à l'éosine hydrosoluble	Zhuhai Beisuo Biotechnology Co., Ltd.	N/A	Contre-coloration histologique. Le protocole source prévoit une coloration à l'éosine de 3 minutes.
Système d'électrophorèse pour immunoblot	N/A	N/A	Séparation des protéines. Électrophorèse source : 80 V initialement, puis 120 V.
Système d'imagerie pour immunoblot	N/A	N/A	Imagerie de membrane chimiluminescente. Des membranes non recadrées sont requises pour la soumission.
Système de transfert pour immunoblot	N/A	N/A	Transfert des protéines vers la membrane PVDF. Conditions de transfert source : 400 mA, 90 min, bain de glace.
Xylène	N/A	N/A	Déparaffinage et clarification tissulaire en histologie.
Plantes composant la pilule Zuogui	Beijing Tongrentang	N/A	Formulation à huit plantes : Rehmannia glutinosa, Dioscorea opposita, Cornus officinalis, Lycium barbarum, gélatine de plastron de Chinemys reevesii, Cyathula officinalis, Cuscuta australis et gélatine de bois de cerf de Cervus elaphus.