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Article de recherche

Liuwei Dihuang Wan inhibe l’ostéoclastogenèse et la perte osseuse induite par l’ovariectomie en supprimant la signalisation NF-κB

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DOI :

10.3791/72270

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28 juillet 2026

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1School of Medicine, Nankai University, 2School of Basic Medical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, 3Emergency Medical Center, Ningbo Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, 4The Second People's Hospital of Changzhou, the Third Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Cette étude a démontré que Liuwei Dihuang Wan (LWDHW) supprime la différenciation des ostéoclastes et la perte osseuse induite par l’ovaire en inhibant la voie de signalisation NF-κB, comme révélé par l’analyse LC-MS/MS, la pharmacologie de réseau, ainsi que la validation in vivo et in vitro.

Résumé

Liuwei Dihuang Wan (LWDHW), une formule classique de médecine traditionnelle chinoise, est largement utilisée pour traiter diverses maladies associées à une déficience rénale et a montré une efficacité clinique satisfaisante dans l’ostéoporose postménopausée (PMOP). Cependant, ses mécanismes pharmacologiques restent flous. Pour y remédier, nous avons d’abord analysé les composants chimiques de LWDHW en utilisant LC-MS/MS, qui a identifié 1 615 composants. La pharmacologie réseau a ensuite prédit que l’inflammation et la voie de signalisation NF-κB sont des mécanismes thérapeutiques potentiels sous-jacents aux effets de LWDHW sur le PMOP. Par la suite, 27 femelles C57BL/6J ont été assignées au hasard aux groupes Sham, Model et LWDHW. Les souris des deux derniers groupes ont subi une ovariectomie bilatérale (OVX), et celles du groupe LWDHW ont reçu une LWDHW orale à 9,75 g/kg/jour pendant 8 semaines. Des échantillons sériques et fémurs ont été prélevés pour le test immunosorbent lié aux enzymes (ELISA), la micro-tomodensitométrie (μCT), l’examen histologique et l’immunohistochimie (IHC). Les macrophages primaires dérivés de la moelle osseuse (BMM) ont été traités avec LWDHW puis soumis à une coloration TRAP et à la qRT-PCR. Chez les souris OVX, le LWDHW a significativement atténué la perte osseuse et la détérioration de la microarchitecture osseuse, accompagnées d’une diminution des niveaux sériques de β-CTX et d’une diminution des taux d’ostéoclastes dans les tissus fémors. La coloration IHC a révélé une expression nettement plus faible de TNF-α, IL-1β et p-P65 dans les tissus fémoraux de souris traitées par LWDHW par rapport au groupe modèle. In vitro, la coloration TRAP a démontré que LWDHW inhibait la différenciation des ostéoclastes induite par RANKL/M-CSF des BMM et régulait à la baisse l’expression de Ctsk, MMP9 et Nfatc1. L’analyse Western blot a également montré que les niveaux de protéines de P65, p-P65, IκBα et p-IκBα étaient significativement diminués dans les BMM après le traitement LWDHW. Collectivement, LWDHW soulage l’ostéoporose postménopausique, éventuellement en supprimant l’ostéoclastogenèse médiée par la signalisation NF-κB.

Introduction

L’ostéoporose postménopausée (PMOP) est une maladie métabolique osseuse répandue caractérisée par une perte de masse osseuse et une détérioration de la microarchitectureosseuse. Avec le vieillissement croissant de la population, l’incidence croissante de la PMOP est devenue un problème mondial de santé publique qui menace sérieusement la santé des femmespostménopausées 2. En Chine, la prévalence globale du PMOP atteint jusqu’à 32,1 %. Les personnes atteintes sont plus susceptibles de développer des complications graves telles que des douleurs chroniques au dos, des déformations vertébrales et des fractures defragilité 4,5. Actuellement, les médicaments approuvés par la FDA pour l’ostéoporose incluent les bisphosphonates6, l’hormone parathyroïdienne67 et le dénosumab8, largement utilisés en pratique clinique. Cependant, leur application à long terme est souvent limitée par divers effets indésirables9. Par conséquent, il est pressant de développer des agents thérapeutiques plus sûrs et plus efficaces pour le PMOP. Parmi les alternatives potentielles, les plantes médicinales chinoises ont attiré une attention croissante en raison de leur efficacité reconnue et de leur profil de sécurité favorable10.

Liuwei Dihuang Wan (LWDHW) est une formule classique de la médecine traditionnelle chinoise (MTC), documentée pour la première fois dans l’ancien texte Clé de la thérapie des maladies de l’enfant durant la dynastie Song. Depuis des milliers d’années, le LWDHW est largement utilisé en pratique clinique pour traiter diverses maladies attribuées à une déficiencerénale 11,12,13,14. Selon la théorie de la MTC des « os qui gouvernent les reins », la perte de masse osseuse et la détérioration osseuse chez les patients atteints de PMOP sont principalement causées par un manque de nutrition à partir de l’essencereinale 15. Par conséquent, LWDHW est couramment appliqué dans la prise en main clinique de la PMOP et a démontré une efficacité thérapeutiquedéfinie 16,17. Cependant, bien que des études animales et cliniques aient révélé que le LWDHW exerce de multiples effets pharmacologiques, notamment lesantioxydatifs 18, les anti-inflammatoires19 etles activités antifibrotiques 14, son mécanisme sous-jacent contre le PMOP reste largement inconnu.

L’homéostasie osseuse repose sur l’équilibre entre la résorption osseuse par les ostéoclastes et la formation osseuse par lesostéoblastes 20. Cet équilibre est perturbé car la différenciation et l’activité des ostéoclastes sont renforcées dans des conditions inflammatoires, entraînant une résorption osseuseaccélérée 21. Dans ce processus, la voie NF-κB sert de régulateur central. Des facteurs inflammatoires tels que le TNF-α et l’IL-1β peuvent induire la phosphorylation et la dégradation d’IκBα, déclenchant la translocation nucléaire de p65 phosphorylé (p-P65)22. Par conséquent, des gènes spécifiques à l’ostéoclaste en aval, dont Ctsk, Mmp9 et Nfatc1, sont activés pour promouvoir l’ostéostogenèse23,24.

La pharmacologie des réseaux est un domaine interdisciplinaire qui intègre l’informatique, la pharmacologie et la bioinformatique25. Elle présente des avantages distincts pour explorer de manière exhaustive les mécanismes pharmacologiques sous-jacents aux effets thérapeutiques des herbeschinoises 26. Dans la présente étude, la pharmacologie en réseau a été employée pour prédire les processus biologiques potentiels et les voies de signalisation impliqués dans les effets anti-ostéoporotiques du LWDHW. Parallèlement, les composants chimiques de LWDHW ont été analysés à l’aide de LC-MS/MS. De plus, une validation in vivo à l’aide d’un modèle murin OVX et des expériences in vitro avec des macrophages primaires dérivés de la moelle osseuse (BMM) ont été menées afin d’approfondir l’étude du mécanisme pharmacologique de LWDHW face au PMOP. Le flux de travail est présenté à la Figure 1.

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Protocole

Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvées par le Comité d’éthique animale de l’Université médicale chinoise du Zhejiang (IACUC-202402-07).

Préparation et analyse LC-MS/MS de LWDHW

La formule LWDHW se compose de six herbes chinoises : Rehmannia glutinosa (Gaertn.), Cornus officinalis (Sieb.), Paeonia suffruticosa (Andr.), Dioscoreae en face (Thunb.), Poria cocos (Schw.) et Alisma orientale (Sam.). Des informations détaillées sur ces herbes sont listées dans le Tableau 1. Toutes les herbes crues étaient fournies par le Premier Hôpital affilié de l’Université médicale chinoise du Zhejiang (Hangzhou, Chine) et bouillies dans de l’eau purifiée à un ratio herbe/eau de 0,1 kg/L. L’extrait aqueux obtenu a été filtré et concentré dans une solution de travail à 0,5 g/mL pour des analyses LC-MS/MS ultérieures et des expériences animales. De plus, la solution de travail était transformée en poudre lyophilisée pour des expériences cellulaires.

Dans l’analyse LC-MS/MS, les conditions de chromatographie liquide étaient les suivantes : phase mobile A (aqueuse) et phase mobile B (organique) consistaient respectivement en 0,1 % d’acide formique dans l’eau et d’acétonitrile pour le mode ion positif, ou 5 mM de formatie ammoniaque dans l’eau et d’acétonitrile, respectivement, pour le mode ion négatif. Le temps d’exécution total était de 8 min, avec un débit de 0,3 mL/min, une température de colonne de 40 °C et un volume d’injection de 2 μL. Pour la spectrométrie de masse, les données étaient acquises en mode MS-ddMS2 complet, avec des tensions de pulvérisation réglées à +3,50 kV (positif) et –2,50 kV (négatif).

Ingrédients bioactifs et cibles prédiction du LWDHW

Les noms individuels de six plantes constitutives ont été saisis dans la base de données du Système de Pharmacologie de la Médecine Traditionnelle Chinoise (TCMSP) afin d’obtenir la liste complète des ingrédients de LWDHW. Les ingrédients bioactifs ont ensuite été dépistés à l’aide des paramètres pharmacocinétiques de biodisponibilité orale (OB) ≥ 30 % et de ressemblance du médicament (DL) ≥ 0,18, 27,28,29,30. Les protéines correspondantes des ingrédients bioactifs ont été identifiées et soumises à UniProt pour récupérer leurs noms de gènes standardisés, définis comme cibles géniques finales de LWDHW.

Objectifs chevauchants entre LWDHW et PMOP

Les cibles génétiques associées au PMOP ont été retrouvées en recherchant le mot-clé « ostéoporose postménopausée » dans les bases de données GeneCards et DisGeNET le 2 octobre 2024. Les cibles ont été filtrées en utilisant des seuils de score de >0,1 dans DisGeNET et >10 dans GeneCards, et les entrées en double ont été supprimées pour obtenir un ensemble non redondant de gènes liés au PMOP. Par la suite, les cibles dérivées des plantes de LWDHW et les cibles associées au PMOP ont été importées dans l’outil en ligne Venny pour générer un diagramme de Venn représentant les cibles chevauchantes entre LWDHW et PMOP.

Ontologie des gènes (GO) et analyse de l’enrichissement des voies de signalisation

Les cibles chevauchantes entre LWDHW et PMOP ont fait l’objet d’une analyse d’enrichissement GO à l’aide de la base de données DAVID. Les termes GO récupérés ont été classés en trois catégories, incluant composante cellulaire, fonction moléculaire et processus biologique (BP). Après avoir filtré FDR < 0,01, les 30 premiers termes BP étaient listés dans un diagramme à bulles dans l’ordre décroissant d’enrichissement des plis.

Ensuite, les cibles qui se chevauchent ont été saisies dans les bases de données de l’Encyclopédie des gènes et génomes de Kyoto (KEGG) et Metascape pour l’analyse d’enrichissement des voies de signalisation. Les voies enrichies issues des bases de données KEGG et Metascape ont été classées par nombre de cibles correspondantes dans un ordre décroissant, et les 25 principales voies de chaque base de données étaient affichées sous forme de graphiques à barres.

Construction du réseau

Les réseaux « Formule-Plantes-Ingrédients-Cibles-Maladies » et « Cibles-Voies » ont été construits dans Cytoscape pour visualiser les interrelations entre les composants. Un réseau d’interaction protéine-protéine (PPI) a été généré en saisissant les cibles qui se chevauchent dans la base de données STRING. Les cibles de hub au sein du réseau ont été identifiées par criblage basé sur des caractéristiques topologiques, notamment la centralité des degrés (DC), la centralité entre les centres (BC) et la centralité de proximité (CC).

Groupe animal, modèle d’ostéoporose induit par OVX et intervention médicamenteuse

Un total de 27 souris C57BL/6J femelles (âgées de 2 mois, pesant 22 ± 2 g) ont été fournies par le Centre d’expérimentation animale de l’Université médicale chinoise du Zhejiang (Hangzhou, Zhejiang). Tous les animaux étaient hébergés dans des conditions spécifiques sans agents pathogènes (FPS) avec un cycle clair/obscur de 12 heures, une température ambiante maintenue à 25 °C et une humidité comprise entre 40 % et 60 %, avec un accès libre à la nourriture et à l’eau. Après une semaine d’alimentation adaptative, les souris ont été assignées au hasard à trois groupes (n = 9 par groupe) à l’aide d’un tableau de nombres aléatoires : Sham, Model et LWDHW. Les souris des groupes Model et LWDHW ont subi une ovaire bilatérale (OVX) pour établir le modèle PMOP, tandis que le groupe Sham a subi une procédure simulée impliquant la résection d’un volume équivalent de tissu adipeux périovarien. À partir de deux jours après la chirurgie, les souris du groupe LWDHW ont reçu quotidiennement une dose orale de solution de travail LWDHW à une dose de 9,75 g/kg/jour (convertie à partir de la dose équivalente humaine basée sur la surface corporelle), tandis que les groupes modèle et Sham ont reçu un volume égal de solution saline. Des échantillons biologiques, y compris les tissus séromiques et fémoraux, ont été prélevés 8 semaines après l’administration pour une analyse ultérieure. Aucun décès ou mortalité inattendu n’a eu lieu dans aucun des groupes durant la période expérimentale.

Dosage immunosorbent lié à une enzyme sérique (ELISA)

Le sang total a été prélevé dans le plexus rétro-orbitaire et centrifugé à 1000 x g pendant 15 minutes à 4 °C pour obtenir du sérum. Les concentrations sériques d’ostéocalcine (OCN) et de télopeptide β-C-terminal du collagène de type I (β-CTX) ont été mesurées à l’aide des kits ELISA correspondants selon les protocoles du fabricant.

μCT et analyse biomécanique

Les échantillons fémoraux ont été analysés à l’aide d’un appareil de micro-tomodensitométrie (μCT) à haute résolution à une résolution isotrope de 10 μm. La microstructure tridimensionnelle (3D) du fémur distal a été reconstruite à partir des images acquises à l’aide du logiciel NRecon. Par la suite, les paramètres de microarchitecture osseuse suivants, incluant la densité minérale osseuse (DMO, g/mm3), la fraction de volume osseuse (VB/TV, %), l’épaisseur trabéculaire (Tb.Th, mm) et le nombre trabéculaire (Tb.N, 1/mm), ont été quantifiés dans la région d’intérêt (ROI) du fémur distal.

Les propriétés biomécaniques des échantillons fémoraux (n = 3 par groupe) ont été évaluées via un essai de flexion en trois points utilisant un système de test de fatigue axiale en torsion. Une charge de compression était appliquée au milieu de la diaphyse à un taux constant de déplacement de 2 mm/min jusqu’à la rupture structurelle. La charge maximale (N) était automatiquement enregistrée par le logiciel du système.

Coloration en histomorphologie, immunohistochimie (IHC) et immunofluorescence (FI)

Après fixation avec 4 % de paraformoldéhyde, décalcification dans une solution d’EDTA à 14 %, et déshydratation par une série éthanol graduée, les échantillons fémoraux ont été traités en sections de paraffine de 3 μm d’épaisseur comme décritprécédemment à 31. Les coupes ont été colorées à l’hématoxyline alcien bleu (ABH)/Orange G pour une évaluation morphologique. Une analyse quantitative de la zone osseuse trabéculaire dans la métaphyse distale du fémur a été réalisée à l’aide du logiciel OsteoMetrics.

Des échantillons de foie et de rein ont été fixés, intégrés dans la paraffine et découpés en sections de 4 μm. Après une déparaffinisation et une réhydratation régulières, les sections ont été colorées à l’hématoxyline et à l’éosine. L’examen histologique a été réalisé au microscope optique.

Les tests IHC et IF ont été réalisés sur des sections plongées dans la paraffine selon des procédures établies. En résumé, la récupération antigénique a été réalisée en incubant des sections dans un tampon de citrate de 0,01 M à 60 °C pendant 4 heures. Les sections ont ensuite été incubées toute la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires comprenant ALP (1:300), IL-1β (1:500), TNF-α (1:500) et p-P65 (1:300). Après incubation avec des anticorps secondaires correspondants pendant 20 minutes, des sections ont été soumises à une solution de diaminobenzidine (DAB) et à une contre-coloration à l’hématoxyline pour l’IHC, ou colorées avec DAPI pour le marquage nucléaire en IF. Pour la quantification positive de la coloration, quatre champs sélectionnés au hasard ont été capturés à partir de chacune des trois sections de tissu par échantillon. Dans la coloration IHC, la densité optique moyenne était définie comme le rapport entre la densité optique intégrée (IOD) et la cavité correspondante, tel que déterminé à l’aide du logiciel Image-Pro Plus. Dans la coloration IF, la zone de coloration positive était normalisée à la surface du champ et exprimée en pourcentage, et la quantification était effectuée avec le même logiciel.

Culture primaire des macrophages de moelle osseuse (BMM) et test de comptage cellulaire

Les cellules de moelle osseuse ont été éliminées des fémurs et des tibias de souris C57BL/6 âgées de 2 mois à l’aide de solution saline tamponnée phosphate (PBS). La suspension à cellules résultante était filtrée à travers une tamoire de 70 μm et centrifugée à 200 x g pendant 5 minutes. Le pellet cellulaire a été resuspendu dans un milieu complet α-MEM contenant 10 % de sérum bovin fœtal. Après 24 heures d’incubation à 37 °C dans une atmosphère à 5 % de CO₂, les cellules non adhérentes ont été retirées. Pour induire la différenciation des macrophages, des cellules adhérentes ont été cultivées dans un milieu contenant 50 ng/mL de facteur stimulant la colonie de macrophages (M-CSF) et 40 ng/mL de RANKL pendant 5 à 7 jours jusqu’à l’observation de BMM mature.

Les MBM étaient placés à 3 x 104 cellules/puits dans des plaques à 96 puits. Après 24 heures de traitement avec des concentrations en gradient de LWDHW, les MBM ont été incubées avec une solution de travail du kit de comptage cellulaire à 10 % (CCK-8) à 37 °C pendant 1 heure. L’absorption de chaque puits était mesurée à 450 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques.

Analyse quantitative de l’expression génique sur les BMM primaires

Les BMM ont été ensemencés dans des plats de 6 cm à une densité de 3 x 106 cellules par plat. Après traitement avec 500 et 1 000 μg/mL de LWDHW pendant 24 heures, l’ARN total a été extrait des BMM à l’aide du kit de purification rapide à l’ARN selon les instructions du fabricant. Après quantification par spectrophotométrie, 500 ng d’ARN total ont été rétrotranscrits en ADNc. La PCR quantitative en temps réel (qRT-PCR) a été réalisée à l’aide d’amorces spécifiques à chaque gène (Tableau 2), et les conditions de cycle de la PCR étaient les suivantes : dénaturation initiale à 95 °C pendant 30 s, suivie de 40 cycles à 95 °C pendant 5 s et 60 °C pendant 30 s. Les niveaux d’expression génique ont été analysés à l’aide de la méthode 2ΔΔCt , avec GAPDH comme gène de référence interne.

Analyse du western blot sur les BMM primaires

Après avoir été dressés à 3 x 106 cellules par plat dans des plats de 6 cm, les BMM ont été traités par diverses interventions puis lysés sur glace avec un tampon de lyse RIPA. Les protéines totales ont été collectées et quantifiées à l’aide d’un kit de test protéique BCA. Des échantillons de protéines (30 μg par voie) ont été séparés par SDS-PAGE sur des gels de polyacrylamide à 12,5 % et transférés sur des membranes PVDF à 0,2 μm. Après un blocage de 20 minutes, les membranes ont été incubées toute la nuit à 4 °C avec les anticorps primaires suivants : P65 (1:1000), p-P65 (1:1000), IκBα (1:1000), p-IκBα (1:1000) et β-actine (1:1000). Le lendemain, des membranes ont été incubées avec un anticorps secondaire pendant 1 h à température ambiante. Les bandes protéiques ont été visualisées à l’aide d’un kit de détection chimiluminescence ECL et capturées à l’aide d’un système automatique d’analyse d’images chimiluminescences.

Coloration TRAP des tissus fémuraux et des BMM

Les coupes de tissu fémoral et les BMM plaquées en plaques à 24 puits à 1 x 10cellules de 5 puits ont été colorées à l’aide d’un kit de coloration par phosphatase acide résistante au tartrate (TRAP) selon le protocole du fabricant. La surface osseuse trabéculaire couverte d’ostéoclastes (Oc.S/BS) dans les sections tissulaires et la zone de formation d’ostéoclast dans les cultures de BMB ont été quantifiées à l’aide du logiciel Image-Pro Plus.

Analyse statistique

Toutes les données ont été présentées en moyenne ± écart-type. Une ANOVA unidirectionnelle suivie du test de Dunnett a été utilisée pour l’analyse statistique dans SPSS. *p < 0,05 et **p < 0,01 étaient considérés comme statistiquement significatifs.

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Résultats

Composants chimiques de LWDHW analysés par LC-MS/MS

Le profil chimique de la solution aqueuse de LWDHW a été caractérisé par analyse LC-MS/MS. Un total de 1615 composants ont été identifiés, dont 968 détectés en mode ionisation positive et 647 en mode ionisation négative (Figure 2A). Les détails des 10 principaux composants de chaque mode d’ionisation sont listés dans la Figu...

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Discussion

Avec le vieillissement de la population mondiale, le PMOP est devenu un problème sanitaire sérieux à l’échelle mondiale, touchant chaqueannée des millions de femmes 36. Compte tenu des effets secondaires associés aux médicaments anti-ostéoporotiques actuels, il est impératif de développer des stratégies thérapeutiques plus sûres et plus efficaces. LWDHW est une formule classique pour tonifier les reins en MTC et sert de médecine alternative pour traiter diverses m...

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Déclarations de divulgation

Tous les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêts financiers ou non financiers concurrents.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par la Fondation des sciences naturelles de la province du Zhejiang (ZCLQN25H2701).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
0,01 M tampon citrateSolarbioC1010Pour la récupération des antigènes des sections fémorales pour la coloration IHC et IF à l'étape 10 du protocole
Mémoires PVDF 0,2 μmBioRad1620177Pour l'électrotransfert des protéines du SDS-PAGE sur membrane à l'étape 13 du protocole
Gels de polyacrylamide à 12,5%Epizyme BiotechPG113Pour la séparation des protéines par SDS-PAGE à l'étape 13 du protocole
Anticorps ALPARIGOARG57422Pour la détection IHC dans les sections fémorales à l'étape 10 du protocole
Système d'analyse d'images de chimiluminescence automatiqueTanon5200Pour la visualisation des bandes Western blot à l'étape 13 du protocole
Système d'essai de fatigue axial-torsionInstronmodèle 5569R1412Pour les tests biomécaniques des échantillons fémoraux à l'étape 9 du protocole
Kit d'analyse des protéines BCABeyotimeP0010SPour la quantification des protéines avant le Western blot à l'étape 13 du protocole
CCK-8BeyotimeC0039Pour la mesure de la viabilité cellulaire des BMM dans l'étape 11 du protocole
CytoscapeNon applicableNon applicableVersion 3.8.0
Base de données DAVIDNon applicableNon applicableVersion 6.8; https://david.ncifcrf.gov/home.jsp
Base de données DisGeNETNon applicableNon applicablehttps://www.disgenet.org/
Kit de détection de chimiluminescence ECLVazymeE411-04Pour la détection chimiluminescente des signaux Western blot à l'étape 13 du protocole
Kit ELISA de OCNMEIMIANMM-0551M1Pour la mesure des taux sériques d'ostéocalcine à l'étape 8 du protocole
Kit ELISA de β-CTXMEIMIANMM-44858M1Pour la mesure des taux sériques de β-CTX à l'étape 8 du protocole
Base de données GeneCardsNon applicableNon applicablehttps://www.genecards.org/
Green Premix Ex Taq II FASTTakaraCN830APour l'amplification qRT-PCR à l'étape 12 du protocole
Équipement de micro-tomodensitométrie haute résolution (μCT)BrukerSkyscan 1176Pour l'imagerie μCT haute résolution de la microstructure osseuse fémorale à l'étape 9 du protocole
Anticorps IL-1βBIOSSbs6319RPour la détection IHC dans les sections fémorales à l'étape 10 du protocole
Anticorps IκBαCST4812Pour la détection Western blot à l'étape 13 du protocole
Base de données Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)Non applicableNon applicablehttps://www.kegg.jp/
M-CSFAMIZONAAMK1001-S1Pour induire la différenciation des BMM à l'étape 11 du protocole
Base de données MetascapeNon applicableNon applicablehttps://metascape.org/
Orbitrap Exploris 120Thermo Fisher ScientificBRE725531Pour l'analyse LC-MS/MS de LWDHW à l'étape 2 du protocole
Anticorps P65CST8242Pour la détection Western blot à l'étape 13 du protocole
Anticorps p-IκBαCST2859Pour la détection Western blot à l'étape 13 du protocole
Anticorps p-P65CST3033SPour la détection Western blot à l'étape 13 du protocole
Anticorps p-P65Suzhou RuiyingRLP0187Pour la détection IHC dans les sections fémorales à l'étape 10 du protocole
Kit de réactif de transcription inverse PrimeScript RTTakaraRR047APour la transcription inverse de l'ARN total dans les BMM pour l'analyse qRT-PCR à l'étape 12 du protocole
Système QuantStudio 5Applied BiosystemsA28573Pour l'analyse qRT-PCR des gènes marqueurs des ostéoclastes à l'étape 12 du protocole
RANKLAMIZONAAMK1001-S1Pour induire la différenciation des BMM à l'étape 11 du protocole
Tampon de lyse RIPAEpizyme BiotechPC101Pour l'extraction des protéines totales des BMM à l'étape 13 du protocole
Kit de purification rapide d'ARNTransGen BiotechER501-01-V2Pour l'extraction de l'ARN total dans les BMM à l'étape 12 du protocole
Logiciel SPSSIBMversion 26Pour l'analyse statistique des données expérimentales à l'étape 15 du protocole
Base de données STRINGNon applicableNon applicablehttps://string-db.org/
Kit de coloration à la phosphatase acide résistante au tartrate (TRAP)AMIZONAAMK1001-S1Pour la coloration TRAP pour identifier et quantifier les ostéoclastes à l'étape 14 du protocole
Système Thermo Vanquish UPLCThermo Fisher ScientificTSLC-002Pour l'analyse LC-MS/MS de LWDHW à l'étape 2 du protocole
Anticorps TNF-αSuzhou RuiyingRLM3472Pour la détection IHC dans les sections fémorales à l'étape 10 du protocole
Base de données Traditional Chinese Medicine System Pharmacology (TCMSP)Non applicableNon applicablehttp://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php
Base de données UniProtNon applicableNon applicablehttps://www.uniprot.org/
Colonne UPLCWatersACQUITY HSS T3Pour l'analyse LC-MS/MS de LWDHW à l'étape 2 du protocole
Outil en ligne VennyNon applicableNon applicablehttps://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html
Anticorps β-actineAbcamab8227Pour la détection Western blot à l'étape 13 du protocole

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