Ce protocole décrit l'évaluation de la formule modifiée de Xiaoyao San dans un modèle murin de dépression induite par un stress modéré imprévisible chronique, incluant des évaluations comportementales, histologiques et moléculaires de la nécroptose neuronale.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de recherche
Le Xiaoyao San modifié améliore les comportements de type dépressif et la nécroptose neuronale dans un modèle murin de stress chronique imprévisible léger
Dans cet article
Résumé
Résumé
La perte et les lésions neuronales sont des caractéristiques pathologiques importantes de la dépression, et la nécroptose a été proposée comme un mécanisme potentiel de mort cellulaire neuronale. L'analyse de jeux de données du Gene Expression Omnibus (GEO) (GSE54565, GSE54566 et GSE54568) a révélé une association entre la dépression et la nécroptose, suggérant que l'inhibition de cette voie pourrait représenter une stratégie thérapeutique potentielle. Le Xiaoyao San modifié (MXYS), une formulation modifiée du médicament traditionnel chinois Xiaoyao San, a été élaboré en incorporant des herbes aux propriétés d'élimination de la chaleur, de refroidissement du sang, d'amélioration cognitive et de stimulation de la ressuscitation afin d'accroître son efficacité thérapeutique. Toutefois, ses effets sur la nécroptose neuronale ainsi que les constituants actifs atteignant le tissu cérébral restent mal compris. La chromatographie liquide ultra-performante couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution (UHPLC-HRMS) a été utilisée pour identifier de manière préliminaire les constituants du MXYS détectés dans le tissu cérébral. L'efficacité thérapeutique a été évaluée chez un modèle murin de dépression induite par un stress modéré imprévisible chronique (CUMS) à l'aide d'évaluations comportementales, d'examens histologiques, d'immunofluorescence, de western blot et d'analyses bioinformatiques. L'administration du MXYS a été associée à une amélioration des comportements de type dépressif, à une atténuation des lésions cérébrales pathologiques et à une réduction de la phosphorylation de la protéine kinase 3 interagissant avec le récepteur (RIPK3) et de la protéine apparentée au domaine kinase de lignée mixte (MLKL). Ces résultats suggèrent que le MXYS exerce des effets de type antidépresseur associés à une diminution des marqueurs de nécroptose neuronale, fournissant ainsi un appui expérimental en faveur d'une exploration plus approfondie du MXYS comme stratégie thérapeutique potentielle contre la dépression.
Introduction
La dépression, un trouble mental grave appartenant au spectre des troubles de l'humeur, se caractérise principalement par une humeur basse persistante et est influencée par de nombreux facteurs1. Cliniquement, les patients souffrant de dépression présentent fréquemment des symptômes tels qu'une humeur dépressive, un ralentissement cognitif, une diminution de la communication verbale et de l'activité physique, et, dans les cas graves, des comportements auto-lésionnels et des idées suicidaires2. En raison de sa forte prévalence, de son taux de récurrence et de handicap élevés ainsi que de son association avec le suicide, la dépression constitue une cause majeure d'incapacité dans le monde entier et impose un fardeau social et économique considérable3. Selon l'Organisation mondiale de la Santé, la dépression devrait devenir d'ici 2030 la principale contribution au fardeau mondial des maladies, dépassant le cancer ainsi que les maladies cardiovasculaires et cérébrovasculaires3. De plus, la pandémie de la maladie à coronavirus 2019 (COVID-19) a été associée à une augmentation de 27,6 % de la prévalence mondiale du trouble dépressif majeur4. En Chine, la prévalence annuelle de la dépression est de 3,6 %, avec une prévalence au cours de la vie de 6,8 %5. La pathogénie de la dépression n'est pas encore entièrement comprise en raison de son étiologie complexe et de ses multiples facteurs contributifs. Par conséquent, les options thérapeutiques restent limitées, et environ 30 % à 40 % des patients développent une dépression résistante au traitement en raison d'une réponse insuffisante aux antidépresseurs actuellement disponibles6. En outre, le délai d'apparition de l'effet thérapeutique, la persistance des symptômes, la neurotoxicité et les effets indésirables associés aux antidépresseurs existants continuent de poser des défis thérapeutiques importants7.
La mort cellulaire programmée est depuis longtemps un axe majeur de la recherche biomédicale. Des preuves croissantes suggèrent que la dépression est associée à la nécroptose8,9,10,11. La nécroptose, tout comme l'apoptose, constitue une forme de mort cellulaire programmée ; toutefois, contrairement à l'apoptose, elle déclenche des réponses immunitaires et inflammatoires marquées12. En l'absence d'activité de la caspase-8, le facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α) se lie au récepteur 1 du facteur de nécrose tumorale (TNFR1), entraînant l'activation de la kinase 1 interagissant avec le récepteur de mort (RIPK1)13. La RIPK1 activée interagit avec la kinase 3 interagissant avec le récepteur de mort (RIPK3) pour former le complexe nécrosome, qui active ensuite la protéine apparentée au domaine kinase de lignée mixte (MLKL)14. Après oligomérisation, la MLKL transloque du cytoplasme vers la membrane plasmique, provoquant un gonflement des organites15,16, une altération de l'intégrité de la membrane cellulaire et la libération de contenus intracellulaires, notamment des motifs moléculaires associés aux lésions (DAMPs) et des médiateurs inflammatoires tels que le TNF-α, l'interleukine (IL)-1 et l'IL-6, amplifiant ainsi les réponses inflammatoires17. La nécroptose a été impliquée dans de nombreuses maladies inflammatoires et neurodégénératives, notamment la sclérose en plaques, la dépression, la sclérose latérale amyotrophique, la maladie de Parkinson et la maladie d'Alzheimer18,19,20. Des analyses protéomiques ont montré que la dépression induite par un stress modéré imprévisible chronique (CUMS) est associée à une surexpression de RIPK3 et de MLKL ainsi qu'à l'activation de la voie de la nécroptose2. Dans un autre modèle murin de dépression induite par CUMS, la fluoxétine exerce des effets antidépresseurs associés à l'inhibition de la nécroptose médiée par RIPK110. De plus, le Nec-1s, un inhibiteur de la nécroptose, s'est révélé capable d'atténuer les comportements de type dépressif induits par le lipopolysaccharide (LPS)21. Étant donné que les lésions neuronales constituent une caractéristique pathologique importante de la dépression, cibler la nécroptose pourrait représenter une stratégie thérapeutique prometteuse pour le traitement de cette affection.
La médecine traditionnelle chinoise (MTC) possède une longue histoire dans le traitement de la dépression. Selon la théorie de la MTC, le foie régule la libre circulation du qi ; par conséquent, la dépression est principalement attribuée à une détresse émotionnelle entraînant une stagnation du qi hépatique. En conséquence, la stratégie thérapeutique principale consiste à apaiser le foie et à soulager la dépression. Xiaoyao San (XYS) est une formule à base de plantes classique largement utilisée à cet effet, et de nombreuses données étayent son utilisation dans le traitement de la dépression22. De plus, on a signalé que XYS possède des propriétés anti-nécroptotiques23,24. Sur la base des concepts de la MTC selon lesquels « la dépression du foie se transforme en feu » et « le yang clair monte vers le cerveau », XYS a été modifié par l'ajout d'écorce de Moutan (Mudan Pi) et de fruit de Gardenia (Zhizi) afin de dissiper la chaleur et refroidir le sang, ainsi que de rhizome d’Acorus tatarinowii (Shi Changpu) et de racine de Polygala (Yuan Zhi) pour favoriser la fonction cognitive et la récupération neurologique. La formulation résultante a été nommée Xiaoyao San modifié (MXYS) et a été conçue pour offrir des effets thérapeutiques améliorés selon les principes de la MTC. Toutefois, aucune comparaison directe avec la formulation originale de XYS n’a été effectuée dans cette étude25. Des études cliniques ont démontré l’efficacité antidépressive de MXYS26,27,28, et ses effets thérapeutiques pourraient être associés à la régulation de l’axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien (AHS) et à l’inhibition de la neuroinflammation29,30,31. Néanmoins, il reste incertain si MXYS est associé à une réduction de la nécroptose neuronale.
Dans la présente étude, la chromatographie liquide ultra-performante couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution (UHPLC-HRMS) a été utilisée pour identifier de manière préliminaire les composés dérivés du MXYS détectés dans le tissu cérébral. Des ensembles de données publics du Gene Expression Omnibus (GEO) et des analyses bioinformatiques, incluant l'analyse de réseau de coexpression génique pondérée (WGCNA), l'analyse d'expression différentielle et l'analyse d'enrichissement, ont été utilisés pour explorer les associations entre le MXYS, la dépression et la nécroptose. Sur la base de ces résultats, nous avons émis l'hypothèse que le MXYS pourrait exercer des effets semblables à ceux d'un antidépresseur, associés à une réduction des marqueurs de nécroptose neuronale, la voie du facteur de transcription activateur 4 (ATF4)/protéine de liaison à l'élément de réponse à l'AMPc (CREB)/facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF) représentant un mécanisme corrélatif plausible. Pour évaluer cette hypothèse, les composés détectés dans le tissu cérébral ont été identifiés de manière préliminaire par UHPLC-HRMS, des analyses bioinformatiques ont été réalisées afin de déterminer des cibles thérapeutiques potentielles, et des expériences in vivo ont été menées pour examiner si le traitement par le MXYS est associé à des modifications des marqueurs de nécroptose et de la voie ATF4/CREB/BDNF. Ces résultats fournissent des éléments préliminaires appuyant l'application thérapeutique potentielle du MXYS dans la dépression, tout en reconnaissant que des études comparatives avec la formulation originale de XYS et une validation dose-réponse restent nécessaires.
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
Les expériences sur les animaux ont été approuvées par le comité d'éthique sur l'expérimentation animale de l'Université de médecine chinoise du Henan (numéro d'approbation : DWLLGZR202200023). Toutes les procédures ont été réalisées conformément aux lignes directrices institutionnelles et nationales relatives au bien-être animal et se sont conformées aux lignes directrices ARRIVE. Des rats mâles Sprague–Dawley (SD) ont été obtenus auprès d'un fournisseur agréé d'animaux de laboratoire. Les animaux ont été logés dans un environnement à température et humidité contrôlées, avec un cycle lumineux de 12 heures de lumière et 12 heures d'obscurité, et ont reçu une alimentation standard et de l'eau ad libitum.
Identification des composants présents dans le tissu cérébral contenus dans le MXYS
Préparation de la poudre de MXYS lyophilisée :
Les 11 herbes composant le MXYS ont été macérées dans 10 volumes d'eau distillée pendant 2 h, puis portées à ébullition pendant 40 min. La menthe poivrée a été ajoutée durant les 5 min finales de la décoction. Une seconde décoction a été préparée de la même manière en utilisant 8 volumes d'eau distillée. Les deux décoctions ont été combinées, filtrées à travers un tampon de gaze, concentrées sous pression réduite jusqu'à une concentration de 1 g/mL (équivalent en drogue brute), puis lyophilisées sous vide pendant 48 h afin d'obtenir la poudre de MXYS lyophilisée. Le rendement d'extraction était de 21,7 % (p/p)25,29,31.
Animaux et administration de MXYS :
Douze rats mâles SD ont été répartis aléatoirement en deux groupes et ont reçu soit MXYS, soit de l'eau purifiée deux fois par jour par gavage oral. Les deux administrations quotidiennes ont été effectuées à 8h00 et 20h00 (intervalle de 12 heures). La poudre de MXYS a été dissoute dans de l'eau purifiée et administrée à une dose de 24,4 g/kg (environ deux fois la dose clinique pour les rats)25. Le groupe témoin a reçu de l'eau purifiée en volume équivalent (10 mL/kg).
Préparation du tissu cérébral contenant MXYS :
Après 14 jours, tous les rats ont été anesthésiés avec du pentobarbital sodique (40 mg/kg, par voie intrapéritonéale) 2 h après la dernière administration de MXYS. Les tissus cérébraux ont été recueillis après une perfusion transcardiaque avec une solution saline normale. Les cerveaux entiers ont été immédiatement excisés et placés sur de la glace afin d'obtenir des échantillons de tissu cérébral témoin et de tissu cérébral traité au MXYS.
Conditions chromatographiques et de spectrométrie de masse et base de données :
La poudre de MXYS lyophilisée, des tissus cérébraux témoins dopés avec de la poudre de MXYS, des tissus cérébraux témoins et des extraits de tissus cérébraux contenant du MXYS ont été analysés à l’aide d’un système de chromatographie liquide à ultra-haute performance équipé d’une colonne HSS-T3 (100 × 2,1 mm, 1,8 μm) maintenue à 35 °C. Les phases mobiles étaient constituées d’eau contenant 0,1 % d’acide formique (phase mobile A) et d’acétonitrile contenant 0,1 % d’acide formique (phase mobile B). Les échantillons ont été séparés à un débit de 0,3 mL/min selon un gradient commençant à 5 % de B pendant 1 min, augmentant jusqu’à 98 % de B en 16 min, revenant à 5 % de B en 0,5 min, puis maintenu à 5 % de B pendant 2,5 min.
Des spectres de masse ont été obtenus en modes d'ionisation électrospray positive et négative, en utilisant une acquisition dépendante des données sur une plage de m/z de 90–1 300. Les spectres MS/MS ont été générés à partir des 10 ions précurseurs les plus intenses, en appliquant des énergies de dissociation par collision à haute énergie progressives de 20, 40 et 60 eV. La température du capillaire a été maintenue à 320 °C et celle du chauffage de la sonde a été réglée à 350 °C.
L'annotation des composés a été effectuée en comparant la masse exacte, la distribution isotopique et les spectres de MS/MS avec une base de données interne de médecine traditionnelle chinoise ainsi qu'avec les bases de données publiques GNPS32, ReSpect33 et MassBank34. Les composés présentant une correspondance fiable des spectres MS/MS et des formes de pics chromatographiques cohérentes ont été retenus. La liste complète des composés identifiés de manière préliminaire est fournie dans le Tableau supplémentaire 1.
Bioinformatique
Sélection et prétraitement des jeux de données à partir de la base de données GEO :
L'implication potentielle de la nécroptose dans la pathologie de la dépression a été étudiée en interrogeant la base de données GEO à l'aide du mot-clé « dépression ». Selon les critères de sélection, trois jeux de données (GSE54566, GSE54565 et GSE54568) ont été retenus pour une analyse approfondie. Ces jeux de données provenaient de différentes régions cérébrales : GSE54565 (cortex cingulaire antérieur), GSE54566 (amygdale) et GSE54568 (cortex préfrontal dorsolatéral, BA9). Tous les jeux de données ont été générés à l'aide de la plateforme Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0 Array (GPL570) et comprenaient des échantillons de tissu cérébral post-mortem provenant de patients atteints de trouble dépressif majeur (TDM) et de témoins non psychiatriques. Les caractéristiques détaillées des échantillons pour chaque jeu de données sont résumées dans le Tableau supplémentaire 2. Ces jeux de données comprenaient des données transcriptomiques provenant de trois régions cérébrales impliquées dans la dépression. Une analyse différentielle de l'expression génique a été réalisée entre les groupes TDM et témoins pour chaque jeu de données, et les gènes régulés à la hausse et à la baisse de manière cohérente ont été intégrés à l'aide du package R Robust Rank Aggregation (RRA).
Tous les jeux de données ont été prétraités à l'aide de l'algorithme robust multi-array average (RMA) pour la correction du fond et la normalisation. Après la normalisation RMA, l'algorithme ComBat implémenté dans le package R sva a été appliqué pour ajuster les effets de lot entre les jeux de données, l'origine des jeux de données étant considérée comme la covariable de lot. Cette procédure a réduit la variation technique entre les jeux de données et amélioré leur comparabilité pour les analyses ultérieures.
Les analyses bioinformatiques ont été réalisées à l'aide du logiciel R (version 4.2.1). Les principaux packages R utilisés comprenaient ClusterProfiler (version 4.8.2) pour les analyses d'enrichissement en ontologie génique (GO) et dans l'Encyclopédie de Kyoto des gènes et des génomes (KEGG), WGCNA (version 1.72) pour l'analyse de réseau de coexpression génique pondérée, RRA pour l'intégration des gènes différentiellement exprimés, et sva (version 3.48.0) pour la correction de biais par méthode ComBat. Le flux de travail analytique comprenait l'acquisition des données, la normalisation RMA, la correction de biais ComBat, l'analyse d'expression différentielle avec intégration RRA, la construction de modules WGCNA, les analyses d'enrichissement GO et KEGG avec un taux de fausses découvertes (FDR) < 0,05, et la prédiction de cibles par analyse du réseau d'interactions protéine-protéine (PPI).
Utilisation de WGCNA pour construire des réseaux de gènes de co-expression et identification des modules significativement associés à la dépression et à la nécroptose :
WGCNA construit des réseaux de co-expression génique pondérés en appliquant une puissance de seuil doux (valeur β) afin d'approcher une topologie sans échelle. La valeur β a été choisie lorsque le coefficient de corrélation entre log(k) et log(p(k)) atteignait au moins 0,9. Après sélection de la valeur β, les modules de gènes ont été identifiés à l'aide de la méthode de découpage dynamique de l'arbre. Les paramètres supplémentaires ont été définis comme suit : minModuleSize = 30, cutHeight = 0,25 et deepSplit = 2. La valeur β a été choisie lorsque le coefficient de corrélation entre log(k) et log(p(k)) atteignait au moins 0,9. Une puissance de seuil doux de β = 7 a été utilisée pour la construction du réseau. L'Eigenmodule (ME) a été calculé pour chaque module afin de résumer les profils d'expression génique et d'évaluer les associations avec les caractères biologiques. La Significativité des Gènes (GS) et l'Appartenance au Module (MM) ont ensuite été calculées, et les relations entre modules et caractères ont été évaluées à l'aide du coefficient de corrélation (cor) et de la valeur p correspondante. Des coefficients de corrélation plus élevés et des valeurs p plus faibles indiquaient des associations plus fortes entre les modules de gènes et les caractères biologiques.
Analyse d'enrichissement fonctionnel et construction du réseau PPI :
ClusterProfiler a été utilisé pour effectuer une analyse d'enrichissement des voies KEGG. La méthode FDR de Benjamini–Hochberg a été appliquée pour la correction des tests multiples, et une valeur p ajustée (FDR) < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Après identification du module cible, les gènes clés de ce module ont été croisés avec les gènes associés à MXYS et à la nécroptose. Un réseau PPI a ensuite été construit à l'aide de la base de données STRING.
Prédiction des cibles pour les composés détectés dans le tissu cérébral :
Les 143 composés identifiés de manière préliminaire dans le tissu cérébral de rat après l'administration de MXYS ont été utilisés pour la prédiction des cibles. Pour chaque composé, les cibles potentielles ont été extraites de la base de données GeneCards à l'aide de la fonction « Cibles associées » avec un score de pertinence > 5. Les cibles en double ont été fusionnées, et seuls les gènes humains dotés de symboles génétiques officiels ont été conservés, ce qui a donné 3 164 cibles uniques. Ces cibles ont fait l'objet d'analyses d'enrichissement GO et KEGG à l'aide du package R ClusterProfiler, un FDR < 0,05 étant considéré comme statistiquement significatif. L'ensemble génique de référence comprenait tous les gènes humains codant des protéines et annotés dans la base de données KEGG.
Vérification expérimentale
Culture cellulaire :
Les cellules HT-22 ont été obtenues auprès de Procell Life Science & Technology Co., Ltd. (CL-0697, RRID : CVCL_0321) et cultivées dans un milieu de croissance supplémenté avec 10 % de sérum bovin fœtal (FBS) et 100 U/mL de pénicilline/streptomycine. Les cellules ont été maintenues à 37 °C dans un incubateur humidifié contenant 5 % de CO₂.
Activité anti-nécroptose du MXYS :
La poudre lyophilisée de MXYS a été reconstituée dans un milieu de croissance cellulaire à une concentration de 1,0 g/mL, stérilisée à l’aide d’un filtre membranaire de 0,22 μm et conservée à −20 °C jusqu’à utilisation. Les cellules HT-22 ont été ensemencées à une densité de 8 000 cellules par puits dans des plaques de 96 puits, avec trois puits par groupe. Le MXYS a été dilué dans le milieu de croissance à des concentrations finales de 2, 4 et 6 mg/mL. Après une incubation de 12 h, les cellules ont été traitées avec du chlorhydrate de SM-164 (10 nM) et de l’inhibiteur de caspase z-VAD-fmk (20 μM) pendant 30 min, puis stimulées avec du facteur de nécrose tumorale-α humain (h-TNF-α ; 20 ng/mL) pendant 12 h supplémentaires. La viabilité cellulaire a été évaluée à l’aide d’un test de viabilité cellulaire luminescent selon les instructions du fabricant. La luminescence a été mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques. La morphologie cellulaire a été examinée au microscope inversé, et des images représentatives ont été acquises pour analyse.
Animaux :
Les expériences sur les animaux ont été approuvées par le comité d'éthique pour l'expérimentation animale de l'Université de médecine chinoise du Henan (numéro d'approbation : DWLLGZR202200023). Toutes les procédures ont été réalisées conformément aux lignes directrices institutionnelles et nationales relatives au bien-être animal et se sont conformées aux recommandations ARRIVE. Seuls des souris mâles BALB/c âgées de 6 à 8 semaines ont été utilisées pour la mise en place du modèle CUMS. Les animaux ont été logés dans un environnement à température et humidité contrôlées, avec un cycle lumineux de 12 heures de lumière et 12 heures d'obscurité, et ont reçu de la nourriture standard et de l'eau ad libitum.
Modèle de dépression induite par CUMS :
Les souris ont été réparties aléatoirement en un groupe témoin ou un groupe CUMS. Après une semaine d'acclimatation, les souris du groupe CUMS ont été soumises à des stress modérés intermittents et imprévisibles, tandis que les souris témoins n'ont pas été perturbées. Le protocole de stress comprenait 13 stress différents, notamment l'inclinaison de la cage, l'agitation de la cage, le changement de cage, la litière humide, la privation d'eau, l'illumination stroboscopique, l'exposition au bruit, la lumière continue, l'obscurité continue, l'éclairage intermittent, la natation en eau froide (4 °C), la natation en eau chaude (40 °C), le stress de contention et d'autres stress modérés. Chaque stress était appliqué pendant 2 à 6 heures par séance, selon une séquence aléatoire afin de maintenir l'imprévisibilité. Les souris étaient exposées chaque jour à un ou deux stress différents selon un planning aléatoire.
Groupes et traitement médicamenteux :
Après six semaines d'exposition au CUMS, les souris ont été réparties aléatoirement en groupes traités par CUMS, MXYS, paroxétine ou Nec-1. Le groupe MXYS a reçu par gavage oral de la poudre de MXYS lyophilisée à raison de 35,2 g/kg/jour. Le groupe paroxétine a reçu de la paroxétine (20 mg/kg) par gavage oral, tandis que le groupe Nec-1 a reçu du Nec-1 (10 mg/kg) par injection intrapéritonéale pendant quatre semaines consécutives. Pendant la même période, les groupes témoin et CUMS ont reçu un volume équivalent de sérum physiologique par gavage oral.
Expériences comportementales :
Les souris ont été réparties aléatoirement dans les groupes expérimentaux à l'aide d'une séquence de nombres aléatoires générée par ordinateur avant le début de l'administration du médicament. La séquence de randomisation a été générée par un chercheur indépendant qui n'a pas participé aux expériences ultérieures ni à l'analyse des données.
Les tests comportementaux ont été réalisés par un investigateur aveugle aux groupes de traitement. Le même investigateur a effectué l'évaluation comportementale basée sur vidéo (temps d'immobilité, distance parcourue et temps passé au centre) à l'aide d'un logiciel de suivi automatisé afin de minimiser les biais subjectifs. L'investigateur en insu n'a eu accès aux codes d'affectation des groupes qu'une fois que toutes les données comportementales eurent été collectées et enregistrées.
Les analyses par immunofluorescence ont été réalisées par un chercheur distinct, également aveugle quant aux groupes expérimentaux. Les échantillons ont été étiquetés à l'aide d'identifiants codés, et l'affectation aux groupes n'a été révélée qu'après la fin des mesures densitométriques ou de l'intensité de fluorescence. Les analyses statistiques ont été effectuées par un troisième investigateur, qui était aveugle tant à l'affectation aux groupes qu'aux résultats expérimentaux correspondants, jusqu'à ce que toutes les données quantitatives aient été regroupées.
Test de préférence pour le saccharose (SPT) : Les tests comportementaux ont été réalisés après la dernière administration du médicament. Avant les tests, les souris ont été habituées à une solution de saccharose à 1 % en leur fournissant deux bouteilles contenant une solution de saccharose à 1 % pendant 12 h, suivies d'une bouteille contenant une solution de saccharose à 1 % et d'une bouteille contenant de l'eau potable pendant encore 12 h. Les souris ont ensuite été privées de nourriture et d'eau pendant 12 h avant le test formel. Pendant le test, chaque souris a reçu une bouteille contenant une solution de saccharose à 1 % et une bouteille contenant de l'eau potable. Après 12 h, le volume consommé à partir de chaque bouteille a été mesuré. La préférence pour le saccharose a été calculée comme suit :
Test de suspension par la queue (TST) : La queue de chaque souris a été fixée en haut de l'appareil d'essai à l'aide de ruban adhésif. Le comportement des souris a été enregistré pendant 6 min à l'aide d'un logiciel d'enregistrement et d'analyse vidéo du comportement. La durée d'immobilité au cours des 4 dernières minutes de l'essai a été quantifiée.
Test du champ ouvert (OFT) : Chaque souris a été placée individuellement au centre de l'appareil de champ ouvert. L'activité comportementale a été enregistrée et analysée pendant 5 min à l'aide d'un logiciel de suivi comportemental, incluant la distance parcourue et l'activité locomotrice. Après chaque test, l'appareil a été nettoyé avec de l'éthanol à 75 %.
Prélèvement des échantillons :
Les souris décédées pendant la procédure CUMS ou présentant des signes de maladie sévère (perte de poids corporel >20 %, infection visible ou incapacité à se déplacer) ont été exclues de l'étude. L'euthanasie a été réalisée par du personnel certifié à l'aide d'une surdose de pentobarbital sodique (150 mg/kg, par voie intrapéritonéale). Après perte de conscience, une dislocation cervicale a été effectuée comme méthode secondaire pour s'assurer du décès. Pour les analyses par coloration de Nissl et par immunofluorescence, trois souris ont été sélectionnées aléatoirement dans chaque groupe. Les tissus hippocampiques destinés à l'analyse par immunobuvardage ont été disséqués immédiatement sur glace et congelés rapidement dans l'azote liquide.
Coloration de Nissl :
Pour les analyses histologiques de coloration de Nissl et d'immunofluorescence, les souris ont été profondément anesthésiées au pentobarbital sodique (150 mg/kg, par voie intrapéritonéale) puis décapitées sans perfusion transcardiaque. Les cerveaux ont été rapidement extraits et fixés dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant 24 à 48 heures avant l'inclusion en paraffine. Des coupes en paraffine d'une épaisseur de 3 μm ont été réalisées. Les sections en paraffine ont été déparaffinisées par incubation successive dans une solution de déparaffinage, de l'éthanol absolu et de l'éthanol à 75 %, puis rincées à l'eau courante. Lorsque cela s'appliquait, les sections congelées ont été portées à température ambiante, fixées avec un fixateur tissulaire pendant 15 minutes, puis rincées à l'eau courante. Les sections tissulaires ont été colorées avec la solution de coloration de Nissl pendant 2 à 5 minutes, rincées à l'eau, différenciées à l'acide acétique glacé à 0,1 %, lavées pour arrêter la réaction, examinées au microscope afin de contrôler la différenciation, séchées, clarifiées dans le xylène pendant 10 minutes, puis montées avec un milieu de montage neutre.
Immunofluorescence :
Les procédures d'immunofluorescence ont été réalisées selon des méthodes standard. Le tissu cérébral a été fixé dans du paraformaldéhyde à 4 % et inclus dans de la paraffine pour la coloration par immunofluorescence. Les coupes de tissu ont été incubées toute la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires dirigés contre NeuN (1:200), MLKL (1:300), ATF4 (1:5000) et CREB (1:1000). Après incubation avec les anticorps primaires, les coupes ont été lavées quatre fois au PBS puis incubées pendant 1 h à l'obscurité avec les anticorps secondaires fluorescents correspondants : immunoglobuline G de chèvre anti-souris conjuguée à CY3 (1:300, Servicebio, GB21301) pour l'anticorps anti-ATF4 de souris ; immunoglobuline G de chèvre anti-souris conjuguée à Alexa Fluor 488 (1:400, Servicebio, GB25301) pour l'anticorps anti-MLKL de souris ; immunoglobuline G de chèvre anti-lapin conjuguée à CY3 (1:300, Servicebio, GB21303) pour l'anticorps anti-NeuN de lapin ; et immunoglobuline G de chèvre anti-lapin conjuguée à Alexa Fluor 488 (1:400, Servicebio, GB25303) pour l'anticorps anti-CREB de lapin. Les coupes ont ensuite été colorées avec le DAPI pendant 10 min à température ambiante, lavées au PBS, montées avec un milieu de montage antifade, et les images de fluorescence ont été acquises par microscopie confocale.
Immunotransfert :
Les tissus cérébraux ont été homogénéisés dans un tampon de lyse RIPA (radioimmunoprécipitation assay). Les concentrations protéiques ont été déterminées, puis 20 μg de protéines totales par piste ont été séparés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium à 10 % (SDS-PAGE), avant transfert sur membranes de fluorure de polyvinylidène (PVDF). Après blocage, les membranes ont été incubées toute la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires (1:1000), puis avec des anticorps secondaires conjugués à la peroxydase de raifort (HRP) pendant 1 h. Les bandes protéiques ont été visualisées à l’aide d’un système d’imagerie chimiluminescent, et l’intensité des bandes a été quantifiée à l’aide du logiciel ImageJ. Pour l’analyse par immunotransfert de tissus hippocampiques, deux souris par groupe ont été analysées, et des immunoblots représentatifs sont présentés. Pour les expériences sur les cellules HT-22, l’analyse par immunotransfert a été réalisée une fois comme expérience représentative. Ces données sont présentées comme des observations qualitatives de tendance plutôt que comme des résultats quantifiés statistiquement.
Analyse statistique :
Les différences entre les groupes ont été analysées à l'aide d'une analyse de variance à un facteur (ANOVA) suivie du test de comparaison multiple de Tukey. Les données sont exprimées comme la moyenne ± l'écart type (SD). Une valeur de p < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
Disponibilité des données :
Les jeux de données générés et analysés au cours de cette étude sont inclus dans cet article publié et ses matériaux supplémentaires. Les résultats d'identification des composés par UHPLC-HRMS sont fournis dans le Tableau Supplémentaire 1, et les caractéristiques des jeux de données GEO utilisés pour les analyses bioinformatiques sont résumées dans le Tableau Supplémentaire 2. D'autres données complémentaires, incluant l'immunofluorescence GFAP (Figure Supplémentaire 1), la coloration immunofluorescente de p-RIPK3 et de p-MLKL (Figure Supplémentaire 2), le schéma expérimental et la chronologie d'allocation des animaux (Figure Supplémentaire 3), ainsi que les images brutes non recadrées des immunotransferts (Figure Supplémentaire 4), sont disponibles dans les matériaux supplémentaires.
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
WGCNA identifie un module génique associé à la dépression enrichi dans la voie de la nécroptose
Le logiciel RRA a été utilisé pour intégrer les gènes exprimés de manière différentielle régulièrement surexprimés et sous-exprimés à partir des jeux de données GSE54566, GSE54565 et GSE54568, permettant ainsi d'identifier 2 513 gènes. Une carte thermique de ces gènes est présentée dans la Figure 1A. Les trois jeux de données proviennent de régions cérébrales distinctes — le c...
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
La mort neuronale anormale joue un rôle crucial dans la pathogenèse de la dépression8. La nécroptose, une forme de mort cellulaire programmée, a été largement étudiée, conduisant à des progrès importants dans le développement d'inhibiteurs ciblant cette voie39. Depuis l'identification en 2005 de l'inhibiteur de la nécroptose Nec-140, des avancées considérables ont été réalisées dans la conception de composés ciblant des éléments clés de la voie de si...
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Conflits d'intérêts :
Les auteurs n'ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par le projet de recherche scientifique clé des établissements d'enseignement supérieur du Henan, Chine (n° 26A360008), le projet de recherche scientifique de médecine traditionnelle chinoise de la province du Henan (n° 2025ZY3152), la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n° 82274496), le projet de recherche scientifique et technologique de la province du Henan (n° 232301420018), ainsi que par le projet d'héritage et d'innovation Zhang Zhongjing du Département des sciences et technologies de l'Administration nationale de la médecine traditionnelle chinoise (n° GZY-KJS-2022-044-1).
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Rhizome d’Acori Tatarinowii (Acorus tatarinowii Schott ; Shi Changpu) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | 231001 | Ingrédient végétal (12 g) |
| Adhésif | Non applicable | Non applicable | Test de suspension par la queue |
| Radix Angelicae Sinensis (Angelica sinensis (Oliv.) Diels ; Dang Gui) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | G01230507-16 | Ingrédient végétal (10 g) |
| Anticorps anti-ATF4 (immunofluorescence) | Servicebio | GB111137 | Anticorps primaire |
| Anticorps anti-ATF4 (immunobuvardage western) | MedChemExpress | HY-P80486 | Anticorps primaire |
| Anticorps anti-BDNF | MedChemExpress | HY-P80567 | Anticorps primaire pour immunobuvardage western |
| Anticorps anti-CREB | Beyotime | AF1018 | Anticorps primaire pour immunobuvardage western et immunofluorescence |
| Anticorps anti-GAPDH | Abcam | ab181602 | Témoin de chargement |
| Anticorps anti-MLKL | Proteintech | 66675-1-Ig | Anticorps primaire pour immunobuvardage western et immunofluorescence |
| Anticorps anti-NeuN | Servicebio | GB11138 | Anticorps primaire pour immunofluorescence |
| Anticorps anti-CREB phosphorylé | Beyotime | AF5785 | Anticorps primaire |
| Anticorps anti-MLKL phosphorylé | Bioss | bsm-54104R | Anticorps primaire |
| Anticorps anti-RIPK1 phosphorylé | Biolynx | BX60008 | Anticorps primaire |
| Anticorps anti-RIPK3 phosphorylé | Abcam | ab195117 | Anticorps primaire |
| Anticorps anti-RIPK1 | Cell Signaling Technology | 3493S | Anticorps primaire |
| Anticorps anti-RIPK3 | Proteintech | 17563-1-AP | Anticorps primaire |
| Atractylodes macrocephala (Atractylodes macrocephala Koidz. ; Bai Zhu) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | 230801 | Ingrédient végétal (10 g) |
| Logiciel automatisé de suivi du comportement | Panlab (Harvard Apparatus) | N/A | Logiciel de suivi vidéo SMART 3.0 pour les tests en champ ouvert et de suspension par la queue |
| Kit d’analyse protéique BCA | CWBIO | CW0014S | Quantification des protéines |
| Système d’enregistrement comportemental | Panlab (Harvard Apparatus) | SMART V3.0 | Tests en champ ouvert et de suspension par la queue |
| Système d’imagerie par chimiluminescence Bio-Rad | Bio-Rad | 12003154 | Système d’imagerie ChemiDoc MP pour la détection par chimiluminescence en immunobuvardage western |
| Kit d’essai de viabilité cellulaire CellTiter-Lumi II par luminescence | Beyotime | C0056XL | Essai de viabilité cellulaire |
| Microscope confocal | Nikon Eclipse C1 | N/A | Imagerie par immunofluorescence |
| DAPI | Servicebio | G1012 | Colorant nucléaire |
| Solution de déparaffinage environnementale | Servicebio | G1128 | Déparaffinage de paraffine |
| Sérum bovin fœtal (FBS) | BI | C04001-500 | Complément pour culture cellulaire |
| Fructus Gardeniae (Gardenia jasminoides J. Ellis ; Zhi Zi) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | 22102109 | Ingrédient végétal (12 g) |
| Radix Glycyrrhizae (Glycyrrhiza uralensis Fisch. ; Gan Cao) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | 230301 | Ingrédient végétal (3 g) |
| Immunoglobuline de chèvre anti-souris IgG conjuguée à CY3 | Servicebio | GB21301 | Anticorps secondaire fluorescent pour anti-ATF4 de souris (IF, CY3, 1:300) |
| Immunoglobuline de chèvre anti-souris IgG conjuguée à Alexa Fluor 488 | Servicebio | GB25301 | Anticorps secondaire fluorescent pour anti-MLKL de souris (IF, Alexa Fluor 488, 1:400) |
| Immunoglobuline de chèvre anti-lapin IgG conjuguée à CY3 | Servicebio | GB21303 | Anticorps secondaire fluorescent pour anti-NeuN de lapin (IF, CY3, 1:300) |
| Immunoglobuline de chèvre anti-lapin IgG conjuguée à Alexa Fluor 488 | Servicebio | GB25303 | Anticorps secondaire fluorescent pour anti-CREB de lapin (IF, Alexa Fluor 488, 1:400) |
| Immunoglobuline de chèvre anti-lapin IgG conjuguée à HRP | Absin | abs20040 | Anticorps secondaire pour immunobuvardage western |
| Chaîne légère d’immunoglobuline de souris anti-lapin IgG conjuguée à HRP | ABclonal | AS061 | Anticorps secondaire pour immunobuvardage western |
| TNF-α humain | Novoprotein | C008 | Inducteur de nécroptose |
| Cellules HT-22 | Procell | CL-0697 | RRID : CVCL_0321 |
| Milieu de croissance HyClone | Cytiva (HyClone) | SH30022.01 | Milieu de culture cellulaire |
| ImageJ | NIH | Logiciel gratuit | Quantification des bandes |
| Microscope inversé | Nikon | Eclipse Ti-SR | Morphologie cellulaire |
| Azote liquide | Henan Jilai New Energy Technology Co., Ltd. | N/A | Préservation des tissus |
| Lecteur de microplaques Molecular Devices | Molecular Devices | SpectraMax M5 | Mesure de la luminescence |
| Cortex Moutan (Paeonia suffruticosa Andr. ; Mu Danpi) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | 22121714 | Ingrédient végétal (12 g) |
| Nécrostatine-1 (Nec-1) | Selleck | S8037 | Inhibiteur de RIPK1 |
| Paraformaldéhyde | Servicebio | G1101-500ML | Fixation des tissus |
| Paroxétine hémisulfate hémihydratée | Aladdin | P129711 | Témoin positif |
| PBS | Servicebio | G4202-500ML | Solution de lavage |
| Menthe poivrée (Mentha haplocalyx Briq. ; Bo He) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | 230101 | Ingrédient végétal (6 g) |
| Pénicilline–streptomycine | Gibco | 15140-122 | Antibiotique pour culture cellulaire |
| Radix Polygalae (Polygala tenuifolia Willd. ; Yuan Zhi) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | 20221101 | Ingrédient végétal (12 g) |
| Mébrane de fluorure de polyvinylidène (PVDF) | Merck Millipore | ISEQ00010 | Immunobuvardage western |
| Poria (Wolfiporia cocos ; Fu Ling) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | D23070601 | Ingrédient végétal (15 g) |
| Solution de lyse RIPA (radioimmunoprécipitation assay) | CWBIO (Jiangsu Cowin Biotech Co., Ltd.) | CW2333S | Extraction protéique |
| Radix Bupleuri (Bupleurum chinense DC. ; Chai Hu) | Beijing Tongrentang Co., Ltd., Zhengzhou, Chine | 230801 | Ingrédient végétal (12 g) |
| Réactifs SDS-PAGE | Solarbio ; Servicebio ; Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd. | Non applicable | Acrylamide, bis-acrylamide, Tris, SDS, APS et TEMED préparés en interne |
| Pentobarbital de sodium | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 69020181 | Anesthésique |
| Système de chromatographie liquide ultra-performante | Thermo Fisher Scientific | Système Vanquish UHPLC | Analyse LC-MS |
| Colonne UHPLC HSS-T3 (100 × 2,1 mm, 1,8 μm) | Waters | 186003539 | Séparation chromatographique |
| z-VAD-fmk | TargetMol | T6013 | Inhibiteur pan-caspase |
Références
- Zhang Y, et al. Natural volatile oils derived from herbal medicines: A promising therapy way for treating depressive disorder. Pharmacol Res. 2021;164:105376.
- O’Connor EA, et al. Depression and suicide risk screening: Updated evidence report and systematic review for the US Preventive Services Task Force. JAMA. 2023;329(23):2068-85.
- World Health Organization. The global burden of disease: 2004 update. World Health Organization; Geneva; 2008.
- Pedrosa-Naudín MA, et al. Non-adherence to antidepressant treatment and related factors in a region of Spain: A population-based registry study. Pharmaceutics. 2022;14(12):2696.
- Huang Y, et al. Prevalence of mental disorders in China: A cross-sectional epidemiological study. Lancet Psychiatry. 2019;6(3):211-24.
- Thase ME. New medications for treatment-resistant depression: A brief review of recent developments. CNS Spectr. 2017;22(S1):39-48.
- Monteggia LM, Malenka RC, Deisseroth K. Depression: The best way forward. Nature. 2014;515(7526):200-1.
- Cao H, et al. Hippocampal proteomic analysis reveals activation of necroptosis and ferroptosis in a mouse model of chronic unpredictable mild stress-induced depression. Behav Brain Res. 2021;403:113261.
- Sun Y, et al. Dysmyelination by oligodendrocyte-specific ablation of Ninj2 contributes to depressive-like behaviors. Adv Sci (Weinh). 2022;9(3):e2103065.
- Zeb S, et al. Necroptotic kinases are involved in the reduction of depression-induced astrocytes and fluoxetine’s inhibitory effects on necroptotic kinases. Front Pharmacol. 2022;13:1060954.
- Duan YW, Chen SX, Li QY, Zang Y. Neuroimmune mechanisms underlying neuropathic pain: The potential role of the TNF-α-necroptosis pathway. Int J Mol Sci. 2022;23(13):7191.
- Frank D, Vince JE. Pyroptosis versus necroptosis: Similarities, differences, and crosstalk. Cell Death Differ. 2019;26(1):99-114.
- Vandenabeele P, Galluzzi L, Vanden Berghe T, Kroemer G. Molecular mechanisms of necroptosis: An ordered cellular explosion. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010;11(10):700-14.
- Linkermann A, Green DR. Necroptosis. N Engl J Med. 2014;370(5):455-65.
- Sun L, et al. Mixed lineage kinase domain-like protein mediates necrosis signaling downstream of RIP3 kinase. Cell. 2012;148(1-2):213-27.
- Cai Z, et al. Plasma membrane translocation of trimerized MLKL protein is required for TNF-induced necroptosis. Nat Cell Biol. 2014;16(1):55-65.
- Kaczmarek A, Vandenabeele P, Krysko DV. Necroptosis: The release of damage-associated molecular patterns and its physiological relevance. Immunity. 2013;38(2):209-23.
- Wallach D, Kang TB, Kovalenko A. Concepts of tissue injury and cell death in inflammation: A historical perspective. Nat Rev Immunol. 2014;14(1):51-9.
- Yuan J, Amin P, Ofengeim D. Necroptosis and RIPK1-mediated neuroinflammation in CNS diseases. Nat Rev Neurosci. 2019;20(1):19-33.
- Mitroshina EV, Saviuk M, Vedunova MV. Necroptosis in CNS diseases: Focus on astrocytes. Front Aging Neurosci. 2022;14:1016053.
- Gong Q, et al. RIPK1 inhibition mitigates neuroinflammation and rescues depressive-like behaviors in a mouse model of LPS-induced depression. Cell Commun Signal. 2024;22(1):427.
- Kwon TG, et al. A review of antidepressant and anxiolytic effects of Soyo-san (Xiaoyao-san) and modified Soyo-san in animal models. Phytomedicine. 2024;135:155387.
- Jiao H, et al. Xiaoyaosan ameliorates CUMS-induced depressive-like and anorexia behaviors in mice via necroptosis-related cellular senescence in the hypothalamus. J Ethnopharmacol. 2024;318(Pt A):116938.
- Yan ZY, et al. Antidepressant mechanism of traditional Chinese medicine formula Xiaoyaosan in a CUMS-induced depressed mouse model via RIPK1-RIPK3-MLKL-mediated necroptosis based on network pharmacology analysis. Front Pharmacol. 2021;12:773562.
- Wu M, et al. Integration of network pharmacology and experimental verification to reveal the active components and molecular mechanism of modified Danzhi Xiaoyao San in the treatment of depression. J Ethnopharmacol. 2025;337:118739.
- Chen X, et al. Therapeutic effect of Jiawei Danzhi Xiaoyao Powder combined with intravenous human umbilical cord mesenchymal stem cells on post-stroke depression. Chin J Pathophysiol. 2019;35(12):2274-79.
- Zhang J. Clinical observation of Shugan Jiannao Tiaoyu Tablets in the treatment of 30 cases of depression. New J Tradit Chin Med. 2008;40(11):48-49.
- Zhang J, Zhang B. Thirty-five patients with post-stroke depression were treated with Shugan Jiannao Tiaoyu Tablets. New J Tradit Chin Med. 2006;38(3):75-76.
- Su P, et al. Modified Xiaoyao San reverses lipopolysaccharide-induced depression-like behavior through suppressing microglial M1 polarization by enhancing autophagy via the PI3K/AKT/mTOR pathway in mice. J Ethnopharmacol. 2023;308:116659.
- Guo X, et al. Effect of Jiawei Danzhi Xiaoyao Powder on mineralocorticoid receptor and glucocorticoid receptor in the hippocampus of depression model rats. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 2014;20(11):119-22.
- Wang B, et al. Modified Danzhi Xiaoyaosan inhibits neuroinflammation by regulating the TRIM31/NLRP3 inflammasome in chronic unpredictable mild stress-induced depression. Exp Gerontol. 2024;187:112451.
- Wang M, et al. Sharing and community curation of mass spectrometry data with Global Natural Products Social Molecular Networking. Nat Biotechnol. 2016;34(8):828-37.
- Sawada Y, et al. RIKEN tandem mass spectral database (ReSpect) for phytochemicals: A plant-specific MS/MS-based data resource and database. Phytochemistry. 2012;82:38-45.
- Horai H, et al. MassBank: A public repository for sharing mass spectral data for life sciences. J Mass Spectrom. 2010;45(7):703-14.
- Wang M, et al. Targeting programmed cell death in inflammatory bowel disease through natural products: New insights from molecular mechanisms to targeted therapies. Phytother Res. 2024;38:4587-611.
- Huang X, et al. Shikonin overcomes drug resistance and induces necroptosis by regulating the miR-92a-1-5p/MLKL axis in chronic myeloid leukemia. Aging (Albany NY). 2020;12(17):17662-80.
- Yuan J, Najafov A, Py BF. Roles of caspases in necrotic cell death. Cell. 2016;167(7):1693-704.
- Mu R, et al. Activation of TGR5 ameliorates streptozotocin-induced cognitive impairment by modulating apoptosis, neurogenesis, and neuronal firing. Oxid Med Cell Longev. 2022;2022:3716609.
- Gardner CR, et al. From (tool)bench to bedside: The potential of necroptosis inhibitors. J Med Chem. 2023;66(4):2361-85.
- Degterev A ,et al. Chemical inhibitor of nonapoptotic cell death with therapeutic potential for ischemic brain injury. Nat Chem Biol. 2005;1(2):112-19.
- Cao L, Mu W. Necrostatin-1 and necroptosis inhibition: Pathophysiology and therapeutic implications. Pharmacol Res. 2021;163:105297.
- Vissers M, et al. Safety, pharmacokinetics and target engagement of the novel RIPK1 inhibitor SAR443060 (DNL747) for neurodegenerative disorders: Randomized, placebo-controlled, double-blind phase I/Ib studies in healthy subjects and patients. Clin Transl Sci. 2022;15(8):2010-23.
- Mo K, et al. Targeting HNRNPC suppresses thyroid follicular epithelial cell apoptosis and necroptosis through m6A-modified ATF4 in autoimmune thyroid disease. Pharmacol Res. 2023;195:106933.
- Liu J, et al. Brain-derived neurotrophic factor elevates activating transcription factor 4 (ATF4) in neurons and promotes ATF4-dependent induction of SESN2. Front Mol Neurosci. 2018;11:62.
- Tang H, Kang R, Liu J, Tang D. ATF4 in cellular stress, ferroptosis, and cancer. Arch Toxicol. 2024;98(4):1025-41.
- Pang BPS, et al. Deficiency of muscle-generated brain-derived neurotrophic factor causes inflammatory myopathy through reactive oxygen species-mediated necroptosis and pyroptosis. Redox Biol. 2024;74:103418.
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.