Le miR‑486‑3p est sous-régulé chez les patients atteints d'infarctus cérébral aigu associé au syndrome d'apnées obstructives du sommeil, corrèle négativement avec la gravité de la maladie et les marqueurs inflammatoires, et prédit un pronostic défavorable à 1 an, ce qui soutient son potentiel en tant que biomarqueur diagnostique et pronostique.
Article de recherche
Étude de cohorte rétrospective des taux de miR-486-3p dans le sang périphérique chez des patients présentant un infarctus cérébral aigu et un syndrome d'apnées obstructives du sommeil
Dans cet article
Résumé
Résumé
L'infarctus cérébral aigu (ICA) compliqué par un syndrome d'apnées obstructives du sommeil (SAOS) présente un risque élevé de récidive d'accident vasculaire cérébral et de décès, mais des biomarqueurs efficaces pour cette affection concomitante restent limités. Cette étude de cohorte rétrospective a inclus 270 patients atteints d'ICA entre novembre 2020 et décembre 2023, répartis en deux groupes : le groupe ICA (n = 100, indice d'apnée-hypopnée [AHI] < 5) et le groupe ICA avec SAOS (n = 170, AHI ≥ 5), ce dernier étant subdivisé en sous-groupes léger (5 ≤ AHI < 15, n = 60), modéré (15 ≤ AHI < 30, n = 75) et sévère (AHI ≥ 30, n = 35). L'expression sérique de la miR-486-3p a été mesurée par RT-qPCR, et les marqueurs inflammatoires, notamment le facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α), la protéine C-réactive (CRP) et le facteur inductible par l'hypoxie-1α (HIF-1α), ont été quantifiés par ELISA. La valeur diagnostique de la miR-486-3p a été évaluée par analyse de la courbe ROC (caractéristique de fonctionnement du récepteur), et sa signification pronostique a été évaluée par analyse de survie de Kaplan-Meier et modèles de régression de Cox. La miR-486-3p était nettement plus faible dans le groupe comorbide et présentait une forte capacité diagnostique (AUC = 0,927). Notamment, une tendance claire de type dose-dépendante a été observée parmi les sous-groupes de gravité du SAOS, la miR-486-3p diminuant progressivement tandis que le TNF-α et la CRP augmentaient progressivement du SAOS léger au SAOS sévère. Les analyses de corrélation de Spearman ont révélé que la miR-486-3p était négativement corrélée à l'AHI, au score NIHSS, au TNF-α et à la CRP. Au suivi à 1 an, les patients présentant une faible expression de la miR-486-3p avaient des résultats fonctionnels significativement moins bons que ceux ayant une expression élevée. La régression de Cox multivariée a confirmé que la miR-486-3p constituait un facteur protecteur indépendant pour le pronostic à 1 an. Ces résultats suggèrent que la miR-486-3p pourrait servir de biomarqueur diagnostique et pronostique novateur chez les patients atteints d'ICA avec SAOS, potentiellement par son rôle régulateur dans l'inflammation systémique, et justifient une validation ultérieure dans de plus grandes cohortes prospectives.
Introduction
Le syndrome d'apnées obstructives du sommeil (SAOS) est une affection fréquente caractérisée par des interruptions répétées de la respiration pendant le sommeil1. Le SAOS est souvent associé à des comorbidités telles que des troubles métaboliques, cardiovasculaires, rénaux, pulmonaires et neuropsychiatriques2. Au-delà de ses associations générales avec les maladies cardiovasculaires et métaboliques, le SAOS représente une menace spécifique et grave dans l'infarctus cérébral aigu, compliquant jusqu'à 70 % des cas et augmentant les risques de détérioration neurologique, de mortalité et d'accident vasculaire cérébral récidivant3,4,5. L'infarctus cérébral aigu (ICA) constitue la forme d'accident vasculaire cérébral la plus fréquente. Bien que des progrès importants aient été réalisés dans le traitement de l'ICA ces dernières années, la plupart des patients souffrent encore de handicaps sévères voire décèdent6. L'interaction synergique entre l'ICA et le SAOS aggrave les lésions ischémiques et l'inflammation systémique, augmentant considérablement les risques de récidive d'accident vasculaire cérébral, de handicap et de mortalité. Par conséquent, l'identification de biomarqueurs fiables pour le diagnostic précoce et la prise en charge de cette affection comorbide à haut risque est d'une importance capitale.
Les microARN (miARN) se sont révélés très prometteurs en tant que biomarqueurs ces dernières années. Parmi eux, le miR-486-3p revêt une grande importance dans les maladies neurovasculaires. Des études antérieures ont montré que l'expression du miR-486-3p est inhibée dans l'apnée obstructive du sommeil (AOS)7. De plus, un traitement par exosomes exprimant le microARN miR-486-3p et la glycoprotéine du virus de la rage peut atténuer les troubles neurocomportementaux, l'œdème cérébral, les lésions de la barrière hémato-encéphalique et la neurodégénérescence8, ce qui indique que le miR-486-3p joue un rôle dans les lésions cérébrales. Après un AVC ischémique (ACI), les microglies présentes dans le tissu cérébral lésé s'activent, favorisant ainsi la sécrétion de cytokines inflammatoires5. Le SAHOS provoque des épisodes d'hypoxie intermittente, entraînant l'activation du système nerveux sympathique et un stress oxydatif, déclenchant par conséquent une réaction inflammatoire systémique en cascade9. Le miR-486-3p est étroitement associé à l'inflammation10. L'ensemble de ces données suggère que le miR-486-3p pourrait constituer un lien moléculaire entre l'hypoxie liée au SAHOS, l'inflammation systémique et la récupération après un accident vasculaire cérébral.
Cependant, son profil d'expression, sa précision diagnostique et sa signification pronostique chez les patients atteints d'ACI associés à un SAOS n'ont pas été systématiquement étudiés, et on ignore si elle est corrélée à la gravité du SAOS ou aux médiateurs inflammatoires de manière dépendante de la dose. Pour combler ces lacunes, cette étude a évalué la valeur diagnostique du miR-486-3p pour le SAOS chez les patients atteints d'ACI, a examiné sa relation dépendante de la dose avec la gravité du SAOS et les marqueurs inflammatoires (TNF-α, CRP et HIF-1α), et a évalué son utilité pronostique pour les résultats fonctionnels à un an. À notre connaissance, il s'agit de la première étude complète démontrant que le miR-486-3p pourrait servir de biomarqueur diagnostique et pronostique novateur pour la comorbidité ACI-SAOS, potentiellement par régulation de l'inflammation systémique.
Protocole
Cette étude a été approuvée par le comité d'éthique de l'hôpital affilié de l'université médicale de Xuzhou (numéro d'approbation : XYFY2024-KL238-01) et a été dispensée de l'obligation d'obtenir un consentement éclairé supplémentaire des patients. Les réactifs et l'équipement utilisés sont listés dans le Tableau des matériaux.
Patients et échantillons
Cette étude était une étude de cohorte rétrospective. De novembre 2020 à décembre 2023, un total de 270 patients ayant subi une AIC à l'Hôpital affilié de l'Université médicale de Xuzhou ont été recrutés consécutivement. Le processus de sélection des patients est résumé dans la Figure supplémentaire 1. Les patients éligibles ont été identifiés par un dépistage quotidien de toutes les nouvelles admissions dans l'unité d'accident vasculaire cérébral. L'apparition des symptômes dans les 72 heures précédant l'admission a été vérifiée par l'examen des dossiers médicaux d'urgence et confirmée par un neurologue certifié à l'aide de l'histoire clinique du patient et d'un entretien avec la famille. La taille de l'échantillon a été calculée en fonction de la capacité à détecter une différence significative des niveaux de miR-486-3p entre les groupes. En supposant une taille d'effet de 0,5, un seuil de significativité bilatéral (α) de 0,05 et une puissance (1-β) de 0,80, un minimum de 64 patients par groupe était requis. Les tailles finales des groupes reflètent le recrutement réel ainsi que la prévalence plus élevée du SAOS dans la population victime d'accident vasculaire cérébral, et non une répartition prédéterminée. Les patients présentant une AIC associée au SAOS ont fait l'objet d'un suivi de leur pronostic pendant 1 an.
Les critères d'inclusion étaient les suivants : (1) un accident ischémique cérébral aigu avec début des symptômes dans les 72 heures précédant l'admission, confirmé par imagerie par résonance magnétique. (2) La capacité de comprendre et de remplir les questionnaires de l'étude ainsi que les évaluations neurologiques. (3) La gravité de l'ACI a été évaluée à l'admission à l'aide de l'échelle d'accident vasculaire cérébral du National Institutes of Health (NIHSS). Lorsque le score NIHSS est <5, l'ACI est classé comme léger ; lorsqu'il se situe entre 5 et 20, il est considéré comme modéré. Les principaux critères d'exclusion comprenaient des antécédents de tumeurs malignes, un handicap physique sévère préexistant ou des troubles psychiatriques, une insuffisance cardiaque, pulmonaire ou rénale sévère, une chirurgie majeure ou un traumatisme au cours des 3 mois précédents, une infection active ou une maladie auto-immune, un accident vasculaire cérébral antérieur dans les 6 mois, une thérapie immunosuppressive, ainsi qu'un diagnostic ou un traitement préalable d'apnées obstructives du sommeil (y compris la pression positive continue des voies respiratoires).
Pour la confirmation par IRM, tous les patients ont subi une IRM cérébrale standard sur un système 3,0 T, comprenant les séquences suivantes : en pondération T1, en pondération T2, en récupération d'inversion avec suppression du signal des fluides (FLAIR), en imagerie par diffusion (DWI) et cartographie du coefficient de diffusion apparent (ADC). Un infarctus aigu était défini par la présence d'un signal hyperintense en DWI associé à un signal hypointense correspondant en ADC. Toutes les IRM ont été interprétées par deux neuroradiologues expérimentés, ignorant les données cliniques, les désaccords étant résolus par consensus. La cotation NIHSS a été réalisée à l'admission par des neurologues certifiés, avant tout traitement thrombolytique ou endovasculaire.
Du sang veineux à jeun a été prélevé entre 24 et 48 heures après le début de l'accident vasculaire cérébral, après un jeûne nocturne d'au moins 8 heures. Les prélèvements sanguins ont été effectués entre 6 h et 8 h du matin afin de minimiser les variations circadiennes. Un volume total de 5 mL de sang veineux périphérique a été recueilli dans des tubes à vide revêtus d'EDTA. Dans les 2 heures suivant le prélèvement, les échantillons de sang ont été centrifugés à 1 500 × g pendant 15 minutes à 4 °C à l'aide d'une centrifugeuse réfrigérée. Le surnageant sérique a été soigneusement aliquoté dans des tubes microcentrifugeurs sans RNase de 1,5 mL et immédiatement stocké à −80 °C jusqu'à l'extraction de l'ARN. Les cycles répétés de congélation-décongélation ont été strictement évités ; tous les aliquots n'ont subi au maximum qu'un seul cycle de congélation-décongélation avant l'analyse.
Regroupement des patients
Les participants ont été regroupés en fonction de leurs scores d'IAH obtenus par polysomnographie. Tous les enregistrements ont été réalisés en laboratoire du sommeil à l'hôpital entre 22 h et 6 h du matin, pour une durée minimale de 7 h. Les voies physiologiques surveillées comprenaient : l'électroencéphalographie (EEG ; six voies), l'électro-oculographie (EOG ; deux voies), l'électromyographie (EMG ; menton et tibialis antérieur bilatéral), l'électrocardiographie (ECG ; une dérivation), le débit aérien nasal (thermistance et transducteur de pression), les efforts respiratoires thoracique et abdominal (pléthysmographie par inductance respiratoire) et l'oxymétrie de pouls (SpO2). Le technicien du sommeil a calculé l'IAH. L'analyse des stades de sommeil et des événements respiratoires a été effectuée manuellement par un technicien du sommeil certifié selon le manuel de scoring 2012 de l'American Academy of Sleep Medicine (AASM), à l'aide du logiciel Somnolyzer 24×7. Selon les critères diagnostiques largement acceptés de l'American Academy of Sleep Medicine, un IAH de 5 événements ou plus par heure constitue le seuil standard pour diagnostiquer l'apnée obstructive du sommeil (OSAS). Par conséquent, les participants ayant un IAH < 5 ont été classés dans le groupe ACI (n = 100), tandis que ceux ayant un IAH ≥ 5 ont été classés dans le groupe ACI combiné au syndrome d'apnées obstructives du sommeil (OSAS) (n = 170). Parmi les participants ayant un IAH ≥ 5 (groupe ACI combiné à l'OSAS, n = 170), les patients ont été davantage stratifiés en trois sous-groupes de gravité selon des critères établis : OSAS léger (5 ≤ IAH < 15, n = 60), OSAS modéré (15 ≤ IAH < 30, n = 75) et OSAS sévère (IAH ≥ 30, n = 35). Cette stratification a permis d'évaluer la relation dose-dépendante entre la charge hypoxique, l'expression de la miR‑486‑3p et les marqueurs inflammatoires. Les patients ayant reçu un traitement préalable pour l'OSAS (par exemple, CPAP) n'ont pas été inclus dans l'étude afin d'éviter toute perturbation de la mesure initiale de l'IAH.
Évaluation du pronostic
Le point temporel à 1 an permet la résolution des effets aigus et la manifestation de la charge hypoxique cumulative de l’apnée obstructive du sommeil (OSAS), offrant ainsi une fenêtre robuste pour évaluer son impact pronostique. Le pronostic clinique des patients ayant un accident cérébrovasculaire ischémique (ACI) associé à l’OSAS a été évalué à l’aide de l’échelle de Rankin modifiée (mRS) après le début de la maladie. Toutes les évaluations selon l’échelle mRS ont été réalisées par des neurologues certifiés ayant suivi une formation normalisée avant l’étude, en utilisant un formulaire d’entretien structuré mRS. La fiabilité inter-observateurs a été évaluée par un coefficient kappa >0,85. L’évaluation de suivi a été effectuée lors d’une visite programmée en consultation externe. Pour les patients incapables de se présenter en personne, un entretien téléphonique structuré a été mené par une infirmière de recherche formée, utilisant un script standardisé. Tous les évaluateurs étaient aveugles aux concentrations de miR-486-3p et au statut OSAS des patients. Afin de maintenir la cohérence entre les évaluations en consultation externe et par téléphone, les deux formats ont utilisé le même questionnaire structuré, et tous les évaluateurs ont réalisé un exercice de calibrage avant le début de l’étude. Les patients ayant des scores de 0 à 2 ont été classés dans le groupe au bon pronostic, tandis que ceux ayant des scores de 3 à 6 ont été classés dans le groupe au mauvais pronostic. Aucun patient n’a été perdu lors du suivi. Le SAQLI, l’ESS, le TNF-α et le HIF-1α ont été évalués comme variables pronostiques, sans être utilisés pour définir les groupes de pronostic. Le NIHSS, le SAQLI et l’ESS ont été administrés par un personnel de recherche formé. Le SAQLI et l’ESS ont été administrés sous forme de questionnaires remplis par l’intervieweur dans une pièce calme.
Indice de notation
L'Échelle du National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS) est une échelle quantitative pour l'AVC11, où des scores plus élevés indiquent une gravité plus importante de l'ACI. L'échelle SAQLI est un questionnaire sur la qualité de vie des patients atteints d'apnée obstructive du sommeil (OSA), sur une échelle de 1 à 7, où des scores plus élevés traduisent une qualité de vie plus mauvaise, couvrant les activités quotidiennes, les interactions sociales, les états émotionnels, les symptômes et les symptômes liés au traitement12. L'échelle ESS sert à évaluer la somnolence diurne auto-déclarée par les patients, avec un score variant de 0 à 24, et un score > 10 indique une somnolence diurne13.
Extraction de l'ARN et transcription inverse
L'ARN total a été extrait à partir de 200 µL de sérum en utilisant le réactif TRIzol. Brièvement, les échantillons de sérum ont été mélangés avec 800 µL de TRIzol, incubés à température ambiante pendant 5 min, puis centrifugés à 12 000 × g pendant 15 min à 4 °C. Du chloroforme (200 µL) a été ajouté, le mélange a été vigoureusement agité pendant 15 s, incubé pendant 3 min, puis centrifugé à 12 000 × g pendant 15 min à 4 °C. La phase aqueuse a été transférée dans un tube neuf, et l'ARN a été précipité avec 500 µL d'isopropanol, incubé à −20 °C pendant 1 h, puis centrifugé à 12 000 × g pendant 10 min à 4 °C. Le culot d'ARN a été lavé avec de l'éthanol à 75 %, séché à l'air, puis dissous dans 20 µL d'eau exempte de RNase. La concentration et la pureté de l'ARN ont été évaluées à l'aide d'un spectrophotomètre à microvolume, un rapport A260/A280 compris entre 1,8 et 2,0 étant accepté pour les analyses ultérieures. L'intégrité de l'ARN a été vérifiée par électrophorèse sur gel d'agarose.
La transcription inverse a été réalisée à l'aide de 500 ng d'ARN total avec le kit de transcription inverse dans un volume réactionnel total de 20 µL, en utilisant des amorces aléatoires hexamériques conformément au protocole du fabricant. La réaction de transcription inverse a été effectuée à 25 °C pendant 10 min, à 42 °C pendant 60 min et à 70 °C pendant 5 min. L'ADNc obtenu a été conservé à −20 °C jusqu'à son utilisation.
RT-qPCR
L'expression de miR-486-3p a été détectée à l'aide d'un kit de PCR en temps réel basé sur le SYBR Green pour la quantification des microARN, sur un système de PCR quantitative en temps réel (qPCR). Le mélange réactionnel contenait 10 µL de Master Mix SYBR Green 2×, 2 µL de matrice d'ADNc (diluée 1:5), 1 µL de chaque amorces (10 µM) et de l'eau libre de nucléase jusqu'à un volume final de 20 µL. Les séquences des amorces sont les suivantes (de 5' à 3') : miR-486-3p-sens : TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU, antisens : CTCAACTGGTGTCGTGGA ; et U6-sens : CTCGCTTCGGCAGCACA, antisens : AACGCTTCACGAATTTGCGT. Les conditions de cyclage de la qPCR étaient les suivantes : 95 °C pendant 2 min, suivies de 40 cycles de 95 °C pendant 30 s, 60 °C pendant 30 s et 72 °C pendant 60 s. Chaque échantillon a été analysé en triplets, et un témoin sans matrice a été inclus dans chaque réaction. La spécificité de l'amplification a été confirmée par une analyse de la courbe de fusion allant de 60 °C à 95 °C. Le seuil de cycle (Ct) a été déterminé automatiquement par le logiciel QuantStudio 6 Pro (v1.5) en utilisant le réglage de seuil par défaut. Le niveau de miR-486-3p a été calculé selon la méthode 2-ΔΔCT et normalisé à U6. U6 a été validé comme gène de référence stable dans nos échantillons de sérum à l'aide de l'algorithme NormFinder afin d'assurer la cohérence entre les groupes. Les coefficients de variation inter-essai et intra-essai étaient <5 %.
ELISA
Les concentrations sériques de la protéine C-réactive (CRP), du TNF-α et de l'HIF-1α ont été mesurées à l'aide d'un kit ELISA. Les procédures expérimentales ont été réalisées conformément aux instructions du fabricant. En bref, les échantillons sériques ont été décongelés sur glace et dilués au 1:2 avec le tampon de dilution fourni. Les échantillons et les étalons ont été ajoutés dans des plaques pré-enrobées de 96 puits (100 µL/puit) et incubés pendant 2 h à 37 °C. Après quatre lavages avec 300 µL de tampon de lavage, 100 µL d'anticorps de détection marqué à la biotine ont été ajoutés et incubés pendant 1 h à 37 °C. Après une nouvelle étape de lavage, 100 µL de streptavidine marquée à la peroxydase de raifort ont été ajoutés et incubés pendant 30 min à 37 °C à l'abri de la lumière. Le substrat chromogène (tétraméthylbenzidine, 100 µL) a ensuite été ajouté et incubé pendant 15 min à 37 °C, à l'abri de la lumière. La réaction a été arrêtée par l'ajout de 50 µL de solution d'arrêt, et l'absorbance a été mesurée à 450 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques. Les concentrations ont été déterminées à partir de courbes d'étalonnage établies à l'aide de concentrations connues de protéines recombinantes. Chaque échantillon a été mesuré en double, et la valeur moyenne a été utilisée pour l'analyse. Des échantillons de contrôle qualité fournis par le fabricant ont été inclus dans chaque plaque ; les résultats n'ont été acceptés que si les valeurs du contrôle qualité se situaient dans la plage spécifiée par le fabricant.
Contrôle de qualité et reproductibilité
Tous les essais en laboratoire ont été réalisés conformément aux lignes directrices MIQE (informations minimales pour la publication d'expériences de PCR en temps réel quantitative) pour la RT-qPCR et aux normes de déclaration appropriées pour le ELISA. Les principaux instruments ont été étalonnés conformément aux plannings des fabricants. Des échantillons témoins négatifs et positifs ont été inclus dans chaque série d'analyses de RT-qPCR et de ELISA afin de surveiller la variabilité entre les plaques. Toutes les données ont été enregistrées et gérées à l'aide de Microsoft Excel, et l'auteur correspondant fournira les protocoles expérimentaux détaillés ainsi que les données brutes sur demande raisonnable.
Analyse statistique
Les données ont été analysées à l'aide du logiciel SPSS 23.0 et d'un logiciel de statistiques et de graphiques. La normalité de la distribution a été évaluée par le test de Shapiro–Wilk. Les variables continues sont présentées sous forme de moyenne ± écart-type ou médiane (écart interquartile), et ont été comparées par le test t ou le test de Mann–Whitney U, selon le cas. Les variables catégorielles ont été comparées par le test du χ2. Les corrélations ont été examinées à l'aide d'analyses de Pearson ou de Spearman, selon la distribution des données. La valeur prédictive a été déterminée à l'aide de la courbe ROC et validée par une validation croisée en 5 parties. La valeur seuil optimale pour le miR-486-3p a été déterminée en maximisant l'indice de Youden. Des analyses de corrélation de Pearson et de Spearman ont été utilisées pour évaluer les corrélations. Pour l'analyse pronostique, les patients ont été stratifiés selon l'expression médiane du miR-486-3p ; les courbes de Kaplan–Meier accompagnées du test du log-rank ont été utilisées pour comparer les résultats de survie entre les groupes. Les variables ayant une valeur P < 0,1 dans la régression de Cox univariée ont été intégrées dans le modèle de Cox multivarié. Une valeur de P < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
Résultats
Caractéristiques de base dans le groupe ACI et le groupe ACI associé à OSAS
Comme indiqué dans le Tableau 1, le groupe ACI comprenait 68 hommes et 32 femmes, avec un âge moyen de 62,84 ± 12,65 ans, tandis que le groupe ACI associé à OSAS comprenait 116 hommes et 54 femmes, avec un âge moyen de 61,31 ± 11,25 ans. Le groupe ACI associé à OSAS présentait des valeurs significativement plus élevées d’AHI, de scores NIHSS et de taux de CRP. Toutefois, les deux groupes présentaient des répartitions comparables en ce qui concerne l’âge, le sexe, l’IMC, l’hypertension, le diabète sucré (DM), les cardiopathies, le dyslipidémie, le tabagisme, la consommation d’alcool, la thrombolyse et la classification TOAST.
Variations des marqueurs de l'inflammation et du miR-486-3p selon les sous-groupes de gravité de l'OSAS
Pour évaluer la relation dose-dépendante entre la gravité de l'OSAS et les modifications moléculaires, nous avons stratifié les 170 patients présentant un ACI et un OSAS en fonction de la gravité : léger (5 ≤ IAH < 15), modéré (15 ≤ IAH < 30) et sévère (IAH ≥ 30). < 15, n = 60), modérée (15 ≤ AHI < 30, n = 75) et sévère (AHI ≥ 30, n = 35) en fonction des critères de l'AHI. Comme indiqué dans Figure 1A–C, un gradient clair et progressif a été observé entre les quatre groupes (ACI, léger, modéré et sévère OSAS). Plus précisément, l'expression de miR-486-3p diminuait progressivement du groupe ACI au sous-groupe OSAS sévère (Figure 1A, P < 0.001 contre. groupe ACI). En revanche, les taux sériques de TNF-α et de CRP augmentaient progressivement en fonction de la gravité de l'apnée obstructive du sommeil (AOS) (Figure 1B, C, P < 0,001 par rapport au groupe ACI). Ces résultats indiquent que la charge hypoxique imposée par le SAOS est associée à une suppression graduelle du miR-486-3p et à une augmentation parallèle de l'inflammation systémique.
Valeur diagnostique de l'ARNm-486-3p pour l'OSAS chez les patients atteints de lésions cérébrales aiguës
L'ARNm-486-3p pourrait présenter une valeur diagnostique importante dans les cas d'association entre lésion cérébrale aiguë et syndrome d'apnées obstructives du sommeil (OSAS), avec une AUC de 0,927 (la valeur seuil optimale étant de 0,845), ainsi qu'une sensibilité et une spécificité respectivement de 92,94 % et 79,00 % (Figure 1D). Afin d'évaluer la robustesse du modèle diagnostique et d'éliminer un ajustement excessif potentiel, une validation croisée à 5 groupes a été réalisée pour l'analyse ROC de l'ARNm-486-3p. Comme indiqué dans le tableau supplémentaire 1, la moyenne de l'AUC sur les cinq groupes était de 0,928 (variant de 0,847 à 0,969), ce qui correspond étroitement à l'AUC apparente de 0,927 obtenue lors de l'analyse initiale. La sensibilité et la spécificité moyennes étaient respectivement de 88,83 % et 87,00 %.
Corrélations entre le miR-486-3p et la gravité de l'accident vasculaire cérébral ainsi que les marqueurs inflammatoires dans l'ACI combiné au SAOS
Dans le groupe ACI avec SAOS, les analyses de corrélation de Spearman ont révélé que l'expression du miR-486-3p était significativement corrélée négativement au score NIHSS (Figure 2A), à la TNF-α (Figure 2B) et à la CRP (Figure 2C).
Indicateurs pronostiques dans les groupes de bon et mauvais pronostic
Les patients atteints de CIA associée à SAHOS ont été divisés en un groupe de bon pronostic et un groupe de mauvais pronostic selon les scores d’Ebm. Comme indiqué dans le Tableau 2, les scores d’Ebm, de SAQLI et d’ESS, ainsi que les taux de HIF-1α et de TNF-α, étaient augmentés dans le groupe de mauvais pronostic.
Valeur pronostique du miR-486-3p pour les résultats à 1 an chez les patients atteints d'ACI combiné à des OSAS
Les courbes de Kaplan-Meier ont montré que des taux élevés de miR-486-3p étaient associés à un bon pronostic, tandis que des taux faibles étaient associés à un mauvais pronostic (Figure 2D). Dans l'analyse univariée, l'expression du miR-486-3p et le score NIHSS étaient associés aux résultats cliniques. D'autres variables, notamment le score SAQLI (P = 0,078), HIF-1α (P = 0,086), TNF-α (P = 0,072), l'âge (P = 0,082), le diabète (P = 0,067), les cardiopathies (P = 0,065) et l'AHI (P = 0,069), présentaient des associations marginalement significatives avec le pronostic et ont également été incluses dans l'analyse multivariée de Cox. Dans l'analyse multivariée, le miR-486-3p est resté un facteur protecteur indépendant (HR = 0,437, IC 95 % : 0,278–0,684, P < 0,001), tandis que les cardiopathies (HR = 1,822, IC 95 % : 1,070–3,104, P = 0,027) et le score NIHSS (HR = 1,597, IC 95 % : 1,008–2,529, P = 0,046) se sont révélés être des facteurs de risque indépendants de mauvais résultats cliniques (Table 3).
Résumé des résultats
En résumé, la présente étude a démontré que le miR‑486‑3p est significativement sous-régulé chez les patients atteints d'ACI ayant une comorbidité avec l'OSAS et présente une forte précision diagnostique pour identifier l'OSAS dans cette population. Une relation claire de type dose-dépendante a été observée entre les sous-groupes de gravité de l'OSAS, le miR‑486‑3p diminuant progressivement tandis que les marqueurs inflammatoires (TNF‑α et CRP) augmentaient progressivement de l'OSAS léger à l'OSAS sévère. Les analyses de corrélation ont en outre confirmé que le miR‑486‑3p était négativement associé à la fois à la gravité de l'accident vasculaire cérébral (échelle NIHSS) et à l'inflammation systémique. De manière importante, une faible expression du miR‑486‑3p prédisait de mauvais résultats fonctionnels à un an, et une régression de Cox multivariée a identifié le miR‑486‑3p comme un facteur protecteur indépendant après ajustement sur d'éventuels facteurs de confusion, notamment le NIHSS et l'AHI. Dans leur ensemble, ces résultats appuient l'hypothèse selon laquelle le miR‑486‑3p pourrait servir de biomarqueur diagnostique et pronostique novateur pour la comorbidité ACI-OSAS, potentiellement par son rôle régulateur dans l'inflammation systémique.
DISPONIBILITÉ DES DONNÉES :
Les données brutes soutenant les résultats de cette étude sont disponibles dans le Fichier supplémentaire 1, qui inclut les caractéristiques de base, les niveaux d'expression de miR‑486‑3p, les mesures par ELISA et les données de suivi à 1 an avec l'échelle mRS pour tous les patients inclus.
Figure 1 : Modifications de l'expression de miR-486-3p et des marqueurs inflammatoires selon les sous-groupes de gravité de l'ACI combinée aux OSAS, et performance diagnostique de miR-486-3p pour les OSAS. (A) Expression relative de miR-486-3p dans le groupe ACI et les sous-groupes d'ACI combinée aux OSAS. (B) Concentration sérique combinée de TNF-α. (C) Concentration sérique de CRP dans le groupe ACI (AHI < 5, n=100) et les sous-groupes d'OSAS légers (5 ≤ AHI < 15, n=60), modérés (15 ≤ AHI < 30, n=75) et sévères (AHI ≥ 30, n=35). (D) Courbe ROC de miR-486-3p pour distinguer les patients atteints d'ACI avec OSAS de ceux sans OSAS. ***P < 0,001. Veuillez cliquer ici pour visualiser une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : Corrélations de miR-486-3p avec la gravité de l'accident vasculaire cérébral et les marqueurs inflammatoires, ainsi que sa valeur pronostique pour les résultats à un an. (A–C) Analyses de corrélation de Spearman entre l'expression de miR-486-3p et le score NIHSS, le TNF-α et la CRP. (D) Courbes de survie de Kaplan-Meier représentant la probabilité de bon pronostic au suivi à un an, stratifiées selon l'expression médiane de miR-486-3p. ***P < 0,001. Veuillez cliquer ici pour visualiser une version agrandie de cette figure.
| Variable | ACI (n=100) | ACI et OSAS (n=170) | Valeur de p | |
| Âge (années) | 62,84 ± 12,65 | 61,31 ± 11,25 | 0,303 | |
| Sexe (masculin/féminin) | 68/32 | 116/54 | 0,968 | |
| IMC (kg/m2) | 24,74 ± 3,57 | 25,02 ± 3,47 | 0,531 | |
| Hypertension, n (%) | 74 (74 %) | 134 (78,82 %) | 0,365 | |
| DM, n (%) | 22 (22 %) | 43 (25,29 %) | 0,543 | |
| Cardiopathie, n (%) | 13 (13 %) | 25 (14,71 %) | 0,698 | |
| AHI (fois/h) | 2,07 ± 1,42 | 19,95 ± 9,19 | < 0,001*** | |
| Score NIHSS | 1,70 ± 1,18 | 4,05 ± 1,73 | < 0,001*** | |
| CRP (ng/mL) | 2,03 ± 0,17 | 3,01 ± 0,27 | < 0,001*** | |
| Stade d'ACI (léger/modéré) | 99/1 | 69/101 | < 0,001*** | |
| Dyslipidémie (oui/non) | 52/48 | 96/74 | 0,478 | |
| Tabagisme (oui/non) | 48/52 | 91/79 | 0,382 | |
| Consommation d'alcool (oui/non) | 40/60 | 87/83 | 0,076 | |
| Thrombolyse (oui/non) | 38/62 | 81/89 | 0,124 | |
| TOAST | 0,487 | |||
| Cardio-embolie (n) | 22 | 36 | ||
| Occlusion des petits vaisseaux (n) | 18 | 28 | ||
| Athérosclérose des grosses artères (n) | 13 | 25 | ||
| Accident vasculaire cérébral d'étiologie indéterminée (n) | 5 | 19 | ||
| Accident vasculaire cérébral d'autre étiologie déterminée (n) | 42 | 62 | ||
Tableau 1 : Caractéristiques de base des patients atteints d'ACI avec et sans SAOS. Les données sont présentées comme moyenne ± écart-type (ET) pour les variables continues ou n (%) pour les variables catégorielles. Les valeurs P ont été calculées à l'aide du test t indépendant pour les variables continues et du test du chi-deux pour les variables catégorielles. ACI, infarctus cérébral aigu ; SAOS, syndrome d'apnées obstructives du sommeil ; IMC, indice de masse corporelle ; DM, diabète sucré ; IAH, indice d'apnée-hypopnée ; NIHSS, échelle d'AVC des Instituts nationaux de la santé ; CRP, protéine C-réactive ; TOAST, essai thérapeutique d'Org 10172 dans le traitement de l'AVC aigu.
| Variable | Prognostic favorable (n=97) | Prognostic défavorable (n=73) | Valeur P |
| Score mRS | 0,88 ± 0,84 | 4,55 ± 1,08 | < 0,001*** |
| Score SAQIL | 2,59 ± 1,17 | 3,12 ± 1,48 | 0,009** |
| Score ESS | 8,69 ± 2,76 | 10,05 ± 2,79 | 0,002** |
| HIF-1α (pg/mL) | 1159,94 ± 277,86 | 1283,88 ± 445,15 | 0,027* |
| TNF-α (pg/mL) | 121,4 ± 12,87 | 128,4 ± 11,67 | < 0,001*** |
Tableau 2 : Indicateurs pronostiques chez les patients atteints de SAOS avec un bon ou un mauvais pronostic. Les patients ont été répartis en deux groupes selon le pronostic (bon pronostic : échelle mRS 0–2, n = 97 ; mauvais pronostic : échelle mRS 3–6, n = 73) en fonction des scores mRS à 1 an. Les données sont exprimées comme moyenne ± écart-type. Les valeurs P ont été calculées à l’aide du test t indépendant. mRS, échelle de Rankin modifiée ; SAQLI, indice de qualité de vie de Calgary sur les apnées du sommeil ; ESS, échelle de somnolence d'Epworth ; HIF‑1α, facteur inductible par l'hypoxie‑1α ; TNF‑α, facteur de nécrose tumorale‑α.
| Variable | HR | IC 95 % univarié | P | HR | IC 95 % multivarié | P | ||
| Inférieur | Supérieur | Inférieur | Supérieur | |||||
| miR-486-3p | 0,442 | 0,228 | 0,679 | <0,001 | 0,437 | 0,278 | 0,684 | <0,001 |
| Score SAQLI | 0,628 | 0,375 | 1,053 | 0,078 | 0,713 | 0,416 | 1,22 | 0,217 |
| Score ESS | 0,922 | 0,595 | 1,429 | 0,718 | ||||
| HIF-1α | 0,694 | 0,457 | 1,053 | 0,086 | 0,802 | 0,523 | 1,229 | 0,311 |
| TNF-α | 1,469 | 0,966 | 2,233 | 0,072 | 1,494 | 0,978 | 2,284 | 0,063 |
| Âge | 1,445 | 0,955 | 2,188 | 0,082 | 1,29 | 0,845 | 1,97 | 0,238 |
| Sexe | 0,829 | 0,534 | 1,285 | 0,401 | ||||
| IMC | 1,196 | 0,786 | 1,821 | 0,402 | ||||
| Hypertension | 0,754 | 0,465 | 1,222 | 0,252 | ||||
| DM | 1,512 | 0,972 | 2,351 | 0,067 | 1,246 | 0,79 | 1,965 | 0,343 |
| Cardiopathie | 1,611 | 0,971 | 2,673 | 0,065 | 1,822 | 1,07 | 3,104 | 0,027 |
| AHI | 1,468 | 0,97 | 2,222 | 0,069 | 1,125 | 0,734 | 1,725 | 0,588 |
| Score NIHSS | 1,588 | 1,027 | 2,455 | 0,037 | 1,597 | 1,008 | 2,529 | 0,046 |
| Dyslipidémie | 1,178 | 0,776 | 1,788 | 0,442 | ||||
| Tabagisme | 0,895 | 0,593 | 1,35 | 0,596 | ||||
| Alcool | 1,116 | 0,738 | 1,689 | 0,603 | ||||
| Thrombolyse | 1,259 | 0,834 | 1,902 | 0,272 | ||||
Tableau 3 : Analyses de régression de Cox univariée et multivariée pour le pronostic défavorable à 1 an chez les patients atteints d'ACI avec OSAS. HR, rapport de risque ; CI, intervalle de confiance ; SAQLI, indice de qualité de vie lié à l'apnée du sommeil de Calgary ; ESS, échelle de somnolence d'Epworth ; HIF‑1α, facteur inductible par l'hypoxie‑1α ; TNF‑α, facteur de nécrose tumorale‑α ; BMI, indice de masse corporelle ; DM, diabète sucré ; AHI, indice d'apnées-hypopnées ; NIHSS, échelle d'AVC des Instituts nationaux de la santé. Les variables présentant une valeur P < 0,1 dans l'analyse univariée ont été incluses dans le modèle de Cox multivarié.
Supplémentaire Figure 1 : Organigramme de la sélection des patients et de la stratification en sous-groupes.Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
Tableau supplémentaire 1 : Validation croisée à cinq plis pour la validation interne de la valeur diagnostique du miR-486-3p. AUC, aire sous la courbe ; CI, intervalle de confiance. L'AUC moyenne, la sensibilité et la spécificité ont été calculées comme la moyenne arithmétique sur les cinq plis.Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
Fichier supplémentaire 1 : les données brutes soutenant les résultats de cette étude.Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
Discussion
Les patients atteints de SAHOS présentent des collapsus et obstructions des voies respiratoires répétés, entraînant une hypoxie intermittente (HI) et une somnolence diurne excessive (SDE), pouvant provoquer des lésions neuronales.14L'apnée obstructive du sommeil (AOS) est très fréquente après un infarctus aigu du myocarde, touchant environ 72 % des patients, et aggrave considérablement le risque cardiovasculaire.15. L'IAA constitue un spectre de déficits neurologiques résultant d'une ischémie cérébrale localisée et d'une hypoxie secondaires à une perfusion insuffisante16L'hypoxie intermittente, centrale dans la physiopathologie du SAOS, agit probablement de manière synergique avec l'insulte ischémique de l'ACI, amplifiant ainsi les lésions cérébrales. Néanmoins, les recherches portant spécifiquement sur cet état comorbide à haut risque sont rares. Des données accumulées indiquent que les ARN micro (miARN) jouent un rôle clé dans la pathogenèse à la fois du SAOS et de l'ACI.17,18On a précédemment noté que le miR-486-3p pourrait être associé à l'apnée obstructive du sommeil (OSAS) et à l'ischémie cérébrale aiguë (ACI). Nous avons donc étudié le miR-486-3p comme lien moléculaire potentiel entre l'OSAS et l'ACI. Notamment, cette cohorte a été recrutée entre novembre 2020 et décembre 2023, période couvrant la pandémie de COVID-19. Des données accumulées suggèrent que l'inflammation systémique persistante induite par l'infection à SARS-CoV-2 pourrait aggraver les lésions neuronales et favoriser la progression des lésions neurodégénératives.19,20Cependant, la présente étude ne porte pas sur l'infection par le SARS-CoV-2/la COVID-19, et nos objectifs et conception de recherche ne sont pas liés à la COVID-19. Une concentration significativement plus faible de miR-486-3p sérique a été observée chez les patients atteints d'ACI associée à un SAHOS, fournissant ainsi une première preuve clinique de son rôle dans cette comorbidité et soulignant la nécessité de recherches supplémentaires.
Le score NIHSS permet d'évaluer la gravité d'un accident vasculaire cérébral11. L'IAH en polysomnographie est couramment utilisé pour diagnostiquer le SAOS, et plus le score d'IAH est élevé, plus le SAOS est sévère21. Compte tenu des difficultés cliniques et logistiques liées à la polysomnographie, l'identification de biomarqueurs accessibles pour l'apnée obstructive du sommeil chez les patients ayant subi un accident vasculaire cérébral est essentielle22. Les résultats actuels indiquent que le miR-486-3p présente une promesse diagnostique importante pour le SAOS associé à un IAC, car ses concentrations sont inversement corrélées aux scores d'IAH et de NIHSS, reflétant ainsi la gravité de la maladie.
Sur le plan méthodologique, cette étude démontre la faisabilité d'une intégration du profilage moléculaire à un phénotypage clinique quantitatif au sein d'une même cohorte, permettant d'évaluer simultanément la précision diagnostique, les relations dose-réponse et la valeur pronostique. Ce cadre intégré pourrait servir de référence pour les futures études de découverte de biomarqueurs dans les comorbidités liées à l'AVC, où les interactions complexes entre plusieurs voies physiopathologiques compliquent souvent les analyses traditionnelles à critère unique.
L’IH est une caractéristique marquante de l’OSAS et induit une inflammation et des lésions tissulaires en activant des voies de signalisation pro-inflammatoires23. De manière cruciale, cet état inflammatoire interagit avec et aggrave la pathogenèse de l’ACI, dans laquelle l’inflammation post-ischémique médie les lésions cérébrales secondaires24,25. Des médiateurs inflammatoires clés tels que le TNF-α et la CRP sont élevés dans les deux affections, se situant au croisement des cascades inflammatoires induites par l’hypoxie et déclenchées par l’ischémie, ce qui en fait des molécules essentielles dans la pathologie concomitante de l’ACI et de l’OSA26,27,28. Par conséquent, les concentrations sériques de TNF-α et de CRP chez les patients atteints d’ACI associé à un OSAS ont été mesurées. Dans cette étude, les corrélations négatives observées entre les taux sériques de miR-486-3p et les taux de TNF-α et de CRP chez les patients atteints d’ACI combiné à un OSAS suggèrent un lien potentiel entre ce ARNmi et l’état inflammatoire systémique caractéristique de cette affection concomitante.
L’AOSA a un effet très néfaste sur la qualité de vie, et l’SAQLI est un questionnaire spécifique à l’AOSA évaluant la qualité de vie29. La SDS est un symptôme courant de l’AOSA, et l’AOSA accompagnée de SDS entraîne davantage d’événements indésirables et un pronostic plus défavorable30. L’EES est couramment utilisée pour déterminer la gravité de la somnolence diurne31. Dans l’AOSA, des épisodes récurrents d’hypoxie intermittente (HI) sont considérés comme un facteur de risque indépendant de maladie vasculaire32. De plus, le stress oxydatif induit par l’HI peut entraîner des complications telles que l’ostéoporose, un risque cardiovasculaire accru et des modifications neurologiques33. Par conséquent, cette étude a également examiné l’expression de HIF-1α. La découverte d’un niveau élevé de HIF-1α dans le groupe au pronostic défavorable d’ACI associée à l’AOSA est conforme à la physiopathologie de l’hypoxie intermittente chronique dans l’AOSA. En outre, les résultats ont montré que miR-486-3p et TNF-α étaient corrélés au pronostic dans l’ACI associée à l’AOSA, et que de faibles concentrations de miR-486-3p étaient associées à un mauvais pronostic. Cela suggère une cascade potentielle dans laquelle HIF-1α induite par l’HI supprime miR-486-3p, contribuant ainsi à la surexpression de médiateurs inflammatoires tels que le TNF-α, aggravant ainsi les lésions cérébrales dans l’ACI.
Cette étude présente toutefois des limites. Elle est restreinte par l'absence de groupes témoins (sujets sains, OSAS uniquement), ce qui empêche de définir une plage normale pour le miR-486-3p et de distinguer les modifications spécifiques à la comorbidité de celles liées à l'OSAS seul. Par conséquent, les travaux futurs devront inclure ces groupes afin de cartographier complètement le profil d'expression du miR-486-3p. De plus, il est insuffisant de déduire le mécanisme régulateur précis du miR-486-3p uniquement à partir de corrélations. Nous vérifierons davantage son mécanisme moléculaire dans de futures expériences.
Du point de vue translationnel, la forte précision diagnostique et la valeur pronostique indépendante du miR‑486‑3p suggèrent plusieurs applications cliniques potentielles. En tant que biomarqueur sanguin, il pourrait être intégré au bilan de routine des accidents vasculaires cérébraux pour identifier les patients présentant un AVC sous-jacent à un SAOS, facilitant ainsi une orientation précoce vers une polysomnographie et une intervention rapide. La surveillance des taux de miR‑486‑3p pendant les phases aiguë et subaiguë pourrait permettre de suivre la dynamique inflammatoire et de stratifier les patients selon leur risque pronostique, permettant des stratégies de réadaptation personnalisées. Ces pistes translationnelles justifient des investigations supplémentaires dans des études prospectives multicentriques. Dans l'ensemble, le miR-486-3p pourrait participer à l'association AVC et SAOS en régulant les facteurs inflammatoires et présenter une valeur diagnostique et pronostique dans cette comorbidité.
Déclarations de divulgation
Cette étude a été financée par le projet « Recherche sur les technologies de prévention et de traitement des accidents vasculaires cérébraux » (n° WKZX2023CZ0143).
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Scanneur IRM 3,0 T | Siemens Healthineers, Allemagne | MAGNETOM Skyra | Imagerie cérébrale pour la confirmation d'un infarctus cérébral aigu |
| Plaques microtitration ELISA à 96 puits | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Chine | XBS-PLATE | Réaction antigène-anticorps pour la détection par ELISA |
| Lignes directrices cliniques de l'AASM sur les troubles respiratoires du sommeil | Académie américaine de médecine du sommeil | lignes directrices complètes de 2020 | Critères normalisés de diagnostic de l'AHI et de stratification de la gravité du SAHOS |
| Calgary Sleep Apnea Quality of Life Index (SAQLI), version chinoise validée | Université de Calgary | édition traduite de 2021 | Évaluation de la qualité de vie chez les patients atteints d'ACI compliquée par le SAOS |
| Tubes à vide de 5 mL pour prélèvement sanguin avec EDTA-K2 | BD Biosciences, États-Unis | 367863 | Prélèvement de sang veineux périphérique pour la séparation du sérum |
| Échelle de somnolence d'Epworth (ESS), version chinoise validée | Université Johns Hopkins | édition révisée de 2018 | Évaluation de la somnolence diurne chez les patients victimes d'un accident vasculaire cérébral |
| GraphPad Prism 9 | GraphPad Software, États-Unis | Version 9.4.1 | Graphiques de dispersion, boîtes à moustaches, visualisation de la courbe ROC |
| Kit ELISA humain pour la CRP | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Chine | XBS-H001 | Détection quantitative de la protéine C-réactive sérique |
| HIF-1 humainα Kit ELISA | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Chine | XBS-H007 | Détection quantitative du facteur inductible par l'hypoxie-1 sériqueα |
| TNF humainα Kit ELISA | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Chine | XBS-H003 | Détection quantitative du TNF sériqueα facteur inflammatoire |
| IBM SPSS Statistics 23.0 | IBM, Armonk, NY, États-Unis | Version 23.0 | Toutes les analyses statistiques (test t, corrélation, ROC, Kaplan–Meier, régression de Cox |
| Spectrophotomètre de microplaque | Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, États-Unis) | Multiskan FC | Lecture de l'absorbance des plaques ELISA à 450 nm |
| miR-486-3p & Amorces de qPCR U6 | Sangon Biotech, Shanghai, Chine | Synthèse sur mesure | Amplification des gènes cibles et de référence pour la qPCR |
| Kit miScript SYBR Green PCR | Qiagen GmbH, Hilden, Allemagne | 218073 | Amplification par PCR quantitative en temps réel de miR-486-3p et de U6 |
| Échelle de l'AVC du NIH (NIHSS), version chinoise validée | Institut national des troubles neurologiques et de l'AVC (NINDS), États-Unis | Édition clinique standard | Évaluation initiale de la gravité neurologique chez les patients atteints d'ACI |
| Logiciel de scoring du sommeil PSG | BMC Medical Co., Ltd., Chine | v3.2 | Évaluation préliminaire automatisée des événements respiratoires pendant le sommeil |
| Système QuantStudio 6 Pro de PCR en temps réel | Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, États-Unis) | QuantStudio 6 Pro | Amplification par RT-qPCR, acquisition de la courbe de fusion, enregistrement des valeurs de Ct |
| Logiciel QuantStudio pour PCR en temps réel | Applied Biosystems, États-Unis | v1.7 | Exportation des données brutes de qPCR, analyse des valeurs de Ct |
| Centrifugeuse de banc réfrigérée | Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., Hunan, Chine | TDZ5-WS | Séparation du sérum à partir de sang total (2700 × g 4 °C) |
| Kit de transcription inverse RevertAid RT | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, États-Unis | K1691 | Transcription inverse des miARN sériques en ADNc |
| Tubes microcentrifuge de 1,5 mL sans RNase | Axygen, États-Unis | MCT-150-C | Prélèvement de fractions et stockage du sérum séparé |
| Réactif d'isolement d'ARN TRIzol | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, États-Unis | 15596026 | Extraction d'ARN total à partir d'échantillons de sérum humain |
| Congélateur ultra-basse température | Haier Biomedical, Shandong, Chine | DW-86L388 | Stockage prolongé des échantillons sériques à −80 °C |
| Moniteur de polysomnographie YH-600B | BMC Medical Co., Ltd., Pékin, Chine | YH-600B | Surveillance du sommeil nocturne et calcul de l'IAH pour le diagnostic du SAOS |
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