Lasers au thulium, à l'erbium et à diode pour la décontamination endocanal : activité anti-Enterococcus faecalis et sécurité thermique ex vivo

Résumé

Ce protocole compare les lasers à diode, au thulium et à l'erbium pour la désinfection intracanalaire dans un modèle ex vivo de canal radiculaire contaminé par Enterococcus faecalis, en évaluant l'efficacité antibactérienne et la température à la surface externe de la racine afin d'identifier des paramètres d'irradiation sûrs et efficaces.

Résumé

L'irrigation assistée par laser s'est imposée comme un adjuvant prometteur pour la désinfection des canaux radiculaires ; toutefois, les données comparant directement différents systèmes laser dans des conditions expérimentales standardisées restent limitées. Cette étude ex vivo a comparé l'efficacité antibactérienne et la sécurité thermique d'un laser à diode de 808 nm, d'un laser au thulium de 1940 nm et d'un laser à l'erbium de 2940 nm pour la décontamination intracanalaire contre Enterococcus faecalis. Des spécimens humains de canaux radiculaires infectés, standardisés, ont été traités selon des paramètres d'irradiation cliniquement pertinents. L'efficacité antibactérienne a été évaluée par la réduction du nombre d'unités formant colonies (UFC) et par l'analyse des courbes de croissance bactérienne, tandis que la sécurité thermique a été évaluée en mesurant les variations de température à la surface externe de la racine pendant l'irradiation laser. Les trois systèmes laser ont montré une activité antibactérienne supérieure à celle des témoins traités au sérum physiologique. Le laser à l'erbium a obtenu le taux d'inhibition moyen le plus élevé (99,0 %) à 30 mJ pendant 30 s, tout en maintenant l'augmentation de température à la surface externe de la racine en dessous du seuil de sécurité thermique accepté de 10 °C. Le laser au thulium a produit une activité antibactérienne comparable, mais a dépassé le seuil de sécurité thermique à ses réglages d'irradiation les plus élevés. Le laser à diode a montré une efficacité antibactérienne moindre et des augmentations de température plus importantes que les lasers au thulium et à l'erbium dans les conditions testées. Dans les limites de ce modèle ex vivo, le laser à l'erbium de 2940 nm a démontré le meilleur équilibre entre efficacité antibactérienne et sécurité thermique, représentant ainsi une approche adjuvante prometteuse pour la désinfection intracanalaire.

Introduction

La principale cause de la pulpite et de la parodontite apicale est une infection bactérienne du système canalaire radiculaire¹. Selon une étude, Enterococcus faecalis a été identifié comme l'isolat bactérien prédominant chez les patients présentant une infection chronique ou récidivante après un traitement endodontique^2,3. Cette bactérie possède de nombreux facteurs de virulence, notamment la formation de biofilms ; elle peut pénétrer les tubules dentinaires jusqu'à une profondeur de 800 µm et survivre dans des conditions limitées en nutriments^2,3. Ces propriétés contribuent à sa résistance aux désinfectants canalaire standards utilisés pendant le traitement canalaire, ainsi qu'aux mécanismes de défense naturels de l'organisme. Par conséquent, l'incapacité à éliminer complètement tous les E. faecalis résiduels du système canalaire radiculaire constitue une cause importante d'échec du traitement endodontique⁴.

Le traitement actuel des canaux radiculaires associe un débridement mécanique par instrumentation à une irrigation chimique afin d'éliminer les micro-organismes du système canalaire⁵. Bien que l'instrumentation mécanique soit très efficace pour réduire les populations bactériennes, de nombreuses zones de l'anatomie complexe du canal radiculaire restent inaccessibles à l'instrumentation seule⁵. Par conséquent, les agents irrigants chimiques jouent un rôle important dans la désinfection du système canalaire. Des études ont toutefois montré que même les agents chimiques les plus puissants ne parviennent pas à éliminer complètement les biofilms bactériens⁶. De plus, certains agents chimiques utilisés lors du traitement endodontique peuvent compromettre l'intégrité structurale de la dentine^6,7. Afin d'améliorer l'efficacité de la désinfection et d'obtenir une élimination plus complète des biofilms bactériens du système canalaire, plusieurs méthodes d'activation des agents irrigants ont été explorées. Parmi celles-ci, l'irrigation activée par laser s'est révélée l'une des alternatives les plus prometteuses⁸. Les lasers à diode, au thulium et à l'erbium ont également été évalués quant à leur potentiel de produire des effets photothermiques et photomécaniques capables de perturber les parois cellulaires bactériennes et les biofilms⁹.

L'interaction entre chacun de ces types de laser et les tissus avec lesquels ils interagissent varie considérablement selon la longueur d'onde. Les lasers à diode, qui émettent généralement de la lumière à des longueurs d'onde comprises entre 808 et 980 nm, sont absorbés par les chromophores présents dans les tissus biologiques, provoquant une réaction photothermique au cours de laquelle les protéines sont dénaturées et les bactéries tuées¹⁰. Les lasers au thulium fonctionnent à 1940 nm et présentent une forte absorption par l'eau. Par conséquent, les lasers au thulium se sont révélés particulièrement adaptés aux environnements humides, notamment les canaux radiculaires remplis de solution d'irrigation¹¹. En raison de leur forte absorption de l'eau, les lasers au thulium peuvent rapidement chauffer et vaporiser les fluides lorsqu'ils sont utilisés dans des canaux radiculaires irrigués. Cette vaporisation génère des ondes de choc qui peuvent aider à perturber les biofilms bactériens. Les lasers à l'erbium, en particulier ceux fonctionnant à 2940 nm, possèdent le coefficient d'absorption de l'eau le plus élevé parmi les lasers dentaires¹². Dans les canaux irrigués, cette propriété peut provoquer une vaporisation explosive et des ondes de choc qui détachent mécaniquement les bactéries et les tuent, tout en limitant potentiellement la transmission de chaleur à la dentine environnante¹³.

Bien que l'intérêt pour la technologie laser en endodontie continue de croître, de nombreux aspects restent inconnus concernant les paramètres cliniques optimaux pour les différents systèmes laser. Les méthodes actuelles d'utilisation clinique reposent généralement sur l'expérience empirique ou sur les recommandations des fabricants, avec un soutien limité par des données probantes¹⁴. De plus, la plupart des études publiées à ce jour ont évalué les effets antimicrobiens des lasers ; toutefois, un aspect important de la thérapie laser a fait l'objet d'une attention relativement moindre : le risque de lésions thermiques aux tissus parodontaux. Il est généralement admis qu'une augmentation de la température de la surface externe de la racine supérieure à 10 °C peut entraîner des dommages permanents au ligament parodontal et à l'os environnant¹⁵. Il semble qu'aucune comparaison directe publiée n'existe à l'heure actuelle entre différents systèmes laser évaluant systématiquement à la fois leur efficacité antimicrobienne et leur sécurité thermique dans des conditions expérimentales contrôlées.

Le but principal de cette étude ex vivo était d'analyser et de comparer l'efficacité antimicrobienne et la sécurité thermique de trois systèmes laser — un laser à diode de 808 nm, un laser au thulium de 1940 nm et un laser à l'erbium de 2940 nm — pour éliminer le biofilm de E. faecalis des parois des canaux radiculaires. Afin d'identifier les combinaisons de paramètres permettant une élimination bactérienne efficace tout en préservant la sécurité thermique, cette étude a évalué des paramètres d'irradiation cliniquement pertinents. On s'attend à ce que ces résultats aident les cliniciens à choisir des approches assistées par laser sûres et efficaces pour la désinfection endodontique.

Protocole

Cette étude a été menée conformément aux normes éthiques de l'Hôpital municipal n°4 de Shanghai, École de médecine de l'Université Tongji, et a été approuvée par le comité d'éthique institutionnel (numéro d'approbation : 2026013-001). Les dents humaines extraites utilisées dans cette étude ont été collectées auprès de patients ayant subi une extraction dentaire pour des raisons orthodontiques ou parodontologiques. Un consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les participants avant la collecte des échantillons. Aucune intervention clinique supplémentaire n'a été réalisée dans le cadre de cette étude. L'étude a été menée conformément aux exigences institutionnelles relatives à l'utilisation de dents humaines extraites.

Préparation et critères de sélection des échantillons
Un total de 141 dents permanentes monoradiculaires (incisives mandibulaires et prémolaires) récemment extraites a été reçu du service de stomatologie affilié à l'Université Tongji au Shanghai Fourth People’s Hospital. Toutes les dents ont été extraites pour des raisons orthodontiques ou parodontales. Un consentement éclairé a été obtenu auprès de chaque patient. Ont été incluses dans cette étude les dents dont la racine mesurait au moins dix millimètres, mesurée à l’aide d’un détecteur parodontal, les dents intactes sans lésions carieuses ni fissures, avec une formation radiculaire complète et une courbure radiculaire inférieure à dix degrés selon la méthode de Schneider. Ont été exclues les dents présentant plusieurs canaux, une calcification canalaire, une résorption interne ou un traitement endodontique antérieur. Après l’extraction, tout tartre visible et les résidus de tissus mous ont été éliminés à l’aide d’un instrument parodontal. Les dents ont ensuite été conservées dans une solution saline à 0,9 % à 4 °C jusqu’à leur utilisation afin d’éviter la déshydratation, et toutes les expériences ont été réalisées dans les trois mois suivant l’extraction. Les échantillons ont été répartis dans les groupes expérimentaux selon une séquence prédéfinie d’attribution alternée. Plus précisément, les échantillons ont été attribués séquentiellement à chaque groupe de manière alternée jusqu’à atteindre la taille d’échantillon requise pour chaque groupe. Aucun calcul formel de puissance a priori n’a été effectué. La taille de l’échantillon a été choisie en se basant sur des études ex vivo comparables antérieures, le nombre de combinaisons de paramètres d’irradiation évaluées et la disponibilité des dents extraites éligibles.

Préparation et stérilisation du canal radiculaire
La couronne de chaque dent a été retirée au niveau de la jonction cémento-émail à l’aide d’une scie à diamant à basse vitesse sous refroidissement continu par eau afin d’obtenir un segment radiculaire standardisé de 10 mm. La longueur de travail a été déterminée à 1 mm du foramen apical à l’aide d’un fichier K de taille 10. Les canaux radiculaires ont été préparés à l’aide du système rotatif en nickel-titane ProTaper Universal selon les instructions du fabricant, en suivant la séquence S1, S2, F1, F2 et F3 jusqu’à l’obtention d’une taille apicale de préparation F3. Pendant l’instrumentation, les canaux ont été irrigués avec environ 2 mL d’hypochlorite de sodium à 5,25 % après l’utilisation de chaque fichier rotatif, ce qui a donné un volume total d’irrigation d’environ 10 mL par canal. Un rinçage final a été effectué avec 5 mL d’EDTA à 17 % pendant 1 minute, suivi de 5 mL de solution saline stérile. Le foramen apical a été scellé avec une résine composite fluide afin de créer un système canalaire fermé. Les racines préparées ont été stérilisées par autoclavage à 121 °C pendant 20 minutes, conservées dans une solution saline tamponnée au phosphate stérile (PBS) à 4 °C, puis inoculées avec des bactéries dans les 24 heures suivant la stérilisation.

Souche bactérienne et conditions de culture
E. faecalis ATCC 29212 a été utilisée pour établir le modèle de canal radiculaire infecté. La souche a été cultivée sur gélose au bouillon cerveau-cœur (BHI) à 37 °C pendant 24 h en conditions aérobies. Une colonie isolée a été transférée dans un bouillon BHI et incubée à 37 °C pendant 18 à 24 h. La suspension bactérienne a été ajustée à environ 1,5 × 10⁸ UFC/mL, ce qui correspond à un étalon McFarland 0,5, en utilisant une densité optique à 600 nm (DO₆₀₀) comprise entre 0,08 et 0,10.

Mise en place de E. faecalis Modèle de canal radiculaire infecté
Pour établir un modèle de biofilm en canal radiculaire infecté, la surface externe de chaque racine stérilisée a été recouverte de deux couches de vernis à ongles incolore afin d'empêcher la pénétration bactérienne à travers le cément. La région apicale a été recouverte après que le foramen apical eut été obturé avec un composite résineux fluide, tandis que l'orifice du canal est resté découvert pour permettre l'inoculation bactérienne. À l'aide d'une micropipette stérile, 10 µL du E. faecalis la suspension a été transférée dans chaque canal radiculaire individuel afin de remplir toute la longueur du canal sans débordement. Les échantillons inoculés ont ensuite été placés individuellement dans des plaques de culture stériles à 24 puits, avec ajout de 1,5 mL de bouillon BHI dans chaque puit. Les échantillons ont été mis en culture à 37°C en conditions aérobies pendant 21 jours. Le milieu de culture a été éliminé et remplacé tous les 2 jours par du bouillon BHI stérile frais afin d'assurer un apport continu en nutriments pour la croissance bactérienne et d'éliminer les débris cellulaires accumulés. Aucune inoculation supplémentaire avec E. faecalis n'a été effectuée lors du changement de milieu. À l'issue de la période d'incubation, tous les échantillons viables ont été lavés une fois au PBS pour éliminer les bactéries planctoniques faiblement adhérentes avant les tests expérimentaux. Deux échantillons choisis aléatoirement ont été utilisés pour visualiser la formation de biofilm mature et la pénétration bactérienne dans les tubules dentinaires par microscopie électronique à balayage (MEB). Les spécimens ont été fixés dans du glutaraldéhyde à 2,5 % à 4°C pendant 24 h, rincés trois fois au PBS, déshydratés par une série graduée d'éthanol (30 %, 50 %, 70 %, 80 %, 90 % et 100 %), chaque étape durant 10 min, puis divisés longitudinalement, séchés à l'air, montés sur des supports en aluminium, recouverts par pulvérisation d'or et examinés au MEB.

Groupes expérimentaux et protocoles d'irradiation laser
Les 135 échantillons de racines infectées ont été répartis en trois groupes expérimentaux principaux selon le système laser utilisé : le groupe laser à diode 808 nm, le groupe laser au thulium 1940 nm et le groupe laser à l'erbium 2940 nm. Chaque groupe laser comprenait 45 échantillons, subdivisés ultérieurement selon les paramètres d'irradiation. Le laser à diode a été utilisé à des puissances moyennes de 1,0, 1,5 ou 2,0 W, chaque réglage de puissance étant appliqué pendant 10, 20 ou 30 s, conduisant à neuf sous-groupes comportant trois échantillons par sous-groupe. Le laser au thulium a été utilisé à des puissances moyennes de 1,5, 2,5 ou 3,5 W, chaque réglage de puissance étant appliqué pendant 10, 20 ou 30 s, donnant également lieu à neuf sous-groupes avec trois échantillons par sous-groupe. Le laser à l'erbium fonctionnait en mode d'impulsion super-courte à une fréquence fixe de 15 Hz. Des énergies d'impulsion de 10, 20 ou 30 mJ ont été appliquées pendant 10, 20 ou 30 s, générant ainsi neuf sous-groupes avec trois échantillons par sous-groupe. Les lasers à diode 808 nm et au thulium 1940 nm ont tous deux fonctionné en mode continu.

Au total, six échantillons supplémentaires ont été inclus, trois échantillons étant attribués à chacun des groupes de contrôle négatif et positif. Le groupe de contrôle négatif a été traité avec une solution saline stérile, tandis que le groupe de contrôle positif a été traité avec de l'hypochlorite de sodium (NaOCl) à 5,25 % pendant 30 s.

Pour les groupes au laser, un protocole d'irradiation standardisé a été suivi. La fibre optique a été introduite dans le canal radiculaire jusqu'à la longueur de travail et déplacée en un mouvement spiralé lent et continu du tiers apical vers le tiers coronal pendant toute la durée de l'irradiation. Des fibres ou embouts spécifiques au laser ont été utilisés plutôt qu'une fibre interchangeable unique. Le laser à diode de 808 nm a été acheminé à travers une fibre émettrice terminale de 200 µm, le laser au thulium de 1940 nm à travers une fibre émettrice terminale de 200 µm, et le laser à l'erbium de 2940 nm à travers un embout émetteur radial de 400 µm. La fibre ou l'embout d'acheminement a été retiré à une vitesse d'environ 1 mm/s. Une fois l'orifice du canal atteint, il a été réinséré jusqu'à la longueur de travail, et le mouvement spiralé apical vers coronal a été répété jusqu'à l'achèvement de la durée d'irradiation prévue.

Pour les lasers au thulium et à l'erbium, les canaux ont été maintenus remplis de sérum physiologique stérile pendant l'irradiation afin de simuler une activation laser assistée par l'eau. Environ 10 µL de sérum physiologique stérile ont été introduits dans chaque canal pour le remplir jusqu'au niveau de l'orifice canalaire avant l'irradiation. Le sérum physiologique a été renouvelé avant chaque cycle d'irradiation, si nécessaire, afin de maintenir un canal rempli de liquide tout au long du traitement. Pour le groupe laser à diode, les canaux ont été séchés à l'aide de points de papier stériles avant l'irradiation, car le laser à diode de 808 nm présente une absorption relativement faible dans l'eau et a été utilisé pour produire un effet antibactérien photothermique direct à l'intérieur du canal. En revanche, les lasers au thulium de 1940 nm et à l'erbium de 2940 nm présentent une absorption dans l'eau nettement plus élevée et ont donc été utilisés dans des canaux remplis de sérum physiologique afin de faciliter des effets photothermiques et photomécaniques médiés par l'eau. Le traitement au laser a été répété une fois par jour pendant trois jours consécutifs.

Mesure de la température de la surface radiculaire externe
Les variations de température en temps réel sur la surface radiculaire externe ont été mesurées pendant la première journée d'irradiation laser. Chaque échantillon radiculaire a été fixé verticalement sur un support d'éprouvette à température ambiante (22 °C ± 1 °C). Un thermocouple de type K relié à un thermomètre numérique a été placé en contact ferme avec le tiers moyen de la surface radiculaire externe, perpendiculairement à l'axe longitudinal de la racine. La sonde du thermocouple a été positionnée à l'aide d'une pince réglable et fixée à la surface de la racine avec un ruban adhésif résistant à la chaleur afin de maintenir un contact ferme et constant tout au long de la mesure. La sonde du thermocouple a été étalonnée avant chaque session de mesure à l'aide d'eau bouillante (100 °C) et d'un mélange glace-eau (0 °C). Les relevés de température ont été enregistrés à des intervalles de 50 ms pendant toute la durée d'irradiation (10, 20 ou 30 s). La température de base et la température maximale enregistrée pendant ou immédiatement après l'irradiation laser ont été mesurées pour chaque échantillon. L'augmentation de température entre la température de base et la température maximale a été calculée sous la forme de ΔT. Une valeur de ΔT supérieure à 10 °C a été considérée comme le seuil pouvant entraîner des lésions des tissus parodontaux.

Évaluation microbiologique : dénombrement des colonies et taux d'inhibition
Afin de déterminer l'effet antibactérien des traitements au laser, des échantillons ont été prélevés après chaque traitement au laser. Le canal a été séché à l’aide de points de papier stériles. Un nouveau fichier stérile Hedström de taille 40 a été utilisé pour chaque prélèvement afin d’obtenir des copeaux de dentine à partir des parois du canal, évitant ainsi toute contamination croisée entre les échantillons. Chaque copeau de dentine a été transféré dans un tube microcentrifuge distinct contenant 1 mL de PBS stérile. Les tubes ont été vigoureusement agités au vortex pendant 30 secondes afin de libérer les bactéries des copeaux de dentine. Des dilutions sériées dix fois successives, allant de 10⁻¹ à 10⁻⁶, ont été préparées en transférant 100 µL de la suspension bactérienne dans 900 µL de PBS stérile à chaque étape de dilution. Des aliquots (30 µL) de chaque dilution ont été étalés sur des boîtes de gélose infusion cerveau-cœur distinctes, puis incubés à 37°C pendant 24 heures. Les colonies ont été dénombrées et exprimées en unités formant colonies (UFC). Chaque dilution a été ensemencée en triple, et le nombre moyen de colonies provenant des trois boîtes a été utilisé pour l’analyse. Les boîtes ont été codées avant le dénombrement, et l’investigateur effectuant le dénombrement des colonies était aveugle quant aux attributions des traitements.

Ici, C est le nombre moyen de CFU du groupe témoin négatif (sérum physiologique) et T est le nombre moyen de CFU du groupe expérimental.

Analyse de la courbe de croissance bactérienne
L'effet de divers traitements laser sur la cinétique de croissance bactérienne a été étudié en traçant des courbes de croissance. Le jour 3 après le traitement laser final, les canaux ont été rincés avec 5 mL de solution saline stérile. Le contenu des canaux a été prélevé à l’aide de points de papier stériles, puis transférés dans un tube de centrifugation contenant 5 mL de bouillon BHI. Le tube a été agité au vortex pour mettre en suspension les bactéries dans le bouillon. La suspension bactérienne a été ajustée à 1 × 10⁶ UFC/mL. La concentration bactérienne a été ajustée en fonction des mesures d’OD₆₀₀, à l’aide d’une courbe de calibration établie précédemment pour E. faecalis ATCC 29212, puis confirmée par dénombrement des colonies viables. Un aliquot de 200 µL de la suspension a été ajouté dans chaque puits d’une microplaque stérile à 96 puits. En outre, 20 µL d’huile minérale stérile ont été ajoutés dans chaque puits afin de minimiser l’évaporation. La microplaque a été placée dans un spectrophotomètre-incubateur maintenu à 37 °C, et l’OD₆₀₀ a été mesurée chaque heure pendant 24 heures. Avant chaque mesure d’OD600, la microplaque a été agitée en rotation à environ 300 tr/min pendant 10 secondes afin d’assurer une suspension bactérienne homogène. Chaque échantillon a été testé en cinq puits réplicats.

Analyse statistique
Toutes les données numériques sont présentées sous forme de moyenne ± écart type (ET). Les analyses statistiques ont été réalisées à l'aide du logiciel SPSS version 26.0. La distribution des données a été évaluée à l'aide du test de Shapiro–Wilk. Une analyse de la variance (ANOVA) a été utilisée pour comparer plus de deux groupes, suivie du test de Tukey de différence significative honnête (HSD) pour les comparaisons par paires. Les comparaisons entre deux groupes ont été effectuées à l'aide d'un test t pour échantillons indépendants. L'homogénéité des variances a été vérifiée à l'aide du test de Levene avant l'application des tests paramétriques. Lorsque l'hypothèse d'homogénéité des variances n'était pas respectée, une correction de Welch a été appliquée, selon les cas. Le seuil de significativité statistique a été fixé à P < 0,05. Les graphiques ont été réalisés à l'aide du logiciel GraphPad Prism version 9.0.

Résultats

Activité antibactérienne de différents traitements au laser contre E. faecalis
L'efficacité antibactérienne des trois systèmes laser contre E. faecalis a été évaluée en déterminant le nombre d'UFC après trois traitements consécutifs. Les résultats sont présentés dans la Figure 1 et la Figure supplémentaire 1. Le groupe témoin négatif au sérum physiologique stérile a montré une croissance bactérienne importante, avec une valeur moyenne de teinte grise des colonies de 396618,7 ± 67787,5. Le groupe témoin positif au NaOCl à 5,25 % a atteint un taux d'inhibition moyen global de 47,2 % ± 3,0 %, avec des valeurs d'inhibition individuelles de 46,8 %, 43,1 % et 51,7 %.

Figure 1 : Efficacité antibactérienne des traitements au laser contre Enterococcus faecalis. Taux d'inhibition bactérienne après trois jours consécutifs de traitement avec des systèmes laser à diode 808 nm, au thulium 1940 nm et à l'erbium 2940 nm, utilisant différents paramètres d'irradiation. L'hypochlorite de sodium (NaOCl) à 5,25 % a servi de contrôle positif, et la solution saline stérile a servi de contrôle négatif avec 0 % d'inhibition. Les données sont exprimées en moyenne ± écart type (ET) à partir de n = 3 échantillons indépendants par groupe de traitement. Les barres d'erreur représentent l'ET. * indique P < 0,05, ** indique P < 0,01, et *** indique P < 0,001. Veuillez cliquer ici pour visualiser une version agrandie de cette figure.

Tous les groupes traités au laser ont montré des taux d'inhibition plus élevés que le groupe témoin positif au NaOCl à 5,25 %. Une activité antibactérienne accrue a été observée avec une puissance laser ou une énergie d'impulsion plus élevée et des durées d'irradiation plus longues. Par exemple, dans le groupe au laser à diode de 808 nm, le taux d'inhibition moyen est passé de 53,1 % ± 6,5 % à 1,0 W pendant 10 s à 80,2 % ± 2,6 % à 2,0 W pendant 30 s. Une différence statistiquement significative a été observée entre les groupes traités à 1,0 W pendant 30 s et à 2,0 W pendant 30 s (P < 0,01).

Le laser au thulium à 1940 nm a démontré une activité antibactérienne supérieure à celle du laser à diode dans la plupart des conditions testées. À 1,5 W pendant 10 s, le taux d'inhibition moyen était de 78,8 % ± 1,9 %. À 2,5 W pendant 30 s, le taux d'inhibition augmentait jusqu'à 91,6 % ± 0,4 %. Le taux d'inhibition le plus élevé dans le groupe du laser au thulium a été observé à 3,5 W pendant 30 s, atteignant 97,4 % ± 0,8 %. Cette valeur était significativement plus élevée que celles du groupe témoin positif au NaOCl à 5,25 % (P < 0,001) et du laser à diode à 808 nm à 2,0 W pendant 30 s (P < 0,001).

Le laser erbium à 2940 nm a démontré la plus grande activité antibactérienne parmi les trois systèmes laser. À 10 mJ pendant 10 s, le taux d'inhibition moyen a atteint 84,3 % ± 1,5 %. À 20 mJ pendant 30 s, le taux d'inhibition était de 96,5 % ± 2,0 %. Le taux d'inhibition le plus élevé a été observé à 30 mJ pendant 30 s, atteignant 99,0 % ± 0,6 %. Cette valeur était significativement supérieure à celles du groupe témoin positif au NaOCl à 5,25 % (P < 0,001), du laser thulium à 1940 nm à 2,5 W pendant 30 s (P < 0,01) et de tous les groupes traités au laser à diode à 808 nm (P < 0,001).

Les résultats démontrent que les trois systèmes laser ont présenté une activité antibactérienne contre E. faecalis, une augmentation des paramètres d'irradiation étant généralement associée à des taux d'inhibition plus élevés. Parmi les conditions testées, le laser à l'erbium à 2940 nm a obtenu l'inhibition antibactérienne la plus élevée, suivie par le laser au thulium à 1940 nm et le laser à diode à 808 nm, ce qui confirme l'hypothèse de l'étude selon laquelle la désinfection canalaires assistée par laser peut réduire efficacement la charge bactérienne dans les conditions expérimentales testées.

Impact des traitements au laser sur la cinétique de croissance bactérienne
La repousse bactérienne après traitement a été évaluée en mesurant l'OD₆₀₀ pendant 24 h. Les résultats sont présentés dans la Figure 2 et la Figure supplémentaire 2. Le groupe témoin avec solution saline stérile a présenté un profil typique de croissance bactérienne, comprenant une phase de latence d’environ 4 h suivie d’une croissance exponentielle rapide entre 4 et 12 h, puis une phase stationnaire avec des valeurs maximales d'OD600 comprises entre 1,167 et 1,245.

Figure 2 : Courbes de croissance d'Enterococcus faecalis après traitement au laser. Cinétique de croissance d'Enterococcus faecalis récupéré à partir de canaux radiculaires traités sur une période de 24 heures, mesurée par densité optique à 600 nm (OD₆₀₀). Des courbes de croissance représentatives sont présentées pour le témoin stérile de solution saline, le témoin de l'hypochlorite de sodium à 5,25 % (NaOCl), ainsi que pour les groupes traités avec les lasers à diode 808 nm, au thulium 1940 nm et à l'erbium 2940 nm. Les données sont exprimées en moyenne ± écart-type (ET) à partir de n = 3 échantillons indépendants, avec cinq puits par échantillon en réplicats techniques. Les barres d'erreur représentent l'écart-type. * indique P < 0,05, ** indique P < 0,01 et *** indique P < 0,001. Veuillez cliquer ici pour consulter une version agrandie de cette figure.

Les groupes traités au laser à diode 808 nm ont montré une suppression de la croissance bactérienne dépendante des paramètres. À 1,0 W pendant 10 s, la courbe de croissance était similaire à celle du groupe au NaOCl 5,25 %, la croissance exponentielle débutant environ à 8 h. À 2,0 W pendant 30 s, la phase de latence s'est prolongée jusqu'à environ 10 h, et la valeur d'OD₆₀₀ à 14 h était significativement inférieure à celle du groupe au NaOCl 5,25 % (0,559 ± 0,042 contre 0,934 ± 0,042, P < 0,001).

Les groupes traités au laser au thulium de 1940 nm ont montré une suppression plus importante de la croissance bactérienne que les groupes traités au laser à diode. À 1,5 W pendant 10 s, la croissance exponentielle a commencé à environ 10 h. À 2,5 W pendant 30 s, la phase de latence s'est prolongée jusqu'à environ 11 h, avec des valeurs d'OD600 significativement plus faibles que celles du témoin de sérum physiologique stérile et que celles du laser à diode de 808 nm à 2,0 W pendant 30 s au point temporel correspondant (P < 0,001 pour les deux). À 3,5 W pendant 30 s, la croissance bactérienne est restée nettement supprimée, les valeurs d'OD600 demeurant à ou en dessous d'environ 0,15 à partir de 12 h et restant pratiquement inchangées par la suite.

Les groupes traités au laser erbium à 2940 nm ont produit la plus grande suppression de la repousse bactérienne. À 10 mJ pendant 10 s, aucune augmentation exponentielle de la croissance bactérienne n'a été observée jusqu'à environ 10 h après le traitement. L'augmentation de l'énergie par impulsion a davantage retardé le début de la croissance exponentielle. À 30 mJ pendant 30 s, la croissance exponentielle a été retardée jusqu'à environ 12 h, période durant laquelle l'OD600 moyen est resté inférieur à 0,20. À 12 h, la valeur d'OD600 du groupe traité au laser erbium à 2940 nm à 30 mJ pendant 30 s était significativement plus faible que celle du groupe traité au laser à diode à 808 nm à 2,0 W pendant 30 s (0,120 ± 0,001 contre 0,274 ± 0,044, P < 0,001).

Dans l'ensemble, les trois systèmes laser ont retardé la repousse bactérienne par rapport aux groupes témoins, une inhibition croissante étant observée avec l'augmentation des paramètres d'irradiation. Dans les conditions testées, le laser au erbium à 2940 nm a produit la plus forte inhibition de la repousse bactérienne, suivie par le laser au thulium à 1940 nm et le laser à diode à 808 nm, ce qui confirme l'hypothèse de l'étude.

Évaluation de la sécurité thermique de différents traitements au laser sur la surface radiculaire externe
Outre leur activité antibactérienne, la sécurité thermique des trois systèmes laser a été évaluée en mesurant l'augmentation de la température de la surface radiculaire externe (ΔT). Une augmentation de température supérieure à 10 °C a été considérée comme le seuil pouvant entraîner une lésion des tissus parodontaux. Les résultats sont présentés dans la Figure 3.

Figure 3 : Modifications de la température de la surface externe de la racine pendant l'irradiation laser. Évolutions de la température de la surface externe de la racine (ΔT) après irradiation par des lasers à diode 808 nm, au thulium 1940 nm et à l'erbium 2940 nm, utilisés avec différents paramètres d'irradiation. La ligne horizontale en pointillés indique le seuil de 10 °C généralement associé à un risque de lésion des tissus parodontaux. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± écart-type (ET) à partir de n = 3 échantillons indépendants. Les barres d'erreur représentent l'écart-type. * indique P < 0,05, ** indique P < 0,01 et *** indique P < 0,001. Veuillez cliquer ici pour visualiser une version agrandie de cette figure.

Le laser à diode de 808 nm a provoqué l'augmentation la plus importante de la température de la surface externe de la racine. À 1,0 W pendant 10 s, l'augmentation moyenne de température (ΔT) était de 6,0 °C ± 0,7 °C. En augmentant le temps d'irradiation à 30 s tout en maintenant la même puissance, l'augmentation moyenne de ΔT atteignait 10,4 °C ± 0,9 °C. À 2,0 W pendant 30 s, la moyenne de ΔT augmentait encore à 14,8 °C ± 3,8 °C, dépassant ainsi le seuil de sécurité de 10 °C dans tous les échantillons.

Le laser au thulium à 1940 nm a provoqué des augmentations modérées de température. À 1,5 W pendant 10 s, la variation moyenne de température (ΔT) était de 2,5 °C ± 0,7 °C. En augmentant la puissance à 2,5 W et la durée d'irradiation à 30 s, la variation moyenne de ΔT atteignait 8,8 °C ± 0,9 °C, un échantillon atteignant même 10,2 °C. À 3,5 W pendant 30 s, la variation moyenne de ΔT augmentait à 12,7 °C ± 1,9 °C, et tous les échantillons dépassaient le seuil de sécurité de 10 °C. L'augmentation de température à 3,5 W pendant 30 s était significativement plus élevée que celle obtenue à 2,5 W pendant 30 s (P < 0,01).

Le laser auerbium à 2940 nm a produit la plus faible augmentation de la température de la surface racinaire externe pour tous les paramètres testés. À 10 mJ pendant 10 s, la variation moyenne de température (ΔT) était de 0,8 °C ± 0,1 °C. À la puissance maximale testée de 30 mJ pendant 30 s, la ΔT moyenne était de 3,6 °C ± 1,0 °C, les températures mesurées variant de 2,1 °C à 5,0 °C. Toutes les augmentations de température enregistrées sont restées inférieures au seuil de sécurité de 10 °C. L'augmentation de température observée avec le laser au thulium à 1940 nm à 3,5 W pendant 30 s était significativement plus élevée que celle observée avec le laser au erbium à 2940 nm à 30 mJ pendant 30 s (P < 0,01).

Dans l'ensemble, le laser au erbium de 2940 nm a entraîné les augmentations les plus faibles de la température de la surface racinaire externe dans toutes les conditions testées, tandis que le laser à diode de 808 nm et les réglages du laser au thulium de 1940 nm à puissance plus élevée ont provoqué des élévations de température plus importantes, certaines conditions dépassant le seuil de sécurité prédéfini.

Disponibilité des données :
Toutes les données brutes soutenant les résultats de cette étude sont fournies sous forme de fichiers supplémentaires. Les images représentatives des unités formant colonies (UFC) et les courbes complètes de croissance bactérienne sont disponibles respectivement dans les Figures supplémentaires 1 et 2. Les mesures individuelles des températures de la surface radiculaire externe par spécimen sont fournies dans le Tableau supplémentaire 1, et les données brutes d'activité antibactérienne, incluant les valeurs de gris de la surface des colonies et les taux d'inhibition calculés pour tous les groupes traités, sont fournies dans le Tableau supplémentaire 2. Ces fichiers supplémentaires contiennent les données primaires sous-jacentes aux résultats présentés dans le manuscrit principal.

Fichiers supplémentaires
Figure supplémentaire 1. Plaques représentatives d'unités formant colonies (UFC) après traitement au laser d'Enterococcus faecalis. Plaques de gélose au bouillon cerveau-cœur (BHI) représentatives montrant les unités formant colonies (UFC) récupérées à partir d'échantillons de canaux radiculaires après trois traitements consécutifs. Les échantillons ont été dilués en série (10⁻³) avant d'être ensemencés et incubés pendant 24 heures. Des images représentatives sont présentées pour les groupes suivants : contrôle négatif (sérum physiologique stérile), contrôle positif (hypochlorite de sodium à 5,25 %, NaOCl), laser à diode 808 nm (2,0 W, 30 s), laser au thulium 1940 nm (3,5 W, 30 s) et traitement au laser à l'erbium 2940 nm (30 mJ, 30 s). Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.

Figure supplémentaire 2. Courbes de croissance complètes sur 24 h d'Enterococcus faecalis après traitement au laser. Cinétique de croissance d'Enterococcus faecalis récupéré à partir de canaux radiculaires traités sur une période de 24 h, mesurée par densité optique à 600 nm (OD₆₀₀). Les suspensions bactériennes ont été ajustées à 1 × 10⁶ unités formant des colonies (UFC)/mL et incubées dans un bouillon d'infusion cerveau-cœur (BHI) à 37 °C. Les courbes de croissance sont présentées pour le témoin négatif constitué de sérum physiologique stérile, le témoin positif au hypochlorite de sodium à 5,25 % (NaOCl), ainsi que pour tous les groupes expérimentaux traités au laser : laser à diode de 808 nm (1,0, 1,5 et 2,0 W pendant 10, 20 et 30 s), laser au thulium de 1940 nm (1,5, 2,5 et 3,5 W pendant 10, 20 et 30 s), et laser à l'erbium de 2940 nm (10, 20 et 30 mJ à 15 Hz pendant 10, 20 et 30 s). Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.

Tableau supplémentaire 1. Mesures de la température de la surface externe de la racine pendant l'irradiation laser.
Les températures de la surface externe de la racine avant et après irradiation sont indiquées pour chaque échantillon traité au laser à diode 808 nm, au laser au thulium 1940 nm ou au laser à l'erbium 2940 nm, selon les conditions de puissance ou d'énergie par impulsion et de durée d'irradiation précisées. La différence de température a été calculée selon la formule ΔT = température après irradiation − température avant irradiation. Trois échantillons indépendants ont été évalués pour chaque combinaison de paramètres. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.

Tableau supplémentaire 2. Données brutes d'analyse des unités formant des colonies (UFC) pour l'activité antibactérienne après traitement au laser.
Les valeurs de gris de la surface des colonies et les taux d'inhibition calculés pour chaque échantillon après traitement au laser à diode 808 nm, au laser au thulium 1940 nm ou au laser à l'erbium 2940 nm, selon les paramètres d'irradiation indiqués, sont présentés. La solution saline et l'hypochlorite de sodium à 5,25 % (NaOCl) ont servi respectivement de groupes témoins négatif et positif. Le taux d'inhibition a été calculé par rapport au groupe témoin saline. Trois échantillons indépendants ont été analysés pour chaque condition de traitement. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.

Discussion

La présente étude ex vivo a comparé l'efficacité antibactérienne et la sécurité thermique des lasers à diode 808 nm, au thulium 1940 nm et à l'erbium 2940 nm pour l'élimination de E. faecalis biofilms provenant de canaux radiculaires infectés. Les trois systèmes laser ont démontré une inhibition bactérienne supérieure à celle du NaOCl à 5,25 % ; toutefois, leur efficacité antibactérienne et leurs profils thermiques différaient sensiblement. Le laser à l'erbium à 2940 nm a obtenu l'équilibre global le plus favorable, combinant une activité antibactérienne maximale et une augmentation minimale de la température à la surface externe de la racine. Le laser au thulium à 1940 nm a également montré une forte efficacité antibactérienne, bien que ses paramètres d'irradiation les plus élevés aient dépassé le 10°C seuil de sécurité thermique. Le laser à diode de 808 nm a présenté une activité antibactérienne relativement plus faible et une sécurité thermique moins favorable. Ces résultats indiquent que la longueur d'onde du laser et les paramètres d'irradiation sont des facteurs importants pour équilibrer la désinfection intracanalaire et la sécurité des tissus parodontaux.¹⁶. Toutefois, les comparaisons directes entre les différents systèmes laser doivent être interprétées avec prudence, car chaque longueur d'onde possède des indications cliniques, des systèmes de délivrance et des mécanismes d'action distincts. La présente étude a comparé l'efficacité antibactérienne dans des conditions standardisées ex vivo conditions, mais l'application optimale de chaque laser peut dépendre du scénario clinique spécifique, des objectifs thérapeutiques et des instruments disponibles.

Les différents résultats obtenus avec les trois systèmes laser s'expliquent en grande partie par leurs interactions dépendantes de la longueur d'onde avec l'eau, la dentine et les biofilms bactériens. Le laser à diode de 808 nm est faiblement absorbé par l'eau et agit principalement par des effets photothermiques directs. Les lasers à diode peuvent éliminer les bactéries par dénaturation des protéines induite par la chaleur et par perturbation des membranes bactériennes¹⁷. Toutefois, leur efficacité dépend de la proximité du contact entre la fibre laser et les bactéries ciblées, ce qui constitue un défi dans l'anatomie complexe du système canalaire radiculaire. Cela pourrait expliquer pourquoi le laser à diode a produit seulement un degré modéré d'inhibition bactérienne, même à 2,0 W pendant 30 s. L'analyse des courbes de croissance a montré que certaines bactéries ont survécu après le traitement au laser à diode et ont conservé la capacité de se multiplier à nouveau, suggérant que le biofilm existant n'avait pas été complètement éradiqué¹⁸. Le laser au thulium de 1940 nm présente une absorption par l'eau plus élevée que le laser à diode et peut produire à la fois des effets photothermiques et photomécaniques dans les canaux remplis de liquide¹⁹. Cette absorption accrue de l'eau pourrait expliquer son effet antibactérien plus puissant ; toutefois, elle entraîne également des augmentations de température plus importantes à des réglages de puissance élevés. Par exemple, une irradiation à 3,5 W pendant 30 s a produit une activité antibactérienne marquée, mais a dépassé le seuil recommandé de 10 °C pour éviter les lésions des tissus parodontaux^11,20. Par conséquent, il semble exister un compromis entre l'obtention d'une désinfection suffisante des canaux radiculaires infectés et l'évitement d'augmentations excessives de température pouvant endommager les tissus environnants. Ces systèmes laser ne doivent pas être considérés comme directement interchangeables, car leurs longueurs d'onde ont des chromophores primaires différents ainsi que des mécanismes distincts de transfert d'énergie. Le laser à diode produit principalement des effets photothermiques directs, tandis que les lasers au thulium et à l'erbium interagissent plus fortement avec l'eau intracanalaire et génèrent des effets supplémentaires médiés par le fluide. Ainsi, les différences observées pourraient refléter à la fois les paramètres d'irradiation et les mécanismes d'action distincts des trois systèmes laser.

Le laser auerbium à 2940 nm a démontré le profil global le plus favorable, principalement en raison de son absorption élevée par l'eau²¹Lorsqu'elle est activée dans un canal irrigué, l'énergie laser est rapidement absorbée par une fine couche d'eau, produisant une cavitation, des ondes de choc et un mouvement du liquide capables de perturber mécaniquement les biofilms tout en limitant la transmission de chaleur vers la surface externe de la racine.^21,22. Ce mécanisme pourrait expliquer pourquoi le laser à l'erbium a obtenu le taux d'inhibition le plus élevé tout en maintenant l'ensemble des augmentations de température liées à l'irradiation en dessous du seuil de sécurité prédéfini. Ainsi, dans les conditions expérimentales évaluées dans cette étude ex vivo, le laser à l'erbium a démontré l'équilibre le plus favorable entre efficacité antibactérienne et sécurité thermique parmi les systèmes laser testés. Toutefois, ces résultats sont limités aux systèmes testés ex vivo conditions et n'établissent pas la supériorité clinique du laser à l'erbium. En outre in vivo et des études cliniques sont nécessaires avant que ces résultats puissent être traduits en recommandations thérapeutiques cliniques. Le taux d'inhibition plus faible observé avec le NaOCl à 5,25 % est également notable. Le NaOCl est depuis longtemps utilisé comme irriguant standard pour l'élimination bactérienne lors du traitement endodontique ; toutefois, son effet antibactérien peut être limité dans les biofilms matures et les tubules dentinaires profonds en raison d'une pénétration restreinte, d'une neutralisation chimique et de la nature protectrice de la matrice du biofilm.^23,24Ces résultats suggèrent que les effets physiques produits par les lasers, notamment la cavitation, les ondes de choc et le courant acoustique, pourraient améliorer l'élimination bactérienne par rapport à l'irrigation au hypochlorite de sodium seule.^8,25Par conséquent, les résultats de cette étude appuient l'utilisation de l'irrigation assistée par laser comme méthode complémentaire de désinfection des canaux radiculaires, plutôt que comme substitut aux protocoles d'irrigation conventionnels. Le sérum physiologique et l'NaOCl ont été inclus respectivement comme contrôle chimique négatif et contrôle chimique conventionnel, car l'objectif principal de cette étude était de comparer les trois systèmes laser dans des conditions expérimentales standardisées. L'étude n'a pas été conçue pour comparer l'irradiation laser aux protocoles contemporains d'irrigation activée par sonication, ultrasons ou autres méthodes. En conséquence, l'absence de ces groupes comparateurs limite la pertinence clinique des résultats et devrait être prise en compte dans des études futures.

La sécurité thermique reste une considération importante pour les applications cliniques. L'irradiation par laser à diode pendant 30 s a dépassé ou approché le seuil de 10 °C sous plusieurs paramètres d'irradiation, suggérant un risque potentiel de lésion des tissus parodontaux²⁶. Les lasers au thulium ont montré des effets antibactériens supérieurs à ceux des lasers à diode ; toutefois, leur marge de sécurité s'est réduite à des réglages de puissance plus élevés, en particulier à 3,5 W pendant 30 s. En revanche, le laser à l'erbium à 2940 nm a maintenu des augmentations de température inférieures à 5 °C, même à son réglage maximal testé. Ces résultats suggèrent qu'une sélection minutieuse des paramètres est nécessaire lors de l'utilisation de lasers à diode ou au thulium, tandis que le laser à l'erbium a démontré une marge de sécurité thermique plus large dans les conditions évaluées dans cette étude.

Cette étude présente plusieurs limites. Premièrement, elle a utilisé un modèle ex vivo, qui ne peut pas reproduire complètement l'environnement biologique d'une infection clinique. En particulier, l'absence de perfusion sanguine et du refroidissement physiologique des tissus peut influencer la dissipation de la chaleur et les variations de température au niveau de la surface radiculaire externe. De plus, l'absence de réponse immunitaire de l'hôte fait que les résultats antibactériens reflètent uniquement les effets directs de l'irradiation laser, sans tenir compte de l'élimination bactérienne médiée par le système immunitaire. Deuxièmement, une seule espèce bactérienne, E. faecalis, a été étudiée, alors que la plupart des canaux radiculaires infectés contiennent des biofilms polymicrobiens.²⁷. Un modèle à espèce unique ne peut pas reproduire les interactions interspécifiques, la structure hétérogène du biofilm ou la susceptibilité variable aux antimicrobiens caractéristiques des infections polymicrobiennes cliniques. Par conséquent, l'efficacité antibactérienne observée contre E. faecalis ne devraient pas être généralisés à l'ensemble de la communauté microbienne présente dans les canaux radiculaires infectés. Troisièmement, toutes les expériences ont été menées dans des conditions statiques de laboratoire, alors que les dents in vivo sont influencées par les tissus environnants et la perfusion sanguine, ce qui peut affecter la dissipation de la chaleur²⁸Enfin, seules certaines combinaisons de longueurs d'onde et de paramètres d'irradiation ont été évaluées. Les longueurs d'onde testées ont été choisies afin de représenter des systèmes laser présentant différentes caractéristiques d'absorption par l'eau et différents mécanismes d'action antibactérienne, tandis que les paramètres d'irradiation ont été sélectionnés pour refléter des niveaux de puissance ou d'énergie et des durées d'exposition cliniquement réalisables. Néanmoins, le nombre limité de combinaisons de paramètres restreint la généralisabilité des résultats, et d'autres réglages devraient être évalués dans des études futures. Bien que E. faecalis est fréquemment utilisé comme organisme représentatif dans la recherche endodontique en raison de sa persistance et de sa résistance aux agents antimicrobiens, mais il ne devrait pas être considéré comme l'indicateur unique d'une infection endodontique ou d'un échec thérapeutique. Les infections cliniques sont généralement polymicrobiennes, et des études futures utilisant des modèles de biofilms multispcifiques sont nécessaires pour mieux refléter la complexité de la microflore du canal radiculaire.

En résumé, chaque système laser a démontré une activité antibactérienne supérieure contre E. faecalis par rapport au NaOCl à 5,25 % seul. Dans les conditions expérimentales évaluées dans cette étude ex vivo, le laser à l’erbium à 2940 nm a présenté le meilleur équilibre entre efficacité antibactérienne et sécurité thermique. Le laser au thulium à 1940 nm a également montré une forte activité antibactérienne ; toutefois, des réglages à puissance plus élevée augmentaient le risque de dommages thermiques aux tissus. Le laser à diode à 808 nm a présenté une efficacité antibactérienne moindre et une sécurité thermique moins favorable que les lasers au thulium et à l’erbium. Ces résultats soutiennent la poursuite des recherches sur la désinfection assistée par le laser à l’erbium à 2940 nm, une approche prometteuse en complément du traitement endodontique²⁹.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Solution saline à 0,9 %	Beyotime	ST341-500ml	Stockage, irrigation et contrôle négatif des dents
Tube microcentrifuge de 1,5 mL	Axygen	MCT-150-C	Prélèvement d'échantillons et dilution sériée
Plaque de culture 24 puits	Corning	3524	Incubation du biofilm
Microplaque 96 puits	Corning	3599	Essai de courbe de croissance bactérienne
Autoclave	Tuttnauer	2540E	Stérilisation des racines préparées
Agar Brain Heart Infusion (BHI)	BD Biosciences	211065	Culture bactérienne et dénombrement des UFC
Bouillon Brain Heart Infusion (BHI)	BD Biosciences	237500	Culture bactérienne et analyse de la courbe de croissance
Vernis à ongles transparent	Beyotime	C0187	Scellement de la surface externe de la racine
Scie diamantée (basse vitesse)	Buehler	IsoMet Low Speed Saw	Sectionnement de la couronne
Thermomètre numérique (compatible avec thermocouple de type K)	OMEGA Engineering	HH802U	Mesure de la température de la surface externe de la racine
Enterococcus faecalis ATCC 29212	American Type Culture Collection (ATCC)	ATCC 29212	Souche bactérienne
Acide éthylènediaminotétraacétique (EDTA), 17 %	Sigma-Aldrich	E9884	Rinçage final du canal
Composite résine fluide	3M ESPE	6031A2	Scellement du foramen apical
GraphPad Prism	GraphPad Software	Version 9.0 • RRID: SCR_002798	Génération de graphiques
Fichier Hedström, taille 40	Dentsply Maillefer	80603010042	Prélèvement de copeaux de dentine
Fichier K, taille 10	Dentsply Maillefer	800-0210	Détermination de la longueur de travail
Système laser à fibre dopée au thulium, 1940 nm	Menovex Medical Technology (Shenzhen) Co., Ltd. (Arpadent)	TN20	Irradiation laser
Système laser Er:YAG, 2940 nm	PointNix Co., Ltd.	Modular-beam	Irradiation laser
Système laser à diode, 808 nm	elexxion AG	Claros Nano	Irradiation laser
Micro-pipette	Eppendorf	3123000063	Inoculation des échantillons
Huile minérale (stérile)	Sigma-Aldrich	M5904	Prévention de l'évaporation pendant l'essai de courbe de croissance bactérienne
Système de fichier rotatif en nickel-titane (préparation F3)	Dentsply Sirona	ProTaper Gold	Préparation du canal radiculaire
Fibre optique pour laser à fibre dopée au thulium, 1940 nm	Menovex Medical Technology (Shenzhen) Co., Ltd. (Arpadent)	400 µm de diamètre	Irradiation laser
Fibre optique pour laser Er:YAG, 2940 nm	PointNix Co., Ltd.	600 µm de diamètre	Irradiation laser
Fibre optique pour laser à diode, 808 nm	elexxion AG	elexxion longlife 200, 200 µm (Art. No. 10063)	Irradiation laser
Probe parodontale	Hu-Friedy	PCPUNC156	Mesure de la longueur de la racine
Scalpel parodontal	Hu-Friedy	SJ34-35	Élimination du tartre et des tissus mous
Solution tampon phosphate (PBS)	Gibco / Thermo Fisher Scientific	10010023	Lavage et dilution bactérienne
Pointes de pipette (10 µL, 200 µL, 1000 µL)	Axygen	T-300 / T-200-Y / T-1000-B	Manutention des liquides
Statif	Biosharp	BS-IT-01	Fixation de l'échantillon de racine
Microscope électronique à balayage (MEB)	Hitachi High-Technologies	TM4000Plus	Imagerie du biofilm
Incubateur agitateur	Thermo Fisher Scientific	MaxQ 4000	Incubation des cultures en bouillon
Hypochlorite de sodium (NaOCl), 5,25 %	Sigma-Aldrich	425044	Irrigation du canal et contrôle positif
Spectrophotomètre/incubateur (lecteur de microplaque)	BioTek / Agilent Technologies	Epoch 2	Mesures de densité optique à 600 nm (OD600)
SPSS	IBM	Version 26.0 • RRID: SCR_002865	Analyse statistique
Points de papier stériles	Dentsply Maillefer	Absorbent Paper Points, ISO 20, conicité 0,02, 28 mm	Séchage du canal et prélèvement bactérien
Palpeur de thermocouple (type K)	OMEGA Engineering	88000	Mesure de température
Agitateur vortex	Scientific Industries	Vortex-Genie 2	Mélange des suspensions bactériennes