La méthode MODS pour le diagnostic de la tuberculose et la tuberculose multirésistante

Résumé

L'observation microscopique-sensibilité aux médicaments (MODS) de dosage est un faible coût, faible technicité outil de haute performance de détection de la tuberculose (TB) et la tuberculose multirésistante (tuberculose à bacilles multirésistants). Cette vidéo décrit le liquide MODS la méthode de culture des médias.

Résumé

Les patients atteints de tuberculose pulmonaire (TB) active infecter d'autres personnes de 10 à 15 par an, ce qui rend le diagnostic de tuberculose active essentielle à la fois à guérir le patient et la prévention des nouvelles infections. Par ailleurs, l'émergence de la tuberculose multirésistante (tuberculose à bacilles multirésistants) signifie que la détection de la résistance aux médicaments est nécessaire pour arrêter la propagation de souches résistantes aux médicaments. L'observation microscopique-sensibilité aux médicaments (MODS) de dosage est un faible coût, faible technicité outil de haute performance de détection de la tuberculose et TB-MR. Le test MODS est basé sur trois principes: 1) de Mycobacterium tuberculosis (MTB) croît plus vite dans les milieux liquides que sur milieu solide 2) la croissance VTT microscopiques peuvent être détectés plus tôt dans les milieux liquides que d'attendre que l'aspect macroscopique des colonies sur milieu solide, et que la croissance est caractéristique de VTT, qui lui permet d'être distinguée de la contamination mycobactéries ou fongiques ou bactériennes atypiques 3) les médicaments isoniazide et la rifampicine peuvent être incorporés dans le test MODS pour permettre une détection directe simultanée de tuberculose à bacilles multirésistants, éliminant la nécessité d'une sous-culture à effectuer un test de drogue indirects susceptibilité. La concurrence des diagnostics actuels sont entravés par une faible sensibilité aux frottis de crachats, de longs délais jusqu'à ce diagnostic avec la culture médiatique solide, avec des coûts prohibitifs des méthodes existantes de liquide milieux de culture, et la nécessité de ne sous-culture pour les tests de sensibilité aux médicaments indirectes pour détecter la tuberculose multirésistante. En revanche, la méthode non-propriétaires MODS a une sensibilité élevée pour la tuberculose et tuberculose à bacilles multirésistants, est une méthode de culture relativement rapide, offre simultanée des tests de sensibilité aux médicaments pour la tuberculose multirésistante, et est accessible aux ressources limitées à un peu moins 3 $ pour les tests pour la tuberculose et TB-MR.

Protocole

1. Préparer des solutions étalons
   1. Stock tampon phosphate
      1. Mélanger 950ml de sodium dibasique solution (9.47g de phosphate dibasique de sodium dissous dans l'eau distillée 1000ml) avec 950ml de solution de phosphate de potassium monobasique (9.07g de phosphate de potassium monobasique dissous dans l'eau distillée 1000ml) et remuer; retenir 50ml de chaque solution pour ajuster pH si nécessaire
      2. Ajuster le pH à 6,8 ± 0,2: ajouter le phosphate de sodium dibasique solution pour augmenter le pH, ajouter une solution de phosphate de potassium monobasique pour abaisser le pH
      3. Autoclave à 121-124 ° C pendant 15 minutes po....

Discussion

Le test MODS est destiné aux ressources limitées. Pour la première fois, MODS apporte la capacité de détection rapide de la culture liquide de la tuberculose et la tuberculose multirésistante aux ressources limitées à un peu moins de 3 $ par test. MODS est un non-propriétaires, méthodologie itérative, et la communauté MODS est toujours intéressé à l'amélioration d'autres laboratoires ont réussi à faire.

Une préoccupation récurrente est la biosécurité de la culture des milieux liquides de la tuberculose, car les liquides peuv.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réfrigérateur/congélateur	Équipement			pour stocker le bouillon pré-préparé et les stocks d’antibiotiques
Équipement Vortex	Équipement			pour aider à la décontamination des expectorations
Équipement			centrifugation	pour la concentration des expectorations ; capable d’atteindre 3000 g ; d– ; n’a pas besoin d’être réfrigéré, mais DOIT être biosécuritaire (les seaux peuvent être scellés)
Incubateur (37 degrés C)	Équipement			pour la culture ; n’a pas besoin d’être enrichi en CO2
Microscope à lumière inversée	Microscope			pour lire les plaques MODS
Autoclave	Équipement			pour stériliser les milieux, le PBS et les plaques usagées
Équipement				d’équilibrepour peser l’isoniazide, la rifampicine et le bouillon NALC
Middlebrook 7H9 (Difco)	Réactif	Fisher Scientific	DF0713-17-9	500gr/bouteille ; milieu de culture
base Casitone (caséine de digestion pancréatique)	Réactif	Fisher Scientific	DF0259‐ ; 17‐ ; 9	500gr/bouteille ; milieu de culture base
Glycérol (glycérine) lyophilisé	Réactif	Sigma-Aldrich	G‐ ; 33‐ ; 500	500ml/bouteille ; base de milieu de culture
PANTA (Mélange d’antibiotiques lyophilisé BD)	Réactif	Fisher Scientific	B4345114	6 bouteilles/paquet ; supplément de milieu antibiotique
OADC (Middlebrook OADC enrichment BD)	Réactif	Fisher Scientific	B11886	10 x 20ml/paquet ; complément de milieu nutritionnel
Diméthylsulfoxyde (Hibri-Max)	Réactif	Sigma-Aldrich	D-2650	100ml/flacon ; pour préparer le stock de rifampicine
Stocks d’antibiotiques : réactif d’isoniazide		Sigma-Aldrich	I-3377	50gr/flacon ; sensibilité directe
Stocks d’antibiotiques : rifampicine	Réactif	Sigma-Aldrich	R-3501	1gr/flacon ; sensibilité directe
hydroxyde de sodium (pastilles)	Réactif	Sigma-Aldrich	221465	500gr/bouteille ; décontamination des expectorations
Citrate de sodium (sel trisodique dihydraté)	Réactif	Sigma-Aldrich	S-4641	500gr/bouteille ; décontamination des expectorations
N-acétyl-L-cystéine	Réactif	Sigma-Aldrich	A-7250	50gr/bouteille ; décontamination des expectorations
Phosphate de potassium Monobasic crystal. KH2PO4	Réactif	Sigma-Aldrich	P0662	500gr/bouteille ; décontamination des expectorations
Phosphate de sodium dibasique, anhydre. Na2HPO4	Réactif	Sigma-Aldrich	S0876	500gr/bouteille ; décontamination des expectorations
Hypochlorite de sodium	Réactif	d’eau de Javel		pour jeter les déchets contaminés
15ml tubes à centrifuger (polypropylène 15ml Falcon 35‐ ; 2096)	Consommable	Fisher Scientific	14‐ ; 959 et # 8208 ; 49B	500ea/case ; pour la décontamination et la concentration des expectorations
Plaques 24 puits (Plaques Tissu 24 puits BD Falcon 35‐ ; 3047)	Consommable	Fisher Scientific	08-772-1	50 plaques/caisse ; pour la culture et la lecture
Sacs en polyéthylène refermables 6 X 6 “ ; (ziplock)	Consommable			pour la biosécurité à contenir 24 tubes
avec couvercle (16 x 100 mm et 18 x 145 mm)	Consommable	VWR international	47729-583	500 tubes/caisse ; pour stocker les aliquotes du bouillon préparé
Tubes à microcentrifugeuse à bouchon à vis (1,5 ml)	Consommable	Fisher Scientific	05‐ ; 669 et # 8208 ; 22	1000ea/caisse ; pour stocker les aliquotes des stocks d’antibiotiques
0,22&mu ; m filtres (solvants aqueux) Filtre à seringue Millex blue	Consommable	Fisher Scientific	SLGL 025 OS	50 unités/caisse ; pour filtrer les stocks d’antibiotiques
0,22&mu ; m filtres (solvants organiques) Filtre à seringue Millex jaune	Consommable	Fisher Scientific	SLGV 033 RS	50 unités/caisse ; pour filtrer les stocks d’antibiotiques
Pipettes jetables Pasteur verre borosilicaté 9″ ;	Consommable	Fisher Scientific	13‐ ; 678 et # 8208 ; 20C	720ea/caisse ; pour mélanger PANTA avec un mélange de médias
Embouts barrière contre les aérosols 1000‐ ; 1300&mu ; l	Consommable	Fisher Scientific	02‐ ; 707 et # 8208 ; 51	1000ea/pk ; pour distribuer le milieu dans la plaque
USA Scientific Tips One 1‐ ; 200&mu ; l embouts jaunes	Consommable	Fisher Scientific	1111‐ ; 0006	1000 pointes/sachet ; pour diluer les stocks d’antibiotiques