Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">Current Protocols in Cell Biology</a> .

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

obtention des oeufs de xenopus laevis femelles

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Les œufs de Xenopus laevis intacte, lysées, et / ou fractionnées sont utiles pour une grande variété d&#39;expériences. Ce protocole montre comment provoquer la ponte, la collecte et dejelly les oeufs, les oeufs et le tri pour éliminer les oeufs endommagés.

Obtention des oeufs de Xenopus laevis femelles

Les ovocytes de Xenopus laevis intacts, lysés et/ou fractionnés sont utiles pour une grande variété d'expériences. Ce protocole montre comment induire la ponte, ...

Les extraits d'œufs de Xip Labis sont utiles comme sources de matériel cytoplasmique et d'organites pour la reconstitution in vitro d'événements cellulaires tels que l'assemblage du noyau et l'importation de protéines nucléaires. Bien entendu, avant de pouvoir utiliser des extraits d'œufs, vous devez d'abord obtenir les œufs de grenouilles femelles. Bonjour, je m'appelle Marie Cross et je suis étudiante diplômée dans le laboratoire de la Dre Maureen Power, au Département de biologie cellulaire de l'Université Emory à Atlanta, en Géorgie.Aujourd'hui, nous allons vous montrer comment obtenir des œufs gélatineux D à partir de femelles adultes d'opus lavis. Cette procédure comprend les étapes suivantes : la stimulation des grenouilles pour la ponte d'œufs à l'aide de sérum de poulain gravide, l'induction de la ponte d'œufs par la gonadotrophine chorionique humaine, et le tri des œufs ou des cellules anormaux. Commençons donc.Pour produire des œufs, les grenouilles femelles matures sont d'abord primées avec une gonadotrophine de jument enceinte. Pour commencer la procédure de priming, préparez un réservoir contenant du chlorure de sodium à cent millimolaire pour y loger les grenouilles. Après l'injection, les grenouilles primées doivent être maintenues à une densité d'environ une grenouille par litre.La production optimale d'œufs est maintenue en gardant les grenouilles à 18 degrés Celsius. À l’aide d’une aiguille de 27 gauge fixée à une seringue d’un mil, injecter 0,5 mil de 200 unités par mil de gonadotrophine chorionique de jument gravide par voie sous-cutanée dans le sac lymphatique dorsal de la grenouille.Replacer les grenouilles adultes dans le réservoir contenant cent millimoles par litre de chlorure de sodium. Après deux à trois jours, induire la ponte en injectant aux grenouilles 0,5 ml d'une solution à cent unités par ml d'hormone chorionique humaine, administrée à nouveau par injection sous-cutanée dans la poche lymphatique dorsale.Après l'injection, placer chaque grenouille dans cinq litres d'une solution de chlorure de sodium à cent millimolaire. Il est préférable de placer chaque grenouille dans un récipient individuel, car la qualité des œufs varie d'une grenouille à l'autre. Environ 16 à 22 heures après l'injection d'hormone chorionique humaine, retirer la grenouille vers un aquarium d'eau propre et verser les œufs dans un bécher.Il est conseillé d'observer les grenouilles pendant un à deux jours afin de détecter tout signe d'infection au site d'injection. À ce stade, une couche gélatineuse transparente entoure chaque œuf, ce qui empêche les œufs de se toucher. Pour dégeler les œufs, rincez-les une fois dans une solution de L-cystéine à 2 %, pH 8, puis poursuivez l'incubation dans 100 mL de solution de L-cystéine à 2 % par grenouille pendant environ cinq minutes. À température ambiante, agitez doucement les œufs périodiquement après cinq minutes.Versez la solution de cystéine sur les œufs déjelés et rincez-les trois fois dans une solution de Ringer modifiée à 0,25 x. Pour éliminer les débris, versez les œufs dans une boîte de Pétri en verre de cent millimètres en travaillant sous un microscope stéréoscopique. Retirez les œufs abîmés de la boîte de Pétri à l’aide d’une pipette Pasteur.Les œufs matures de xip présentent une moitié supérieure fortement pigmentée et une moitié inférieure claire. Une petite tache blanche, de la taille d'un point, indiquant la maturation de l'ovocyte, doit être visible au centre de l'hémisphère fortement pigmenté de l'œuf mature. Un bon œuf est un œuf dont le pigment est uniformément réparti. Tout élément ne présentant pas cette tache blanche est un ovocyte et doit être éliminé. Tous les œufs qui sont blancs, agrandis ou non uniformément pigmentés doivent également être retirés. Un œuf particulièrement altéré apparaîtra comme une boule blanche gonflée avec une limite entre les hémisphères entièrement obscurcie. Lavez les œufs triés deux à trois fois en versant dessus du tampon de lyse pour œufs, puis en versant soigneusement le tampon, en minimisant le nombre d'œufs renversés.Les œufs peuvent maintenant être lysés et les extraits préparés. Nous venons de vous montrer comment obtenir des œufs et les débarrasser de leur gélatine à partir de femelles Xenopus laevis matures. N'hésitez pas à consulter nos deux autres vidéos qui vous montrent comment préparer des extraits bruts d'œufs ainsi que comment reconstituer in vitro l'assemblage nucléaire en utilisant des extraits d'œufs fractionnés.Voilà, c'est tout. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

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Emory University.  Les œufs de Xenopus laevis intacte, lysées, et / ou fractionnées sont utiles pour une grande variété d'expériences. Ce protocole montre comment provoquer la ponte, la collecte et dejelly les oeufs, les oeufs et le tri pour éliminer les oeufs endommagés.

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