Faire patch pipettes et électrodes Sharp avec un extracteur programmable

Résumé

Cette vidéo montre comment utiliser un tire-programmables pour les pipettes de patch et électrodes pointu pour l'électrophysiologie. La même procédure peut être utilisée pour faire une variété d'outils de verre, y compris les aiguilles d'injection.

Résumé

Microélectrodes de verre (aussi appelé pipettes) ont été un cheval de bataille de l'électrophysiologie pendant des décennies. Aujourd'hui, ces pipettes sont fabriqués à partir de capillaires en verre à l'aide d'un tire-programmables. Ces instruments de la chaleur du capillaire en utilisant soit un filament métallique ou d'un laser et d'en tirer le verre en utilisant la gravité, un moteur ou les deux. Pipettes pour patch-clamp sont formées en utilisant la chaleur et ne la gravité, tandis que des électrodes pour l'enregistrement intracellulaire forte d'utiliser une combinaison de la chaleur, la pesanteur, et un moteur. La procédure utilisée pour faire des pipettes d'enregistrement intracellulaire est semblable à celui utilisé pour faire des aiguilles d'injection pour une variété d'applications, y compris l'injection dans des ovocytes de Xenopus ARNc. En général, capillaire en verre <1,2 mm de diamètre est utilisé pour faire des pipettes pour l'enregistrement de patch-clamp, tandis que plus étroit de verre est utilisé pour l'enregistrement intracellulaire (diamètre extérieur = 1,0 mm). Pour chaque outil, l'extracteur est programmé de façon légèrement différente. Cette vidéo montre comment faire les deux types de pipettes d'enregistrement en utilisant des programmes pré-établis extracteur.

Protocole

Pipettes de traction

En utilisant une microélectrode extracteur comme le Sutter P-97 Flaming / Brown, tirer un ensemble d'environ 10-20 pipettes.

1. Sélectionnez votre verre capillaire. Nous utilisons borosilicate capillaires (Sutter BF150-110-10, 1,5 mm de diamètre extérieur, diamètre intérieur de 1.1mm, 10cm de long). Conservez le verre avec soin afin qu'il reste propre et sans poussière.
2. Concevoir un programme de traction. Nous utilisons un programme en 5 étapes, avec la chaleur et la vitesse de descente à chaque étape, et une traction sur la petite la dernière étape. Livre de Sutter pipette est une excellente ....

Discussion

Le protocole est illustré ici, dans une utilisation quotidienne dans les laboratoires d'électrophysiologie et est également utilisé pour faire des aiguilles d'injection pour les cellules et les animaux. Avec un extracteur programmables, il est facile de faire des pipettes pour une variété d'utilisations. Avec une attention et des soins, le filament sur votre extracteur va durer un an ou plus. Bonne chance avec vos expériences.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Micro-pipeteuse	Instrument	Sutter Instrument Co.	P-97	Ou un instrument similaire (par exemple Sutter P-87 ou P-2000)
Capillaires en verre	Réactif	Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	Ou un verre capillaire similaire. Pour faciliter le remplissage de la pipette, utilisez un capillaire avec un filament de verre.